專利名稱：一種酪蛋白快速檢測(cè)卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種酪蛋白快速檢測(cè)卡，是一種檢測(cè)酪蛋白的檢測(cè)器具，屬于奶
制品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
牛奶是人們?nèi)粘Ｉ钪匾氖称?，牛奶營(yíng)養(yǎng)豐富，是人類重要的食品，其主要成份 有每100克牛奶含水分87克、蛋白質(zhì)3. 3克、脂肪4克、碳水化合物5克、鈣120毫克、磷 93毫克、鐵0. 2毫克、維生素A 140國(guó)際單位、維生素Bi 0. 04毫克、維生素82 0. 13毫克、 尼克酸0.2毫克、維生素C l毫克。而牛奶蛋白質(zhì)更是牛奶中的關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)成分，鮮牛奶包裝 上都會(huì)標(biāo)明蛋白質(zhì)含量。正常情況下，牛乳所含有的蛋白總量大約為3. 3%，其中2. 5%左 右是酪蛋白，0.6%是乳清蛋白。酪蛋白是一類磷酸蛋白，占牛乳真蛋白的80%左右。 收購(gòu)生鮮牛奶、生產(chǎn)過(guò)程中、產(chǎn)品出廠時(shí)和市場(chǎng)上，都需檢測(cè)蛋白質(zhì)的含量，以判 定牛奶的質(zhì)量。根據(jù)蛋白質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)，有幾種蛋白檢測(cè)方法。食品工業(yè)上普遍采用的被 定為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的是凱氏定氮法。這是19世紀(jì)后期丹麥人約翰.凱達(dá)爾發(fā)明的方法，原理很 簡(jiǎn)單蛋白質(zhì)含有氮元素，用強(qiáng)酸處理樣品，讓蛋白質(zhì)中的氮元素釋放出來(lái)，測(cè)定氮的含量， 就可以算出蛋白質(zhì)的含量。牛奶蛋白質(zhì)的含氮率約16%，根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，把測(cè)出的氮含量乘 以6. 38，就是蛋白質(zhì)含量。 但凱氏定氮法實(shí)際上測(cè)的不是蛋白質(zhì)含量，而是通過(guò)測(cè)氮含量來(lái)間接推算蛋白質(zhì) 的含量，如果樣品中還有其他化合物含有氮，這個(gè)方法的準(zhǔn)確性就存在問(wèn)題。在通常情況 下，牛奶中的主要成分只有蛋白質(zhì)含有氮，其他主要成分(碳水化合物、脂肪)都不含氮，因 此凱氏定氮法是一種很準(zhǔn)確的測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法。但是如果有人往樣品中添加含氮的 其他物質(zhì)，通過(guò)凱氏定氮法將錯(cuò)誤，就獲得虛假的蛋白質(zhì)含量。 為此，本實(shí)用新型擬發(fā)明一種基于蛋白質(zhì)抗原性的免疫學(xué)檢測(cè)方法，采取免疫學(xué) 競(jìng)爭(zhēng)法的原理，結(jié)合膠體金標(biāo)記技術(shù)和免疫層析法設(shè)計(jì)的一種快速檢測(cè)試劑，可快速特異 地檢測(cè)牛奶樣品中的酪蛋白。根據(jù)檢測(cè)卡樣品測(cè)試線(T)和對(duì)照線(C)的有無(wú)來(lái)判定牛奶 樣品中的酪蛋白含量。反應(yīng)是利用牛奶蛋白抗原性而建立的一種蛋白檢測(cè)方法，具有特異 性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，可避免其它檢測(cè)方法的假陽(yáng)性導(dǎo)致的誤檢問(wèn)題。同時(shí)檢測(cè)卡操作簡(jiǎn)單快速，無(wú) 需特殊的儀器設(shè)備，既可以在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，也可在超市、家庭、車間等實(shí)地進(jìn)行測(cè)定。由于樣 本量需要少、簡(jiǎn)便快速，適用于大量樣本的篩查。結(jié)果準(zhǔn)確，液態(tài)奶樣品靈敏度為2500ppm， 準(zhǔn)確率大于95%。

發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的在于提供一種能檢測(cè)酪蛋白的檢測(cè)器具，直接應(yīng)用免疫學(xué)的方 法直接檢測(cè)液態(tài)奶、奶粉和奶制品樣品酪蛋白的含量，克服現(xiàn)有凱氏定氮法非特異性檢測(cè) 的缺陷，建立基于免疫學(xué)特異性的檢測(cè)方法。
本實(shí)用新型的技術(shù)方案一種酪蛋白快速檢測(cè)卡，其為在長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)
3卡外殼1中設(shè)置測(cè)試條2，檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔3和加樣孔4 ;測(cè)試條2是由支承背 板5上通過(guò)不干膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金膜7、硝酸纖維素膜6、和吸水膜9所組 成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板一端疊置粘貼吸水膜9，另一端疊置 粘貼樣品墊8，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖 維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜7 ;膠體金膜為含抗酪蛋白抗體膠體金 標(biāo)記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測(cè)帶和一條質(zhì)控帶，依次是含酪蛋白的檢測(cè) 帶IO，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶ll，測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi)，樣品墊正對(duì)加樣孔， 硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔。 采用上述酪蛋白快速檢測(cè)卡，檢測(cè)樣品可以是液態(tài)奶、奶粉和奶制品等樣品。 樣品的處理方法是 針對(duì)液態(tài)奶樣品的處理方法是液態(tài)奶用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測(cè)。 針對(duì)奶粉樣品的處理方法是稱取1克奶粉樣品，加入9mL樣品稀釋液，在試管中 攪拌均勻，再用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測(cè)。 針對(duì)奶制品樣品的處理方法是取lg搗碎后的奶制品樣品，加入9mL樣品稀釋液， 在試管中攪拌均勻，再用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測(cè)。所用樣品稀釋液為pH 7. 6、10mmol PBST溶液。 當(dāng)檢測(cè)帶IO和質(zhì)控帶11同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，表示被檢測(cè)樣 品中酪蛋白含量低于正常值； 當(dāng)檢測(cè)帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測(cè)結(jié)果為陰性，表示 被檢測(cè)樣品中酪蛋白含量正常； 當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明測(cè)試條已失效。 所述正常值為樣品中酪蛋白含量不低于質(zhì)量濃度2. 5%。 本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是能同時(shí)檢測(cè)液態(tài)奶、奶粉和奶制品等樣品中含有的酪蛋白， 易于制備且節(jié)省檢測(cè)費(fèi)用，使用方便，檢測(cè)快速，靈敏度高，結(jié)果準(zhǔn)確。

圖1酪蛋白快速檢測(cè)卡外殼及測(cè)試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、外殼，2、測(cè)試條，3、檢 測(cè)窗孔，4、加樣孔。 圖2測(cè)試條的硝酸纖維素膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、檢測(cè)帶，11、 質(zhì)控帶。 圖3酪蛋白快速檢測(cè)卡的測(cè)試條結(jié)構(gòu)示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜，7、膠 體金膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
具體實(shí)施方式本實(shí)用新型結(jié)合具體實(shí)施例參見(jiàn)附圖進(jìn)一步說(shuō)明如下 實(shí)施例1 —種酪蛋白快速檢測(cè)卡，它是在檢測(cè)卡外殼1中設(shè)置測(cè)試條2，檢測(cè)卡外殼1的結(jié) 構(gòu)及測(cè)試條2的設(shè)置參見(jiàn)附圖1，檢測(cè)卡外殼1為長(zhǎng)條扁平薄殼狀外殼，長(zhǎng)70mm，寬20mm，厚 5mm，薄殼壁厚lmm，由工程塑料制成。檢測(cè)卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測(cè)卡
4外殼1殼蓋上有檢測(cè)窗孔3和加樣孔4。測(cè)試條2放置在檢測(cè)卡外殼1的殼座內(nèi)。 測(cè)試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長(zhǎng)約60mm，片寬約4mm，厚度約2. 5mm。測(cè)試 條2是多層結(jié)構(gòu)底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0. 5mm，長(zhǎng)60mm，寬4mm ;支 承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，硝酸纖維素膜厚0. 5mm，長(zhǎng)20-25mm，寬4mm。硝酸 纖維素膜6上有二條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見(jiàn)附圖2，二條顯示印跡帶中，一條是檢 測(cè)帶10，含酪蛋白；另一條是質(zhì)控帶ll，含抗兔抗體或抗鼠抗體。支承背板5—端部上疊置 粘貼吸水膜9，支承背板5另一端部上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各 自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置 粘貼一段膠體金膜7，膠體金膜7是含抗酪蛋白單克隆抗體或多克隆抗體膠體金標(biāo)記物的 玻璃纖維膜。膠體金膜7厚0. 5-0. 8mm，長(zhǎng)5mm，寬4mm。樣品墊8厚0. 5-0. 8mm，長(zhǎng)20mm，寬 4mm。吸水膜9厚0. 5_0. 8mm，長(zhǎng)16-20mm，寬4mm。膠體金膜7、樣品墊8及吸水膜9與硝酸 纖維素膜搭接長(zhǎng)度為l-2mm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。 本實(shí)用新型酪蛋白檢測(cè)卡用于檢測(cè)液態(tài)奶、奶粉和奶制品等樣品中的酪蛋白的檢 實(shí)施例2 樣品的處理方法是 針對(duì)液態(tài)奶樣品的處理方法是液態(tài)奶應(yīng)用樣品稀釋液(pH 7. 610mmolPBST)進(jìn) 行10倍稀釋后用于檢測(cè)。 針對(duì)奶粉樣品的處理方法是稱取1克奶粉樣品，加入9mL樣品稀釋液 (pH7. 610mmo1 PBST)，在試管中攪拌均勻，再應(yīng)用樣品稀釋液(pH 7. 610mmolPBST)進(jìn)行10
倍稀釋后用于檢測(cè)。 針對(duì)奶制品樣品的處理方法是取lg搗碎后的奶制品樣品，加入9mL樣品稀釋液 (pH 7. 610mmo1 PBST)，在試管中攪拌均勻，再應(yīng)用樣品稀釋液(pH 7. 610mmo1 PBST)進(jìn)行 10倍稀釋后用于檢測(cè)。 使用酪蛋白快速檢測(cè)卡進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，先將待檢測(cè)的樣品液從加樣孔4中滴注入酪 蛋白快速檢測(cè)卡測(cè)試條2的樣品墊8上，由于虹吸作用原理，帶動(dòng)待檢測(cè)的樣品液及膠體金 膜7所含的抗酪蛋白單克隆抗體或多克隆抗體膠體金標(biāo)記物一起向硝酸纖維素膜6擴(kuò)散， 5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。 檢測(cè)卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，在硝酸纖維素膜上遷移的膠體金 標(biāo)記的抗體，在測(cè)試帶上分別與所含酪蛋白，以及質(zhì)控帶抗兔抗體或抗鼠抗體反應(yīng)，形成棕 紅色條帶。若樣品中有待檢酪蛋白存在，當(dāng)樣品加入后即與抗體發(fā)生反應(yīng)，而不會(huì)與檢測(cè)帶 所含的酪蛋白反應(yīng)，從而不顯色。主要反應(yīng)的結(jié)果有以下3種情況 1、當(dāng)顯示檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō) 明被檢測(cè)樣品中酪蛋白含量低于正常值(2. 5% wt% )。 2、當(dāng)檢測(cè)帶10不顯示顏色，只有質(zhì)控帶11顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測(cè)結(jié)果為陰性，說(shuō)
明被檢測(cè)樣品中酪蛋白含量正常(> 2. 5% wt% )。 3、當(dāng)檢測(cè)帶10和質(zhì)控帶11均不顯色，則表明檢測(cè)試條已失效。
權(quán)利要求一種酪蛋白快速檢測(cè)卡，其特征在于在長(zhǎng)條扁平薄殼狀的檢測(cè)卡外殼(1)中設(shè)置測(cè)試條(2)，檢測(cè)卡外殼表面有檢測(cè)窗孔(3)和加樣孔(4)；測(cè)試條(2)是由支承背板(5)上通過(guò)不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜(7)、硝酸纖維素膜(6)、和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜內(nèi)端與樣品墊內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜搭接，在樣品墊與硝酸纖維素膜的搭接部，兩者之間夾置粘貼一段膠體金膜(7)；膠體金膜為含抗酪蛋白抗體膠體金標(biāo)記的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有一條檢測(cè)帶和一條質(zhì)控帶，依次是含酪蛋白的檢測(cè)帶(10)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(11)，測(cè)試條置入檢測(cè)卡外殼內(nèi)，樣品墊正對(duì)加樣孔，硝酸纖維素膜正對(duì)檢測(cè)窗孔。
專利摘要一種酪蛋白快速檢測(cè)卡，屬于奶制品檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本實(shí)用新型酪蛋白快速檢測(cè)卡外殼內(nèi)有測(cè)試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、膠體金膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成；膠體金膜為含抗酪蛋白抗體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有兩條檢測(cè)帶，一條為含酪蛋白的檢測(cè)帶，另一條為含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本實(shí)用新型優(yōu)點(diǎn)是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測(cè)液態(tài)奶、奶粉和奶制品樣品酪蛋白的含量。本實(shí)用新型酪蛋白快速檢測(cè)卡易于制備，使用方便快速，結(jié)果準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)G01N33/68GK201497743SQ20092023509
公開日2010年6月2日 申請(qǐng)日期2009年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月4日
發(fā)明者周堅(jiān) 申請(qǐng)人:無(wú)錫安迪生物工程有限公司