專利名稱：檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極及其分子印跡膜的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是一種檢測技術(shù)領(lǐng)域的電極及其制備方法，具體涉及一種檢測 氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極及其分子印跡膜的制備方法。
背景技術(shù)：
氯霉素(Chloramphenicol, CAP)是一種高效廣譜的抗生素，廣泛用于動物 各種傳染性疾病的治療，但是，氯霉素有嚴(yán)重的副作用，能引起人的再生障礙性 貧血和粒狀白細(xì)胞缺乏癥等疾病，此外，長期微量攝入氯霉素不僅使大腸桿菌、 沙門氏菌等產(chǎn)生耐藥性，而且會引起機體正常菌群失調(diào)，使人們易感染各種疾病， 如果氯霉素在食用動物中殘留，可通過食物鏈傳給人類，因此，氯霉素在動物性 食品中的殘留對人類的健康構(gòu)成了潛在危害，許多國家和地區(qū)相繼禁止或嚴(yán)格限 制使用氯霉素，我國也規(guī)定氯霉素在動物性食品中不得檢出，但是，由于氯霉素 的抑菌效果好，以及相對廉價，目前仍有人將其用于家禽、畜類以及水產(chǎn)品中。 為了保障人民的身體健康以及擴大動物性食品的貿(mào)易往來，建立靈敏度高、特異 性強、簡便易行又經(jīng)濟的氯霉素殘留的分析方法是很有必要的。
在檢測氯霉素方面，國內(nèi)外學(xué)者在熱聚合法制備印跡微?；螂娀瘜W(xué)法制備印 跡膜的基礎(chǔ)上，建立了檢測生物樣品中氯霉素殘留的新方法。這些分子印跡傳感 裝置的感受器部分，是通過分子印跡微?；蛘呤请娀瘜W(xué)方法制備的分子印跡膜組 成的，缺點在于利用分子印跡微粒制備的傳感儀組裝比較復(fù)雜，過程繁瑣，且不 適合對多個樣品進行檢測，而利用電化學(xué)方法制備分子印跡膜目前還僅限于實驗 室研究階段，由于制備和檢測過程都要在柱狀金屬電極上進行，很難批量制備并 用于重復(fù)檢測，因此實際推廣應(yīng)用價值比較低。
經(jīng)對現(xiàn)有技術(shù)文獻的檢索發(fā)現(xiàn)，專利申請?zhí)枮?00810016487. 7的中國專利， 名稱為"檢測痕量環(huán)境內(nèi)分泌干擾物的分子印跡膜電極制備方法及檢測方法"， 該專利中提出將EDCs模板分子、功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑和有機溶 劑按照摩爾比為0. 1 1: 1: 0. 5 6: 35 65: 0. 05 0. 05: 2.0 25配制聚合液，工作電極表面經(jīng)過打磨、超聲波清洗、酸堿清洗、雙蒸水清洗以及干燥，然 后將處理后的工作電極浸泡于聚合液中，取出進行洗脫處理，重復(fù)上述操作4 7次，制得分子印跡膜電極。該方法的缺陷在于在其工作電極為玻璃碳電極，成 本較高，在工作電極表面制備分子印跡膜時操作繁瑣，電極處理過程復(fù)雜，分子 印跡膜制備過程中需要進行多次洗脫，因而制備過程耗時較長?？傊摲肿佑?跡膜電極制備成本高、制備時間長，難以實現(xiàn)對大量樣品的檢測，因而在實際應(yīng) 用中具有很大的局限性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提出了一種檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳 感電極及其分子印跡膜的制備方法，電導(dǎo)型傳感電極由兩片絲網(wǎng)印刷電極平行設(shè) 置組成，將聚合液在一次性絲網(wǎng)印刷電極表面直接原位聚合過程中嵌埋模板分 子，然后將模板分子洗脫，使分子印跡膜內(nèi)部形成具有固定大小和形狀的"空穴" 及具有確定排列的功能基團，其對模板分子的立體結(jié)構(gòu)具有記憶性，待測樣品中 的氯霉素分子能夠與這種"空穴"特異性的結(jié)合，從而改變分子印跡膜的電化學(xué) 性質(zhì)，造成分子印跡膜的電導(dǎo)率增大，過膜電導(dǎo)增加。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)
本發(fā)明所涉及的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極，由兩片絲網(wǎng)印刷電極平行設(shè) 置組成，絲網(wǎng)印刷電極包括電極基片、接線端子、電極連線、工作電極、絕緣 層，接線端子、電極連線與工作電極連成一體組成一條電極基體，電極基體印制 在電極基片上，電極連線的表面涂覆一層絕緣體，接線端子是裸露的導(dǎo)電材料薄 膜，兩片絲網(wǎng)印刷電極中的一片的工作電極反應(yīng)區(qū)上覆蓋有氯霉素分子印跡膜， 而另一片中的工作電極為空白電極。
所述絕緣材料為PVC (聚氯乙烯)。
所述氯霉素分子印跡膜，其直徑為5 mm 6mm，厚度為80 100um。 所述電極基片，其材料為聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、基乙烯四種聚合
物的其中之一，上述聚合物為片材或巻材。
本發(fā)明所涉及的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極分子印跡膜的制備方法，包括
如下步驟
歩驟一，氯霉素分子印跡膜片的制備稱取氯霉素模板分子與功能單體溶于
溶劑，超聲波震蕩混合均勻后加入交聯(lián)劑，再超聲波震蕩混合均勻后加入粘合劑，再經(jīng)超聲波震蕩混合均勻，然后加入引發(fā)劑，超聲波震蕩混合均勻，通氮氣除氧， 將上述操作所制備的溶液滴加到電導(dǎo)型傳感電極中一個絲網(wǎng)印刷電極的工作電 極的反應(yīng)區(qū)，蓋玻片壓蓋，然后將該絲網(wǎng)印刷電極平放在培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿周 圍放置冰與干冰的混合物，并在iooow紫外光聚合，形成內(nèi)含印跡分子的分子印 跡膜。
步驟二，氯霉素分子印跡膜內(nèi)部氯霉素分子的去除將步驟一所得的氯霉素 分子印跡膜用體積比為9: 1的甲醇-乙酸混合溶液經(jīng)索式提取器中反復(fù)洗脫氯霉 素分子，直到最后一次洗脫時洗脫液中檢測不到模板分子存在為止，于雙蒸水中 保存?zhèn)溆谩?br> 所述功能單體為甲基丙烯酸、甲基丙烯酸胺、丙烯酰胺中的一種。 所述溶劑為四氫呋喃、二甲亞砜、無水乙醇或甲苯中的一種，溶劑體積為
350ul 400ul。
所述氮氣除氧，其時間為5分鐘 10分鐘。 所述冰與干冰的混合物，其中冰與干冰的質(zhì)量比為9 15。 所述紫外光聚合其時間為15分鐘 30分鐘。 所述氯霉素模板分子、功能單體與交聯(lián)劑的摩爾比為1: 5: 20。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果
(1) 本發(fā)明的電導(dǎo)型電極構(gòu)造簡單，不需要價格昂貴的參比電極；采用電 導(dǎo)型電極構(gòu)造的傳感器其靈敏度顯著高于電流型傳感器；操作簡單，測試不同樣 品時僅需要更換帶有不同分子印跡膜的電導(dǎo)型電極即可；抗干擾能力強；響應(yīng)時 間短，檢測在3min內(nèi)即可完成；
(2) 本發(fā)明方法中所用的四氫呋喃、乙二醇二甲基丙烯酸等親水性溶劑作 反應(yīng)溶劑和制孔劑，所制備的聚合物可直接應(yīng)用于含水溶劑，降低了分子印跡膜 制備過程及使用過程對條件的要求，擴大了材料的應(yīng)用范圍；
(3) 本發(fā)明方法的反應(yīng)過程中加入了粘合劑水性聚氨酯，增加了分子印跡 膜的柔韌性，防止了在聚合過程中分子印跡膜出現(xiàn)裂痕的現(xiàn)象，并使所制備的分 子印跡膜空穴分布均勻，十分有利于檢測效果的提高；
(4) 本發(fā)明方法的聚合過程中采用冰、干冰混合冰浴，控制了聚合過程中 溫度恒定，聚合反應(yīng)在低溫下進行，避免了熱聚合反應(yīng)的發(fā)生，干冰揮發(fā)過程中 釋放大量C02氣體，C02密度大于空氣，可在聚合反應(yīng)區(qū)域周圍形成隔絕氧氣的環(huán)境，因而避免了聚合過程中氧化還原反應(yīng)的干擾，從而提高了分子印跡膜的特異 性識別能力。
(5)本發(fā)明的方法獲得的分子印跡膜片可應(yīng)用于制備電導(dǎo)型生物傳感器， 本發(fā)明加工方法簡便、成本低，用該絲網(wǎng)印刷電極制成的電導(dǎo)型傳感器檢測氯霉 素操作方便，對于不同樣品，只需替換附有氯霉素分子印跡膜的絲網(wǎng)印刷電極即 可，且具有響應(yīng)時間快、使用壽命長、重現(xiàn)性良好和特異性識別能力強等優(yōu)點。


圖1為本發(fā)明的使用檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極的檢測原理示意圖； 圖2為本發(fā)明的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極的平面圖； 圖3為本發(fā)明的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極的側(cè)視圖4為本發(fā)明的實施例中使用檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極檢測氯霉素的 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合附圖對本發(fā)明的實施例作詳細(xì)說明本實施例在以本發(fā)明技術(shù)方案 為前提下進行實施，給出了詳細(xì)的實施方式和具體操作過程，但本發(fā)明的保護范 圍不限于下述的實施例。 圖1為使用檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極的檢測氯霉素的工作原理示意圖， 絲網(wǎng)印刷電極上的分子印跡膜上的特異性空穴選擇性的與氯霉素分子結(jié)合，造成 分子印跡膜電化學(xué)性質(zhì)變化，導(dǎo)致高頻電壓激勵下的電導(dǎo)性能變化，電導(dǎo)信號經(jīng) 電導(dǎo)-電壓轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)化為電壓信號并放大，再經(jīng)模數(shù)轉(zhuǎn)換器轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號，經(jīng) 單片機分析處理后，數(shù)據(jù)在存儲器中保存記錄并可隨時提取，同時氯霉素濃度直 接從液晶顯示電路讀出，數(shù)據(jù)可通過USB接口傳輸?shù)接嬎銠C作長期儲存。
如圖2、 3所示，下述實施例涉及的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極，由兩片 絲網(wǎng)印刷電極平行設(shè)置組成，絲網(wǎng)印刷電極包括電極基片l、接線端子2、電 極連線3、工作電極4、絕緣層5，接線端子2、電極連線3與工作電極4連成一 體組成一條電極基體，電極基體印制在電極基片1上，電極連線3的表面涂覆一 層絕緣體5，接線端子2是裸露的導(dǎo)電材料薄膜，兩片絲網(wǎng)印刷電極中的一片的 工作電極反應(yīng)區(qū)上覆蓋有氯霉素分子印跡膜6，而另一片中的工作電極為空白電 極。
所述絕緣層5，其材料為PVC (聚氯乙烯)。所述工作電極4，為邊長5mm的實心矩形。
所述電極基片l，其長度為36mm 40mm、寬8mm 10mm、厚0. 4 0. 45mra; 所述接線端子2，其長度為9 mm 10咖、寬為1醒 1. 2mra; .所述電極連線3，其長度為20 mm 25mm、寬為l腿 1. 2咖； 所述氯霉素分子印跡膜6，其直徑為5mm 6mm，厚度為80 u m 100 u m。 所述電極基片l，其材料為聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、基乙烯四種聚 合物的其中之一，其中優(yōu)先選擇聚氯乙烯，上述聚合物為片材或巻材。
下述實施例所涉及的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極分子印跡膜的制備方法， 包括如下步驟-
步驟一，氯霉素分子印跡膜片的制備稱取氯霉素模板分子與功能單體溶于 溶劑，超聲波震蕩混合均勻后加入交聯(lián)劑，再超聲波震蕩混合均勻后加入粘合劑， 再經(jīng)超聲波震蕩混合均勻，然后加入引發(fā)劑，超聲波震蕩混合均勻，通氮氣除氧， 將上述操作所制備的溶液滴加到電導(dǎo)型傳感電極中一個絲網(wǎng)印刷電極的工作電 極的反應(yīng)區(qū)，蓋玻片壓蓋，然后將該絲網(wǎng)印刷電極平放在培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿周 圍放置冰與干冰的混合物，并在IOOOW紫外光聚合，形成內(nèi)含印跡分子的分子印 跡膜。
步驟二，氯霉素分子印跡膜內(nèi)部氯霉素分子的去除將步驟一所得的氯霉素 分子印跡膜用體積比為9: 1的甲醇-乙酸混合溶液經(jīng)索式提取器中反復(fù)洗脫氯霉 素分子，直到最后一次洗脫時洗脫液中檢測不到模板分子存在為止，于雙蒸水中 保存?zhèn)溆谩?br> 所述功能單體為甲基丙烯酸、甲基丙烯酸胺、丙烯酰胺中的一種。 所述溶劑為四氫呋喃、二甲亞砜、無水乙醇或甲苯中的一種，溶劑體積為
350 u 1 400n 1。
所述交聯(lián)劑為乙二醇二甲基丙烯酸、3， 5-二丙烯酰胺基苯甲酸中的一種。 所述粘合劑，為水性聚氨酯。 所述引發(fā)劑，為偶氮二異丁氰。 所述超聲波震蕩，其時間為5分鐘 15分鐘。 所述氮氣除氧，其時間為5分鐘 10分鐘。
所述將溶液滴加到電導(dǎo)型傳感電極中一個絲網(wǎng)印刷電極的工作電極的反應(yīng)區(qū)，溶液的滴加量為8yl -15lil。
所述冰與干冰的混合物，其中冰與干冰的質(zhì)量比為9 15。 所述紫外光聚合其時間為15分鐘 30分鐘。
所述氯霉素模板分子、功能單體與交聯(lián)劑的摩爾比為1: 5: 20。
實施例1
采用絲網(wǎng)印刷技術(shù)將導(dǎo)電銀漿在電極基片上印刷電極連線和接線端子的基
體，電極連線表面涂覆一層pvc絕緣體，下端的工作電極采用濺射石墨法涂覆一 層導(dǎo)電石墨。用50%硝酸浸泡處理，再用蒸餾水沖洗3次。晾干，4'C保存?zhèn)溆谩?稱取0. 05g氯霉素和70 u 1甲基丙烯酸功能單體溶于380 n 1四氫呋喃溶劑 中，超聲混合10分鐘后加入乙二醇二甲基丙烯酸交聯(lián)劑，超聲混合10分鐘，再 往反應(yīng)體系中加入70ii 1水性聚氨酯粘合劑，超聲混合10分鐘后加入0. 02g的 引發(fā)劑偶氮異丁氰，超聲混合20分鐘后，通氮氣5分鐘，將制好的混合液滴加 10ul到絲網(wǎng)印刷電極工作電極區(qū)域，蓋上蓋玻片，冰干冰質(zhì)量比為9: l混 合物冰浴、1000W紫外光距離18cm照射15分鐘，重復(fù)兩次，得到內(nèi)含氯霉素的 分子印跡膜。
將所制得的承載分子印跡膜的絲網(wǎng)印刷電極用體積比為9: 1的甲醇-乙酸混 合溶液經(jīng)索式提取器中反復(fù)洗脫氯霉素分子，直到最后一次洗脫時洗脫液中檢測 不到模板分子存在為止，得到具有氯霉素空間結(jié)構(gòu)空穴的分子印跡膜。通過電鏡 掃描分析、原子力顯微鏡來觀察分子印跡膜的表征。電鏡掃描與原子力顯微鏡觀 察顯示，該方法制備的印跡膜表面存在大量可以特異性識別模板分子印跡微孔， 直徑介于0. 1 ti m 0. 48 u m之間。
作為優(yōu)選的實施例，冰干冰質(zhì)量比9: 1混合物冰浴、IOOOW紫外光照射
15分鐘，重復(fù)兩次聚合成膜，印跡鍵合的效果達到最佳。
檢測樣品，以檢測牛奶樣品中氯霉素殘留量為例
制作標(biāo)準(zhǔn)曲線利用Tris-HCL (IO薩、ph7.4)溶液為支持液，將與電導(dǎo)型 傳感器相連接的分子印跡絲網(wǎng)印刷電極插入到支持液中，使分子印跡膜片完全浸 入到支持液中，磁力攪拌器攪拌條件下加入20"L氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液(0.01mg/L)， 通過電導(dǎo)型傳感器進行檢測，記錄結(jié)果并分析，檢測結(jié)束后，更換帶有分子印跡 膜片的絲網(wǎng)印刷電極條，采用相同操作方法分別加入40wL 、 60yL、 80uL、IOO"L氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液，進行檢測，針對每個濃度梯度重復(fù)檢測五次，然后根據(jù) 五次做出的實驗結(jié)果，建立氯霉素檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如圖4所示。
樣品處理取經(jīng)高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)確證不含有氯霉素殘留的牛奶
樣品5個，用10ml移液器準(zhǔn)確移取分別樣品5ml放至10ml離心管中，加入lral 含有60u g/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液，振蕩混勻15min,再用6 ml乙酸乙酯進行萃取， 收集含氯霉素的有機相，40 °C、 240mbar條件下蒸發(fā)去除有機溶劑，最后加入 5ml乙腈-2M高氯酸水溶液，體積比為3: 2，攪拌20s，振蕩混合均勻作為待測 溶液。
將上述方法制成的絲網(wǎng)印刷電極的分子印跡膜插入龜導(dǎo)型傳感器，浸入 10mL、 Tris-HCL溶液(IO腿、ph7.4)，滴加20"L處理的樣品，測定并記錄讀 數(shù)，并計算出氯霉素殘留量。針對同一樣品，更換絲網(wǎng)印刷電極條，連續(xù)檢測5 次，以所得的平均值作為檢測值。在本實施例中，所檢測的牛奶樣品中氯霉素的 標(biāo)加回收率為94.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)差為2.73%，所檢樣品中氯霉素的平均含量為 74ng/g。該方法在牛奶樣品中的檢測限為3.6ng/g，線性范圍介于5ng/g 200 ng/g之間，線性方程為Y=0. 0038+0. 00499X， R=0. 99958。將制備好的10個 絲網(wǎng)印刷電極上原位合成的氯霉素分子印跡膜在-4'C條件下保存于雙蒸水中，經(jīng) 過兩個月之后重新檢測相同濃度的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液，檢測的結(jié)果表明兩次檢測結(jié) 果的相對標(biāo)準(zhǔn)誤差值小于2.6%，因此本實施例中的用于快速檢測氯霉素的電導(dǎo) 型傳感電極具有良好的重復(fù)性和穩(wěn)定性。
實施例2
在氯霉素分子印跡膜的制備過程中，紫外聚合時間為連續(xù)照射30min，其他 條件不變。在檢測過程中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備同實施例1，檢測樣品采用雞肉。
樣品處理取經(jīng)高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)確證不含有氯霉素殘留的雞肉 樣品5個，取1克肉樣，放入組織勻漿機的樣品杯中，加入10毫升0. 1 M pH 為7. 2的磷酸鹽緩沖液，攪碎并均質(zhì)化，將其轉(zhuǎn)移到15ml離心管中，加入lml含 有40yg/L的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液，再用6 ml乙酸乙酯進行萃取，振蕩混勻15min， 收集含氯霉素的有機相，40 'C、 240rabar條件下蒸發(fā)去除有機溶劑，最后加入 乙腈-2M高氯酸水溶液，體積比為3: 2，攪拌20s，振蕩混合均勻作為待測溶液。 在本實施例中，所檢測市售雞肉中氯霉素的回收率為％.2%，所檢樣品中氯霉素的平均含量為57ng/g。用不同濃度的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品進行標(biāo)加試，并重復(fù)三次， 所得的檢測值經(jīng)統(tǒng)計分析，得出該方法檢測肉品中氯霉素的檢測限為3. 3 ng/g， 線性范圍介于1.0ng/g 250 ng/g之間，線性方程為Y=0. 0087+0. 0063X， R =0.986。穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗同實施例1。
實施例3
在氯霉素分子印跡膜的制備過程中，絲網(wǎng)印刷電極接線端子、電極連線、工 作電極均用導(dǎo)電銀漿印制，其他與實施例l同。在檢測過程中，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 同實施例l，檢測樣品采用雞蛋。
樣品處理取經(jīng)高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)確證不含有氯霉素殘留的雞蛋 樣品5個，取5ml放至10ml離心管中，振蕩混勻15min，加入lml含有20y g/L 的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)液，再用3ml乙酸乙酯進行萃取，收集含氯霉素的有機相，40 。C、 240mbar條件下蒸發(fā)去除有機溶劑，最后加入5ml乙腈-2M高氯酸水溶液，體積 比為3: 2，攪拌20s，振蕩混合均勻作為待測溶液。在本實施例中，所檢測雞蛋 中氯霉素的回收率為93.4%,所檢樣品中氯霉素的平均含量為29 ng/g。用不同 濃度的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)品進行標(biāo)加試，并重復(fù)三次，所得的檢測值經(jīng)統(tǒng)計分析，得出 該方法檢測肉品中氯霉素的檢測限為4.2ng/g，線性范圍介于20ng/g 300g/g 之間，線性方程為Y=0. 00312+0. 00797X， R=0.973。穩(wěn)定性及重復(fù)性試驗同 實施例1。
權(quán)利要求
1、一種檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極，其特征在于，電導(dǎo)型傳感電極由兩片絲網(wǎng)印刷電極平行設(shè)置組成，絲網(wǎng)印刷電極包括電極基片、接線端子、電極連線、工作電極、絕緣層，接線端子、電極連線與工作電極連成一體組成一條電極基體，電極基體印制在電極基片上，電極連線的表面涂覆一層絕緣體，接線端子是裸露的導(dǎo)電材料薄膜，兩片絲網(wǎng)印刷電極中的一片的工作電極反應(yīng)區(qū)上覆蓋有氯霉素分子印跡膜，而另一片中的工作電極為空白電極。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極，其特征是，所述 氯霉素分子印跡膜，其直徑為5mm 6mm，厚度為8(^m 100nm。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極，其特征是，所述 電極基片，其材料為聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚苯乙烯、基乙烯四種聚合物的其中 之一，上述聚合物為片材或巻材。
4、 一種如權(quán)利要求1所述的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極分子印跡膜的制 備方法，包括如下步驟步驟一，氯霉素分子印跡膜的制備稱取氯霉素模板分子與功能單體溶于溶 劑，超聲波震蕩混合均勻后加入交聯(lián)劑，再超聲波震蕩混合均勻后加入粘合劑， 再經(jīng)超聲波震蕩混合均勻，然后加入引發(fā)劑，超聲波震蕩混合均勻，通氮氣除氧， 將上述操作所制備的溶液滴加到電導(dǎo)型傳感電極中一個絲網(wǎng)印刷電極的工作電 極的反應(yīng)區(qū)，蓋玻片壓蓋，然后將該絲網(wǎng)印刷電極平放在培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿周 圍放置冰與干冰的混合物，并在1000W紫外光聚合，形成內(nèi)含印跡分子的分子 印跡膜；步驟二，氯霉素分子印跡膜內(nèi)部氯霉素分子的去除將步驟一所得的氯霉素 分子印跡膜用體積比為9: 1的甲醇-乙酸混合溶液經(jīng)索式提取器中反復(fù)洗脫氯霉 素分子，直到最后一次洗脫時洗脫液中檢測不到模板分子存在為止，于雙蒸水中 保存?zhèn)溆谩?br> 5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極分子印跡膜的制備 方法，其特征是，所述功能單體為甲基丙烯酸、甲基丙烯酸胺、丙烯酰胺中的一 種。
6、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極分子印跡膜的制備 方法，其特征是，所述溶劑為四氫呋喃、二甲亞砜、無水乙醇或甲苯中的一種， 溶劑體積為350 u 1 400 y 1。
7、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極分子印跡膜的制備 方法，其特征是，所述氮氣除氧，其時間為5分鐘 10分鐘。
8、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極分子印跡膜的制備 方法，其特征是，所述冰與干冰的混合物，其中冰與干冰的質(zhì)量比為9 15。
9、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極分子印跡膜的制備 方法，其特征是，所述紫外光聚合其時間為15分鐘 30分鐘。
10、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極分子印跡膜的制備 方法，其特征是，所述氯霉素模板分子、功能單體與交聯(lián)劑的摩爾比為1: 5: 20。
全文摘要
一種生物傳感器領(lǐng)域的檢測氯霉素的電導(dǎo)型傳感電極及其分子印跡膜的制備方法，本發(fā)明中，電導(dǎo)型傳感電極由兩片絲網(wǎng)印刷電極平行設(shè)置組成，電導(dǎo)型傳感電極中的氯霉素分子印跡膜制備方法如下將聚合液在一次性絲網(wǎng)印刷電極表面直接原位聚合過程中嵌埋模板分子，然后將模板分子洗脫，使分子印跡膜內(nèi)部形成具有固定大小和形狀的“空穴”及具有確定排列的功能基團，其對模板分子的立體結(jié)構(gòu)具有記憶性，待測樣品中的氯霉素分子能夠與這種“空穴”特異性結(jié)合，改變分子印跡膜的電化學(xué)性質(zhì)，造成分子印跡膜的電導(dǎo)率增大，過膜電導(dǎo)增加。本發(fā)明加工方法簡便、成本低，用該絲網(wǎng)印刷電極制成的電導(dǎo)型傳感器檢測氯霉素操作方便，響應(yīng)時間快、使用壽命長。
文檔編號G01N27/02GK101424650SQ20081020301
公開日2009年5月6日 申請日期2008年11月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月20日
發(fā)明者劉國艷, 鋒 李, 李為強, 柴春彥, 莉 王 申請人:上海交通大學(xué)