專利名稱：：一種丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及丙型肝炎病毒(HCV)抗體的診斷試劑，特別是涉及一種以雙抗原夾心法制備一種丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙及其制備方法。
背景技術(shù)：
：丙型肝炎病毒(HCV)是1989年由美國Choo等從受感染的黑猩猩血液標(biāo)本中最初發(fā)現(xiàn)，主要由血液、體液傳播，占輸血后肝炎的70%。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì)，全球估計(jì)約1.7億人感染HCV。丙型肝炎慢性化率為50%—85%，其中又有20%可發(fā)展為肝纖維化，危害十分嚴(yán)重。我國HCV抗體攜帶者達(dá)4千萬左右。到目前為止丙型肝炎既無有效疫苗，亦無有效的治療方法，預(yù)防感染是唯一有效的方法。HCV抗體檢查和乙肝表面抗原(HBsAg)、人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體及梅毒(TP)抗體檢査是我國法定的四個(gè)血源性篩査項(xiàng)目，意義十分重要。酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)法HCV抗體診斷是當(dāng)前最為常用的HCV抗體檢查方法，已發(fā)展到第3代，采用HCV的Core、NS3、NS4和NS5抗原混合包被反應(yīng)板進(jìn)行檢測。根據(jù)國家公布的HCV抗體診斷ELISA試劑批批檢的數(shù)據(jù)，2006年國內(nèi)HCV抗體診斷ELISA試劑盒為6千7百萬人份，相對于HCV的高感染率、我國的人口基數(shù)和衛(wèi)生條件的改善，HCV抗體診斷需求在未來5—10年內(nèi)還會逐年提高。但ELISA診斷亦有其不足之處，檢測需要專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室，專業(yè)人員操作，檢測時(shí)間較長，穩(wěn)定性相對較低。另一個(gè)重要問題是靈敏度和特異性并未達(dá)到理想要求，主要原因是到目前為止HCV的ELISA試劑仍運(yùn)用間接法而不是雙抗原夾心法檢測，由于HCV的Core抗原表位富含賴氨酸和精氨酸，在和辣根過氧化物酶(HRP)等酶偶聯(lián)時(shí)會產(chǎn)生空間位阻，降低免疫反應(yīng)的親和力，所以無法用常規(guī)雙抗原夾心ELISA法進(jìn)行檢測，有限的雙抗原夾心法ELISA診斷試劑都需對抗原進(jìn)行特殊處理，并且到目前為止尚沒有形成真正的產(chǎn)品[一種檢測丙型肝炎病毒抗體的方法，中國專利號200510071806.0]。免疫層析膠體金法是新型的免疫學(xué)檢測方法，和ELISA相比，具有檢測方便、快速、適于現(xiàn)場檢測，穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。但總體看，膠體金類試劑的靈敏度較ELISA略低。HCV抗體診斷快速檢測試劑研發(fā)具有難度，試劑對抗原、抗體的要求更為嚴(yán)格，不但需要高純度，更需要高的穩(wěn)定性和配對關(guān)系。在HCV抗體診斷上和ELISA一樣，需要多表位的重組混合抗原以滿足不同亞型、不同抗體的檢測[ChenM，SallbergM，SonnerborgA.etal.LimitedhumoralimmunityinhepatitisCvirusinfectionJT.Gastroenterology.1999，116(1):135-43]。到目前為止，國內(nèi)外雖有少量公司以免疫層析膠體金技術(shù)研制了HCV抗體診斷試劑盒，但沿用了ELISA的思路，采用間接法進(jìn)行檢測，在產(chǎn)品的靈敏度上一般都低于ELISA試劑。還沒有以雙抗原夾心法為原理研制的HCV抗體快速診斷試紙出現(xiàn)。和酶聯(lián)相似，賴氨酸同樣是蛋白和膠體金結(jié)合的重要分子，但除賴氨酸外，膠體金和蛋白的結(jié)合還有色氨酸半胱氨酸兩個(gè)重要分子，所以不同于抗原和服P的酶聯(lián)，在理論上運(yùn)用雙抗原夾心法研制出HCV抗體快速診斷試劑是可行的，但需要選擇好的配對的抗原，掌握好工藝。雙抗原夾心法存在兩次特異性抗原—抗體的結(jié)合，可以顯著提高產(chǎn)品的特異性和靈敏度。同時(shí)雙抗原夾心法不但能檢測出樣品中的免疫球蛋白G(IgG)能檢測出樣品中免疫球蛋白M(IgM)，而間接法不能，亦能增加檢測的靈敏度，特別是對于HCV，IgM在感染過程中長期存在[NikolaevaLI，BlokhinaNP，Tsurikova麗，etal.Virus-specificantibodytitresindifferentphasesofhepatitisCvirusinfectionJ.JViralH印at.2002，9(6):429-37.]。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明目的是提供一種簡便、快捷、靈敏度和特異性高、適合于臨床診斷或篩査用的HCV抗體快速診斷試紙及其制備方法。本發(fā)明運(yùn)用雙抗原夾心免疫層析技術(shù)實(shí)現(xiàn)對被檢樣品中抗HCV抗體檢測，提供一種丙型肝炎病毒(HCV)抗體快速診斷的免疫層析試紙，包括上樣墊1，緊密連接于上樣墊一端的含有標(biāo)記HCV混合抗原的膠體金墊2，與膠體金墊的另一端緊密連接的NC(硝酸纖維素)膜3和緊密連接于NC膜另一端的吸樣墊4，NC膜包被有相互分離的檢測T線(5)和質(zhì)控C線6，上樣墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊粘貼到塑料支撐板7上形成試紙，其特征在于，所述T線為包被在NC膜上的HCV混合抗原，所述膠體金墊含有HCV重組混合抗原，所述C線為包被在NC膜上的抗HCV混合抗原的抗體。所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于，標(biāo)記和包被用HCV混合抗原成份為重組表達(dá)HCV的核心抗原(Core)、非結(jié)構(gòu)蛋白(NS)3、NS4和NS5抗原，抗原為基因工程單獨(dú)表達(dá)或兩種及以上融合表達(dá)蛋白。HCV混合抗原可以為Core、NS3混合，或Core、NS3、NS4混合，Core、NS3、NS5混合或四種全部混合抗原。所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于所述的上樣墊為玻璃纖維膜或無紡布，吸樣墊由吸水濾紙構(gòu)成。所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于，抗原的包被方法為以0.01MpH7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將混合抗原配制成lmg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以lul/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時(shí)在NC膜上部包被抗HCV抗體作為C線。劃線后將NC膜在干燥間(溫度20-25。C，濕度小于30%)干燥8-IO小時(shí)，備用。所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于，混合抗原標(biāo)記膠體金顆粒的方法為以氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為30—50nm的膠體金溶液，制備完成后取100ml膠體金液放在燒杯內(nèi)，用0.2MK2C03調(diào)至pH8.0，按lOOml膠體金溶液加入lmgHCV重組混合抗原，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入保護(hù)劑，封閉20min，12000r/m離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復(fù)溶至100ml，按lml溶液鋪22cm2的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜或無紡布上，再置干燥間(溫度20-25°C，濕度小于30%)干燥2-4小時(shí)，制成膠體金墊，備用。所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于，試紙條的裝配方法為在干燥室內(nèi)(溫度20-25°C，濕度小于30%)，取塑料支撐板板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板板的中部粘貼，在NC膜T線一側(cè)搭接膠體金墊(搭膠體金墊的三分之一)粘貼，在膠體金墊另一側(cè)搭接粘貼上樣墊(搭上樣墊的十分之一)；在NC膜C線一側(cè)搭接吸樣墊(搭吸樣墊的十分之一)；最上面貼一層標(biāo)志膜，最后用裁剪機(jī)將貼好塑料板切成3mm或4mm寬的試紙條。切好的試紙條可以再裝入塑料卡內(nèi)，形成HCV抗體診斷試劑卡。所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于，檢測方法為將被檢血清或血漿平衡至溫室，將試紙條或試劑卡平放，在上樣墊上加入50—100ul被檢樣品，樣品溶解膠體金并在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在30分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測結(jié)果。本發(fā)明的有益效果是運(yùn)用HCV混合抗原包被，采用雙抗原夾心法制備HCV抗體快速診斷免疫層析試紙。采用雙抗原夾心法使試紙的性能比間接法提高一個(gè)等級，為新一代的HCV抗體診斷產(chǎn)品。使快速診斷試劑的靈敏度和特異性達(dá)到或超過需要專業(yè)實(shí)驗(yàn)室和專業(yè)人員進(jìn)行檢驗(yàn)的ELISA試劑的水平；同時(shí)含有Core和NS3的包被抗原理論上可以檢測出所有HCV感染，若再添加NS4和NS5能進(jìn)一步提高檢測的靈敏度。該試紙用于HCV抗體的篩查或臨床診斷，具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡便、反應(yīng)快速、適合現(xiàn)場檢測和經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。圖lHCV抗體快速診斷試紙結(jié)構(gòu)示意圖。附圖符號說明1:上樣墊；2:膠體金墊；3:NC膜；4:吸樣墊5:檢測(T)線；6:質(zhì)控(C)線；7:塑料支撐板具體實(shí)施方式實(shí)施例1:HCV抗體快速診斷試紙的制備1主要材料1.1混合重組抗原為HCV的C0RE，NS3融合抗原美國BiotechAtlanticInc(BBI).和軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院產(chǎn)品，分別用于試紙的包被和標(biāo)記；抗HCV抗體BBI公司產(chǎn)品；氯金酸Sigma公司產(chǎn)品，硝酸纖維素(NC)膜Millipore公司產(chǎn)品；牛血清白蛋白(BSA)，聚乙二醇(PEG)20000，水解酪蛋白Sigma產(chǎn)品。其它常用試劑均為分析純試劑。1.2HCV抗體國家參考品(膠體金類)中國藥品生物制品檢定所檢研制。包括20份陽性血清，編號為P1—P20，20份陰性血清，編號為N1—N20，4份靈敏度血清，編號為L1—1，L1—2，L2_l，L2—2，1份精密度血清，編號為J。2方法2.1HCV混合重組抗原的膠體金標(biāo)記氯金酸一檸檬酸三鈉還原法制備直徑為40nm的膠體金溶液，制備完成后取三份膠體金，用分別用0.2MK2C03將溶液調(diào)到pH7.0、pH8.0和pH9.0。然后將溶液置于磁力攪拌器上緩慢攪拌，按每100ml溶液加入0.5mg、lmg、1.5mg將重組抗原將蛋白緩慢滴加到膠體金溶液中，繼續(xù)攪拌2小時(shí)，再滴加入到終濃度為0.1%的PEG2000和1%的BSA進(jìn)行封閉30min，標(biāo)記結(jié)束后以12000r/m離心，棄上清，沉淀按原體積復(fù)溶至不同配比的膠體金稀釋液(硼酸鹽緩沖液，pH8.0，含BSA、水解酪蛋白，蔗糖和表面活性劑)中。然后將標(biāo)記膠體金溶液按lml溶液鋪22cm2的比例加樣于無紡布上，在溫度20-25°C，相對濕度在<30%的干燥間干燥2-4小時(shí)，制成膠體金墊，干燥備用。2.2HCV混合重組抗原的包被用0.01MpH7.2PBS將HCV重組抗原分別稀釋成0.5mg/ml、lmg/ml、2mg/ml，然后用噴膜儀將重組抗原在NC膜上按lul/cm進(jìn)行劃線包被，同時(shí)在NC膜上包被抗HCV抗體，用于產(chǎn)品的質(zhì)控，包被完成后將NC膜在干燥間干燥8-10小時(shí)，備用。2.3HCV抗體快速診斷試紙的組裝在干燥室內(nèi)溫度20-25°C，相對濕度<30%)取塑料支撐板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板的中部粘貼，在NC膜T線一側(cè)搭接膠體金墊(搭膠體金墊的三分之一)粘貼，在膠體金墊另一側(cè)搭接粘貼上樣墊(搭上樣墊的十分之一)；在NC膜C線一側(cè)搭接吸樣墊(搭吸樣墊的十分之一)；最上面貼一層標(biāo)志膜，最后用裁剪機(jī)將貼好塑料板切成3mm或4mm寬的試紙條。切好的試紙條可以再裝入塑料卡內(nèi)，形成HCV抗體診斷試劑卡。2..4檢測原理和方法將被檢血清或血漿平衡至溫室，將制備好的試紙條或試劑卡平放，檢測時(shí)，在上樣墊上加入50—100ul被檢樣品，若樣品中中含抗HCV抗體，則和樣品墊上的標(biāo)記HCV抗原的膠體金結(jié)合，形成復(fù)合物，并擴(kuò)散到NC膜上進(jìn)一步層析，當(dāng)遇到包被在NC膜上T線處的配對抗原時(shí)，復(fù)合物則又和包被HCV抗原結(jié)合，被捕獲在包被處，當(dāng)被捕獲的膠體金復(fù)合物達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，則形成一條肉眼可見的T線；若血清中不含特異性抗體，則不能形成免疫復(fù)合物，亦不能形成T線，C線作為試劑的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，陽性和陰性樣品檢測時(shí)均會出現(xiàn)。用肉眼直接觀察在15、20、30和45分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測結(jié)果。2.5反應(yīng)體系工藝評價(jià)方法研制產(chǎn)品制備小樣后，以HCV抗體國家參考品(膠體金類)為質(zhì)控品，進(jìn)行檢測，確定最佳的產(chǎn)品反應(yīng)體系和工藝路線。3結(jié)果根據(jù)小樣的檢測結(jié)果，確定了試紙的最佳標(biāo)記pH值為8.0;重組混合抗原的最佳標(biāo)記量為lmg每100ml膠體金溶液；最佳的膠體金稀釋液為50mM硼酸鹽緩沖液，pH8.0，含0.5%BSA、1%的水解酪蛋白，2%蔗糖，0.1%Tween20;最佳的混合抗原包被濃度為lmg/ml。檢測結(jié)果的最佳判定時(shí)間為在30分鐘內(nèi)判定。實(shí)施例2:HCV抗體快速診斷試紙的性能分析1主要材料1.1HCV抗體診斷試紙制備方法見實(shí)施例一；1.2HCV抗體國家參考品(膠體金類)中國藥品生物制品檢定所檢研制。具體說明見實(shí)施例一；1.3含干擾物血清包括常見干擾物高血脂、溶血、黃疸血清各50份，含相關(guān)傳染病HAV、HBV、HIV、TP和HP抗體陽性血清各50份，含不同抗凝劑肝素、EDTA和枸椽酸鈉血槳各20份，由本公司在天津地區(qū)相關(guān)醫(yī)院收集驗(yàn)證并保存，以上血清或血漿經(jīng)兩種以上ELISA檢測均為HCV抗體陰性血清。1.4臨床血清由公司在天津地區(qū)相關(guān)醫(yī)院收集，共1180份，為門診采集檢驗(yàn)用血清。1.5HCV抗體診斷試劑盒(ELISA):上?？迫A生物工程股份有限公司、北京萬泰生物藥業(yè)有限公司和普生(天津)科技有限公司。2.方法2.1樣品檢測方法見實(shí)施例一，在30分鐘內(nèi)判定檢測結(jié)果。2.2HCV抗體國家參考品(膠體金類)檢測取出HCV抗體國家參考品(膠體金類)血清盤，平衡到室溫后用本試紙進(jìn)行檢測。2.3分析靈敏度評估取HCV抗體國家參考品(膠體金類)部分強(qiáng)陽性血清P9、P13、P14，弱陽性血清P2、P4、和L2—2，分別作倍比稀釋，用本試紙和ELISA試劑進(jìn)行對比檢測，直至檢測不出陽性結(jié)果。2.4分析特異性評估用試紙對公司保存的含干擾物樣品進(jìn)行檢測。2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)將本試紙?jiān)谑覝貤l件下保存，在l、3、6、9個(gè)月取出部分試紙，以HCV抗體國家參考品(膠體金類)進(jìn)行測試；將本試紙置于37"C、5(TC條件下，每隔7天取出部試紙，以HCV抗體國家參考品(膠體金類)進(jìn)行測試。2.6臨床樣品試驗(yàn)由企業(yè)從相關(guān)醫(yī)院收集臨床血清，以一種ELISA試劑和本試紙進(jìn)行對照檢測，若遇到檢測結(jié)果不一致的樣品，再以另2種ELISA試劑進(jìn)行檢測，若兩種或以的ELISA試劑為陽性，判定結(jié)果為陽性，兩種或以上的ELISA試劑為陰性，判定結(jié)果為陰性。3結(jié)果3.1HCV抗體國家參考品(膠體金類)檢測對國家參考品(膠體金類)血清盤進(jìn)行測試，結(jié)果和預(yù)期完全一致(表l)，通過國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。表l本試紙對HCV抗體國家參考品(膠體金類)的測試結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>3.2分析靈敏度評估以國家參考品部分陽性血清倍比稀釋后，對比檢測結(jié)果，6份樣品中P2、P4、和L2_2樣品本試紙的分析靈敏度超過ELISA試劑靈敏度，P9、P13、P14，樣品分析靈敏度基本一致，綜合分析本試紙靈敏度達(dá)到或超過ELISA試劑的質(zhì)量。3.3分析特異性評估檢測結(jié)果表明本試紙對常見干擾物高血脂、溶血、黃疸血清檢測均為陰性，對含相關(guān)傳染病HAV、HBV、HIV、TP和HP抗體陽性血清檢測均為陰性，對含不同抗凝劑肝素、EDTA和枸椽酸鈉血漿檢測均為陰性。說明對以上物質(zhì)沒有非特異性反應(yīng)。3.4穩(wěn)定性分析本試紙?jiān)谑覝貤l件下保存，用HCV國家參考品(膠體金類)進(jìn)行測試；1、3、6、9個(gè)月檢測均能通過測試，結(jié)果無顯著性差異，更長時(shí)間的測試還在進(jìn)行中。37。C條件下加速破壞性試驗(yàn)，共檢測到6周，5(TC條件下加速破壞性試驗(yàn)，共檢測到3周，均能通過測試，試紙性能無顯著下降。根據(jù)加速破壞試驗(yàn)結(jié)果，試紙的穩(wěn)定性在室溫條件下應(yīng)該在18個(gè)月以上。3.5臨床樣品試驗(yàn)共檢測了企業(yè)收集的臨床樣品U80份，ELISA試劑檢測出陽性樣品32份，本試紙檢測出陽性樣品35份，具體結(jié)果如下表2本試紙對臨床樣品HCV抗體的檢測結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權(quán)利要求1、一種丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，包括上樣墊(1)，緊密連接于上樣墊一端的含有標(biāo)記HCV混合抗原的膠體金墊(2)，與膠體金墊的另一端緊密連接的NC(硝酸纖維素)膜(3)和緊密連接于NC膜另一端的吸樣墊(4)，NC膜包被有相互分離的檢測(T)線(5)和質(zhì)控(C)線(6)，上樣墊、膠體金墊、NC膜和吸樣墊粘貼到塑料支撐板(7)上形成試紙，其特征在于，所述T線為包被在NC膜上的HCV混合抗原，所述膠體金墊含有HCV重組混合抗原，所述C線為包被在NC膜上的抗HCV混合抗原的抗體。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于，標(biāo)記和包被用HCV混合抗原成份為重組表達(dá)HCV的核心抗原(Core)、非結(jié)構(gòu)蛋白(NS)3、NS4和NS5抗原，抗原為基因工程單獨(dú)表達(dá)或兩種及以上融合表達(dá)蛋白；HCV混合抗原可以為Core、NS3混合，或Core、NS3、NS4混合，Core、NS3、NS5混合或四種全部混合抗原。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于所述的上樣墊為玻璃纖維膜或無紡布，吸樣墊由吸水濾紙構(gòu)成。4、根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于，抗原的包被方法為以0.01MpH7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將混合抗原配制成lmg/ml的溶液，用噴膜儀在NC膜下部以lul/cm的參數(shù)進(jìn)行劃線，包被T線，同時(shí)在NC膜上部包被抗HCV抗體作為C線。劃線后將NC膜在干燥間，溫度20-25°C，濕度小于30%，干燥8-10小時(shí)，5、根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于，混合抗原標(biāo)記膠體金顆粒的方法為以氯金酸-檸檬酸三鈉還原法制備直徑為30—50nm的膠體金溶液，制備完成后取100ml膠體金液放在燒杯內(nèi)，用0.2MK2C03調(diào)至pH8.0，按100ml膠體金溶液加入lmgHCV重組混合抗原，室溫?cái)嚢?小時(shí)，加入保護(hù)劑，封閉20min，12000r/m離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復(fù)溶至100ml，按lml溶液鋪22cm2的比例均勻地鋪在玻璃纖維膜或無紡布上，再置干燥間，溫度20-25。C，濕度小于30%，干燥2-4小時(shí)，制成膠體金墊，備用。6、根據(jù)權(quán)利要求1和3所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于，試紙的裝配方法為在干燥室內(nèi)，溫度20-25'C，濕度小于30%，取塑料支撐板板，將已包被的NC膜放置在塑料支撐板板的中部粘貼，在NC膜T線一側(cè)搭接膠體金墊(搭膠體金墊的三分之一)粘貼，在膠體金墊另一側(cè)搭接粘貼上樣墊(搭上樣墊的十分之一)；在NC膜C線一側(cè)搭接吸樣墊(搭吸樣墊的十分之一)；最上面貼一層標(biāo)志膜，最后用裁剪機(jī)將貼好塑料板切成3mm或4mm寬的試紙條，切好的試紙條可以再裝入塑料卡內(nèi)，形成HCV抗體診斷試劑卡。7、根據(jù)權(quán)利要求1所述的丙型肝炎病毒抗體快速診斷試紙，其特征在于，檢測方法為將被檢血清或血漿平衡至溫室，將試紙條或試劑卡平放，在上樣墊上加入50—100ul被檢樣品，樣品溶解膠體金并在NC膜上層析，然后用肉眼直接觀察在30分鐘內(nèi)C、T線的出現(xiàn)情況，并判定檢測結(jié)果。全文摘要本發(fā)明公開了一種快速診斷丙型肝炎病毒(HCV)抗體的免疫層析試紙及其制備方法，所述試紙，包括上樣墊，緊密連接于上樣墊一端的含有標(biāo)記HCV混合抗原的膠體金墊，與膠體金墊的另一端緊密連接的硝酸纖維素膜和緊密連接于膜另一端的吸樣墊，膜包被有相互分離的檢測(T)線和質(zhì)控(C)線，上樣墊、膠體金墊、膜和吸樣墊粘貼到塑料支撐板上形成試紙，所述T線為包被在NC膜上的HCV混合抗原，所述膠體金墊含有HCV重組混合抗原，所述C線為包被在膜上的抗HCV混合抗原的抗體，用于HCV抗體的篩查或臨床診斷，具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡便、反應(yīng)快速、適合現(xiàn)場檢測和經(jīng)濟(jì)實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號G01N33/576GK101149385SQ20071006003公開日2008年3月26日申請日期2007年10月26日優(yōu)先權(quán)日2007年10月26日發(fā)明者洲李,楊發(fā)青申請人:天津中新科炬生物制藥有限公司