專利名稱：一種美洲大蠊提取物中活性成份的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物檢測(cè)方法，具體涉及中藥康復(fù)新液主要活性成分美洲大蠊提取物 的檢測(cè)方法，尤其涉及一種美洲大蠊提取物中活性成份的檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
中藥康復(fù)新液是本申請(qǐng)人已上市多年的產(chǎn)品，主要成分為美洲大蠊提取物。功能 主治為通利血脈，養(yǎng)陰生肌。內(nèi)服用于瘀血陰滯，胃痛出血，胃、十二指腸潰瘍；以及陰虛 肺癆，肺結(jié)核的輔助治療。外用于金瘡、外傷、潰瘍燒傷、褥瘡之創(chuàng)面。有關(guān)美洲大蠊中的藥效活性成分報(bào)道較少，其主要的化學(xué)成分為信息素類及氨基 酸和各種昆蟲神經(jīng)肽類，此外還有蜚蠊酸、蜚蠊酮、蟑螂油、過(guò)敏原成分、各種酶、細(xì)胞色素 A、B、C、甲殼素、煙酸及微量元素等，有明確藥效活性化學(xué)成分的報(bào)道也比較少?？祻?fù)新液的臨床療效明確，但因所含成分復(fù)雜，真正的活性物質(zhì)基礎(chǔ)不夠明確，現(xiàn) 行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中僅收錄性狀、鑒別(氨基酸和嘧啶堿的鑒別)、PH值及總氨基酸含量等，并以 此作為主要質(zhì)控指標(biāo)。由于含量測(cè)定項(xiàng)僅有總氨基酸，不能真正控制康復(fù)新液的質(zhì)量。隨 著對(duì)藥品質(zhì)量的要求不斷提高，對(duì)康復(fù)新液進(jìn)一步深入研究，找到能真正體現(xiàn)其活性的物 質(zhì)基礎(chǔ)，提高其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有重要的意義。為此，本發(fā)明人從分子水平基礎(chǔ)上闡明康復(fù)新液的藥效活性成分，經(jīng)過(guò)艱苦努力， 從康復(fù)新液中成功地分離到了一種具有顯著的抗炎、促進(jìn)肉芽組織增生、創(chuàng)傷愈合等活性 作用的化合物單體成分(化學(xué)名(3R)-3-甲基-7-羥甲基-8-羥基-3，4-二氫異香豆 素-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷，簡(jiǎn)稱KFX-4)，專利申請(qǐng)?zhí)?200910200557. 9。目前，對(duì)于美洲大蠊提取物及康復(fù)新液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有總氨基酸的質(zhì)量控制， 與其藥效沒(méi)有直接的關(guān)系，而本發(fā)明人對(duì)KFX-4的藥效試驗(yàn)表明具有顯著的抗炎、促進(jìn)肉 芽組織增生、創(chuàng)傷愈合等活性作用，與其適應(yīng)癥一致。康復(fù)新液中KFX-4的質(zhì)控檢測(cè)方法未 見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，且因其含量較低，雜質(zhì)干擾非常嚴(yán)重，常規(guī)檢測(cè)方法難以實(shí)施，存在困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于研究康復(fù)新液的藥效活性成分(3R)-3-甲 基-7-羥甲基-8-羥基-3，4- 二氫異香豆素-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷，簡(jiǎn)稱KFX-4的含 量，設(shè)計(jì)更好控制該產(chǎn)品質(zhì)量的方法。本發(fā)明提供了一種美洲大蠊提取物中活性成份的檢測(cè)方法。具體提供了美洲大蠊 提取物中的活性成份(3R) -3-甲基-7-羥甲基-8-羥基-3，4- 二氫異香豆素-6-0- β -D-吡 喃葡萄糖苷，KFX-4的檢測(cè)方法。有關(guān)康復(fù)新液及美洲大蠊提取物中活性成份KFX-4的檢測(cè)方法未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道，且 因其含量較低，雜質(zhì)干擾非常嚴(yán)重，常規(guī)檢測(cè)方法難以實(shí)施。本發(fā)明人經(jīng)多次研究，試用了 多種分離富集KFX-4的方法，選用多種樹脂和固相萃取柱，并試用了多種洗脫液和色譜分 離條件，最終建立了康復(fù)新液中KFX-4的檢測(cè)方法。
本發(fā)明采用HPLC色譜法，包括下列步驟(1)色譜條件與系統(tǒng)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈_水 (0-50 100-50V/V)為流動(dòng)相，流速 0. 2-2. Oml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)為 210nm_400nm 中的一個(gè) 或幾個(gè)波長(zhǎng)或二極管陣列檢測(cè)器，進(jìn)樣量5-50 μ 1，理論板數(shù)按(3R)-3-甲基-7-羥甲 基-8-羥基-3，4- 二氫異香豆素-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，且與相鄰 雜質(zhì)峰的分離度均大于1. 5 ；(2)對(duì)照品溶液的制備取KFX-4對(duì)照品(京新藥業(yè)提取精制，制備方法見(jiàn)專利， 申請(qǐng)?zhí)?200910200557. 9)適量，精密稱定，加甲醇或乙腈的5_50%水溶液，制成每ml含 2-100 μ g (3R) -3-甲基-7-羥甲基-8-羥基-3，4- 二氫異香豆素-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷 的溶液，即得；(3)美洲大蠊提取物供試品溶液的制備取美洲大蠊提取物lg，精密稱定，置IOml 量瓶?jī)?nèi)，加水約5-7ml，加熱或超聲使溶解，定容，離心，取離心清液l_5ml，過(guò)固相萃取小柱 或聚苯乙烯型吸附樹脂，用水l_5ml洗滌兩次，棄去，用甲醇或乙腈或其中任一的5-50%水 溶液2ml洗脫或梯度洗脫，合并洗脫液，置水浴蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞译娴?-50%水溶液溶 解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心，上清液作為供試品溶液；(4)分別取上述溶液進(jìn)行色譜分析，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算(3R)-3-甲基-7-羥甲 基-8-羥基-3，4- 二氫異香豆素-6-0-β -D-吡喃葡萄糖苷含量(參照中華人民共和國(guó)藥 典2005年版二部附錄V D)。本發(fā)明方法可用于中藥康復(fù)新液的質(zhì)量控制，檢測(cè)其中的KFX-4含量，有效控制 藥品質(zhì)量。具體方法為康復(fù)新液供試品溶液的制備精密量取康復(fù)新液10ml，經(jīng)lOOOOrpm， 離心lOmin，取上清液過(guò)固相萃取小柱或聚苯乙烯型吸附樹脂，用l-5ml水洗滌，棄去洗滌 液，再用0. 01-0. 5mol/L氫氧化鈉溶液l_5ml洗滌，棄去洗滌液；最后用甲醇或乙腈或其中 任一的5-50%水溶液l-5ml洗脫或梯度洗脫，收集洗脫液，作為供試品溶液，分別取上述溶 液按上述方法進(jìn)行色譜分析，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算KFX-4含量。本發(fā)明方法所述固相萃取柱為反相聚合物固相萃取柱，包括ODS或HLB或Strata X固相萃取柱的任一種；所述聚苯乙烯型吸附樹脂，包括D101、麗200、HPD100, HPD400、 HPD450、AB-8、D4020、S_8，HZ806 或 HP-20 的任一種。本發(fā)明提供了美洲大蠊提取物中活性成份(3R)-3_甲基-7-羥甲基-8-羥基_3， 4- 二氫異香豆素-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷，KFX-4的檢測(cè)方法，為中藥康復(fù)新液提供有效 的質(zhì)量控制方法，對(duì)于提高產(chǎn)品質(zhì)量和藥物的安全性有較大的實(shí)用價(jià)值。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。美洲大蠊提取物批號(hào)Τ09070101、Τ09070102、Τ09070103、Τ09070104、Τ09070201、 Τ09070202、Τ09060103、Τ09060104、Τ09060201、Τ090104?？祻?fù)新液批號(hào):090602、090608、090609、090709、090805、090807、091101、091103、 091201,081003,071004,071003ο以上美洲大蠊提取物和康復(fù)新液樣品均由內(nèi)蒙古京新藥業(yè)有限公司提供，供下列實(shí)施例使用。實(shí)施例1美洲大蠊提取物制備(以下檢測(cè)用的各批號(hào)美洲大蠊提取物均按此法制備)取干燥美洲大蠊1kg，置提取罐罐內(nèi)，加入90%的乙醇溶液，于60°C溫浸三次，每 次12小時(shí)，第一次用乙醇為美洲大蠊的八倍量；第二次為六倍量；第三次四倍量。合并溫浸 液，過(guò)濾濃縮，回收乙醇至無(wú)醇味。所得濃縮液加純化水為美洲大蠊的1-2倍量。靜置24 小時(shí)以上，分離并棄去沉淀、油層，水溶液過(guò)濾，減壓濃縮至相對(duì)密度1. 15-1.20(70°C )，即 得。實(shí)施例2取T09070101批號(hào)美洲大蠊提取物lg，精密稱定，置IOml量瓶?jī)?nèi)，加水約5_7ml， 超聲溶解，定容至10ml。離心，取離心清液lml，過(guò)Strata X固相萃取小柱，用水洗滌兩次， 每次2ml，棄去，用20%甲醇，30%甲醇，50%甲醇各2ml依次洗脫，合并洗脫液，置水浴蒸 干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心，取上清液進(jìn)行色譜分析[色 譜分析條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(20 80)V/V為流動(dòng)相，流 速0. 8ml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm，進(jìn)樣量5 μ 1，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算KFX-4的含量]。結(jié) 果測(cè)得KFX-4含量為0. 485mg/g。實(shí)施例3取T09070101批號(hào)美洲大蠊提取物約lg，精密稱定，置IOml量瓶?jī)?nèi)，加水約 5-7ml，加熱或超聲使溶解，定容。離心，取離心清液Iml，過(guò)ODS (十八烷基硅烷健合硅膠) 固相萃取小柱，用水洗滌兩次，每次2ml，棄去，用20%甲醇，30%甲醇，50%甲醇各2ml依次 洗脫，合并洗脫液，置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心， 取上清液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為0. 483mg/g。實(shí)施例4取T09070101批號(hào)美洲大蠊提取物約lg，精密稱定，置IOml量瓶?jī)?nèi)，加水約 5_7ml，加熱或超聲使溶解，定容。離心，取離心清液1ml，過(guò)HLB固相萃取小柱，用水洗滌兩 次，每次2ml，棄去，用20%甲醇，30%甲醇，50%甲醇各2ml依次洗脫，合并洗脫液，置水浴 蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心，取上清液進(jìn)行色譜分析 (方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為0. 478mg/g。實(shí)施例5精密移取090807批康復(fù)新液10ml，lOOOOrpm，離心lOmin，取離心清夜過(guò)DlOl大 孔樹脂柱(lg，內(nèi)徑15mm)，用水，5%乙醇各IOml洗滌，洗滌液棄去，繼續(xù)用50%乙醇50ml 洗脫，洗脫液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心。取上 清液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為2. 09 μ g/ml。實(shí)施例6精密移取090807批康復(fù)新液IOml，lOOOOrpm,離心lOmin，取離心清夜過(guò)MN200大 孔樹脂柱(lg，內(nèi)徑15mm)，用水，5%乙醇各IOml洗滌，洗滌液棄去，繼續(xù)用50%乙醇50ml 洗脫，洗脫液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心。取上 清液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為2. 16 μ g/ml。實(shí)施例7
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精密移取090807批康復(fù)新液10ml，IOOOOrpm,離心lOmin，取離心清夜過(guò)HPDlOO 大孔樹脂柱(lg，內(nèi)徑15mm)，用水，5%乙醇各IOml洗滌，洗滌液棄去，繼續(xù)用50%乙醇 50ml洗脫，洗脫液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心。 取上清液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為2. 14yg/ml。實(shí)施例8精密移取090807批康復(fù)新液10ml，IOOOOrpm,離心lOmin，取離心清夜過(guò)HPD400 大孔樹脂柱(lg，內(nèi)徑15mm)，用水，5%乙醇各IOml洗滌，洗滌液棄去，繼續(xù)用50%乙醇 50ml洗脫，洗脫液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心。 取上清液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為2. 08g/ml。實(shí)施例9精密移取090807批康復(fù)新液10ml，IOOOOrpm,離心lOmin，取離心清夜過(guò)HPD450 大孔樹脂柱(lg，內(nèi)徑15mm)，用水，5%乙醇各IOml洗滌，洗滌液棄去，繼續(xù)用50%乙醇 50ml洗脫，洗脫液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心。 取上清液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為2. 12 μ g/ml。實(shí)施例10精密移取090807批康復(fù)新液10ml，lOOOOrpm，離心lOmin，取離心清夜過(guò)AB-8大 孔樹脂柱(lg，內(nèi)徑15mm)，用水，5%乙醇各IOml洗滌，洗滌液棄去，繼續(xù)用50%乙醇50ml 洗脫，洗脫液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心。取上 清液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為2. 10 μ g/ml。實(shí)施例11精密移取090807批康復(fù)新液IOml，lOOOOrpm,離心lOmin，取離心清夜過(guò)D4020大 孔樹脂柱(lg，內(nèi)徑15mm)，用水，5%乙醇各IOml洗滌，洗滌液棄去，繼續(xù)用50%乙醇50ml 洗脫，洗脫液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心。取上 清液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例2)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為2. 13 μ g/ml。實(shí)施例12精密移取090807批康復(fù)新液IOml，lOOOOrpm,離心lOmin，取離心清夜過(guò)S-8大孔 樹脂柱(lg，內(nèi)徑15mm)，用水，5%乙醇各IOml洗滌，洗滌液棄去，繼續(xù)用50%乙醇50ml洗 脫，洗脫液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心。取上清 液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為2. 08 μ g/ml。實(shí)施例13精密移取090807批康復(fù)新液IOml，lOOOOrpm,離心lOmin，取離心清夜過(guò)HZ806大 孔樹脂柱(lg，內(nèi)徑15mm)，用水，5%乙醇各IOml洗滌，洗滌液棄去，繼續(xù)用50%乙醇50ml 洗脫，洗脫液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心。取上 清液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為2. 12 μ g/ml。實(shí)施例14 精密移取090807批康復(fù)新液IOml，lOOOOrpm,離心lOmin，取離心清夜過(guò)HP-20大 孔樹脂柱(lg，內(nèi)徑15mm)，用水，5%乙醇各IOml洗滌，洗滌液棄去，繼續(xù)用50%乙醇50ml 洗脫，洗脫液置水浴蒸干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并定量轉(zhuǎn)移到Iml或2ml量瓶，離心。取上 清液進(jìn)行色譜分析(方法同實(shí)施例1)。結(jié)果測(cè)得KFX-4含量為2. 10 μ g/ml。
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實(shí)施例15本發(fā)明檢測(cè)方法的條件選擇試驗(yàn)1.檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇二極管陣列檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描，顯示最大吸收波長(zhǎng)兩個(gè)為220nm和265nm，由于 220nm接近紫外末端吸收，故選擇265nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。2.流動(dòng)相的選擇洗脫方式一梯度洗脫。流動(dòng)相A 0. 2%冰乙酸的水溶液流動(dòng)相B 0. 2%冰乙酸的的乙腈溶液
時(shí)間(分鐘)流動(dòng)相)流動(dòng)相B(%)010005100020802035595洗脫方式二 等度洗脫。流動(dòng)相為甲醇-水(20 80)V/V，流速為0.8ml/min兩種洗脫方法，KFX-4與前后峰均完全分離且峰純度大于990，分離度均符合要 求。表明流動(dòng)相適應(yīng)良好。質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)中選用洗脫方式二作為色譜條件。3.專屬性試驗(yàn)取美洲大蠊提取物按測(cè)定法檢測(cè)，顯示KFX-4的吸收峰在DAD峰純度檢測(cè)中，峰純 度大于990。表明此法有較強(qiáng)的專屬性。4.定量限稀釋KFX-4對(duì)照品溶液，使液相色譜圖中顯示的KFX-4峰的信噪比約等于10 1， 結(jié)果此時(shí)KFX-4濃度為0. 618 μ g/ml。5.線形與范圍配制KFX-4對(duì)照品溶液貯備液，稀釋至不同濃度，注入HPLC，記錄色譜圖，以 KFX-4對(duì)照品的峰面積⑴和KFX-4濃度⑴為X軸進(jìn)行線性回歸，得回歸方程y = 11. 498x-0. 883r = 0. 99998。表1 線性與范圍檢測(cè)結(jié)果
KFX-4 的 量(μ g/ml)0. 6181. 8443. 6889. 22018. 4427. 6646. 1092. 2峰面積7. 720. 542. 38106.04211. 66311. 01528. 601060. 15 由上述結(jié)果可知在0.618-9. 28 μ g/ml范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，可采用外標(biāo)一點(diǎn)法
7計(jì)算含量。6.儀器精密度取濃度21. 74 μ g/ml的KFX-4對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量5 μ 1，記錄峰面 積，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD)。結(jié)果表明儀器精密度良好，見(jiàn)表2。表2儀器精密度考察結(jié)果
權(quán)利要求
一種美洲大蠊提取物中活性成份KFX 4的檢測(cè)方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)色譜條件與系統(tǒng)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈 水0 50∶100 50V/V為流動(dòng)相，流速0.2 2.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm 400nm中的一個(gè)或幾個(gè)波長(zhǎng)或二極管陣列檢測(cè)器，進(jìn)樣量5 50μl，理論板數(shù)按KFX 4峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，且與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5；(2)對(duì)照品溶液的制備取KFX 4對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇或乙腈的5 50％水溶液，制成每ml含2 100μg KFX 4的溶液，即得；(3)美洲大蠊提取物供試品溶液的制備取美洲大蠊提取物約1g，精密稱定，置10ml量瓶?jī)?nèi)，加水約5 7ml，加熱或超聲使溶解，加水定容，離心，取離心清液1 5ml，過(guò)固相萃取小柱或聚苯乙烯型吸附樹脂，用水1 5ml洗滌兩次，棄去，用甲醇或乙腈的5 50％水溶液2ml洗脫或梯度洗脫，合并洗脫液，置水浴蒸干，殘?jiān)眉状蓟蛞译娴? 50％水溶液溶解并定量轉(zhuǎn)移到1ml或2ml量瓶，離心，上清液作為供試品溶液；(4)分別取上述溶液進(jìn)行色譜分析，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算KFX 4含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種美洲大蠊提取物中活性成份的檢測(cè)方法，其特征在于所述 活性成份為(3R)-3-甲基-7-羥甲基-8-羥基-3，4-二氫異香豆素-6-0-β-D-吡喃葡萄 糖苷。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種美洲大蠊提取物中活性成份的檢測(cè)方法，其特征在于所 述方法用于檢測(cè)中藥康復(fù)新液中的(3R)-3-甲基-7-羥甲基-8-羥基-3，4- 二氫異香豆 素-6-0-β -D-吡喃葡萄糖苷含量。
4.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述檢測(cè)中藥康復(fù)新液中的(3R)-3-甲 基-7-羥甲基-8-羥基-3，4- 二氫異香豆素-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷含量包括下列步驟(1)色譜條件與系統(tǒng)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈-水0-50 100-50V/V為流動(dòng)相，流速0.2-2. Oml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm_400nm中的一個(gè)或幾 個(gè)波長(zhǎng)或二極管陣列檢測(cè)器，進(jìn)樣量5-50μ 1，理論板數(shù)按KFX-4峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，且 與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1. 5 ；(2)對(duì)照品溶液的制備取KFX-4對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇或乙腈的5-50% 水溶液，制成每ml含2-100μβ(3Κ)-3-甲基_7_羥甲基-8-羥基-3，4-二氫異香豆 素-6-0-β -D-吡喃葡萄糖苷的溶液，即得；(3)康復(fù)新液供試品溶液的制備精密量取康復(fù)新液10ml，經(jīng)IOOOOrpm，離心lOmin， 取上清液過(guò)固相萃取小柱或聚苯乙烯型吸附樹脂，用l_5ml水洗滌，棄去洗滌液，再用 0. 01-0. 5mol/L氫氧化鈉溶液l-5ml洗滌，棄去洗滌液；最后用甲醇或乙腈的5-50%水溶液1-5ml洗脫或梯度洗脫，收集洗脫液，作為供試品溶液；(4)分別取上述溶液進(jìn)行色譜分析，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算(3R)-3-甲基-7-羥甲 基-8-羥基-3，4- 二氫異香豆素-6-0- β -D-吡喃葡萄糖苷含量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述固相萃取柱為反相聚合物固 相萃取柱，包括ODS或HLB或Strata X固相萃取柱的任一種；所述聚苯乙烯型吸附樹脂，包 括 D101、MN200、HPDlOO、HPD400、HPD450、AB-8、D4020、S-8，HZ806 或 HP-20 的任一種。
全文摘要
本發(fā)明提供了美洲大蠊提取物中活性成份(3R)-3-甲基-7-羥甲基-8-羥基-3，4-二氫異香豆素-6-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，KFX-4的檢測(cè)方法。采用HPLC色譜法，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇或乙腈-水(0-50∶100-50V/V)為流動(dòng)相，流速0.2-2.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm-400nm中的一個(gè)或幾個(gè)波長(zhǎng)或二極管陣列檢測(cè)器，進(jìn)樣量5-50μl，理論板數(shù)按KFX-4峰計(jì)算應(yīng)不低于4000，且與相鄰雜質(zhì)峰的分離度均大于1.5進(jìn)行色譜分析，以峰面積外標(biāo)法計(jì)算KFX-4含量。本發(fā)明為中藥康復(fù)新液提供有效的質(zhì)量控制方法，對(duì)于提高產(chǎn)品質(zhì)量和藥物的安全性有較大的實(shí)用價(jià)值。
文檔編號(hào)G01N30/02GK101957345SQ201010118350
公開日2011年1月26日 申請(qǐng)日期2010年3月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月5日
發(fā)明者余國(guó)珍, 陳鑒東 申請(qǐng)人:浙江京新藥業(yè)股份有限公司;內(nèi)蒙古京新藥業(yè)有限公司