α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β-酪蛋白三聯(lián)檢測卡及其檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β-酪蛋白三聯(lián)檢測卡及其檢測方法，屬于乳產(chǎn)品檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明三聯(lián)檢測卡外殼內(nèi)有測試條，由支承背板上依次粘貼樣品墊、數(shù)段膠體金膜、硝酸纖維素膜和吸水膜所組成，硝酸纖維素膜上有3條檢測帶，分別含α-乳白蛋白蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、β-乳球蛋白蛋白質(zhì)偶聯(lián)物、β-酪蛋白蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，另有1條含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)是能同時(shí)檢測出牛奶中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β-酪蛋白是否達(dá)標(biāo)。檢測卡易于制備且節(jié)省檢測費(fèi)用，使用方便快速，結(jié)果準(zhǔn)確。
【專利說明】α-乳白蛋白、β_乳球蛋白和β_酪蛋白三聯(lián)檢測卡及其檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種乳制品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β-酪蛋白含量的檢測器具和檢測方法，屬于乳制品檢測【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]牛奶是人們?nèi)粘Ｉ钪匾氖称罚瘜W(xué)成分很復(fù)雜，主要由水、脂肪、磷脂、蛋白質(zhì)、乳糖和無機(jī)鹽等組成。所以牛奶制品中的蛋白質(zhì)含量是評價(jià)牛奶質(zhì)量好壞的一項(xiàng)重要指標(biāo)。根據(jù)我國滅囷乳GB54082-1999對乳及乳制品質(zhì)量控制指標(biāo)，要求100g奶中蛋白質(zhì)的含量大于2.9g。由于目前國標(biāo)GB/T5009.5-1985中規(guī)定蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法為凱氏定氮法，其方法是通過檢測氮的含量推算得到蛋白質(zhì)含量，對于氮源不具備識(shí)別能力。面對凱氏定氮法存在的局限性，市場上還有通過測定酪蛋白的含量來判斷牛奶中是否摻假的測定方法，但是由于牛奶中的蛋白主要為酪蛋白、乳清蛋白等，單獨(dú)選用酪蛋白作為蛋白質(zhì)的評價(jià)指標(biāo)也存在一定的局限性。
[0003]牛奶中的蛋白質(zhì)主要為酪蛋白和乳清蛋白。α-乳白蛋白和β-乳球蛋白是乳清蛋白主要成分，其中α_乳白蛋白占總蛋白3.5%，β-乳球蛋白占總蛋白12%左右。酪蛋白不是單一的蛋白質(zhì)，而是由α-、β-、Υ-、κ-四種類型構(gòu)成，其中β-酪蛋白約占總蛋白18%。
[0004]本發(fā)明的α-乳白蛋白、乳球蛋白和酪蛋白三聯(lián)檢測卡涉及牛奶蛋白質(zhì)中三種蛋白指標(biāo)，可快速綜合判斷乳及乳制品中蛋白含量。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡便快捷、成本低、攜帶方便、非專業(yè)人員也能操作及可進(jìn)行現(xiàn)場檢測的膠體金試紙，且能同時(shí)檢測牛奶中α-乳白蛋白、β_乳球蛋白和β -酪蛋白是否達(dá)標(biāo)，克服現(xiàn)有技術(shù)操作繁瑣、專業(yè)要求高的缺陷。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案:一種α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和酪蛋白三聯(lián)檢測卡，在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼1中設(shè)置測試條2，檢測卡外殼1表面有檢測窗孔3和加樣孔4，測試條2是由支承背板5上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊8、膠體金膜7、14、15、硝酸纖維素膜6和吸水膜9所組成；支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6，支承背板5一端疊置粘貼吸水膜9，另一端疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼數(shù)段膠體金膜7、14、15 ;膠體金膜依次為含抗α-乳白蛋白抗體、抗β-乳球蛋白抗體、抗β-酪蛋白抗體的膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜6上有三條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是:含α-乳白蛋白檢測帶10，含β_乳球蛋白檢測帶11，含β_酪蛋白檢測帶12，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶13 ;測試條置入檢測卡外殼1內(nèi)，樣品墊正對加樣孔4，硝酸纖維素膜正對檢測窗孔3。[0007]所述的α-乳白蛋白、β_乳球蛋白和β_酪蛋白三聯(lián)檢測卡，其特征是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測樣品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β_酪蛋白的含量，檢測樣品為乳制品，處理方法如下:
針對液態(tài)奶樣品的處理方法是:液態(tài)奶用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測；針對奶粉樣品的處理方法是:稱取lg奶粉樣品，加入9mL樣品稀釋液，在試管中攪拌均勻，再用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測；
針對奶制品樣品的處理方法是，取1 g搗碎后的奶制品樣品，加入9mL樣品稀釋液，在試管中攪拌均勻，再用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測；
上述三種不同乳制品所采用的處理方法中所使用的樣品稀釋液為pH7.6、lOmmol PBST溶液。
[0008]當(dāng)質(zhì)控帶13和檢測帶10、11、12同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，檢測結(jié)果為陽性，表示被檢測樣品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β_酪蛋白含量低于正常值；
當(dāng)質(zhì)控帶13顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測帶10不出線，表示樣品中α -乳白蛋白含量正常；檢測帶11不出線表示樣品中乳球蛋白含量正常；檢測帶12不出線表示樣品中β-酪蛋白含量正常；當(dāng)質(zhì)控帶13和檢測帶10、11、12均不顯色，則表示檢測卡已失效。
[0009]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明三聯(lián)檢測卡能同時(shí)檢測出乳及乳制品中α-乳白蛋白、β_乳球蛋白和β_酪蛋白的含量，本三聯(lián)檢測卡易于制備且節(jié)省檢測費(fèi)用，使用方便快速，結(jié)果準(zhǔn)確。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β-酪蛋白三聯(lián)檢測卡的外殼及測試條在外殼內(nèi)的安置圖。1、外殼，2、測試條，3、檢測窗孔，4、加樣孔。
[0011]圖2為α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β-酪蛋白三聯(lián)檢測卡的測試條結(jié)構(gòu)示意圖。5、支承背板，6、硝酸纖維素膜，7、膠體金膜，14、膠體金膜，15、膠體金膜，8、樣品墊，9、吸水膜。
[0012]圖3為α-乳白蛋白、乳球蛋白和酪蛋白三聯(lián)檢測卡的硝酸玻璃纖維膜上顯示印跡示意圖。6、硝酸纖維素膜，10、含α-乳白蛋白檢測帶，11、含β_乳球蛋白檢測帶，12、含β -酪蛋白檢測帶，13、質(zhì)控帶。
【具體實(shí)施方式】
[0013]本發(fā)明結(jié)合具體實(shí)施例參見附圖進(jìn)一步說明如下。
[0014]實(shí)施例1: α -乳白蛋白、β -乳球蛋白和β_酪蛋白三聯(lián)檢測卡
它是在檢測卡外殼1中設(shè)置測試條2，檢測卡外殼1的結(jié)構(gòu)及測試條2的設(shè)置參見附圖1，檢測卡外殼1為長條扁平薄殼狀外殼，長7cm，寬2cm，厚0.5cm，薄殼壁厚0.1cm，由工程塑料制成。檢測卡外殼1由殼蓋與殼座兩半聯(lián)接構(gòu)成，在檢測卡外殼1殼蓋上有檢測窗孔3和加樣孔4。測試條2放置在檢測卡外殼1的殼座內(nèi)。
[0015]測試條2是多層結(jié)構(gòu)的窄條薄片，片長約6.0cm,片寬約0.4cm,厚度小于2.5mm。測試條2是多層結(jié)構(gòu):底層是支承背板5，為聚氯乙烯塑料薄片，厚約0.5mm,長6.0cm,寬0.4cm ;支承背板5中部疊置粘貼硝酸纖維素膜6,硝酸纖維素膜厚0.5mm,長2_2.5cm,寬0.4cm。硝酸纖維素膜6上有三條間隔開的橫向顯示印跡帶，參見附圖3，三條顯示印跡帶中，第一條是檢測帶10含α -乳白蛋白，第二條檢測帶11含β -乳球蛋白，第三條是檢測帶12含β_酪蛋白，第四條是質(zhì)控帶13，含抗兔抗體或抗鼠抗體。調(diào)節(jié)三種蛋白濃度大約為lmg/mL,抗兔抗體或抗鼠抗體濃度大約為0.lmg/mL時(shí)噴膜。如附圖2所示，支承背板5一端上疊置粘貼吸水膜9，支承背板5另一端上疊置粘貼樣品墊8，吸水膜9內(nèi)端與樣品墊8內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜6 —端搭接，在樣品墊8與硝酸纖維素膜6的搭接部，兩者之間夾置粘貼數(shù)段膠體金膜7、14、15，膠體金膜7、14、15依次是含抗α _乳白蛋白抗體、抗β -乳球蛋白抗體和抗β -酪蛋白抗體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜。膠體金膜7、14、15均厚 0.5-0.8mm,長 0.5-0.6cm,寬 0.4cm。樣品墊 8 厚 0.5-0.8mm,長 2cm,寬 0.4cm。吸水膜9厚0.5-0.8mm,長1.6_2cm，寬0.4cm。膠體金膜是將抗體與膠體金顆粒標(biāo)記后，調(diào)節(jié)濃度大約為1D涂布膠體玻璃纖維膜，烘干后備用金。金膜7、14、15、樣品墊8及吸水膜9與硝酸纖維素膜6搭接長度為0.1-0.2cm。吸水膜9材料是吸水紙，樣品墊8材料是吸水玻璃纖維膜。
[0016]實(shí)施例2:檢測樣品的處理方法
本發(fā)明的α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β_酪蛋白三聯(lián)檢測卡，其特征是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測樣品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β_酪蛋白的含量，檢測樣品為乳制品，處理方法如下:
針對液態(tài)奶樣品的處理方法是:液態(tài)奶用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測；針對奶粉樣品的處理方法是:稱取lg奶粉樣品，加入9mL樣品稀釋液，在試管中攪拌均勻，再用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測；
針對奶制品樣品的處理方法是，取lg搗碎后的奶制品樣品，加入9mL樣品稀釋液,在試管中攪拌均勻，再用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測；
上述三種不同乳制品所采用的處理方法中所使用的所用樣品稀釋液均為PH7.6、lOmmol PBST 溶液。
[0017]使用α-乳白蛋白、β_乳球蛋白和β_酪蛋白三聯(lián)檢測卡進(jìn)行檢測時(shí)，先將待檢測的樣品液從加樣孔中4滴注入α-乳白蛋白、β_乳球蛋白和β_酪蛋白三聯(lián)檢測卡的樣品墊8，由于虹吸作用原理，帶動(dòng)待檢測的樣品液及膠體金膜7所含的抗α -乳白蛋白、抗β-乳球蛋白和抗β-酪蛋白單克隆抗體或多克隆抗體膠體金標(biāo)記物一起向硝酸纖維素膜6擴(kuò)散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。
[0018]檢測卡的主要反應(yīng)是免疫學(xué)的抗原和抗體反應(yīng)，在硝酸纖維素膜6上遷移的膠體金標(biāo)記的抗體，在測試帶上分別與α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β_酪蛋白以及質(zhì)控帶抗兔抗體或抗鼠抗體反應(yīng)，形成棕紅色條帶。當(dāng)樣品中有相應(yīng)的α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β_酪蛋白的含量，則樣品加入后即與相應(yīng)的抗體發(fā)生反應(yīng)，而不會(huì)與相應(yīng)的檢測帶所含的α_乳白蛋白、β_乳球蛋白、酪蛋白反應(yīng)，從而不顯色。
[0019]主要反應(yīng)的結(jié)果有以下9種情況:1、如果顯示檢測帶10、11、12和質(zhì)控帶13同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測結(jié)果為陰性，說明被檢測樣品中α-乳白蛋白、β_乳球蛋白和β_酪蛋白含量低于正常值。
[0020]2、如果檢測帶10、11、12不顯示顏色，只有質(zhì)控帶13顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β_酪蛋白含量正常。[0021]3、如果檢測帶10、11不顯示顏色，檢測帶12和質(zhì)控帶13同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中α-乳白蛋白、β_乳球蛋白含量正常，而β_酪蛋白含量低于正常值。
[0022]4、如果檢測帶10、12不顯示顏色，檢測帶11和質(zhì)控帶13同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中α-乳白蛋白、β_酪蛋白含量含量正常，而β_乳球蛋白含量低于正常值。
[0023]5、如果檢測帶11、12不顯示顏色，檢測帶10和質(zhì)控帶13同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中β_乳球蛋白、β_酪蛋白含量含量正常，而α-乳白蛋白含量低于正常值。
[0024]6、如果檢測帶10不顯示顏色，檢測帶11、12和質(zhì)控帶13同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中α-乳白蛋白含量正常，而β-乳球蛋白和β_酪蛋白含量低于正常值。
[0025]7、如果檢測帶11不顯示顏色，檢測帶10、12和質(zhì)控帶13同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中β_乳球蛋白含量正常，而α-乳白蛋白、β_酪蛋白含量低于正常值。
[0026]8、如果檢測帶12不顯示顏色，檢測帶10、11和質(zhì)控帶13同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中β_酪蛋白含量正常，而α-乳白蛋白、β_乳球蛋白含量低于正常值。
[0027]9、如果檢測帶10、11、12和質(zhì)控帶13均不顯色，則表明測試條失效。
【權(quán)利要求】
1.一種α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β_酪蛋白三聯(lián)檢測卡，其特征在于:在長條扁平薄殼狀的檢測卡外殼(1)中設(shè)置測試條(2)，檢測卡外殼表面有檢測窗孔(3)和加樣孔(4)，測試條(2)是由支承背板(5)上通過不干膠在其上依次粘貼樣品墊(8)、膠體金膜(7)、(14)、(15)、硝酸纖維素膜(6)和吸水膜(9)所組成；支承背板中部疊置粘貼硝酸纖維素膜(6)，支承背板一端疊置粘貼吸水膜(9)，另一端疊置粘貼樣品墊(8)，吸水膜(9)內(nèi)端與樣品墊(8)內(nèi)端各自分別與硝酸纖維素膜(6)搭接，在樣品墊(8)與硝酸纖維素膜(6)的搭接部，兩者之間夾置粘貼數(shù)段膠體金膜(7)、(14)、(15);膠體金膜(7)、(14)、(15)依次是含抗α-乳白蛋白抗體、抗β_乳球蛋白抗體和抗β_酪蛋白抗體膠體金標(biāo)記物的玻璃纖維膜，硝酸纖維素膜上有三條檢測帶和一條質(zhì)控帶，依次是:含α-乳白蛋白偶聯(lián)物檢測帶(10)，含β_乳球蛋白偶聯(lián)物檢測帶(11)，含β_酪蛋白偶聯(lián)物檢測帶(12)，含抗兔抗體或抗鼠抗體的質(zhì)控帶(13);測試條2置入檢測卡外殼1內(nèi)，樣品墊8正對加樣孔4，硝酸纖維素膜6正對檢測窗孔3。
2.用權(quán)利要求1所述的α-乳白蛋白、β_乳球蛋白和β_酪蛋白三聯(lián)檢測卡的檢測方法，其特征是應(yīng)用免疫學(xué)的方法直接檢測樣品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β-酪蛋白的含量，檢測樣品為乳制品，處理方法如下:Α、針對液態(tài)奶樣品的處理方法是:液態(tài)奶用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測；Β、針對奶粉樣品的處理方法是:稱取lg奶粉樣品，加入9mL樣品稀釋液，在試管中攪拌均勻，再用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測；C、針對奶制品樣品的處理方法是，取lg搗碎后的奶制品樣品，加入9mL樣品稀釋液，在試管中攪拌均勻，再用樣品稀釋液進(jìn)行10倍稀釋后用于檢測；`上述三種不同乳制品所采用的處理方法中所使用的樣品稀釋液為pH7.6、lOmmol PBST溶液；將上述處理后的待檢測樣品液從加樣孔(4)中加4滴注入α -乳白蛋白、β -乳球蛋白和β_酪蛋白三聯(lián)檢測卡的樣品墊(8)，由于虹吸作用原理，帶動(dòng)待檢測的樣品液及膠體金膜所含的抗α-乳白蛋白、抗β-乳球蛋白和抗β_酪蛋白單克隆抗體或多克隆抗體膠體金標(biāo)記物一起向硝酸纖維素膜(6)擴(kuò)散，5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果:如果檢測帶(10)、( 11 )、( 12)和質(zhì)控帶(13)同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡帶，表示檢測結(jié)果為陰性，說明被檢測樣品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β_酪蛋白含量低于正常值；如果檢測帶(10)、( 11 )、( 12)不顯示顏色，只有質(zhì)控帶(13)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中α-乳白蛋白、β-乳球蛋白和β-酪蛋白含量正常；如果檢測帶(10)、( 11)不顯示顏色，檢測帶(12)和質(zhì)控帶(13)同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中α-乳白蛋白、β_乳球蛋白含量正常，而β_酪蛋白含量低于正常值；如果檢測帶(10)、( 12)不顯示顏色，檢測帶(11)和質(zhì)控帶(13)同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中α-乳白蛋白、β_酪蛋白含量含量正常，而β_乳球蛋白含量低于正常值；如果檢測帶(11)、(12)不顯示顏色，檢測帶(10)和質(zhì)控帶(13)同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中β_乳球蛋白、β_酪蛋白含量含量正常，而α-乳白蛋白含量低于正常值；如果檢測帶(10)不顯示顏色，檢測帶(11)、(12)和質(zhì)控帶(13)同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中α-乳白蛋白含量正常，而β-乳球蛋白和β-酪蛋白含量低于正常值；如果檢測帶(11)不顯示顏色，檢測帶(10)、( 12)和質(zhì)控帶(13)同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中β_乳球蛋白含量正常，而α-乳白蛋白、β-酪蛋白含量低于正常值；如果檢測帶(12)不顯示顏色，檢測帶(10)、( 11)和質(zhì)控帶(13)同時(shí)顯現(xiàn)棕紅色印跡，檢測結(jié)果為陽性，表明被檢測樣品中β_酪蛋白含量正常，而α-乳白蛋白、β-乳球蛋白含量低于正常值；如果檢測帶(10 )、( 11)、( 12 )和質(zhì) 控帶(13 )均不顯色，則表明測試條失效。
【文檔編號(hào)】G01N33/04GK103675219SQ201310680080
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月13日
【發(fā)明者】周堅(jiān), 王黎麗, 唐愛明, 丑亞琴, 劉增再 申請人:長沙安迪生物科技有限公司