專利名稱：黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種果汁質(zhì)量控制方法，尤其涉及黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法
背景技術(shù)：
黑果枸杞果汁是以茄科枸杞屬植物黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murr.)的成熟 果實去除籽皮后得到的果汁，有較強的抗氧化性，呈紫紅色，無毒，應(yīng)用于醫(yī)藥、食品及化妝
P
ΡΠ O黑果枸杞果汁中主要含有花色苷類物質(zhì)、原花青素和總多酚。其中花色苷類物質(zhì) 屬酚類化合物中的類黃酮，具有清除體內(nèi)自由基、抗氧化、降血脂及防治動脈粥樣硬化等作 用；原花青素(Proanthocyanidins或Procyanidins，簡稱PC，又譯原花果汁、前花果汁等) 是植物中廣泛存在的一大類天然多酚化合物的總稱，具有清除人體自由基、抗氧化、抗致突 變、酶抑制等活性；總多酚具有清除自由基、抗氧化的功能。但是，黑果枸杞果汁目前還沒有完整的質(zhì)量控制方法，不利于保證黑果枸杞果汁 的品質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種簡單、快速、準(zhǔn)確的黑果枸杞果汁質(zhì)量控 制方法。為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，其特征在于該 方法以總花色苷含量、原花青素含量和總多酚含量的測定作為質(zhì)量控制指標(biāo)；其中——總花色苷含量的測定方法是(1)制備樣品溶液將0. 1 2ml黑果枸杞果汁 用水稀釋1 1000倍后，取0. 1 IOOmL,加入鹽酸-乙醇溶液中，在15 80°C溫度下保 溫1 36小時后即得；(2)測定樣品溶液吸光度值用紫外_可見光分光光度計在波長為 450 600nm處測定樣品溶液吸光度值；(3)計算樣品溶液中總花色苷含量；——原花青素含量的測定方法是①制備對照品溶液將甲醇加入到兒茶素對照 品中，制成每Iml含兒茶素0. Img的溶液后即得；②制備標(biāo)準(zhǔn)曲線分別將0. 0,0. 5、1、1. 5、 2、2. 5ml的對照品溶液用甲醇定容至25ml，即得濃度為0. 01 lmg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液；③制 備樣品溶液在0. 01 IOml黑果枸杞果汁中加入甲醇，并用甲醇定容至2 500ml，搖勻， 即得；④測定樣品溶液中原花青素含量在0. 1 2mL樣品溶液中，依次加入1 5mL香草 醛甲醇溶液、0. 5 2. 5mL濃鹽酸，混合均勻，室溫下顯色10 20mim后，在波長為400 600nm處比色即得；—總多酚含量的測定方法是(a)制備對照品溶液在1 IOmg沒食子酸對照品中加入水，經(jīng)超聲溶解后定容至2 25ml，即得每Iml含沒食子酸0. 25g的溶液；(b)制 備標(biāo)準(zhǔn)曲線分別將0. 0,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5ml的對照品溶液用水定容至50ml，搖勻，即 得；(c)制備樣品溶液將0. 1 2. Oml黑果枸杞果汁用水溶解，并用水逐級稀釋1 200 倍，即得樣品溶液；⑷測定樣品溶液吸光度值在樣品溶液中加福林_酚顯色劑，搖勻后加入碳酸鈉溶液，定容至IOml ；以加入福林-酚顯色劑和碳酸鈉的溶液為空白，用紫外-可見 光分光光度計在波長為300 SOOnm處測定樣品溶液吸光度值；(e)計算樣品溶液中總多
酚含量。所述總花色苷含量的測定方法中的步驟(1)中鹽酸的質(zhì)量濃度為0. 01 1%，乙 醇的質(zhì)量濃度為50 90%。所述原花青素含量的測定方法中的步驟④中香草醛甲醇溶液的質(zhì)量濃度為4%。所述總多酚含量的測定方法中的步驟(d)中碳酸鈉溶液的質(zhì)量濃度為20%。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點1、由于本發(fā)明采用分光光度法測定黑果枸杞果汁中花色苷、原花青素及總多酚， 而該法具有所用試劑量少、操作簡單方便、靈敏度高、精密度高穩(wěn)定性好等特點，因此，適宜 測定黑果枸杞果汁的花色苷、原花青素及總多酚，從而實現(xiàn)對黑果枸杞果汁進(jìn)行保健功能 的有效性評價。2、經(jīng)對本發(fā)明進(jìn)行精密度實驗、穩(wěn)定性實驗、回收率實驗后，可以看出本發(fā)明具有 較高的精密度、在8小時內(nèi)穩(wěn)定性良好、準(zhǔn)確可靠，可以實現(xiàn)對黑果枸杞果汁有效地質(zhì)量控 制(參見表1、表2、表3)。表1 精密度實驗(次數(shù)η = 5) 表2 穩(wěn)定性實驗(t = 8h) 表3:回收率實驗 3、本發(fā)明簡單、快速，易于推廣。
具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明，下述實施例僅用于說明本發(fā)明，而并非 對本發(fā)明的限制。實施例1 一種黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，該方法以總花色苷含量、原花青素含 量和總多酚含量的測定作為質(zhì)量控制指標(biāo)。其中——總花色苷含量的測定方法是(1)制備樣品溶液取Iml黑果枸杞果汁用水稀釋100倍后，取ImL至試管中，力口 入IOmLO. 鹽酸-80%乙醇溶液，在25°C溫度下保溫24小時后即得。(2)測定樣品溶液吸光度值用紫外_可見光分光光度計在波長為540nm處測定 樣品溶液吸光度值為0. 23。(3)計算樣品溶液中總花色苷含量?？偦ㄉ蘸?mg/g) = (AXMWXDF)/b，式中A為吸光度；MW為相對分子量(取 449.2) ；DF為稀釋倍數(shù)；b為摩爾吸光度(取26900)，得到黑果枸杞果汁的總花色苷的含量 為 0. 43mg/ml 0——原花青素含量的測定原理原花青素是含有兒茶素和表兒茶素單元的聚合 物。原花青素本身無色，在酸性介質(zhì)中與香草醛反應(yīng)，可以生產(chǎn)深紅色的花青素離子。測定方法是①制備對照品溶液將甲醇加入到兒茶素對照品中，制成每Iml含兒茶素0. Img的 溶液后即得。②制備標(biāo)準(zhǔn)曲線分別將0. 0,0. 5、1、1. 5、2、2. 5ml的對照品溶液置25ml量瓶中， 甲醇定容至25ml，搖勻，即得濃度為0. 01 lmg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液。以甲醇為空白，在500nm 波長測定吸光度A，以濃度C對吸光度A進(jìn)行回歸，得回歸方程為A = 5. 4012C+0. 0014，Γ =0.9997。③制備樣品溶液取黑果枸杞果汁1ml，置IOOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，靜 止30分鐘，用時稀釋10倍，即得。④測定樣品溶液中原花青素含量用錫箔紙將試管包裹嚴(yán)，僅留管口用于加樣。取 樣品Iml加入試管中，再加3ml的4%香草甲醛溶液混合，然后加入1. 5ml的濃鹽酸，徹底混 勻，室溫顯色15分鐘，最后在500nm比色。含量測定結(jié)果經(jīng)計算，黑果枸杞果汁原花青素含量為3mg/ml?！偠喾雍康臏y定方法是(a)制備對照品溶液在1 IOmg沒食子酸對照品中加入水，經(jīng)超聲(功率150W， 頻率53KHz)溶解后定容至2 25ml，即得每Iml含沒食子酸0. 25g的溶液。(b)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線分別將0. 0,0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5ml的對照品溶液置于50ml 量瓶中，用水定容至50ml，搖勻，即得。在760nm波長測定吸光度A，以濃度C對吸光度A進(jìn)行回歸，得回歸方程為A = 3. 0940C+0. 0178，Γ = 0.9994。(c)制備樣品溶液將0. 5ml黑果枸杞果汁用水溶解，并用水逐級稀釋100倍，即得樣品溶液；(d)測定樣品溶液吸光度值取樣品溶液lml，置IOml量瓶中，加水6ml，加福 林_酚顯色劑0. 5ml，搖勻，10分鐘內(nèi)加入20%碳酸鈉溶液1. 5ml，定容至刻度10ml，搖勻。 以加入福林_酚顯色劑和碳酸鈉的溶液為空白，用紫外_可見光分光光度計在波長為760nm 處測定樣品溶液吸光度值。福林-酚顯色劑稱取IOg鎢酸鈉和2. 5g鉬酸鈉，用70ml蒸餾水溶于250ml回流 瓶中，加入5ml磷酸和IOml濃鹽酸，混勻，微沸回流2小時，加入15g硫酸鋰、5ml蒸餾水和 3滴溴水，開口沸騰15分鐘(至溴水揮盡為止)，冷卻至室溫，定容至IOOml，濾過，置棕色瓶 中保存?zhèn)溆?。使用時加入1倍蒸餾水稀釋即可。20%碳酸鈉溶液的配制稱取20g無水碳酸鈉，置IOOml容量瓶中，加80ml水超聲 (功率150W，頻率53KHz)溶解，冷卻至室溫后定容至100ml，搖勻、濾過，即得。(e)計算樣品溶液中總多酚含量。總多酚含量(g/ml)=稀釋后的含量X稀釋倍數(shù)X樣品溶液體積―1，得到黑果枸 杞果汁總多酚含量為3. 186mg/ml。實施例2 —種黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，該方法以總花色苷含量、原花青素含 量和總多酚含量的測定作為質(zhì)量控制指標(biāo)。其中——總花色苷含量的測定方法是(1)制備樣品溶液取0. Iml黑果枸杞果汁用水稀釋1倍后，取0. Iml至試管中， 加入ImLO. 01%鹽酸-70%乙醇溶液，在15°C溫度下保溫36小時后即得。(2)測定樣品溶液吸光度值用紫外_可見光分光光度計在波長為480nm處測定 樣品溶液吸光度值為0.21。(3)計算樣品溶液中總花色苷含量?？偦ㄉ蘸?mg/g) = (ΑΧ麗XDF)/b，式 中A為吸光度；MW為相對分子量(取449. 2) ；DF為稀釋倍數(shù)；b為摩爾吸光度(取26900)， 得到黑果枸杞色素的總花色苷的含量為0. 35mg/ml?！ㄇ嗨睾康臏y定方法是①制備對照品溶液、②制備標(biāo)準(zhǔn)曲線同實施例1。③制備樣品溶液取黑果枸杞果汁0. 01ml，置2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，靜 止30分鐘，用時稀釋10倍，即得。④測定樣品溶液中原花青素含量用錫箔紙將試管包裹嚴(yán)，僅留管口用于加樣。取 樣品0. Iml加入試管中，再加Iml的4%香草甲醛溶液混合，然后加入0. 5ml的濃鹽酸，徹底 混勻，室溫顯色15分鐘，最后在450nm比色。含量測定結(jié)果經(jīng)計算，黑果枸杞果汁原花青素含量為2. 88mg/ml?！偠喾雍康臏y定方法是(a)制備對照品溶液、(b)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線同實施例1。(c)制備樣品溶液將0. Iml黑果枸杞果汁用水溶解，并用水逐級稀釋20倍，即得 樣品溶液；d)測定樣品溶液吸光度值取樣品溶液lml，置IOml量瓶中，加水6ml，加福林-酚顯色劑0. 5ml，搖勻，10分鐘內(nèi)加入20%碳酸鈉溶液1. 5ml，定容至刻度10ml，搖勻。以加入 福林_酚顯色劑和碳酸鈉的溶液為空白，用紫外-可見光分光光度計在波長為400nm處測 定樣品溶液吸光度值。福林-酚顯色劑和20%碳酸鈉溶液的制備同實施例1。(e)計算樣品溶液中總多酚含量。總多酚含量(g/ml)=稀釋后的含量X稀釋倍數(shù)X樣品溶液體積―1，得到黑果枸 杞色素總多酚含量為3. 096mg/ml。實施例3 —種黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，該方法以總花色苷含量、原花青素含 量和總多酚含量的測定作為質(zhì)量控制指標(biāo)。其中——總花色苷含量的測定方法是(1)制備樣品溶液取Iml黑果枸杞果汁用水稀釋1000倍后，取Iml至試管中，力口 入IOmLl %鹽酸-90%乙醇溶液，在80°C溫度下保溫1小時后即得。(2)測定樣品溶液吸光度值用紫外_可見光分光光度計在波長為600nm處測定 樣品溶液吸光度值為0.021。(3)計算樣品溶液中總花色苷含量?？偦ㄉ蘸?mg/g) = (AX麗XDF)/b，式中A為吸光度；麗為相對分子量(取 449. 2) ；DF為稀釋倍數(shù)；b為摩爾吸光度(取26900)，得到黑果枸杞色素的總花色苷的含量 為 0. 36mg/ml0——原花青素含量的測定方法是①制備對照品溶液、②制備標(biāo)準(zhǔn)曲線同實施例1。③制備樣品溶液取黑果枸杞果汁10ml，置500ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，靜 止30分鐘，用時稀釋20倍，即得。④測定樣品溶液中原花青素含量用錫箔紙將試管包裹嚴(yán)，僅留管口用于加樣。取 樣品2ml加入試管中，再加5ml的4%香草甲醛溶液混合，然后加入2. 5ml的濃鹽酸，徹底混 勻，室溫顯色20分鐘，最后在600nm比色。含量測定結(jié)果經(jīng)計算，黑果枸杞果汁原花青素含量為2. 94mg/ml?！偠喾雍康臏y定方法是(a)制備對照品溶液、(b)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線同實施例1。(c)制備樣品溶液將2ml黑果枸杞果汁用水溶解，并用水逐級稀釋200倍，即得 樣品溶液；d)測定樣品溶液吸光度值取樣品溶液lml，置IOml量瓶中，加水6ml，加福林-酚 顯色劑0. 5ml，搖勻，10分鐘內(nèi)加入20%碳酸鈉溶液1. 5ml，定容至刻度10ml，搖勻。以加入 福林_酚顯色劑和碳酸鈉的溶液為空白，用紫外_可見光分光光度計在波長為SOOnm處測 定樣品溶液吸光度值。福林-酚顯色劑和20%碳酸鈉溶液的制備同實施例1。(e)計算樣品溶液中總多酚含量?？偠喾雍?g/ml)=稀釋后的含量X稀釋倍數(shù)X樣品溶液體積―1，得到黑果枸杞色素總多酚含量為3. 008mg/ml。實施例4 一種黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，該方法以總花色苷含量、原花青素含量和總多酚含量的測定作為質(zhì)量控制指標(biāo)。其中——總花色苷含量的測定方法是(1)制備樣品溶液取2ml黑果枸杞果汁用水稀釋500倍后，取IOOml至試管中，加入IOOmLO. 05%鹽酸-50%乙醇溶液，在50°C溫度下保溫12小時后即得。(2)測定樣品溶液吸光度值用紫外_可見光分光光度計在波長為450nm處測定 樣品溶液吸光度值為0. 115。(3)計算樣品溶液中總花色苷含量?？偦ㄉ蘸?mg/g) = (AX麗XDF)/b，式中A為吸光度；麗為相對分子量(取 449. 2) ；DF為稀釋倍數(shù)；b為摩爾吸光度(取26900)，得到黑果枸杞色素的總花色苷的含量 為 0. 43mg/ml0——原花青素含量的測定方法是①制備對照品溶液、②制備標(biāo)準(zhǔn)曲線同實施例1。③制備樣品溶液取黑果枸杞果汁0. 1ml，置IOml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，靜 止30分鐘，用時稀釋10倍，即得。④測定樣品溶液中原花青素含量用錫箔紙將試管包裹嚴(yán)，僅留管口用于加樣。取 樣品1. 5ml加入試管中，再加4. 5ml的4%香草甲醛溶液混合，然后加入2ml的濃鹽酸，徹底 混勻，室溫顯色10分鐘，最后在400nm比色。含量測定結(jié)果經(jīng)計算，黑果枸杞果汁原花青素含量為2. 96mg/ml?！偠喾雍康臏y定方法是(a)制備對照品溶液、(b)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線同實施例1。(c)制備樣品溶液將0. Iml黑果枸杞果汁用水溶解，并用水逐級稀釋1倍，即得 樣品溶液；d)測定樣品溶液吸光度值取樣品溶液lml，置IOml量瓶中，加水6ml，加福林-酚 顯色劑0. 5ml，搖勻，10分鐘內(nèi)加入20%碳酸鈉溶液1. 5ml，定容至刻度10ml，搖勻。以加入 福林_酚顯色劑和碳酸鈉的溶液為空白，用紫外-可見光分光光度計在波長為300nm處測 定樣品溶液吸光度值。福林-酚顯色劑和20%碳酸鈉溶液的制備同實施例1。(e)計算樣品溶液中總多酚含量?？偠喾雍?g/ml)=稀釋后的含量X稀釋倍數(shù)X樣品溶液體積―1，得到黑果枸 杞色素總多酚含量為3. 01mg/ml。實施例5 —種黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，該方法以總花色苷含量、原花青素含 量和總多酚含量的測定作為質(zhì)量控制指標(biāo)。其中—總花色苷含量的測定方法是(1)制備樣品溶液取1. 5ml黑果枸杞果汁用水稀釋100倍后，取50ml至試管中， 加入50mL0. 5%鹽酸-60%乙醇溶液，在70°C溫度下保溫30小時后即得。(2)測定樣品溶液吸光度值用紫外_可見光分光光度計在波長為500nm處測定 樣品溶液吸光度值為0. 24。(3)計算樣品溶液中總花色苷含量。總花色苷含量(mg/g) = (AX麗XDF)/b，式中A為吸光度；麗為相對分子量(取449.2) ；DF為稀釋倍數(shù)；b為摩爾吸光度(取26900)，得到黑果枸杞色素的總花色苷的含量 為 0. 41mg/ml?！ㄇ嗨睾康臏y定方法是①制備對照品溶液、②制備標(biāo)準(zhǔn)曲線同實施例1。③制備樣品溶液取黑果枸杞果汁5ml，置250ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，靜 止30分鐘，用時稀釋10倍，即得。④測定樣品溶液中原花青素含量用錫箔紙將試管包裹嚴(yán)，僅留管口用于加樣。取 樣品2ml加入試管中，再加5ml的4%香草甲醛溶液混合，然后加入2. 5ml的濃鹽酸，徹底混 勻，室溫顯色10分鐘，最后在550nm比色。含量測定結(jié)果經(jīng)計算，黑果枸杞果汁原花青素含量為3. lmg/ml?！偠喾雍康臏y定方法是(a)制備對照品溶液、(b)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線同實施例1。(c)制備樣品溶液將1. 5ml黑果枸杞果汁用水溶解，并用水逐級稀釋150倍，即 得樣品溶液；d)測定樣品溶液吸光度值取樣品溶液lml，置IOml量瓶中，加水6ml，加福林-酚 顯色劑0. 5ml，搖勻，10分鐘內(nèi)加入20%碳酸鈉溶液1. 5ml，定容至刻度10ml，搖勻。以加入 福林_酚顯色劑和碳酸鈉的溶液為空白，用紫外_可見光分光光度計在波長為550nm處測 定樣品溶液吸光度值。福林-酚顯色劑和20%碳酸鈉溶液的制備同實施例1。(e)計算樣品溶液中總多酚含量。總多酚含量(g/ml)=稀釋后的含量X稀釋倍數(shù)X樣品溶液體積―1，得到黑果枸杞色素總多酚含量為3. 13mg/ml。
權(quán)利要求
一種黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法以總花色苷含量、原花青素含量和總多酚含量的測定作為質(zhì)量控制指標(biāo)；其中——總花色苷含量的測定方法是(1)制備樣品溶液將0.1～2ml黑果枸杞果汁用水稀釋1～1000倍后，取0.1～100mL，加入鹽酸-乙醇溶液中，在15～80℃溫度下保溫1～36小時后即得；(2)測定樣品溶液吸光度值用紫外-可見光分光光度計在波長為450～600nm處測定樣品溶液吸光度值；(3)計算樣品溶液中總花色苷含量；——原花青素含量的測定方法是①制備對照品溶液將甲醇加入到兒茶素對照品中，制成每1ml含兒茶素0.1mg的溶液后即得；②制備標(biāo)準(zhǔn)曲線分別將0.0、0.5、1、1.5、2、2.5ml的對照品溶液用甲醇定容至25ml，即得濃度為0.01～1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)使用液；③制備樣品溶液在0.01～10ml黑果枸杞果汁中加入甲醇，并用甲醇定容至2～500ml，搖勻，即得；④測定樣品溶液中原花青素含量在0.1～2mL樣品溶液中，依次加入1～5mL香草醛甲醇溶液、0.5～2.5mL濃鹽酸，混合均勻，室溫下顯色10～20mim后，在波長為400～600nm處比色即得；——總多酚含量的測定方法是(a)制備對照品溶液在1～10mg沒食子酸對照品中加入水，經(jīng)超聲溶解后定容至2～25ml，即得每1ml含沒食子酸0.25g的溶液；(b)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線分別將0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml的對照品溶液用水定容至50ml，搖勻，即得；(c)制備樣品溶液將0.1～2.0ml黑果枸杞果汁用水溶解，并用水逐級稀釋1～200倍，即得樣品溶液；(d)測定樣品溶液吸光度值在樣品溶液中加福林-酚顯色劑，搖勻后加入碳酸鈉溶液，定容至10ml；以加入福林-酚顯色劑和碳酸鈉的溶液為空白，用紫外-可見光分光光度計在波長為300～800nm處測定樣品溶液吸光度值；(e)計算樣品溶液中總多酚含量。
2.如權(quán)利要求1所述的黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，其特征在于所述總花色苷含量 的測定方法中的步驟(1)中鹽酸的質(zhì)量濃度為0. 01 1%，乙醇的質(zhì)量濃度為50 90%。
3.如權(quán)利要求1所述的黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，其特征在于所述原花青素含量 的測定方法中的步驟④中香草醛甲醇溶液的質(zhì)量濃度為4%。
4.如權(quán)利要求1所述的黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，其特征在于所述總多酚含量的 測定方法中的步驟(d)中碳酸鈉溶液的質(zhì)量濃度為20%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種黑果枸杞果汁質(zhì)量控制方法，該方法以總花色苷含量、原花青素含量和總多酚含量的測定作為質(zhì)量控制指標(biāo)，采用分光光度法測定黑果枸杞果汁中花色苷、原花青素及總多酚，具有所用試劑量少、操作簡單方便、靈敏度高、精密度高穩(wěn)定性好等特點，可以實現(xiàn)對黑果枸杞果汁進(jìn)行保健功能的有效性評價。
文檔編號G01N21/33GK101852729SQ20101017945
公開日2010年10月6日 申請日期2010年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月20日
發(fā)明者張興旺, 文懷秀, 梅麗娟, 趙曉輝, 邵赟, 陳晨, 陶燕鐸 申請人:中國科學(xué)院西北高原生物研究所