專(zhuān)利名稱(chēng)：一種定量海水中石莼屬海藻顯微階段總個(gè)體數(shù)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及石莼屬綠潮海藻爆發(fā)的預(yù)測(cè)方法，具體的說(shuō)是一種準(zhǔn)確定
量海水中石莼屬C7/va (包括原滸苔屬五"^ramo^/^)海藻顯微階段總個(gè)體數(shù)的方法。
背景技術(shù)：
綠潮爆發(fā)是一個(gè)由滸苔特殊的生長(zhǎng)和繁殖特點(diǎn)、海洋氣候環(huán)境和獨(dú)特的沿海水產(chǎn)養(yǎng)殖習(xí)慣等幾個(gè)方面綜合作用的結(jié)果。因此，每一方面的深入研究都會(huì)為評(píng)估綠潮爆發(fā)起到積極作用。而在這其中的生物學(xué)方面中，如何準(zhǔn)確定量海水中石莼屬海藻個(gè)體數(shù)這一問(wèn)題，尤其顯得特別重要。在實(shí)際的沿海和海上考察中，目前尚沒(méi)有有效地的技術(shù)方法來(lái)準(zhǔn)確定量海水中的石莼屬海藻個(gè)體數(shù)的方法，從而無(wú)法準(zhǔn)確的估計(jì)海水中潛在的滸苔生物量。抽濾法即通過(guò)將海水抽濾到0.45(im或0.22(im濾膜上，統(tǒng)計(jì)海水中配
子或者孢子數(shù)量的方法不可靠，因?yàn)槭粚俸Ｔ宓呐渥雍玩咦优c很多單細(xì)胞海藻很難區(qū)分；同時(shí)由于不同石莼屬海藻的初期發(fā)育階段很難區(qū)分，得到的結(jié)果無(wú)法從石莼屬類(lèi)別上統(tǒng)計(jì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種準(zhǔn)確定量海水中石莼屬Wra(包括原滸苔屬五"feramo^/w )顯微階段海藻總個(gè)體數(shù)的方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明釆用的技術(shù)方案為定量海水中石莼屬海藻顯微階段總個(gè)體數(shù)的方法
1) 預(yù)處理，樣品海水用100目的紗絹網(wǎng)過(guò)濾，1L過(guò)濾后的海水樣品中加入500 飽和二氧化鍺水溶液，而后加入f/2營(yíng)養(yǎng)鹽(母液A和B各lmL)充氣培養(yǎng)；
2) 培養(yǎng)條件，將加入f/2營(yíng)養(yǎng)鹽的海水在溫度為15-20。C、光強(qiáng)為50-100pmol photons nf2 s"、光周期為12 h白天:12 h黑夜條件下充氣(空氣)培養(yǎng)，培養(yǎng)7天后更換lL新鮮的f/2培養(yǎng)液，以后每5天換一次培養(yǎng)液，培養(yǎng)3-4周，待用；
3) 統(tǒng)計(jì)，經(jīng)培養(yǎng)后即可以確定每升海水中石莼屬海藻總的個(gè)體數(shù)量。所述培養(yǎng)后的器皿中可見(jiàn)不同石莼屬海藻物種長(zhǎng)成的幼苗，包括不同
石莼屬物種的孢子或者配子體及其它繁殖方式形成的幼苗；而后通過(guò)顯微觀察，可以區(qū)分石莼和滸苔，并統(tǒng)計(jì)石莼屬海藻的總數(shù)量，即可以確定每升海水中石莼屬海藻總的個(gè)體數(shù)量；最后收集幼苗在步驟2的培養(yǎng)條^^下，繼續(xù)培養(yǎng)6周后根據(jù)不同的海藻形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)。
所述f/2營(yíng)養(yǎng)鹽成分由母液A和母液B組成，其中母液A包括NaN0374.8g, KH2P044.4g，溶于1L蒸餾水；母液B包括ZnS04'4H20 23mg,MnCl2.4H20 178mg， CuS04.5H20 10mg， FeC6H507 5H203.9g,Na2Mo04'2H20 7.3mg， CoCl2.6H20 12mg; Na2EDTA4.35g溶于1L蒸餾7義。1L海水樣品加母液A和B各lmL. 1L新鮮的f/2培養(yǎng)液是由1L消毒海水加母液A和B各lmL配制而成。
所述樣品海水通過(guò)100目的紗絹網(wǎng)濾掉水中可見(jiàn)的藻體殘?jiān)Ｋ龉庵芷跒?2h白天:12h黑夜條件下，充氣培養(yǎng)為充過(guò)濾的空氣。
本發(fā)明所具有的優(yōu)點(diǎn)
1. 本發(fā)明方法可以最大可能的定量海水中顯微階段可以培養(yǎng)的石莼屬海藻的數(shù)量。
2. 采用本發(fā)明定量計(jì)數(shù)的方法消除了在自然界條件下，因?yàn)樽匀煌饬蜋C(jī)械損傷等導(dǎo)致的死亡或因以石莼屬海藻為食物的天敵捕食造成的數(shù)量減少。
3. 本發(fā)明定量計(jì)數(shù)的方法釆用最優(yōu)的生長(zhǎng)條件使石莼屬滸苔生長(zhǎng)同步化，雖然天然海水中的石莼屬海藻處于不同的顯微生長(zhǎng)階段，但是通過(guò)提供最優(yōu)的生長(zhǎng)條件，不同階段的不同種類(lèi)的石莼屬海藻在培養(yǎng)3-4周左右都可以發(fā)育形成肉眼可見(jiàn)的幼苗。
4. 本發(fā)明定量計(jì)數(shù)的方法將收集獲得的不同石莼屬海藻生長(zhǎng)在相同培養(yǎng)條件下，其克服了不同環(huán)境條件對(duì)石莼屬海藻形態(tài)建成的誘導(dǎo)效應(yīng)，使得依據(jù)藻體的形態(tài)分類(lèi)更加可靠。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1
2009年2月20日從青島沿海的輪渡碼頭、團(tuán)島灣、棧橋、第一海水洛場(chǎng)、五四廣場(chǎng)和石老人分別獲取5L海水水樣，通過(guò)IOO目的紗絹網(wǎng)濾掉水中可見(jiàn)的藻體，轉(zhuǎn)到1 L的燒杯中(11=5)，加入飽和二氧化鍺500pL水溶液用來(lái)抑制硅藻生長(zhǎng)，而后將其加入到f/2營(yíng)養(yǎng)鹽(母液A和B各lmL)中培養(yǎng)后加入；然后轉(zhuǎn)到溫度為15士0.5。C、光強(qiáng)為80±5 jimol photons m-2 s"、光周期為12h白天:12h黑夜條件下充空氣培養(yǎng)，培養(yǎng)7天后換第一次新鮮消毒海水配制的f/2培養(yǎng)液，以后每5天換一次培養(yǎng)液，培養(yǎng)3-4周，統(tǒng)計(jì)石莼屬海藻的總數(shù)量，幼苗最多的是棧橋，平均每升1308株；最少的是石老人，平均每升只有10株。然后收集幼苗，在上述培養(yǎng)條件下繼續(xù)培養(yǎng)，6周后可根據(jù)不同的海藻形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)，總共根據(jù)形態(tài)分了 9類(lèi)，分子水平進(jìn)行鑒定。
所述f/2營(yíng)養(yǎng)鹽成分由母液A和母液B組成，其中母液A包括NaN0374.8g, KH2P044.4g，溶于1L蒸餾水；母液B包括ZnS04'4H20 23mg,MnCl2.4H20 178mg, CuS04.5H20 10mg， FeC6H507 5H203.9g,Na2Mo04.2H20 7.3mg, CoCl2.6H20 12mg; Na2EDTA4.35g溶于1L蒸餾水。1L海水樣品加母液A和B各lmL. 1L新鮮的f/2培養(yǎng)液是由IL消毒海水加母液A和B各lmL配制而成。實(shí)施例2
2009年4月7日從江蘇連云港沿海的西墅全浮紫菜養(yǎng)殖區(qū)，劉圩半浮紫菜養(yǎng)殖區(qū)和蝦池，以及響水全浮紫菜養(yǎng)殖區(qū)和水產(chǎn)動(dòng)物養(yǎng)殖池中共6個(gè)站位分別獲取5L海水水樣，通過(guò)IOO目的紗絹網(wǎng)濾掉水中可見(jiàn)的藻體，轉(zhuǎn)到1 L的燒杯中(r^5),加入飽和二氧化鍺500 (^L水溶液用來(lái)抑制硅藻生長(zhǎng)，后加入f/2營(yíng)養(yǎng)鹽(母液A和B各lmL),然后轉(zhuǎn)到溫度為15±0.5°C、光強(qiáng)為80±5nmol photons m-2s"、光周期為12 h白天:12 h黑夜條件下充氣(空氣)培養(yǎng)，培養(yǎng)7天后換第一次新鮮消毒海水配制的f/2培養(yǎng)液，以后每5天換一次培養(yǎng)液，培養(yǎng)3-4周，統(tǒng)計(jì)石莼屬海藻的總數(shù)量，幼苗最多的是劉圩半浮紫菜養(yǎng)殖區(qū)，平均每升2860株；最少的是響水全浮紫菜養(yǎng)殖區(qū)，平均每升只有7株。然后全部收集或部分收集依據(jù)幼苗數(shù)量，在相同的條件下繼續(xù)培養(yǎng)，6周時(shí)可根據(jù)不同的海藻形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)，總共根據(jù)形態(tài)分了 4類(lèi)，分子水平進(jìn)行鑒定；
實(shí)施例3
2009年4月17日從青島沿海的輪渡碼頭、團(tuán)島灣、棧橋、第一海水浴場(chǎng)、五四廣場(chǎng)和石老人分別獲取5L海水水樣，通過(guò)IOO目的紗絹網(wǎng)濾掉水中可見(jiàn)的藻體，轉(zhuǎn)到1 L的燒杯中(11=5), 1L水樣中加入飽和二氧化鍺500 nL水溶液，后加入f/2營(yíng)養(yǎng)鹽(母液A和B各lmL)，然后轉(zhuǎn)到溫度為15士0.5。C、光強(qiáng)為80±5 pmol photons rt^s"、光周期為12 h白天:12 h黑夜條件下充氣(空氣)培養(yǎng)，培養(yǎng)7天后換第一次新鮮消毒海水配制的f/2培養(yǎng)液，以后每5天換一次培養(yǎng)液，培養(yǎng)3-4周左右，統(tǒng)計(jì)石莼屬海藻的總數(shù)量，幼苗最多的是棧橋，平均每升2060株；最少的是輪渡碼頭，平均每升只有48株。然后全部收集或部分收集依據(jù)幼苗數(shù)量，在相同的條件下繼續(xù)培養(yǎng)，6周時(shí)可根據(jù)不同的海藻形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)，總共根據(jù)形態(tài)分了 9類(lèi)，分子水平進(jìn)行鑒定。
權(quán)利要求
1.一種定量海水中石莼屬海藻顯微階段總個(gè)體數(shù)的方法，其特征在于1)預(yù)處理，樣品海水用100目的紗絹網(wǎng)過(guò)濾，1L過(guò)濾后的海水樣品中加入500μL飽和二氧化鍺水溶液，而后加入f/2營(yíng)養(yǎng)鹽(母液A和B各1mL)充氣培養(yǎng)；2)培養(yǎng)條件，將加入f/2營(yíng)養(yǎng)鹽的海水在溫度為15-20℃、光強(qiáng)為50-100μmol photons m-2s-1、光周期為12h白天:12h黑夜條件下充氣(空氣)培養(yǎng)，培養(yǎng)7天后更換1L新鮮的f/2培養(yǎng)液，以后每5天換一次培養(yǎng)液，培養(yǎng)3-4周，待用；3)統(tǒng)計(jì)，經(jīng)培養(yǎng)后即可以確定每升海水中石莼屬海藻總的個(gè)體數(shù)量。
2. 按權(quán)利要求1所述的定量海水中石莼屬海藻總個(gè)體數(shù)的方法，其特 征在于所述培養(yǎng)后的器皿中可見(jiàn)不同石莼屬海藻物種長(zhǎng)成的幼苗，包括 不同石莼屬物種的孢子或者配子體及其它繁殖方式形成的幼苗；而后通過(guò) 顯微觀察，可以區(qū)分石莼和滸苔，并統(tǒng)計(jì)石莼屬海藻的總數(shù)量，即可以確 定每升海水中石莼屬海藻總的個(gè)體數(shù)量；最后收集幼苗在步驟2的培養(yǎng)條 件下，繼續(xù)培養(yǎng)6周后根據(jù)不同的海藻形態(tài)特征進(jìn)行分類(lèi)。
3. 按權(quán)利要求l或2所述的定量海水中石莼屬海藻總個(gè)體數(shù)的方法， 其特征在于所述f/2營(yíng)養(yǎng)鹽成分由母液A和母液B組成，其中母液A包 括NaN03 74.8g， KH2P044.4g，溶于1L蒸餾水；母液B包括ZnS04'4H20 23mg, MnCl2.4H20 178mg, CuS04.5H20 10mg, FeC6H507-5H203.9g, Na2Mo04.2H20 7.3mg, CoCl2.6H20 12mg; Na2EDTA4.35g溶于1L蒸餾水。 1L海水樣品加母液A和B各lmL. 1L新鮮的f2培養(yǎng)液是由1L消毒海水 加母液A和B各lmL配制而成。
4. 按權(quán)利要求1所述的定量海水中石莼屬海藻總個(gè)體數(shù)的方法，其特 征在于所述樣品海水通過(guò)100目的紗絹網(wǎng)濾掉水中可見(jiàn)的藻體殘?jiān)?br> 5. 按權(quán)利要求1所述的定量海水中石莼屬海藻總個(gè)體數(shù)的方法，其特 征在于所述光周期為12h白天:12h黑夜條件下，充氣培養(yǎng)為充過(guò)濾的空 氣。
全文摘要
本發(fā)明涉及石莼屬綠潮海藻爆發(fā)的預(yù)測(cè)方法，具體地說(shuō)是一種準(zhǔn)確定量海水中石莼屬Ulva海藻顯微階段總個(gè)體數(shù)的方法。取樣品海水用100目的紗絹網(wǎng)過(guò)濾，1升過(guò)濾后的海水樣品中加入500μL飽和二氧化鍺水溶液，而后加入f/2營(yíng)養(yǎng)鹽充氣培養(yǎng)；將加入f/2營(yíng)養(yǎng)鹽的海水在溫度為15-20℃、光強(qiáng)為50-100μmol photons m^-2s^-1、光周期為12h白天:12h黑夜條件下充氣培養(yǎng)，培養(yǎng)7天后換新鮮的f/2培養(yǎng)液，以后每5天換一次培養(yǎng)液，培養(yǎng)3-4周，待用；經(jīng)培養(yǎng)后即可以確定每升海水中石莼屬海藻總的個(gè)體數(shù)量。本發(fā)明消除了在自然界條件下，因?yàn)樽匀煌饬蜋C(jī)械損傷等導(dǎo)致的死亡或因以石莼屬海藻為食物的天敵捕食造成的數(shù)量減少。
文檔編號(hào)G01N21/84GK101592616SQ20091001622
公開(kāi)日2009年12月2日 申請(qǐng)日期2009年6月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月13日
發(fā)明者峰 劉, 單體鋒, 張志懷, 張玉榮, 娜 徐, 逄少軍, 高素芹 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院海洋研究所