專利名稱：通過測定標(biāo)志肽的水平在中風(fēng)患者中進(jìn)行預(yù)后和風(fēng)險評估的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于臨床診斷學(xué)領(lǐng)域。具體來說，本發(fā)明涉及通過測定標(biāo)志肽的水平在中風(fēng)患者中進(jìn)行結(jié)果預(yù)后和風(fēng)險評估。
背景技術(shù)：
中風(fēng)被定義為由腦血管疾病引起的急性局灶性神經(jīng)功能缺損。中風(fēng)的兩種主要類型是缺血性和出血性中風(fēng)，分別占約85%和15% (Hickey 2003.《神經(jīng)和神經(jīng)外科護(hù)理臨床實(shí)踐》第五片反(The clinical practice of neurological and neurosurgical nursing) (5th ed. )，Philadelphia =Lippincott, ffilliams&ffilkins) 當(dāng)發(fā)生缺血性中風(fēng)時，腦的血液供應(yīng)中斷，腦細(xì)胞被剝奪葡萄糖和氧。約45%的缺血性中風(fēng)由小或大的動脈血栓引起，20%源于栓子，其余的原因未知(Hickey 2003.《神經(jīng)和神經(jīng)外科護(hù)理臨床實(shí)踐》第五片反(The clinical practice of neurological and neurosurgical nursing) (5th ed.), Philadelphia :Lippincott，Williams&Wilkins)。短暫性缺血性發(fā)作(TIA)(也稱為“小中風(fēng)”)是一種綜合征，其特征為個別神經(jīng)癥狀突然發(fā)作，并在M小時內(nèi)完全消解。0. 5-8%的老年人群可能報告TIA(Bots等， 1997. Stroke 28(4) :768-73)。表現(xiàn)出TIA的患者處于隨后不利事件的高風(fēng)險中。已報道，90-天中風(fēng)風(fēng)險超過10%，最高風(fēng)險出現(xiàn)在前兩天內(nèi)(Jonston等，2003. Neurology 60: 1429-34)。中風(fēng)是最重要的血管疾病之一。中風(fēng)仍然是全世界死亡的第二大主因，在歐洲是成年人殘疾和病廢的主要原因之一(Murray和Lopez，1997. Lancet 349 :1269-76 ；Murray 和Lopez 1997. Lancet349 :1498-504)。在美國，每年有超過700000人患有中風(fēng)，其中 550，000人是第一次中風(fēng)(Thom等，2006. “心臟病和中風(fēng)統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)——2006年更新來自美國心臟協(xié)會統(tǒng)計(jì)委員會和中風(fēng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分委會的報告”(Heart disease and stroke statistics—2006 update :A report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation 113:85-151)。因此，它是一個重要的公共衛(wèi)生問題，并且對于保健提供者和整個社區(qū)來說是一個負(fù)擔(dān)，因?yàn)樵诒＝〉挠?jì)劃和提供中不得不投入大量的工作。在我們的社會中，中風(fēng)的發(fā)病率隨著年齡增加而顯著增加(Modan和Wagener， 1992. Stroke 23:1230-36)。大多數(shù)缺血性中風(fēng)發(fā)生在71到80歲之間，而大多數(shù)出血性中風(fēng)出現(xiàn)在 60 到 70 歲之間(Colombo 等，1989. Rivista de Neurologia 59 :1_7)。神經(jīng)放射成像法例如計(jì)算機(jī)斷層成像術(shù)(CT)或磁共振斷層成像術(shù)(MRT)被用于診斷中風(fēng)。對于患有由腦溢血引起的急性中風(fēng)的患者，推薦進(jìn)行CT掃描。然而，這種方法在患有急性缺血性發(fā)作的患者中效率較低(靈敏度低于33%)。此外，多普勒超聲顯像法和數(shù)字減影血管造影術(shù)(DSA)可用于確定急性循環(huán)障礙的原因。缺血性中風(fēng)的治療一般集中于支持生命機(jī)能和康復(fù)性措施。療法的目的在于通過打破血凝塊或機(jī)械移除它來除去阻塞、使血凝塊的增大降到最低并阻止新血凝塊的形成。 血栓溶解(血凝塊的分解)可以通過在中風(fēng)后前3個小時內(nèi)施用纖溶酶原激活劑(tPA或PLAT)來誘導(dǎo)。因?yàn)橐恍┘膊顟B(tài)例如低血糖、偏頭痛、腦溢血和某些腦腫瘤具有與急性缺血性中風(fēng)類似的癥狀，因此對于快速鑒別診斷存在著需求。療法還需要根據(jù)患者的個體情況、例如個體的預(yù)后和/或個體再次中風(fēng)的風(fēng)險， 進(jìn)行調(diào)整。中風(fēng)患者在確定時間間隔后的結(jié)果預(yù)后可以是功能的，或與個體存活相關(guān)。 對于功能結(jié)果的預(yù)后來說，使用計(jì)分系統(tǒng)例如“改良的評分量表(modified Ranking Scale)” (mRS ;Bonita和Beaglehole，1988. “評級量表的改良在中風(fēng)后運(yùn)動功能的恢復(fù)，，(Modification of Ranking Scale :Recovery of motor function after stroke), Stroke 19:1497-1500)或“國立衛(wèi)生研究院中風(fēng)量表”(National Institutes of Health Stroke Scale) (NIHSS ;Adams等，1999. “基線NIH中風(fēng)量表分值強(qiáng)烈預(yù)測中風(fēng)后結(jié)果 急性中風(fēng)治療的 Org 10172 試驗(yàn)(TOAST)報告”(Baseline NIH Stroke Scale score strongly predicts outcome after stroke :A report of the Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment (TOAST)),Neurology 53來確定預(yù)定時間后患者的發(fā)病率，NIHSS目前是金標(biāo)準(zhǔn)。功能結(jié)果也可以根據(jù)對護(hù)理的需要或根據(jù)日常生活的活動(ADL) 來表述，例如根據(jù)巴氏(Barthel)指數(shù)和評級量表(Collin等，1988. “巴氏ADL指數(shù)可 ilt生石if究，，(The Barthel ADL Index :areliability study), International Disability Study 10 :61-3 ；Bonita和Beaglehole，1988. “評級量表的改良在中風(fēng)后運(yùn)動功能的恢復(fù)，，(Modification of Ranking Scale :Recovery of motor function after stroke), Stroke 19 :1497-1500)。已經(jīng)報道，一些生物標(biāo)志物能夠指示將來的心血管事件、例如再一次中風(fēng)。已報道的潛在中風(fēng)生物標(biāo)志物是S-100B (血清蛋白100 β ；Stranjalis等，2007 Acta Neurochir (Wien) 149 :231-7 ;Foerch 等，2005. Arch Neurol 62 :1130-4)、NSE (神經(jīng)元特異性烯醇化酶；Ananc^P Maed 2005. Cerebrovasc Dis 20 :213-9)、GFAP (神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白；Nylen 等，2007. Mroke 38 :1489-94)、CRP (C 反應(yīng)蛋白；Di Napoli 等，2001. Stroke 32 :133-8 ；Di Napoli 等，2001. Mroke 32 :917-24)、IL-6 (白介素-6 ;0rion 等， 2008. Eur J Neurol 15 :323-8 ；Shenhar-Tsarfaty 等，2007. Thromb Res 122:167-73)以及血漿纖維蛋白原 CTuraj 等，2006. J Neurol Sci 246:13-9)。已經(jīng)顯示，N-端proBNP (NT-proBNP)是缺血性中風(fēng)后(Jensen等，2006. Cerebrovasc Dis 22 :439-44 ；Sharma ^,2006. J Stroke Cerebrovasc Dis 15 :121-7 ； Makikallio等，20^. Stroke 36 :1016-20 ；Yip 等，2006. Circ J 70 :447-52)和出血性中風(fēng)后(Sharma 等，2006. J Stroke Cerebrovasc Dis 15 :121-7)個體存活預(yù)后的一個獨(dú)立變量。在患有缺血性中風(fēng)的患者的樣品中已經(jīng)測定了成熟ANP(EStrada等，1994. Am J Hypertens 7 :1085-9)和 ADM (Hosomi 等，2004. JHypertens 22 :1945-51)的水平。然而，沒能顯示出ANP濃度與神經(jīng)狀態(tài)(Mathew改良量表)或結(jié)果的關(guān)聯(lián)性。在中風(fēng)患者的血液中已經(jīng)發(fā)現(xiàn)升高的ET-I濃度，但是沒有調(diào)查這些數(shù)據(jù)的預(yù)后價值(Ziv 等，1992 Stroke 23 :1014-6 ；Alioglu 等，2002. Angiology 53 :77-82 ； Giannopoulos等，2008. Neurol. Res. 30(7) :727-30)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在缺血性中風(fēng)后患者中的 ET-I水平升高(Estrada等，1994. Am JHypertens 7 1085-9)，但是沒有確定與存活率的關(guān)聯(lián)性。
對患有急性中風(fēng)的患者的血清降鈣素原(PCT)水平的研究(Miyakis等，2004. Clin Chim Acta 350 :437-9)，沒有顯示出在入院當(dāng)天與第7天時的水平有顯著差異。在該研究中沒有發(fā)現(xiàn)PCT水平與死亡或神經(jīng)結(jié)果的關(guān)聯(lián)性。人生長激素(hGH)是由垂體中的促生長激素細(xì)胞產(chǎn)生的多肽。它以脈沖方式分泌 (在每M小時的周期中10到20次脈沖)，并且其分泌受到三種下丘腦肽的調(diào)控，刺激hGH 分泌的生長激素釋放激素(GHRH)和生長激素釋放肽(ghrelin)，以及通過反向調(diào)控抑制 hGH分泌的生長素抑制因子(Kato等，2002. “人生長激素分泌的調(diào)控及其障礙”(Regulation of human growth hormone secretion and its disorders)，Internal Med 41 :7-13)0HGH是異質(zhì)的，由幾種分子同工型和片段組成(Baumarm G. 1991. “生長激素的異質(zhì)性基因、同工激素、變體和結(jié)合蛋白”(Growth hormone heterogeneity :genes, isohormones, variants and binding proteins)，Endocr Rev 12 :424-449)。在人類垂體中已經(jīng)鑒定到4種主要的hGH同工型，其氨基酸數(shù)量不同，并包括191個氨基酸(頻率為87. 5 % )、176個氨基酸(8. 1 % )、153個氨基酸(3.3%)和145個氨基酸(11%) (Zhan X.等，2005. “人類垂體中生長激素同工型的蛋白質(zhì)組學(xué)分析”(Porteomics analysis of growth hormone isoforms in the human pituitary), Proteomics 5:1228—41)。 191個氨基酸形式的分子量為22kDa，與缺少32到46位氨基酸殘基的176個氨基酸形式(20kDa 同工型)從垂體腺前葉共同分泌(De Palo E.等，2006. “生長激素同工型和區(qū)段/片段: 分子結(jié)構(gòu)禾口實(shí)驗(yàn)室狽Ij量”(Growth hormone isoforms and segments/fragments molecular structure and laboratory measurements)，Clin Chim Acta 365 :67-76)0女性的hGH分泌比男性略高，其最高水平在青春期時觀察到。分泌隨著年齡每10 年減少約14%。此外，分泌隨著正常生理和病理生理狀況而變。hGH分泌的主要生理調(diào)節(jié)機(jī)制是神經(jīng)內(nèi)源節(jié)律、睡眠、壓力、運(yùn)動以及營養(yǎng)和代謝信號在慢波睡眠期間(典型為入睡后1至2小時)hGH水平較高，并被運(yùn)動、壓力、發(fā)燒、禁食和使用某些氨基酸(亮氨酸和精氨酸)所增加。HGH分泌也被胰島素誘導(dǎo)的低血糖、L-多巴、可樂定(α2-腎上腺素能受體激動劑)、Y -羥基丁酸和β -腎上腺素能受體阻斷劑所刺激，而口服給予葡萄糖和血清游離脂肪酸水平的增加抑制hGH的分泌。hGH分泌也在肥胖癥中并隨著衰老而減少。(綜述在Kato等，2002. “人類生長激素分泌的調(diào)控及其障礙”(Regulation of human growth hormone secretion and its disorders)，Internal Med 41 :7-13)。C-反應(yīng)蛋白(CRP)是一種血漿蛋白，其最初由Tillett和Francis在1930年作為患有急性炎癥的患者血清中與肺炎球菌的C多糖反應(yīng)的物質(zhì)而發(fā)現(xiàn)。已經(jīng)顯示，CRP基礎(chǔ)水平升高的患者具有糖尿病、高血壓和心血管疾病的增加的風(fēng)險(Pradhan等，2001. JAMA 286 :327-334 ；Dehghan. 2007，Diabetes 56 872)。肌鈣蛋白是三種調(diào)節(jié)蛋白的復(fù)合物，其在骨骼肌和心肌而不是平滑肌中是肌肉收縮所必需的。肌鈣蛋白具有三個亞基TnC、TnI和TnT。每種亞基起到不同作用肌鈣蛋白 C(TnC)與鈣離子結(jié)合，在TnI中產(chǎn)生構(gòu)象變化。肌鈣蛋白T與原肌球蛋白結(jié)合，使它們連鎖以形成肌鈣蛋白-原肌球蛋白復(fù)合物。肌鈣蛋白I與細(xì)肌絲中的肌動蛋白結(jié)合，將肌鈣蛋白-原肌球蛋白復(fù)合物保持在位。肌鈣蛋白的某些亞型(心臟肌鈣蛋白I和Τ)是心臟肌肉(心肌)損傷的非常靈敏和特異的指示物。它們在血液樣品中的水平可用于在患有胸痛的患者中辨別不穩(wěn)定心絞痛和心肌梗塞(心臟病發(fā)作)(Antman等，1996. N Engl J Med；335 :1342-9)。發(fā)明概述本發(fā)明的主題是提供對已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估的改進(jìn)方法，所述方法包括測定所述患者的樣品中至少一種標(biāo)志肽的水平。本發(fā)明涉及對已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估的方法，所述方法包括下列步驟a.提供來自所述患者的樣品，b.測定所述樣品中至少一種標(biāo)志肽的水平，所述標(biāo)志肽選自ANP、AVP、ADM、ET_1、 降鈣素、肌鈣蛋白、CRP和hGH或其片段或其前體或所述前體的片段，c.將所述至少一種標(biāo)志肽或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與所述患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估相關(guān)聯(lián)。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的方法的應(yīng)用，用于對已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及對已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估的方法，所述方法包括下列步驟a.提供來自所述患者的樣品，b.測定所述樣品中至少一種標(biāo)志肽的水平，所述標(biāo)志肽選自ANP、AVP、ADM、ET_1、 降鈣素、肌鈣蛋白、CRP和hGH或其片段或其前體或所述前體的片段，c.將所述至少一種標(biāo)志肽或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與所述患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估相關(guān)聯(lián)。本發(fā)明的優(yōu)選標(biāo)志肽是ANP、BNP、AVP、ADM、ET-I、降鈣素、肌鈣蛋白、CRP (C-反應(yīng)蛋白)和hGH。特別優(yōu)選的標(biāo)志肽是ANP、BNP, AVP、ADM、ET-I、降鈣素和hGH。這些肽也可以根據(jù)它們的起源和/或在體內(nèi)合成的位置或根據(jù)主要作用位點(diǎn)或根據(jù)功能性質(zhì)分類成亞組ANP、BNP和肌鈣蛋白(cT)是心血管肽，ET-I和ADM是內(nèi)皮肽，AVP (包括例如和肽素) 和hGH是垂體肽，而PCT和CRP是炎性肽。肌鈣蛋白和CRP(C_反應(yīng)蛋白)是蛋白質(zhì)或蛋白復(fù)合物，即多肽。在本發(fā)明的情形中，它們與其他所提到的肽一樣，也被稱為標(biāo)志肽。因此，在本發(fā)明的情形中，術(shù)語“標(biāo)志肽”是指本發(fā)明的心血管、炎性和/或垂體肽。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述樣品在干預(yù)前從所述患者獲取。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述樣品在干預(yù)后從所述患者獲取。本文中的術(shù)語“干預(yù)前”是指用于治療中風(fēng)或TIA的干預(yù)開始之前的時間。使用“干預(yù)”是指用于改變健康結(jié)果的任何醫(yī)學(xué)干預(yù)。該定義包括藥物施用、外科程序、使用裝置、行為治療、護(hù)理方法改變等。優(yōu)選，樣品在接收患者入院時或中風(fēng)或TIA的診斷被證實(shí)之前獲取。術(shù)語“干預(yù)后”是指干預(yù)或治療已經(jīng)開始后的時間。通過本發(fā)明的方法或使用本發(fā)明的分析法獲得的標(biāo)志物的水平，可以用本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員公知的眾多方式進(jìn)行分析。例如，可以將獲得的每個測定結(jié)果與“正?！敝祷蛑甘咎囟膊』蚪Y(jié)果的值進(jìn)行比較。具體的診斷/預(yù)后可以取決于每個測定結(jié)果與這種值的比較，所述值可以被稱為診斷或預(yù)后“閾值”。在某些實(shí)施方案中，用于一種或多種診斷或預(yù)后指示物的分析法，僅僅通過分析法中所述指示物的存在或不存在而與病癥或疾病相關(guān)聯(lián)。例如，可以設(shè)計(jì)分析法，使得只有當(dāng)高于特定目標(biāo)閾值濃度時才出現(xiàn)陽性信號，并且低于該濃度時分析法不提供高于背景的信號。診斷和/或預(yù)后測試的靈敏度和特異性不僅取決于測試的分析“質(zhì)量”，而且還取決于構(gòu)成異常結(jié)果的定義。在實(shí)踐中，典型地通過將“正常”(即表觀健康的)和“患病”群體的變量值對其相對頻率進(jìn)行作圖，計(jì)算出受試者工作特征曲線(R0C曲線)。對于任何特定標(biāo)志物來說，患有或未患疾病的對象的標(biāo)志物水平分布可能交疊。在這些條件下，測試不能以100%準(zhǔn)確性絕對辨別正常與疾病，并且交疊的區(qū)域表示測試不能辨別正常與疾病的地方。選擇一個閾值，高于它(或低于它，取決于標(biāo)志物隨著疾病如何變化)時測試被認(rèn)為是異常的，低于它時測試被認(rèn)為是正常的。ROC曲線下的面積是觀察到的測量值將允許正確鑒定病癥的概率的度量。即使在測試結(jié)果不一定給出準(zhǔn)確數(shù)字的情況下，ROC曲線也能使用。只要人們能夠?qū)Y(jié)果評分，人們即能產(chǎn)生ROC曲線。例如，在“患病”樣品上進(jìn)行的測試的結(jié)果可以按照程度評分(例如1 =低，2 =正常，3 =高)。這種評分可以與“正?！比后w中的結(jié)果相關(guān)聯(lián)，并產(chǎn)生ROC曲線。這些方法在本技術(shù)領(lǐng)域中是公知的。參見例如Hanley 等，1982. Radiology 143 :29_36。優(yōu)選，選擇閾值以提供ROC曲線面積大于約0. 5、更優(yōu)選大于約0. 7、更加優(yōu)選大于約0. 8、更加優(yōu)選大于約0. 85，并且最優(yōu)選大于約0. 9。在這種情形中，術(shù)語“約”是指給定測量值的+/_5%。ROC曲線的水平軸表示(1-特異性)，其隨著假陽性率而增加。曲線的垂直軸表示靈敏度，其隨著真陽性率而增加。因此，對于所選的具體截止值來說，可以測定(1-特異性) 的值，并可以獲得相應(yīng)的靈敏度。ROC曲線下的面積是測量到的標(biāo)志物水平將允許正確鑒定疾病或病癥的概率的度量。因此，ROC曲線下的面積可用于確定測試的有效性。在某些實(shí)施方案中，不依賴于組中的一個或多個標(biāo)志物的具體閾值來確定從對象獲得的標(biāo)志物水平情況是否指示了特定診斷/預(yù)后。相反，本發(fā)明可以利用標(biāo)志物組“情況”作為統(tǒng)一的整體進(jìn)行評估。這種標(biāo)志物組中變化的特定“指紋”模式可以有效用作特定的診斷或預(yù)后指示物。正如在本文中討論的，變化的模式可以從單一樣品或組中的一個或多個成員的時間變化(或組的響應(yīng)值)獲得。這里的組是指一組標(biāo)志物。正如在本文后面所描述的，組的響應(yīng)值優(yōu)選通過對在各種截止值下特定標(biāo)志物組的靈敏度(即真陽性)對組的1_(特異性)(即假陽性)進(jìn)行ROC曲線作圖來確定。在這些方法中，來自對象的標(biāo)志物測量值的情況合在一起，被認(rèn)為提供了診斷或預(yù)后的總體概率(表示成數(shù)字分值或風(fēng)險百分率)。在這樣的實(shí)施方案中，標(biāo)志物的某些亞組的增加可能足以在一個患者中指示特定診斷/預(yù)后，而標(biāo)志物的不同亞組的增加可能足以在另一個患者中指示相同或不同的診斷/預(yù)后。也可以向組中的一個或多個標(biāo)志物施加權(quán)重因數(shù)，例如，當(dāng)標(biāo)志物在鑒定特定診斷/預(yù)后中效用特別高時，可以將其權(quán)重成使得在給定水平下， 它單獨(dú)即足以傳遞陽性結(jié)果的信號。同樣，也可以提供權(quán)重因數(shù)，使得特定標(biāo)志物的任何給定水平都不足以傳遞陽性結(jié)果的信號，而只有當(dāng)另一個標(biāo)志物也加入分析時才傳遞結(jié)果的信號。在某些實(shí)施方案中，選擇標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組，以表現(xiàn)出至少約70%的靈敏度、 更優(yōu)選至少約80%的靈敏度、更加優(yōu)選至少約85%的靈敏度、更甚優(yōu)選至少約90%的靈敏度以及最優(yōu)選至少約95%的靈敏度，與至少約70%的特異性、更優(yōu)選至少約80%的特異性、更加優(yōu)選至少約85%的特異性、更甚優(yōu)選至少約90%的特異性以及最優(yōu)選至少約95% 的特異性的組合。在特別優(yōu)選實(shí)施方案中，靈敏度和特異性兩者均為至少約75%、更優(yōu)選至少約80%、更加優(yōu)選至少約85%、更甚優(yōu)選至少約90%以及最優(yōu)選至少約95%。在這種情況下，術(shù)語“約”是指給定測量值的+/_5%。在其他實(shí)施方案中，陽性似然比、陰性似然比、機(jī)會比或風(fēng)險比被用作測試的預(yù)測風(fēng)險或診斷疾病的能力的度量。在陽性似然比的情況下，值為1表示在“患病”和“對照”組二者的對象中陽性結(jié)果的可能性相等；值大于1表示在患病組中陽性結(jié)果可能性更大；值小于1表示在對照組中陽性結(jié)果可能性更大。在陰性似然比的情況下，值為1表示在“患病”和“對照”組二者的對象中陰性結(jié)果的可能性相等；值大于1表示在測試組中陰性結(jié)果可能性更大；值小于1表示在對照組中陰性結(jié)果可能性更大。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，優(yōu)選選擇標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組能夠表現(xiàn)出至少約1. 5以上或約0. 67以下、更優(yōu)選至少約2以上或約0. 5以下、更加優(yōu)選至少約5以上或約0. 2以下、更甚優(yōu)選至少約10以上或約0. 1 以下，以及最優(yōu)選至少約20以上或約0. 05以下的陽性或陰性似然比。在這種情況下，術(shù)語 “約”是指給定測量值的+/-5%。在機(jī)會比的情況下，值為1表示在“患病”和“對照”組二者的對象中陽性結(jié)果可能性相等；值大于1表示在患病組中陽性結(jié)果可能性更大；值小于1表示在對照組中陽性結(jié)果可能性更大。在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，優(yōu)選選擇標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組能夠表現(xiàn)出至少約2以上或約0. 5以下、更優(yōu)選至少約3以上或約0. 33以下、更加優(yōu)選至少約4以上或約0. 25以下、更甚優(yōu)選至少約5以上或約0. 2以下以及最優(yōu)選至少約10以上或約0. 1以下的機(jī)會比。在這種情況下，術(shù)語“約”是指給定測量值的+/_5%。在風(fēng)險比的情況下，值為1表示在“患病”和“對照”組二者中終點(diǎn)(例如死亡) 的相對風(fēng)險相等；值大于1表示在患病組中風(fēng)險更高；值小于1表示在對照組中風(fēng)險更高。 在某些優(yōu)選實(shí)施方案中，優(yōu)選選擇標(biāo)志物和/或標(biāo)志物組能夠表現(xiàn)出至少約1.1以上或約 0. 91以下、更優(yōu)選至少約1. 25以上或約0. 8以下、更加優(yōu)選至少約1. 5以上或約0. 67以下、更甚優(yōu)選至少約2以上或約0. 5以下以及最優(yōu)選至少約2. 5以上或約0. 4以下的風(fēng)險比。在這種情況下，術(shù)語“約”是指給定測量值的+/_5%。專業(yè)技術(shù)人員將會理解，將診斷或預(yù)后指示物與診斷或與將來臨床結(jié)果的預(yù)后風(fēng)險相關(guān)聯(lián)，是一種統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。例如，標(biāo)志物水平大于X可以傳遞患者與水平低于或等于X 的患者相比更可能遭受不良后果的信號，正如通過統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性水平所確定的。此外，標(biāo)志物濃度從基線水平的改變可以反映患者的預(yù)后，并且標(biāo)志物水平變化的程度可能與不良事件的嚴(yán)重性相關(guān)。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性經(jīng)常通過比較兩個或多個群體并確定置信區(qū)間和/或ρ值來確定。參見例如Dowdy和Wearden，《用于研究的統(tǒng)計(jì)學(xué)》(Statistics for Research), John ffiley&Sons, New York，1983。本發(fā)明的優(yōu)選置信區(qū)間是 90 %、95%、97. 5%、98 %、 99 %,99. 5 %,99. 9 % 和 99. 99 %,而優(yōu)選的 ρ 值是 0. 1、0· 05,0. 025,0. 02,0. 01,0. 005、 0. 001 和 0. 0001。在其他實(shí)施方案中，可以進(jìn)行多次診斷或預(yù)后標(biāo)志物的測定，并可以使用標(biāo)志物的時間變化確定診斷或預(yù)后。例如，可以在初始時間測定對象樣品中的標(biāo)志物濃度，并在第二個時間從第二個對象樣品再次測定。在這樣的實(shí)施方案中，標(biāo)志物從初始時間到第二個時間的增加可以指示特定的診斷或特定的預(yù)后。同樣地，標(biāo)志物從初始時間到第二個時間的減少可以指示特定的診斷或特定的預(yù)后。當(dāng)在本文中使用時，術(shù)語“樣品”是指出于對目標(biāo)對象例如患者進(jìn)行診斷、預(yù)后或評估的目的而獲得的體液樣品。優(yōu)選的測試樣品包括血液、血清、血漿、腦脊液、尿液、唾液、 痰液和胸膜腔積液。此外，本技術(shù)領(lǐng)域的專業(yè)人員將會認(rèn)識到，某些測試樣品在分級或純化程序、例如將全血分離成血清或血漿組分后，將更容易分析。因此，在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，樣品選自血液樣品、血清樣品、血漿樣品、腦脊液樣品、唾液樣品和尿液樣品，或上面提到的任何樣品的提取物。優(yōu)選，樣品是血液樣品，最優(yōu)選為血清樣品或血漿樣品。本文中使用的術(shù)語“患者”是指由于疾病而接受醫(yī)療護(hù)理或應(yīng)接受醫(yī)療護(hù)理的活的人類或非人類生物體。這包括正對其病征進(jìn)行研究的患有未確定疾病的人。因此，本文描述的方法和分析法適用于人類和獸醫(yī)疾病兩者。當(dāng)在本文中在涉及診斷和預(yù)后標(biāo)記物的用途中使用時，術(shù)語“相關(guān)聯(lián)”是指將患者中標(biāo)記物的存在或量，與其在已知患有給定病癥或已知具有給定病癥風(fēng)險的人、或已知沒有給定病癥的人中的存在或量進(jìn)行比較。正如上面討論的，可以將患者樣品中的標(biāo)志物水平與已知與特定診斷相關(guān)的水平進(jìn)行比較。樣品的標(biāo)志物水平被說成已經(jīng)與診斷相關(guān)聯(lián)； 也就是說，專業(yè)技術(shù)人員可以使用標(biāo)志物水平確定患者是否具有特定類型的診斷，并做出相應(yīng)反應(yīng)。供選地，樣品的標(biāo)志物水平可以與已知與良好結(jié)果(例如不存在疾病等)相關(guān)的標(biāo)志物水平進(jìn)行比較。在優(yōu)選實(shí)施方案中，將一組標(biāo)志物的水平與總體概率或特定結(jié)果相關(guān)聯(lián)。優(yōu)選，所述結(jié)果或所述風(fēng)險是指存活和/或功能結(jié)果和/或再次中風(fēng)或再次短暫性缺血性發(fā)作。本發(fā)明還涉及用于將患者分層到風(fēng)險組中的方法，所述患者已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作，并且所述方法包含上面描述的步驟。在本發(fā)明的情形中，ANP是指心房利尿鈉肽或其片段或其前體或所述前體的片段。ANP前體的優(yōu)選片段是中段proANP (MR-proANP)。中段proANP (MR-proANP)被定義為proANP或其任何包含proANP的至少53-90位氨基酸殘基的片段。在本發(fā)明的情形中， MR-proANP53_9(1是特別優(yōu)選的標(biāo)志肽。在本發(fā)明的情形中，AVP是指精氨酸血管加壓素(=血管加壓素)或其片段或其前體或所述前體的片段。AVP前體的優(yōu)選片段是C-端proAVP (CT-proAVP或和肽素)。在本發(fā)明的情形中，CT-proAVP1(17_145 (或CT-pre-proAVP126_164)是特別優(yōu)選的標(biāo)志肽。在本發(fā)明的情形中，ADM是指腎上腺髓質(zhì)素或其片段、或其前體或所述前體的片段。ADM前體的優(yōu)選片段是中段proADM (MR-proADM)。在本發(fā)明的情形中，MR-proADM24_71 (或 MR-pr印roADM45_92)是特別優(yōu)選的標(biāo)志肽。在本發(fā)明的情形中，ET-I是指內(nèi)皮素1或其片段或其前體或所述前體的片段。ET-I前體的優(yōu)選片段是C-端-proETl (CT-proETl)。在本發(fā)明的情形中， CT-proET-l151_195 (或 CT-pr印roET-l168_212)是特別優(yōu)選的標(biāo)志肽。在本發(fā)明的情形中，降鈣素也涉及其片段或其前體或所述前體的片段。降鈣素的優(yōu)選前體是降鈣素原(PCT)。在本發(fā)明的情形中，PCT是指包含1-116、2-116或3-116位氨基酸的降鈣素原或其片段。降鈣素原可以包含翻譯后修飾例如糖基化、脂基化 (Iiposidation)或衍生化。在本發(fā)明的情形中，hGH是指人生長激素或其片段或其前體或所述前體的片段。在本發(fā)明的情形中，hGH是特別優(yōu)選的垂體肽。標(biāo)志肽的“片段”是指長度為至少12個氨基酸、優(yōu)選長度為至少6個氨基酸殘基的片段。此外，本發(fā)明涉及對被懷疑患有中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作或顯示出至少與中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作相似的癥狀的患者進(jìn)行診斷的方法，所述方法包含a.提供來自所述患者的樣品，b.測定所述樣品中至少一種標(biāo)志肽的水平，所述標(biāo)志肽選自ANP、AVP、ADM、ET_1、 降鈣素和hGH或其片段或其前體或所述前體的片段，c.根據(jù)所述至少一種標(biāo)志肽的水平，確定所述患者是否患有中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作。中風(fēng)或類似中風(fēng)的癥狀可以包含例如偏癱、面部肌肉無力、麻木和感官或震動感覺減低。在大多數(shù)情況下，癥狀只影響身體的一側(cè)(單側(cè))。取決于中風(fēng)的病因，癥狀還可能包括下列一種或多種癥狀嗅覺、味覺、聽覺或視覺改變(完全或部分)，眼瞼下垂(下垂癥)和眼肌無力，反射(例如嘔吐、吞咽、瞳孔對光反應(yīng))降低，感覺減低和面部肌肉無力， 平衡問題和眼球震顫，呼吸和心率變化，胸鎖乳突肌無力伴有不能將頭轉(zhuǎn)向一側(cè)，舌無力 (不能伸出和/或從一側(cè)移動到另一側(cè))，失語癥(不能說話或理解涉及布羅卡(Broca' s) 區(qū)或韋尼克氏(Wernicke' s)區(qū)的語言)，失用癥(隨意運(yùn)動改變)，視野缺損，記憶缺失 (涉及顳葉)，偏側(cè)忽視(涉及頂葉)，思維瓦解，混亂，過度穢言(hypersexual gestures) (涉及前葉)，疾病失認(rèn)癥(堅(jiān)持否認(rèn)通常與中風(fēng)相關(guān)的缺陷的存在)，行走困難，運(yùn)動協(xié)調(diào)改變，眩暈和或不平衡。優(yōu)選，所述至少一種標(biāo)志肽的水平歸因于缺血性中風(fēng)或出血性中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作。在本發(fā)明的情形中，術(shù)語“水平”是指從患者獲取的樣品中標(biāo)志肽的濃度(優(yōu)選表示成重量/體積；w/v)。正如上面所概述的，本發(fā)明的標(biāo)志肽還涉及其片段或其前體肽或所述前體的片段。標(biāo)志肽還包括激素原或前激素原或其片段，特別是激素原及其片段。在本發(fā)明的情形中，優(yōu)選，ANP是proANP、最優(yōu)選為MR-proANP。優(yōu)選，AVP是proAVP、更優(yōu)選為CT-proAVP、 最優(yōu)選為CT-proAVP1(17_145及其片段。優(yōu)選，ADM是proADM、更優(yōu)選為MR-proADM、最優(yōu)選為MR-proADM24_71及其片段。優(yōu)選，ET-I是proET_l、更優(yōu)選為CT-proET-Ι、最優(yōu)選為 CT-proET-l151_195及其片段。優(yōu)選，降鈣素是PCIV116及其片段。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自ANP、AVP、ADM、ET_1和降鈣素。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自ANP、AVP、ADM、ET_1和hGH。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自ANP、AVP、ADM和ET-1。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自ANP、AVP和ADM。在本發(fā)明的又一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自ANP和ADM。在本發(fā)明的又一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自ANP、ADM、ET_1、降鈣素和hGH。在本發(fā)明的又一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自ANP、ADM和ET-I。
在本發(fā)明的特別優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自MR-proANP、C-端proAVP(和肽素)、 MR-proADM、CT-proET-1、PCT 和 hGH。在另一個特別優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自MR-proANP、MR-proADM和 CT-proET-1ο在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自MR-proANP、C-端proAVP (和肽素)、MR-proADM 和 CT-proET-1。在本發(fā)明的又一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自MR-proANP、MR-proADM、PCT和 hGH。在本發(fā)明的又一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自MR-proANP、C-端proAVP(和肽素)、MR-proADM、CT-proET-1 和 hGH。 在本發(fā)明的又一個優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽選自MR-proANP、MR-proADM、 CT-proET-1、PCT 和 hGH。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽是proANP。優(yōu)選，標(biāo)志肽的水平通過檢測中段proANP來測定。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽是proAVP。優(yōu)選，標(biāo)志肽的水平通過檢測 C-端proAVP來測定。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽是proADM。優(yōu)選，標(biāo)志肽的水平通過檢測中段proADM來測定。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽是proET-Ι。優(yōu)選，標(biāo)志肽的水平通過檢測C-端proET-Ι來測定。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽是PCT。優(yōu)選，標(biāo)志肽的水平通過檢測 PCT來測定。在本發(fā)明方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，標(biāo)志肽是hGH。優(yōu)選，標(biāo)志肽的水平通過檢測 hGH來測定。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，使用兩種或多種心血管標(biāo)志物的組合。在本文中，優(yōu)選第二中或其他心血管標(biāo)志物選自ANP、BNP, AVP、ADM、ET-I、降鈣素和hGH。任選地，附加地測定BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平。在本發(fā)明的情形中，BNP是指腦利尿鈉肽或其片段或其前體或所述前體的片段。 BNP前體的優(yōu)選片段是N-端proBNP (NT-proBNP)。在本發(fā)明的情形中，NT-proBNP是特別優(yōu)選的標(biāo)志肽。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，測定一種以上心血管標(biāo)志物的水平，并對每種單獨(dú)標(biāo)志物的結(jié)果進(jìn)行不同加權(quán)，用于對已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估。特別優(yōu)選測定一組兩種或以上標(biāo)志肽的水平，最優(yōu)選測定一組兩種標(biāo)志肽的水平。樣品中一種以上標(biāo)志肽水平的測定，與單一標(biāo)志物相比，提供了對患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估的更高可能性。本發(fā)明的特定實(shí)施方案涉及本發(fā)明的用于對已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估的方法，其中測定了至少兩種標(biāo)志肽的水平，并且其中每種標(biāo)志肽選自不同的肽亞組，所述亞組選自心臟肽、內(nèi)皮肽、垂體肽和炎性肽，其中心臟肽選自ANP、BNP和肌鈣蛋白(cT)，內(nèi)皮肽選自ET-I和ADM，垂體肽選自AVP和hGH，炎性肽選自 PCT 禾口 CRP0在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定樣品中2、3、4、5、6、7、8或9種標(biāo)志肽的水平。最優(yōu)選測定一組至少兩種標(biāo)志肽的水平，并且所述至少兩種標(biāo)志肽的組選自下列心血管肽的組合ANP與AVP，ANP與ADM，ANP與ET_1，ANP與降鈣素，ANP與hGH，ADM與 ET-I，ADM與降鈣素，ADM與hGH，ET-I與降鈣素，ET-I與hGH以及降鈣素與hGH。然而，在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，除了該兩種心血管肽的組之外，可以測定第三種或更多標(biāo)志肽的水平。在一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ANP和ADM的水平。優(yōu)選，測定MR-proANP和 MR-proADM 的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ANP和ET-I的水平。優(yōu)選，測定MR-proANP和 CT-proET-Ι 的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ANP和降鈣素的水平。優(yōu)選，測定MR-proANP和 PCT的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ANP和hGH的水平。優(yōu)選，測定MR-proANP和hGH 的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ANP和BNP的水平。優(yōu)選，測定MR-proANP和 NT-proBNP 的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ADM和ET-I的水平。優(yōu)選，測定MR-proADM和 CT-proET-Ι 的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ADM和降鈣素的水平。優(yōu)選，測定MR-proADM和 PCT的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ADM和hGH的水平。優(yōu)選，測定MR-proADM和hGH 的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ADM和BNP的水平。優(yōu)選，測定MR-proADM和 NT-proBNP 的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ET-I和降鈣素的水平。優(yōu)選，測定CT-proET-Ι和 PCT的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ET-I和hGH的水平。優(yōu)選，測定CT-proET-Ι和 hGH的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定ET-I和BNP的水平。優(yōu)選，測定CT-proET-l和 NT-proBNP 的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定PCT和hGH的水平。優(yōu)選，測定PCT和hGH的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定PCT和BNP的水平。優(yōu)選，測定PCT和NT-proBNP 的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，測定hGH和BNP的水平。優(yōu)選，測定hGH和NT-proBNP 的水平。在一個特定實(shí)施方案中，在入院第一天(0日)和入院后第1日、2日、3日、4日、5 日、6日、7日、8日、9日或10日測定至少一種標(biāo)志肽的水平。優(yōu)選，在入院后第0日、第1日、第3日和第5日測定至少一種標(biāo)志肽的水平。更優(yōu)選，在入院后第0日和第5日測定至少一種標(biāo)志肽的水平。在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，在干預(yù)前和干預(yù)后測定至少一種標(biāo)志肽的水平。更優(yōu)選，在干預(yù)前和第5日測定至少一種標(biāo)志肽的水平。無論何時測定一種或多種標(biāo)志肽的水平，樣品都從患者獲取。在本發(fā)明的特定實(shí)施方案中，在第0、1、2、3、4、5、6、7、8、9和/或10日從所述患者獲取樣品，測量所述樣品中至少一種標(biāo)志肽的水平，并將其用于對所述患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估，或用于確定所述患者是否患有中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作。在本發(fā)明的情形中特別優(yōu)選，沒有測定樣品中選自NOGO受體、RNA結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)亞基、遍在蛋白融合物降解蛋白1同系物、β -嵌合素、核苷二磷酸激酶A和硝基酪氨酸的標(biāo)志物或一種或多種與其相關(guān)的標(biāo)志物的存在或量。在這種情形中，術(shù)語“相關(guān)標(biāo)志物”是指特定標(biāo)志物的可以作為標(biāo)志物本身的替代被檢測的一種或多種片段。這些相關(guān)標(biāo)志物可以是例如標(biāo)志物的“前體”、“原”或“原的前體”形式，或被移除以形成成熟標(biāo)志物的“前體”、 “原”或“前體原”片段。根據(jù)優(yōu)選實(shí)施方案，測定使用多變量分析進(jìn)行，所述多變量分析還考慮到了選自 NIHSS、巴氏指數(shù)和mRS的另外一種或多種協(xié)變量。本文中的術(shù)語“結(jié)果”是指例如患者在規(guī)定時間例如5天、4周、3個月、1年后的存活、或再次中風(fēng)或功能結(jié)果。最優(yōu)選，預(yù)測中風(fēng)或TIA后3個月的結(jié)果。在本發(fā)明的情形中，術(shù)語“功能結(jié)果”涉及患者在規(guī)定時間例如5天、4周、3個月或1年后疾病的嚴(yán)重性程度，即健康狀況，優(yōu)選是在中風(fēng)或中風(fēng)樣癥狀方面。最優(yōu)選，預(yù)測中風(fēng)或TIA后3個月的功能結(jié)果。在本發(fā)明的情形中，優(yōu)選功能結(jié)果被確定為結(jié)果的嚴(yán)重性評分或程度。功能結(jié)果也可以根據(jù)對護(hù)理的需要或根據(jù)日常生活活動(ADL)、例如根據(jù)巴氏指數(shù)、NIHSS和改良的評分量表來表述。此外，本發(fā)明還涉及用于對已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估的試劑盒，所述試劑盒包含針對選自ANP、AVP、ADM、ET-1、降鈣素、肌鈣蛋白、CRP 和hGH的標(biāo)志肽或其片段或其前體或所述前體的片段的一種或多種捕獲探針(優(yōu)選為抗體或其功能性片段)。試劑盒可以任選包含針對BNP的捕獲探針(優(yōu)選為抗體或其功能性片段)。試劑盒可以另外包含檢測所需的試劑例如緩沖液。此外，試劑盒還可以包含一種或多種標(biāo)準(zhǔn)樣品，即一種或多種標(biāo)志肽的具有確定濃度的一種或多種樣品。優(yōu)選，試劑盒包含針對標(biāo)志肽或其片段或其前體或所述前體的片段的至少兩種捕獲探針的組合，所述組合選自MR-proANP與MR-proADM、MR-proANP與CT-proET-1、 MR-proADM 與 CT-proET-1、MR-proANP 與 hGH、hGH 與 MR-proADM、hGH 與 CT-proET-1、 MR-proANP 與 PCT、MR-proADM 與 PCT、CT-proAVP 與 PCT、CT-proET-1 與 PCT 和 hGH 與 PCT。本發(fā)明還涉及本發(fā)明的方法或本發(fā)明的試劑盒的應(yīng)用，用于已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者中進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估。本發(fā)明還涉及本發(fā)明方法的應(yīng)用，用于在已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者中監(jiān)測治療。本發(fā)明還涉及本發(fā)明方法的應(yīng)用，用于在所述對象中鑒別診斷缺血性中風(fēng)、出血性中風(fēng)和/或短暫性缺血性發(fā)作，優(yōu)選在中風(fēng)或TIA的第一次癥狀后M小時內(nèi)。特別優(yōu)選，所述方法和試劑盒用于鑒別缺血性中風(fēng)與出血性中風(fēng)，或用于鑒別缺血性和/或出血性中風(fēng)與短暫性缺血性發(fā)作。在這種情形中，優(yōu)選的單一標(biāo)志物是ANP特別是MR-proANP、 AVP特別是和肽素、ADM特別是MR-proADM、ET-l特別是CT-proET_l、PCT和hGH。在這種情形下，也可以使用本發(fā)明的兩種或多種標(biāo)志肽的組合。特別優(yōu)選的組合包含MR-proANP與 MR-proADM、MR-proANP 與 CT-proET_l、MR-proADM 與 CT-proET_l、MR-proANP 與 hGH、hGH 與 MR-proADM、hGH 與 CT-proET-1、MR-proANP 與 PCT、MR-proADM 與 PCT、CT-proAVP 與 PCT、 CT-proET-1 與 PCT、hGH 與 PCT。本文中標(biāo)志肽的水平的測定(或測量或檢測)使用下面解釋的檢測方法和/或診斷分析法來進(jìn)行。當(dāng)在本文中提到時，“分析法”或“診斷分析法”可以是在診斷學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用的任何類型的分析法。這樣的分析法可以基于待檢測分析物與具有一定親和性的一種或多種捕獲探針的結(jié)合。對于捕獲分子與靶分子或目標(biāo)分子之間的相互作用來說，親和常數(shù)優(yōu)選大于 IO8M^10在本發(fā)明的情形中，“捕獲分子”是可用于結(jié)合來自樣品的靶分子或目標(biāo)分子、即分析物(即在本發(fā)明的情況下是心血管肽)的分子。因此，捕獲分子必須在空間上和表面特征例如表面電荷、疏水性、親水性、存在或不存在路易斯供體和/或受體方面適當(dāng)塑造， 以特異性結(jié)合靶分子或目標(biāo)分子。因此，結(jié)合可以由例如捕獲分子與靶分子或目標(biāo)分子之間的離子、范德華、n-n、S-Ji、疏水或氫鍵相互作用或兩種以上上面提到的相互作用的組合來介導(dǎo)。在本發(fā)明的情形中，捕獲分子可以例如選自核酸分子、糖類分子、RNA分子、蛋白質(zhì)、抗體、肽或糖蛋白。優(yōu)選，捕獲分子是抗體，包括其與靶或目標(biāo)分子具有足夠親和性的片段，并包括重組抗體或重組抗體片段，以及所述抗體或其源自于變體鏈的長度為至少12 個氨基酸的片段的化學(xué)和/或生物化學(xué)修飾的衍生物。優(yōu)選的檢測方法包括各種格式的免疫分析法，例如放射免疫分析(RIA)、化學(xué)發(fā)光-和熒光-免疫分析、酶聯(lián)免疫分析(ELISA)、基于Luminex的珠子陣列、蛋白質(zhì)微陣列分析，以及快速檢測格式例如免疫層析試紙?jiān)囼?yàn)。分析法可以是均相或非均相分析、競爭和非競爭性夾心分析。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，分析法是夾心分析形式，其是非競爭性免疫分析，其中待檢測和/或定量的分子與第一抗體并與第二抗體結(jié)合。第一抗體可以結(jié)合到固相例如珠子上、孔或其他容器的表面上、芯片或試紙上，并且第二抗體是例如用染料、放射性同位素或者反應(yīng)性或催化活性部分標(biāo)記的抗體。然后通過適合的方法測量與分析物結(jié)合的標(biāo)記抗體的量?！皧A心分析”所涉及的通用組合物和程序是已確立的，并為專業(yè)技術(shù)人員所公知。(《免疫分析手冊》(The Immunoassay Handbook) ,David Wild Elsevier LTD，Oxford ；第三片反(2005 年 5 月)， ISBN-13 :978-0080445267 ；Hultschig C等，Curr Opin Chem Biol. 2006 Feb ；10(1) :4-10. PMID :16376134)，在此引為參考。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，分析法包含兩種捕獲分子，優(yōu)選為都作為分散體存在于液體反應(yīng)混合物中的抗體，其中第一種標(biāo)記組分附著在第一種捕獲分子上，其中所述第一種標(biāo)記組分是基于熒光-或化學(xué)發(fā)光-淬滅或擴(kuò)增的標(biāo)記系統(tǒng)的一部分，并且所述標(biāo)記系統(tǒng)的第二種標(biāo)記組分附著于第二種捕獲分子上，使得當(dāng)兩種捕獲分子與分析物結(jié)合后產(chǎn)生可測量信號，允許檢測在包含樣品的溶液中形成的夾心復(fù)合物。
更加優(yōu)選，所述標(biāo)記系統(tǒng)包含稀土穴狀化合物或稀土螯合物與熒光染料或化學(xué)發(fā)光染料、特別是花青類型的染料的組合。在本發(fā)明的情形中，基于熒光的分析法包含使用染料，所述染料可以例如選自 FAM(5-或6-羧基熒光素)、VIC、NED、熒光素、熒光素異硫氰酸酯(FITC)、IRD-700/800、 花青染料例如CY3、CY5、CY3. 5、CY5. 5、Cy7、占噸、6-羧基-2’，4’，7’，4，7-六氯熒光素 (HEX)、TET、6-羧基-4，，5，- 二氯-2，，7，- 二甲氧基熒光素(JOE)、N，N，N' , N'-四甲基-6-羧基羅丹明(TAMRA)、6-羧基-X-羅丹明(ROX)、5_羧基羅丹明-6G (R6G5)、6_羧基羅丹明_6G(RG6)、羅丹明、羅丹明綠、羅丹明紅、羅丹明110、BODIPY染料例如BODIPY TMR、俄勒岡綠、香豆素類例如傘形酮、苯并亞胺類例如Hoechst 33258 ；菲啶類例如德克薩斯紅、 雅吉瓦黃、Alexa Fluor、PET、溴化乙錠、吖啶類染料、咔唑染料、吩噁嗪染料、嚇啉染料、聚甲炔染料等。在本發(fā)明的情形中，基于化學(xué)發(fā)光的分析法包含使用基于對化學(xué)發(fā)光材料描述的物理原理的染料，所述原理描述在Kirk-Othmer的《化學(xué)技術(shù)百科全書》(Encyclopedia of chemical technology)第四版，J. I. Kroschwitz 執(zhí)行主編，Μ· Howe-Grant 編輯，John ffiley&Sons, 1993,vol. 15,p. 518-562中，在此引為參考，包括在551-562頁中的引用文獻(xiàn)。 優(yōu)選的化學(xué)發(fā)光染料是吖啶酯。將患者樣品中的一種或多種標(biāo)志肽(或其片段或其前體或所述前體的片段)的水平、即濃度，與患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估相關(guān)聯(lián)。例如，標(biāo)志肽的濃度高于某個閾值表明患者的不良結(jié)果或升高的風(fēng)險。這樣的閾值對于MR-proANP來說優(yōu)選在約100至300pmol/l 的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為250pmol/l、最優(yōu)選為188pmol/l ；對于和肽素來說，在約10至40pmol/ 1的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為15pmol/l、最優(yōu)選為20. 3pmol/l ；對于MR-proADM來說，在約0. 4至 1. Onmo 1/1的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為0. 5nmol/l、最優(yōu)選為0. 67nmol/l ；對于CT-pro-ET_l來說， 在約50至120pmol/l的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為75pmol/l、最優(yōu)選為98. 3pmol/l ；對于PCT來說，在約0. 01至0. 06ng/ml的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為0. 015ng/ml、最優(yōu)選為0. 026ng/ml ；對于 hGH來說，在約0. 25至1. 0ng/ml范圍內(nèi)，更優(yōu)選為0. 5ng/ml、最優(yōu)選為0. 34ng/ml ；對于 NT-proBNP來說，在約250至500pg/ml的范圍內(nèi)，更優(yōu)選為450pg/ml、最優(yōu)選為370pg/ml。在本文中，優(yōu)選使用靈敏的PCT分析法(例如PCT靈敏分析法，B. R. Α. H. M. S AG, Hermigsdorf，德國)。在本文中，優(yōu)選PCT分析法具有0. 05ng/ml以下的功能性靈敏度。這意味著在本發(fā)明方法的一個實(shí)施方案中，以高靈敏度(即靈敏度為0. 05ng/ml, 優(yōu)選為0. 02ng/ml)測量患者樣品中的PCT水平。在這種情形中，優(yōu)選將PCT水平與患者的存活預(yù)后相關(guān)聯(lián)。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，通過將患者個體的標(biāo)志肽水平與健康群體的某個百分位數(shù)(例如97. 5百分位數(shù))相關(guān)聯(lián)，來確定患者的風(fēng)險和/或結(jié)果。用于中風(fēng)(出血性和/或缺血性)與TIA的鑒別診斷的優(yōu)選閾值，對于MR-proANP 來說在約90至約140pmol/l的范圍內(nèi)，對于和肽素來說在約9. 5至約11. 5pmol/l的范圍內(nèi)，對于MR-proADM來說在約0. 5至約0. 8nmol/l的范圍內(nèi)，對于CT-pro-ET_l來說在約65 至約90pmol/l的范圍內(nèi)，對于PCT來說在約0. 0230至約0. 0260ng/ml的范圍內(nèi)，對于hGH 來說在約0. 10至約0. 3ng/ml的范圍內(nèi)，其中低于閾值的值表明TIA，高于閾值的值表明中風(fēng)。用于鑒別診斷的實(shí)例性閾值提供在實(shí)施例11的表25中。
存活分析(Cox回歸和風(fēng)險比)和Kaplan-Meier估計(jì)可用于評估或預(yù)測例如肽水平高于或低于截止值的患者的結(jié)果或風(fēng)險(例如發(fā)病率)。在例如中風(fēng)或TIA后3、4或12 個月的發(fā)病率可以通過風(fēng)險比進(jìn)行評估，所述風(fēng)險比描述了肽水平高于某個截止值的患者的風(fēng)險的增加。在中風(fēng)或TIA后的觀察期內(nèi)出現(xiàn)的再次中風(fēng)或再次TIA的風(fēng)險的增加，可以分別通過例如機(jī)會比和交叉表來確定。從入院之日與入院后某個時間、例如入院后第5日時的一種或多種標(biāo)志肽的相應(yīng)水平的比較，可以使用Kaplan-Meier估計(jì)和風(fēng)險比為例如肽水平高于或低于截止值的患者預(yù)測結(jié)果/風(fēng)險，例如3、4、12個月后的存活概率。一般來說，一種以上標(biāo)志肽水平的測定值，可以通過對高于相應(yīng)截止值的肽水平值的數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)，用于評估患者的結(jié)果和風(fēng)險。超過截止值的肽水平越多，患者的風(fēng)險越高。Kaplan-Meier估計(jì)可用于預(yù)測死亡率，機(jī)會比可用于描述風(fēng)險增加，用于再次中風(fēng)或再次TIA的預(yù)測。正如在上文中提到的，根據(jù)本發(fā)明，標(biāo)志肽的測定水平可以按照功能結(jié)果進(jìn)行表述，例如按照巴氏指數(shù)、NIHSS或改良的評分量表進(jìn)行表述。例如，利用箱線圖(肽水平對結(jié)果)、受試者工作特征曲線(ROC)分析和機(jī)會比，可以使用肽水平預(yù)測將來的功能結(jié)果。本發(fā)明的方法和試劑盒也可用于根據(jù)所述至少一種心血管肽的水平，確定所述患者是否患有中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作。在這種情況下，優(yōu)選在干預(yù)前獲取樣品。序列腎上腺髓質(zhì)素的前體肽(前腎上腺髓質(zhì)素原)的氨基酸序列提供在SEQ ID NO=I 中。腎上腺髓質(zhì)素原是指前腎上腺髓質(zhì)素原序列的22至185位氨基酸殘基。腎上腺髓質(zhì)素原(pro-ADM)的氨基酸序列提供在SEQ ID NO. 2中。pro-ADM N-端20肽(PAMP)是指 pre-proADM的22-41位氨基酸殘基。PAMP的氨基酸序列提供在SEQ ID NO 3中。MR-pro-腎上腺髓質(zhì)素(MR-pro-ADM)是指pre-pro_ADM的45-92位氨基酸殘基。MR-pro_ADM的氨基酸序列提供在SEQ ID N0:4中。成熟的腎上腺髓質(zhì)素(ADM)的氨基酸序列提供在SEQ ID NO :5 中。ANP的氨基酸序列提供在SEQ ID NO :8中。153個氨基酸的pre-pro_ANP的序列顯示在SEQ ID N0:6中。在切掉N-端信號肽(25個氨基酸)和兩個C-端氨基酸(127/128) 后，釋放出proANP(SEQ ID NO :7)。ANP包含來自前體激素原pro-ΑΝΡ的C-端的99-1 位殘基。該激素原被切割成成熟的觀個氨基酸的肽ANP，也稱為ANP (1-28)或α-ANP，以及氨基端片段 ANP (1-98) (NT-proANP，SEQ ID NO :9)。中段 proANP (MR-proANP)被定義為NT-proANP或其包含proANP的至少53-90位氨基酸殘基(SEQ ID N0:10)的任何片段。 C-端兩個精氨酸殘基(SEQ ID NO 6的pre-pro_ANP中152和153位)在pre-pro_ANP的編碼基因的另一個等位基因中不存在，因此pre-pro-ANP可以只包含1到151位殘基。對于pre-pro-ANP的相應(yīng)片段來說當(dāng)然也是如此，特別是pro-ANP與和肽素可以包含或可以不包含這兩個C-端精氨酸。164個氨基酸的血管加壓素前體肽(前血管加壓素原)的序列提供在SEQ ID NO 11中。血管加壓素原是指前血管加壓素原序列的四至164位氨基酸殘基。血管加壓素原的氨基酸序列提供在SEQ ID NO :12中。血管加壓素原被切割成成熟的血管加壓素、后葉激素運(yùn)載蛋白II和C-端血管加壓素原(CT-proAVP或和肽素)。血管加壓素是指前血管加壓素原的20至觀位氨基酸殘基。血管加壓素的氨基酸序列顯示在SEQ ID N0:13中。和肽素是指前血管加壓素原的126至164位氨基酸殘基。和肽素的氨基酸序列提供在SEQ ID N0:14中。后葉激素運(yùn)載蛋白II包含前血管加壓素原的32至IM位氨基酸殘基，其序列顯示在SEQ ID NO 15中。212個氨基酸的內(nèi)皮素-1前體肽(前內(nèi)皮素原-1)的序列提供在SEQ ID NO 16中。Pro-ET-I是指pre-pro-ET-l序列的18至212位氨基酸殘基。pro-ΕΤ-Ι的氨基酸序列提供在SEQ ID NO: 17中。Pro-ΕΤ-Ι被切割成成熟ET-1、big-ΕΤ-Ι和C-端 proET-1 (CT-proET-1)。ET-I 是指 pre-pro-ET-l 的 53 至 73 位氨基酸殘基。ET-I 的氨基酸序列顯示在SEQ ID NO 18中。CT-proET-Ι是指pre-pro-ET-l的168至212位氨基酸殘基。CT-proET-Ι的氨基酸序列提供在SEQ ID N0:19中。Big-ET-I包含pre-pro-ET-l 的53至90位氨基酸殘基，其序列顯示在SEQ ID NO 20中。141個氨基酸的降鈣素前體肽(前降鈣素原)序列提供在SEQ ID NO 21中。降鈣素原(PCT)是指前降鈣素原序列的沈至141位氨基酸殘基。PCT的氨基酸序列顯示在SEQ ID NO :22中。降鈣素原被切割成N-端PCT、降鈣素和鈣抑肽(katacalcin)。N-端PCT包含沈至82位氨基酸，其序列顯示在SEQ ID N0:23中。降鈣素是指8至116位氨基酸，其序列提供在SEQ ID N0J4中。包含121-141位氨基酸殘基的鈣抑肽的序列提供在SEQ ID NO 25 中。134個氨基酸的腦利尿鈉肽的前體肽(pre-pro-BNP)的序列提供在SEQ ID NO 26 中。Pro-BNP是指pre-pro-BNP的27至1；34位氨基酸殘基。pro-BNP的序列顯示在SEQ ID NO 27 中。Pro-BNP 被切割成 N-端 pro-BNP (NT-pro-BNP)和成熟 BNP。NT-pro-BNP 包含 27 至102位氨基酸殘基，其序列顯示在SEQ ID NO 28中。SEQ ID NO 29顯示了 BNP的序列， 其包含pre-pro-BNP肽的103至134位氨基酸殘基。
0149]SEQID NO 1 (pre-pro-ADM 的氨基酸序列)0150]1MKLVSVALMY LGSLAFLGAD TARLDVASEFRKKffNKffALSRGKRELRMSS0151]51SYPTGLADVK AGPAQTLIRP QDMKGASRSPEDSSPDAARIRVKRYRQSMN0152]101NFQGLRSFGC RFGTCTVQKL AHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQGYGRRR0153]151RRSLPEAGPG RTLVSSKPQA HGAPAPPSGSAPHFL0154]SEQID NO :2(pro-ADM的氨基酸序列)0155]1ARLDVASEFR KKffNKffALSR GKRELRMSSSYPTGLADVKAGPAQTLIRPQ0156]51DMKGASRSPE DSSPDAARIR VKRYRQSMNNFQGLRSFGCRFGTCTVQKLA0157]101HQIYQFTDKD KDNVAPRSKI SPQGYGRRRRRSLPEAGPGRTLVSSKPQAH0158]151GAPAPPSGSA PHFL0159]SEQID NO :3(pro-ADM N20的氨基酸序列)0160]1ARLDVASEFR KKffNKffALSR0161]SEQID NO :4(MR-pro-ADM 的氨基酸序列)0162]1ELRMSSSYPT GLADVKAGPA QTLIRPQDMKGASRSPEDSS0163]SEQID NO :5(ADM的氨基酸序列)0164]1YRQSMNNFQG LRSFGCRFGT CTVQKLAHQIYQFTDKDKDNVAPRSKISPQ0165]51GY0166]SEQID NO :6(pre-pro-ANP 的氨基酸序列)0167]1MSSFSTTTVS FLLLLAFQLL GQTRANPMYN AVSNADLMDFKNLLDHLEEK0168]51MPLEDEVVPP QVLSEPNEEA GAALSPLPEV PPffTGEVSPAQRDGGALGRG0169]101PffDSSDRSAL LKSKLRALLT APRSLRRSSC FGGRMDRIGAQSGLGCNSFR0170]151YRR0171]SEQID NO :7(pro-ANP的氨基酸序列)0172]1NPMYNAVSNA DLMDFKNLLD HLEEKMPLED EVVPPQVLSEPNEEAGAALS0173]51PLPEVPPffTG EVSPAQRDGG ALGRGPffDSS DRSALLKSKLRALLTAPRSL0174]101RRSSCFGGRM DRIGAQSGLG CNSFRY0175]SEQID NO :8(ANP的氨基酸序列)0176]1SLRRSSCFGG RMDRIGAQSG LGCNSFRY0177]SEQID NO 9 (NT-proANP的氨基酸序列)0178]1NPMYNAVSNA DLMDFKNLLD HLEEKMPLED EVVPPQVLSEPNEEAGAALS0179]51PLPEVPPffTG EVSPAQRDGG ALGRGPffDSS DRSALLKSKLRALLTAPR0180]SEQID NO :10(proANP的53-90位氨基酸的氨基酸序列)0181]1PEVPPffTGEV SPAORDGGAL GRGPffDSSDR SALLKSKL0182]SEQID NO :11 (pre-pro-AVP 的氨基酸序列)0183]1MPDTMLPACF LGLLAFSSAC YFQNCPRGGK RAMSDLELRQCLPCGPGGKG0184]51RCFGPSICCA DELGCFVGTA EALRCQEENY LPSPCQSGQKACGSGGRCAA0185]101FGVCCNDESC VTEPECREGF HRRARASDRS NATQLDGPAGALLLRLVQLA0186]151GAPEPFEPAQ PDAY0187]SEQID NO :12(pro-AVP的氨基酸序列)0188]1CYFQNCPRGG KRAMSDLELR QCLPCGPGGK GRCFGPSICCADELGCFVGT0189]51AEALRCQEEN YLPSPCQSGQ KACGSGGRCA AFGVCCNDESCVTEPECREG0190]101FHRRARASDR SNATQLDGPA GALLLRLVQL AGAPEPFEPAQPDAY0191]SEQID NO 13 (AVP的氨基酸序列)0192]1CYFQNCPRG0193]SEQID NO :14(CT-pre-proAVP或和肽素的氨基酸序列)0194]1ASDRSNATQL DGPAGALLLR LVQLAGAPEP FEPAQPDAY0195]SEQID NO :15(后葉激素運(yùn)載蛋白II的氨基酸序列)0196]1AMSDLELRQC LPCGPGGKGR CFGPSICCAD ELGCFVGTAEALRCQEENYL0197]51PSPCQSGQKA CGSGGRCAAF GVCCNDESCV TEPECREGFHRRA0198]SEQID NO :16(pre-pro-ET-l 的氨基酸序列)0199]1MDYLLMIFSL LFVACQGAPE TAVLGAELSA VGENGGEKPT PSPPWRLRRS
51 KRCSCSSLMD KECVYFCHLD IIWVNTPEHV VPYGLGSPRS KRALENLLPT 101 KATDRENRCQ CASQKDKKCW NFCQAGKELR AEDIMEKDWN NHKKGKDCSK 151 LGKKCIYQQL VRGRKIRRSS EEHLRQTRSE TMRNSVKSSF HDPKLKGKPS
201 RERYVTHNRA HWSEQ ID NO :17(pro-ET_l 的氨基酸序列)1 APETAVLGAE LSAVGENGGE KPTPSPPffRL RRSKRCSCSS LMDKECVYFC
51
101
151
SEQ
1
SEQ
1
SEQ
1
SEQ
1
51
101
SEQ
1
51
101
SEQ
1
51
SEQ
1
SEQ
1
SEQ
1
51
101
SEQ
1
51
101
SEQ
1
51
SEQ
1
ALESSPADPA RSKRCGNLST RPHVSMPQNA
QDYVQMKASE FPQTAIGVGA
TLSEDEARLL CMLGTYTQDF
N
LEQEQEREGS PGKKRDMSSD
HLDIIffVNTP EHVVPYGLGS PRSKRALENL LPTKATDREN RCQCASQKDK KCffNFCQAGK ELRAEDIMEK DffNNHKKGKD CSKLGKKCIY QQLVRGRKIR RSSEEHLRQT RSETMRNSVK SSFHDPKLKG KPSRERYVTH NRAHW ID NO :18(ET-1的氨基酸序列) CSCSSLMDKE CVYFCHLDII W SEQ ID NO :19(CT-pro-ET-l 的氨基酸序列)
RSSEEHLRQT RSETMRNSVK SSFHDPKLKG KPSRERYVTH NRAHW SEQ ID NO :20(Big-ET-l 的氨基酸序列)
CSCSSLMDKE CVYFCHLDII WVNTPEHVVP YGLGSPRS ID NO :21(前降鈣素原的氨基酸序列) MGFQKFSPFL ALSILVLLQA GSLHAAPFRS LAALVQDYVQ MKASELEQEQ EREGSSLDSP NKFHTFPQTA IGVGAPGKKR DMSSDLERDH ID NO 22 (PCT的氨基酸序列) APFRSALESS PADPATLSED EARLLLAALV SLDSPRSKRC GNLSTCMLGT YTQDFNKFHT LERDHRPHVS MPQNAN ID NO 23 (N-端PCT的氨基酸序列)
APFRSALESS PADPATLSED EARLLLAALV QDYVQMKASE LEQEQEREGS SLDSPRS
ID NO 24(降鈣素的氨基酸序列) CGNLSTCMLG TYTQDFNKFH TFPQTAIGVG AP ID NO :25(鈣抑肽的氨基酸序列) DMSSDLERDH RPHVSMPQNA N SEQ ID NO :26(pre-pro-BNP 的氨基酸序列):
MDPQTAPSRA LLLLLFLHLA FLGGRSHPLG SPGSASDLET SGLQEQRNHL QGKLSELQVE QTSLEPLQES PRPTGVffKSR EVATEGIRGH RKMVLYTLRA PRSPKMVQGS GCFGRKMDRI SSSSGLGCKV LRRH ID NO :27(pro-BNP的氨基酸序列)
HPLGSPGSAS DLETSGLQEQ RNHLQGKLSE LQVEQTSLEP LQESPRPTGV WKSREVATEG IRGHRKMVLY TLRAPRSPKM VQGSGCFGRK MDRISSSSGL GCKVLRRH
SEQ ID NO :28(NT-pro-BNP 的氨基酸序列):
HPLGSPGSAS DLETSGLQEQ RNHLQGKLSE LQVEQTSLEP LQESPRPTGV WKSREVATEG IRGHRKMVLY TLRAPR ID NO 29 (BNP的氨基酸序列) SPKMVQGSGC FGRKMDRISS SSGLGCKVLR RH


圖1 干預(yù)前測量到的MR-proANP水平高(短劃線)和低(實(shí)線)的患者的 Kaplan-Meier圖(在四個月內(nèi)存活的患者的比例)。圖2 具有干預(yù)前測量到的MR-proADM水平高(短劃線)和低(實(shí)線)的患者的 Kaplan-Meier 圖。圖3 具有的干預(yù)前測量到的CT-proET-Ι水平高(短劃線)和低(實(shí)線)的患者的 Kaplan-Meier 圖。圖4:干預(yù)前測量到的CT-proAVP水平高(短劃線)和低(實(shí)線)的患者的 Kaplan-Meier 圖。圖5 干預(yù)前測量到的PCT水平高(短劃線)和低(實(shí)線)的患者的Kaplan-Meier 圖。圖6 干預(yù)前測量到的hGH水平高(短劃線)和低(實(shí)線)的患者的Kaplan-Meier 圖。圖7 干預(yù)前測量到的MR-proANP和CT-proAVP (兩種標(biāo)志的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖8 干預(yù)前測量到的MR-proANP和MR-proADM(兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖9 干預(yù)前測量到的MR-proANP和CT-proET_l (兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖10 干預(yù)前測量到的MR-proANP和PCT(兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖11 干預(yù)前測量到的CT-proAVP和MR-proADM(兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖12 干預(yù)前測量到的CT-proAVP和CT-proET-1 (兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖13 干預(yù)前測量到的CT-proAVP和PCT(兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖14 干預(yù)前測量到的MR-proADM和CT-proET_l (兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖15 干預(yù)前測量到的MR-proADM和PCT (兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖16 干預(yù)前測量到的CT-proET-Ι和PCT (兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于預(yù)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖17 干預(yù)前測量到的hGH和MR-proANP (兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖18 干預(yù)前測量到的hGH和MR_proADM(兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖19 干預(yù)前測量到的hGH和CT-proET-l (兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖20 干預(yù)前測量到的hGH和PCT (兩種標(biāo)志物的成對組合)水平高和低的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線兩種標(biāo)志物低(低于規(guī)定閾值)；短劃/點(diǎn)線兩種標(biāo)志物高(高于規(guī)定閾值)；短劃線第一種標(biāo)志物低，第二種標(biāo)志物高；點(diǎn)線第一種標(biāo)志物高，第二種標(biāo)志物低。圖 21 MR-proANP, MR-proADM、CT-proAVP、CT-proET-1 和 / 或 PCT 水平高的患者的Kaplan-Meier圖。從上到下的曲線0、1、2、3和4個或更多標(biāo)志物高于規(guī)定閾值。圖 22 干預(yù)前測量到的 MR-proANP、MR-proADM、CT-proAVP、CT-proET-l 和 / 或 PCT 水平高的患者的Kaplan-Meier圖。MR-proANP和CT-proAVP被計(jì)數(shù)兩次。從上到下的曲線0、1、2、3、4、5和6個或更多標(biāo)志物高于規(guī)定閾值。圖23 干預(yù)前測量到的MR-proANP水平高和低并且第5日的改良評分量表為5的患者的 Kaplan-Meier 圖。圖M 干預(yù)前測量到的MR-proANP水平高和低并且第5日的巴氏指數(shù)< 85%的患者的 Kaplan-Meier 圖。圖25 具有干預(yù)前測量到的PCT水平高和低并且第1日的NIHSS指數(shù)< 10的患者的 Kaplan-Meier 圖。圖26 干預(yù)前測量到的MR-proANP水平高和低并且第5日的NIHSS指數(shù)< 10的患者的 Kaplan-Meier 圖。圖27 干預(yù)前測量到的PCT水平高和低并且第1日的NIHSS指數(shù)< 10的患者的 Kaplan-Meier 圖。圖28 干預(yù)前(第0日)和/或第5日測量到的MR-proANP水平高和低的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線水平在第0和5日低于閾值；短劃線水平第0日低于閾值并且在第5日高于閾值；點(diǎn)線水平第0日高于閾值并且在第5日低于閾值；短劃/點(diǎn)線水平在第0和5日高于閾值。圖29 干預(yù)前(第0日)和/或第5日測量到的CT-proAVP水平高和低的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線水平在第0和5日低于閾值；短劃線水平第0日低于閾值并且在第5日高于閾值；點(diǎn)線水平第0日高于閾值并且在第5日低于閾值；短劃/點(diǎn)線水平在第0和5日高于閾值。圖30 干預(yù)前(第0日)和/或第5日測量到的MR-proADM水平高和低的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線水平在第0和5日低于閾值；短劃線水平第0日低于閾值并且在第5日高于閾值；點(diǎn)線水平第0日高于閾值并且在第5日低于閾值；短劃/點(diǎn)線水平在第0和5日高于閾值。圖31 干預(yù)前(第0日)和/或第5日測量到的CT-proET-Ι水平高和低的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線水平在第0和5日低于閾值；短劃線水平第0日低于閾值并且在第5日高于閾值；點(diǎn)線水平第0日高于閾值并且在第5日低于閾值；短劃/點(diǎn)線冰平在第0和5日高于閾值。圖32:干預(yù)前(第0日)和/或第5日測量到的PCT水平高和低的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線水平在第0和5日低于閾值；短劃線水平第0日低于閾值并且在第5日高于閾值；點(diǎn)線水平第0日高于閾值并且在第5日低于閾值；短劃/點(diǎn)線水平在第0和5日高于閾值。圖33 第5日具有高的NIHSS(> 10)和低的NIHSS (< 10)的患者的Kaplan-Meier 圖。圖34 第5日測量到的MR-proANP水平高/低的患者的Kaplan-Meier圖。圖35 第5日具有高/低的MR-proANP水平和高/低的NIHSS的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，NIHSS低；短劃線標(biāo)志物水平低，NIHSS高；點(diǎn)線 標(biāo)志物水平高，NIHSS低；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且NIHSS高。圖36 第5日具有高/低的CT-proAVP水平的患者的Kaplan-Meier圖。圖37 第5日具有高/低的CT-proAVP水平和高/低的NIHSS的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，NIHSS低；短劃線標(biāo)志物水平低，NIHSS高；點(diǎn)線 標(biāo)志物水平高，NIHSS低；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且NIHSS高。圖38 第5日具有高/低的CT-proET-Ι水平的患者的Kaplan-Meier圖。圖39 第5日具有高/低的CT-proET-Ι水平和高/低的NIHSS的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，NIHSS低；短劃線標(biāo)志物水平低，NIHSS高；點(diǎn)線 標(biāo)志物水平高，NIHSS低；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且NIHSS高。
圖40 第5日巴氏指數(shù)< 85 % (短劃線)和> 85 % (實(shí)線)的患者的 Kaplan-Meier 圖。圖41:第5日具有高/低的MR-proANP水平并且巴氏指數(shù)</>85%的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，巴氏指數(shù)> 85% ；短劃線標(biāo)志物水平低，巴氏指數(shù)< 85% ；點(diǎn)線標(biāo)志物水平高，巴氏指數(shù)> 85% ；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且巴氏指數(shù)< 85%。圖42:第5日具有高/低的CT-proAVP水平并且巴氏指數(shù)</>85%的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，巴氏指數(shù)> 85% ；短劃線標(biāo)志物水平低，巴氏指數(shù)< 85% ；點(diǎn)線標(biāo)志物水平高，巴氏指數(shù)> 85% ；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且巴氏指數(shù)< 85%。 圖43 第5日具有高/低的CT-proET-Ι水平并且巴氏指數(shù)</>85 %的患者的 Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，巴氏指數(shù)> 85% ；短劃線標(biāo)志物水平低，巴氏指數(shù)< 85% ；點(diǎn)線標(biāo)志物水平高，巴氏指數(shù)> 85% ；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且巴氏指數(shù)< 85%。圖44:第5日改良評分量表分值為0_2(實(shí)線)和3_6(短劃線)的患者的 Kaplan-Meier 圖。圖45 第5日具有高/低的MR-proANP水平并且改良評分量表分值在0_2或3_6 之間的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，評分0_2 ；短劃線標(biāo)志物水平低，評分3-6 ；點(diǎn)線標(biāo)志物水平高，評分0-2 ；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且評分3-6。圖46 第5日具有高/低的MR-proADM水平并且改良評分量表分值在0_2或3_6 之間的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，評分0_2 ；短劃線標(biāo)志物水平低，評分3-6 ；點(diǎn)線標(biāo)志物水平高，評分0-2 ；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且評分3-6。圖47 第5日具有高/低的CT-proAVP水平并且改良評分量表分值在0_2或3_6 之間的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，評分0_2 ；短劃線標(biāo)志物水平低，評分3-6 ；點(diǎn)線標(biāo)志物水平高，評分0-2 ；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且評分3-6。圖48 第5日具有高/低的CT-proET-Ι水平并且改良評分量表分值在0_2或3_6 之間的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，評分0_2 ；短劃線標(biāo)志物水平低，評分3-6 ；點(diǎn)線標(biāo)志物水平高，評分0-2 ；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且評分3-6。圖49 第5日具有高/低的PCT水平并且改良評分量表分值在0_2或3_6之間的患者的Kaplan-Meier圖。實(shí)線標(biāo)志物水平低，評分0_2 ；短劃線標(biāo)志物水平低，評分3_6 ； 點(diǎn)線標(biāo)志物水平高，評分0-2 ；短劃/點(diǎn)線標(biāo)志物水平高并且評分3-6。圖50 三個月后測定的改良評分量表分別與干預(yù)前測量 到的CT-proAVP(A)和 MR-proANP(B)水平之間的關(guān)聯(lián)性的箱線圖。在χ軸上從左到右評分為0至6。圖51 干預(yù)前測量到的CT-proAVP與三個月后二分式改良評分量表(好結(jié)果= mRS 0-2 ；壞結(jié)果=mRS 3-6)的受試者工作特征曲線(ROC)圖。曲線下面積(AUC) = 0. 723。圖52 干預(yù)前測量到的MR-proANP與三個月后二分式改良評分量表(好結(jié)果= mRS 0-2 ；壞結(jié)果=mRS 3-6)的 ROC 圖。AUC = 0. 703。圖53 干預(yù)前測量到的MR-proADM與三個月后二分式改良評分量表(好結(jié)果= mRS 0-2 ；壞結(jié)果=mRS 3-6)的 ROC 圖。AUC = 0. 658。
圖54 干預(yù)前測量到的CT-proET-Ι與三個月后二分式改良評分量表(好結(jié)果= mRS 0-2 ；壞結(jié)果=mRS 3-6)的 ROC 圖。AUC = 0. 608。圖55 干預(yù)前測量到的PCT與三個月后二分式改良評分量表(好結(jié)果=mRS 0-2 ； 壞結(jié)果=mRS 3-6)的 ROC 圖。AUC = 0. 580。圖56干預(yù)前測量到的hGH與三個月后二分式改良評分量表(好結(jié)果=mRS 0-2 ；壞結(jié)果=mRS 3-6)的 ROC 圖。AUC = 0. 581。圖57 在患有缺血性中風(fēng)、出血性中風(fēng)和TIA的患者中MR-proANP水平的分布。中位數(shù)值分別為 137. 0pmol/L、124. Opmol/L 和 90. 6pmol/L。圖58 使用MR-proANP作為單一標(biāo)志物鑒別診斷缺血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。AUC =0. 65 (P < 0. 0001)。圖59 使用MR-proANP作為單一標(biāo)志物鑒別診斷出血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。AUC =0. 65 (P < 0. 001)。圖60 在患有缺血性中風(fēng)、出血性中風(fēng)和TIA的患者中CT-proAVP (和肽素)水平的分布。中位數(shù)值分別為11. 0pmol/L、16. 6pmol/L和4. 8pmol/L。圖61 使用和肽素作為單一標(biāo)志物鑒別診斷缺血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。AUC = 0. 71 (P < 0. 0001)。圖62 使用和肽素作為單一標(biāo)志物鑒別診斷出血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。AUC = 0. 74 (P < 0. 0001)。圖63 在患有缺血性中風(fēng)、出血性中風(fēng)和TIA的患者中MR-proADM水平的分布。中位數(shù)值分別為 0. 74nmol/L、0. 71nmol/L 和 0. 61nmol/L。圖64 使用MR-proADM作為單一標(biāo)志物鑒別診斷缺血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。AUC =0. 61 (P < 0. 0001)。圖65 使用MR-proADM作為單一標(biāo)志物鑒別診斷出血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。AUC =0. 59 (P = 0. 033)。圖66 在患有缺血性中風(fēng)、出血性中風(fēng)和TIA的患者中CT-proET_l水平的分布。 中位數(shù)值分別為 72. 0pmol/L,75. 7pmol/L 和 63. 3pmol/L。圖67 使用CT-proET-Ι作為單一標(biāo)志物鑒別診斷缺血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。 AUC = 0. 59 (P < 0. 001)。圖68 使用CT-proET-Ι作為單一標(biāo)志物鑒別診斷出血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。 AUC = 0. 68 (P < 0. 0001)。圖69 在患有缺血性中風(fēng)、出血性中風(fēng)和TIA的患者中PCT水平的分布。中位數(shù)值分別為 0. 018ng/ml、0. 018ng/ml 和 0. 016ng/ml。圖70 使用PCT作為單一標(biāo)志物鑒別診斷缺血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。AUC = 0. 58 (P < 0. 001)。圖71 使用PCT作為單一標(biāo)志物鑒別診斷出血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。AUC = 0. 56 (P = 0. 17)。圖72 在患有缺血性中風(fēng)、出血性中風(fēng)和TIA的患者中hGH水平的分布。中位數(shù)值分別為 0. 42ng/ml、0. 41ng/ml 和 0. 24ng/ml。圖73 使用hGH作為單一標(biāo)志物鑒別診斷缺血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。AUC =0. 60 (P< 0. 001)。圖74 使用PCT作為單一標(biāo)志物鑒別診斷出血性中風(fēng)與TIA的ROC圖。AUC = 0. 61 (P= 0. 013)。圖 75 :SEQ ID NO 1 (pre-pro-ADM 的氨基酸序列)圖 76 :SEQ ID NO 2 (pro-ADM 的氨基酸序列)圖 77 =SEQ ID NO :3 (pro-ADM N20 的氨基酸序列)圖 78 =SEQ ID NO 4 (MR-pro-ADM 的氨基酸序列)圖 79 :SEQ ID NO 5 (ADM 的氨基酸序列)圖 80 :SEQ ID NO 6 (pre-pro-ANP 的氨基酸序列)圖 81 :SEQ ID NO :7(pro_ANP 的氨基酸序列)圖 82 :SEQ ID NO 8 (ANP 的氨基酸序列)圖 83 :SEQ ID NO 9 (NT-proANP 的氨基酸序列)圖84 =SEQ ID NO 10 (pro ANP的53-90位氨基酸的氨基酸序列)圖 85 :SEQ ID NO 11 (pre-pro-AVP 的氨基酸序列)圖 86 :SEQ ID NO :12(pro-AVP 的氨基酸序列)圖 87 :SEQ ID NO 13 (AVP 的氨基酸序列)圖88 =SEQ ID NO 14 (CT-pre-proAVP 或和肽素的氨基酸序列)圖89 =SEQ ID NO :15(后葉激素運(yùn)載蛋白II的氨基酸序列)圖 90 :SEQ ID NO 16 (pre-pro-ET-1 的氨基酸序列)圖 91 :SEQ ID NO :17(pro-ET_l 的氨基酸序列)圖 92 :SEQ ID NO :18(ET_1 的氨基酸序列)圖 93 :SEQ ID NO 19 (CT-pro-ET-l 的氨基酸序列)圖 94 :SEQ ID NO :20(Big-ET_l 的氨基酸序列)圖95 =SEQ ID NO 21 (前降鈣素原的氨基酸序列)圖 96 :SEQ ID NO 22 (PCT 的氨基酸序列)圖97 =SEQ ID NO 23 (N-端 PCT 的氨基酸序列)圖98 =SEQ ID NO :24 (降鈣素的氨基酸序列)圖99 =SEQ ID NO :25 (鈣抑肽的氨基酸序列)圖 100 :SEQ ID NO 26 (pre-pro-BNP 的氨基酸序列)圖 101 :SEQ ID NO :27(pro_BNP 的氨基酸序列)圖 102 =SEQ ID NO 28 (NT-pro-BNP 的氨基酸序列)圖 103 :SEQ ID NO 29 (BNP 的氨基酸序列)
實(shí)施例實(shí)施例1 臨床研究研究設(shè)置，入選/排除標(biāo)準(zhǔn)研究在巴塞爾大學(xué)醫(yī)院(University Hospital of Basel)的急診部和神經(jīng)與神經(jīng)外科門診部 進(jìn)行。研究入選了急診部接納的在最近3天內(nèi)癥狀發(fā)作的符合世界衛(wèi)生組織 (World Health Organization)標(biāo)準(zhǔn)的缺血性或出血性中風(fēng)或短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)的所有連續(xù)患者。排除了沒有知情同意書的患者。基線數(shù)據(jù)收集訪問沒有入選本研究的所有合格患者的數(shù)據(jù)，對于避免選擇偏倚是重要的。因此， 在所有合格患者中收集了關(guān)于入選和排除標(biāo)準(zhǔn)的基線數(shù)據(jù)和信息，不論他們是否入選在研究中。這允許對同意參加與不同意參加的合格患者的基線數(shù)據(jù)進(jìn)行比較?；颊咧械幕€數(shù)據(jù)收集由研究者進(jìn)行，并包含a)年齡b)件別c)BMId)病史項(xiàng)入院前的真實(shí)病史；患有短暫性缺血性發(fā)作的患者中的AB⑶分值 (Rothwell等，2005. “鑒定在短暫性缺血性發(fā)作后處于高的早期中風(fēng)風(fēng)險中的個體的簡單計(jì)分方法(ABCD) ”(A simple score (ABCD) to identify individuals at high early risk of stroke after transient ischaemic attack). Lancet 366:29-36)；家方矣史；也通過charlson指數(shù)(Goldstein等，2004. “用于缺血性中風(fēng)結(jié)果研究的charlson指數(shù)并存疾病調(diào)整，，(Charlson Index comorbidity adjustment for ischemic stroke outcome studie)s. Stroke 35 1941-5)評估的相關(guān)并存疾病(即高血壓、以前的中風(fēng)、以前的TIA、 缺血性心臟病、心房纖顫、糖尿病、腎和肝功能障礙、充血性心力衰竭、血脂異常)；具有低鈉血癥風(fēng)險的并存疾病(嚴(yán)重的甲狀腺功能減退、糖皮質(zhì)激素不足、腫瘤、HIV感染)；吸煙史(每年包數(shù))和狀態(tài)(每天包數(shù))；正在使用的藥物；飲酒量(每天杯數(shù)和克數(shù))；從癥狀發(fā)作到入院的時間。e)居住地點(diǎn)即獨(dú)立?；?，被定義為住在家里或在養(yǎng)老院中，具有或不具有家庭圈和/或?qū)I(yè)護(hù)理的支持(家庭圈由配偶和/或其他與患者一起生活的重要成員組成)； 不獨(dú)立生活，被定義為住在療養(yǎng)院長住部門、其他醫(yī)院。f)臨床項(xiàng)身體檢杳包括神經(jīng)狀態(tài)、NIHSS(用于評估中風(fēng)的嚴(yán)重性)和格拉斯哥昏迷量表(Glasgow Coma scale) (GCS ;Adams等，1999. “基線NIH中風(fēng)量表分值強(qiáng)烈預(yù)測中風(fēng)后結(jié)果急性中風(fēng)治療的Org 10172試驗(yàn)(TOAST)報告”(Baseline NIH Stroke Scale score strongly predicts outcome after stroke :A report of the Trial of Org 10172in Acute Stroke Treatment (TOAST)), Neurology 53 :126-31)、血壓、脈搏率、體重、 容量狀態(tài)(包括皮膚充盈、頸靜脈擴(kuò)張、聽診、如果可獲得的話流體攝入和失去的流程表)、 體溫；在神經(jīng)外科患者中的腦內(nèi)壓，如果在常規(guī)臨床管理中進(jìn)行的話。 g)在神經(jīng)病患者中，在入院時和鈉失衡的情況下評估低鈉血癥的臨床癥狀。在經(jīng)歷顱內(nèi)手術(shù)的患者中，將每日評估臨床癥狀。具體來說，監(jiān)測頭痛、厭食、惡心、嘔吐、肌肉痙攣和疼痛、癲癇發(fā)作、意識不清、感覺遲鈍或昏睡發(fā)展的出現(xiàn)。h)常規(guī)/標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室化驗(yàn)常規(guī)采血包括血細(xì)胞比容、血尿素氮、碳酸氫鹽、總蛋白、白蛋白、血清尿酸和尿電解質(zhì)、尿液和血清滲透壓、肌酸酐、脂類、TSH、fT4、T3和基礎(chǔ)皮質(zhì)醇。如果可行，所有采血在攝取任何食物或吸煙之前進(jìn)行。或者，對影響因素進(jìn)行監(jiān)測。 )成像腦顱的計(jì)算機(jī)斷層成像或MRI (T1、T2、擴(kuò)散加權(quán)的成像序列，使用或不使用造影)，如果指明使用磁共振血管造影術(shù)或常規(guī)腦血管造影術(shù)的話。記錄了施加造影劑的時間點(diǎn)。
也在缺血性病灶的血管區(qū)域的基礎(chǔ)上將中風(fēng)患者分類如下完全前循環(huán)綜合征 (TACS)，部分前循環(huán)綜合征(PACS)，腔隙性循環(huán)綜合征(LACS)，后循環(huán)綜合征(POCS)。 i)其他調(diào)杳對中風(fēng)患者進(jìn)行神經(jīng)聲像圖、心回波描記術(shù)、標(biāo)準(zhǔn)的12導(dǎo)心電圖和 24小時心電圖檢查，然后按照急性治療中的Org 10172試驗(yàn)(TOAST)中風(fēng)亞型分類標(biāo)準(zhǔn)，通過中風(fēng)的病因進(jìn)行分類，所述分類標(biāo)準(zhǔn)用于區(qū)分大動脈粥樣硬化、心源性腦栓塞、小動脈阻塞、其他病因和未確定病因。知情同意書陳述研究得到巴塞爾倫理委員會(Ethikkommission beider Basel)的批準(zhǔn)。重要的是指出，這是一項(xiàng)探索性和觀察性的研究；與研究相關(guān)的唯一干預(yù)是要求在常規(guī)進(jìn)行的采血過程中獲得7. 5ml血漿。因此，要求患者提供他們同意將其數(shù)據(jù)用于科學(xué)目的的書面知情同意書。在由于急性CNS病變(這是入選的先決條件)的后遺癥而不能“知情同意”的患者中，患者的最近親屬將簽署同意書以陳述患者的假定意愿。在不容易找到最近親屬的情況下，沒有參與本研究的主治醫(yī)生必須證明從他的觀點(diǎn)來看不反對入選到本研究中。只有在這些知情同意書程序后，患者才被入選在本研究中。在整個試驗(yàn)過程中參與者的管理步驟1.急診部或神經(jīng)科病房中的所有合格患者入選本研究。步驟2.收集所有基線數(shù)據(jù)。步驟3.在住院期間，通過圖表審杳評估臨床項(xiàng)目包括體重、血壓、脈搏率、容積狀態(tài)和體溫，直到出院。-流體治療和藥物-可能的低鈉血癥癥狀，即頭痛、惡心、嘔吐、肌肉痙攣和疼痛、厭食、意識受損、癲癇發(fā)作。-在常規(guī)采血時間點(diǎn)處取樣進(jìn)行常規(guī)實(shí)驗(yàn)室化驗(yàn)(化學(xué)圖、血糖、血清滲透壓、尿液滲透壓、尿鈉、血細(xì)胞比容)。步驟4.在所有患者中，在入院第5日，使用NIHSS、巴氏指數(shù)和評分量表進(jìn)行臨床檢查(Collin等，1988. “巴氏ADL指數(shù)可靠性研究”(The Barthel ADL Index :a reliability study),International Disability Study 10 :61_3 ;Bonita禾口Beaglehole， 1988. “排序量表的改良在中風(fēng)后運(yùn)動功能的恢復(fù)”(Modification of Ranking Scale Recovery of motor function after stroke), Stroke 19:1497-1500)。評估了未來居住地(即非獨(dú)立或獨(dú)立生活)。步驟6.在患有缺血性中風(fēng)的患者中，在3個月后獲得了關(guān)于發(fā)病和死亡(通過巴氏指數(shù)和評分量表進(jìn)行評估)的電話隨訪。不利結(jié)果被定義為巴氏指數(shù)<85或改良的評分量表為3到6。標(biāo)志肽濃度的管理MR-proANP水平使用檢測下限為6pmol/L的化學(xué)發(fā)光夾心免疫分析測量。在325 位健康個體中，MR-proANP的濃度范圍是9. 6-313pmol/L,中位數(shù)為45pmol/L。濃度在男性和女性之間差異不顯著，但是與對象的年齡顯著相關(guān)。MR-proADM水平使用檢測下限為0. 08nmol/L的化學(xué)發(fā)光夾心免疫分析測量。在 264位健康個體(117位男性和147位女性)中，MR-proADM值符合高斯分布(Gaussiandistribution)，平均值(SD)為 0. 33(0. 07) nmol/L，范圍為 0. 10-0. 64nmol/L。在性別之間沒有顯著差異，但是MR-proADM濃度與年齡顯著相關(guān)。CT-proET-Ι水平使用檢測下限為0. 4pmol/L的化學(xué)發(fā)光夾心免疫分析測量。在 326位健康個體(150位男性和176位女性)中，CT-proET-Ι值符合高斯分布，平均值(SD) 為44. 3(10. 6)pmol/L，范圍為10. 5-77. 4pmol/L。男性和女性中的CT-proET-Ι平均濃度沒有顯著差異，但是與年齡顯著相關(guān)。CT-proAVP (和肽素)水平使用檢測下限為1. 7pmol/L的化學(xué)發(fā)光夾心免疫分析測量。在359位健康個體(153位男性和206位女性)中，CT-proAVP中位水平為4. 2pmol/L，范圍為1. 0-13. 8pmol/L。在男性和女性之間，CT-proAVP的中位濃度差異顯著。在CT-proAVP 水平與年齡之間沒有相關(guān)性。PCT水平使用檢測下限為7pg/ml的化學(xué)發(fā)光夾心免疫分析“靈敏PCT，，(B. R. Α. H. M. S，Hennigsdorf，德國)測量。在500位健康個體中，中位值為13. 5pg/ml (范圍為 < 7至63pg/ml)。在男性與女性之間或不同年齡組之間PCT值的范圍和中位數(shù)沒有顯著差已升。人生長激素使用新開發(fā)的用于特異性檢測最豐富的22kDa hGH同工型的化學(xué)發(fā)光夾心免疫分析測量。在50位獻(xiàn)血者的組群中22kDahGH同工型的中位濃度為0. 19ng/ml (范圍為 0. 05-8. 82ng/ml)。在352位患有缺血性中風(fēng)的患者、32位患有腦溢血的患者和102位患有TIA的患者中，測定了標(biāo)志肽 MR-proANP、MR-proADM、CT-proET-l、CT-proAVP(和肽素)、PCT 和 hGH 的血漿水平。血樣在入院當(dāng)天(第0日)和入院后第1、3和5日獲取。實(shí)施例2至11實(shí)施例2至11涉及相同的患者組并基于實(shí)施例1的研究。表1和2歸納了研究的患者及其結(jié)果。血樣(EDTA處理的血漿樣品)從501位中風(fēng)或TIA患者組獲取?；颊呓M與實(shí)施例1中的相同，但是數(shù)量可能略有不同，因?yàn)椴皇撬刑熘兴谢颊叨伎色@取，并且不是所有天每個患者都有足夠的樣品體積用于測定所有標(biāo)志物。實(shí)施例2 使用第0日測量的標(biāo)志物對存活的預(yù)后(在3個月內(nèi)死亡) 調(diào)查了中風(fēng)或TIA患者在中風(fēng)或TIA后3 (4)個月內(nèi)的結(jié)果，并將其與所述患者樣品中標(biāo)志物MR-proANP、MR-proADM、CT-proAVP、CT-proETl和PCT的水平相關(guān)聯(lián)。樣品在第0日(入院當(dāng)天)獲取。由該關(guān)聯(lián)性，對給定的截止值(閾值)計(jì)算了風(fēng)險比(HR)。通過將從時間依賴性ROC分析所測定到的靈敏度和特異性的總和最大化，確定截止值。表3a到4歸納了不同標(biāo)志物及其組合的HR值。圖1至27顯示了不同標(biāo)志物/ 標(biāo)志物組合以及與評分/巴氏s指數(shù)/NIHSS組合的Kaplan-Meier圖(在4個月內(nèi)存活的患者的比例)。表1 患者的概況
權(quán)利要求
1.一種對已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估的方法，所述方法包含下列步驟a.提供來自所述患者的樣品，b.測定所述樣品中至少一種心血管肽的水平，所述心血管肽選自ANP、AVP、ADM、ET-1、 降鈣素、肌鈣蛋白、CRP和hGH或其片段或其前體或所述前體的片段，c.將所述至少一種標(biāo)志肽或其片段或其前體或所述前體的片段的水平與所述患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估相關(guān)聯(lián)。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述樣品在干預(yù)前獲取。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述結(jié)果或所述風(fēng)險涉及存活和/或功能結(jié)果和/或再次中風(fēng)或再次短暫性缺血性發(fā)作。
4.一種用于將患者分層到風(fēng)險組中的方法，所述患者已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作，并且所述方法包含權(quán)利要求1或2的步驟。
5.權(quán)利要求4的用于診斷患者的方法，其中將所述至少一種心血管肽的水平歸因于或是缺血性中風(fēng)，或出血性中風(fēng)，或是暫時性缺血性發(fā)作。
6.權(quán)利要求1到5的方法，其中測定至少兩種標(biāo)志肽的水平。
7.權(quán)利要求6的方法，其中測定一組至少兩種標(biāo)志肽的水平，并且所述至少兩種標(biāo)志肽的組選自下列心血管肽的組合ANP與AVP，ANP與ADM，ANP與ET_1，ANP與降鈣素，ANP 與hGH，ADM與ET-I，ADM與降鈣素，ADM與hGH，ET-I與降鈣素，ET-I與hGH，以及降鈣素與 hGH。
8.權(quán)利要求6的方法，其中每種心血管肽選自標(biāo)志肽的不同亞組，所述亞組選自心血管肽、內(nèi)皮肽、垂體肽和炎性肽，其中心臟肽選自ANP、BNP和肌鈣蛋白(cT)，內(nèi)皮肽選自 ET-I和ADM，垂體肽選自AVP和hGH，并且炎性肽選自降鈣素和CRP。
9.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的方法，其中附加地測定BNP或其片段或其前體或所述前體的片段的水平。
10.權(quán)利要求1到9的方法，其中測定使用另外考慮選自O(shè)THSS、巴氏指數(shù)和改良的評分量表的協(xié)變量的多變量分析來進(jìn)行。
11.一種用于已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估的試劑盒，所述試劑盒包含針對選自ANP、AVP、ADM、ET-1、降鈣素、肌鈣蛋白、CRP和hGH的標(biāo)志肽， 或其片段或其前體或所述前體的片段的一種或多種捕獲探針。
12.權(quán)利要求1到10任一項(xiàng)的方法或權(quán)利要求11的試劑盒的應(yīng)用，用于已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估。
13.權(quán)利要求1到10任一項(xiàng)的方法或權(quán)利要求11的試劑盒的應(yīng)用，用于在已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者中監(jiān)測治療。
14.權(quán)利要求1到10任一項(xiàng)的方法或權(quán)利要求11的試劑盒的應(yīng)用，用于將缺血性中風(fēng)與出血性中風(fēng)區(qū)分開，或用于將缺血性和/或出血性中風(fēng)與短暫性缺血性發(fā)作區(qū)分開。
15.權(quán)利要求1到10任一項(xiàng)的方法或權(quán)利要求11的試劑盒的應(yīng)用，用于根據(jù)所述至少一種心血管肽的水平確定所述患者是否正患有中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作。
全文摘要
本發(fā)明涉及對已患過中風(fēng)或短暫性缺血性發(fā)作的患者進(jìn)行結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估的方法，所述方法包含測定所述樣品中至少一種標(biāo)志肽的水平，所述標(biāo)志肽選自ANP、AVP、ADM、ET-1、肌鈣蛋白、CRP、降鈣素和hGH或其片段、或其前體或所述前體的片段，以及將所述至少一種標(biāo)志肽、它的前體或所述前體的片段的水平與所述患者的結(jié)果預(yù)后或風(fēng)險評估相關(guān)聯(lián)。
文檔編號G01N33/50GK102257386SQ200980151226
公開日2011年11月23日 申請日期2009年10月22日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月24日
發(fā)明者安德烈亞斯·貝格曼, 尼爾斯·莫根塔勒, 比特·穆勒 申請人:B.R.A.H.M.S有限公司