專利名稱：一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)孔雀石綠的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種高靈敏電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)孔雀 石綠(無(wú)色孔雀石綠)的方法。
背景技術(shù)：
孔雀石綠是有毒的三苯甲烷類化學(xué)物，既是染料，也是殺菌劑?？兹甘G可致癌， 很多國(guó)家已經(jīng)禁用?？兹甘G價(jià)格低廉，治療魚(yú)病效果好，尤其是對(duì)治療水霉病和小瓜蟲(chóng)病 有特效，而在其病防領(lǐng)域沒(méi)有合適的替代藥物出現(xiàn)，因此，仍有漁民在防治魚(yú)類感染真菌時(shí) 使用，也有運(yùn)輸商用作消毒，以延長(zhǎng)魚(yú)類在長(zhǎng)途販運(yùn)中的存活時(shí)間等，加上使用者對(duì)孔雀石 綠的危害認(rèn)識(shí)不足，所以導(dǎo)致孔雀石綠禁而不止。研究表明，孔雀石綠的代謝物無(wú)色孔雀石 綠在魚(yú)體內(nèi)存留的時(shí)間更長(zhǎng)。因此，開(kāi)發(fā)一種簡(jiǎn)單、高效的孔雀石綠(無(wú)色孔雀石綠)的檢 測(cè)方法具有十分重要的意義。目前孔雀石綠(無(wú)色孔雀石綠)的檢測(cè)方法主要以理化檢測(cè)法和免疫學(xué)檢測(cè)法 為主(劉海新，張農(nóng)，錢卓真，福建水產(chǎn)，2007(1)，42 45)。理化檢測(cè)法包括以下幾種 高效液相色譜法(HPLC)可以檢測(cè)生物體內(nèi)及其他復(fù)雜基質(zhì)中的孔雀石綠和無(wú)色孔雀石 綠(如飼料原料、化工原料等)，此方法的特點(diǎn)是靈敏度較高。高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法 (HPLC-MS-MS)是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的新的檢測(cè)技術(shù)，該方法兼具定性功能、靈敏度高，但儀器 價(jià)格昂貴。還有薄層色譜法(侯云龍，中國(guó)刑警學(xué)院，1997 (4)，19 20)，普通分光光度法 (Safarik I. ,Kova M. ,Water Research，2000，36，196 200)等。薄層色譜法雖然具有簡(jiǎn) 便快速的特點(diǎn)，但是不能同時(shí)檢測(cè)孔雀石綠的代謝物無(wú)色孔雀石綠。分光光度法普通分光 光度法檢測(cè)限較高，靈敏度較低，準(zhǔn)確性較差，也不能用于代謝物無(wú)色孔雀石綠的檢測(cè)，而 且僅僅局限于水樣的檢測(cè)，尚未見(jiàn)該方法在復(fù)雜樣品基質(zhì)中的應(yīng)用，僅可用于孔雀石綠原 料藥等的測(cè)定。免疫學(xué)檢測(cè)法是指酶聯(lián)免疫法(ELISA)，可分為間接競(jìng)爭(zhēng)抑制法、抗體/抗 原包被直接競(jìng)爭(zhēng)法和夾心法。采用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測(cè)水產(chǎn)品中孔雀石綠的特點(diǎn)是檢測(cè) 速度快，2 3小時(shí)就可檢測(cè)一批樣品；靈敏度高，該方法特別適合大批量樣品的篩選。雖 然ELISA法的抗原和抗體結(jié)合有較強(qiáng)的選擇性，但水產(chǎn)品的種類繁多，基質(zhì)復(fù)雜，檢測(cè)結(jié)果 的假陽(yáng)性幾率高。因此，用該方法檢出的陽(yáng)性樣還需用高壓液相色譜法或液相色譜質(zhì)譜聯(lián) 用法進(jìn)行定量和確證。三聯(lián)吡啶釕Ru(bpy)32+ 電化學(xué)發(fā)光(Electrochemiluminescence，簡(jiǎn)稱 ECL)具有 原位響應(yīng)、檢測(cè)靈敏度高、線性范圍寬和儀器簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)，在藥物分析、氨基酸分析、DNA探 針?lè)治?、酶生物傳感器領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。但目前還沒(méi)有任何將電化學(xué)發(fā)光用于孔雀石 綠(無(wú)色孔雀石綠)檢測(cè)的相關(guān)報(bào)道。我們采用的電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)孔雀石綠(無(wú)色孔雀 石綠)能達(dá)到更低的檢測(cè)限和更寬的檢測(cè)范圍，操作比較簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有的孔雀石綠檢測(cè)方法，提出一種全新的檢測(cè)限更低、檢測(cè)線性范圍更寬、靈敏度更高的電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)孔雀石綠(無(wú)色孔雀石綠)的方法。本發(fā)明的原理是本發(fā)明使用聯(lián)吡啶釕類化合物作為發(fā)光物質(zhì)，孔雀石綠(無(wú)色 孔雀石綠)作為共反應(yīng)物之一，同時(shí)也是被檢測(cè)物。將它們分別溶于磷酸或硼酸緩沖溶液 中，用電化學(xué)方法在0-1. 8V電位范圍內(nèi)對(duì)其進(jìn)行掃描；同時(shí)利用光檢測(cè)器采集產(chǎn)生的光信 號(hào)，經(jīng)數(shù)據(jù)處理得到檢測(cè)結(jié)果。由于聯(lián)吡啶釕類化合物具有很高的發(fā)光效率，即使被測(cè)物孔 雀石綠(無(wú)色孔雀石綠)的濃度很低，該方法仍可檢測(cè)到明顯電化學(xué)發(fā)光響應(yīng)，并且孔雀石 綠(無(wú)色孔雀石綠)加入前后體系電化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的變化與體系中孔雀石綠(無(wú)色孔雀石 綠)濃度的對(duì)數(shù)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，通過(guò)計(jì)算可以確定體系中孔雀石綠(無(wú)色孔雀石 綠)的含量。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)孔雀石綠(無(wú)色孔 雀石綠)的方法，步驟如下(1)根據(jù)孔雀石綠(無(wú)色孔雀石綠)樣品濃度，將10_7 liTmol/L的聯(lián)吡啶釕以 及待測(cè)的孔雀石綠(無(wú)色孔雀石綠)樣品分別加入到PH值為3-11的0. IM的磷酸鹽或硼 酸鹽緩沖溶液中；(2)在任意一款電化學(xué)工作站上，對(duì)步驟(1)配置的溶液進(jìn)行掃描；掃描電位范圍 0-1. 8V ；(3)所述的聯(lián)吡啶釕包括單核三聯(lián)吡啶釕、以及通過(guò)不同長(zhǎng)度碳鏈連接的雙核三
聯(lián)吡啶釕，其代表性結(jié)構(gòu)式如下
權(quán)利要求
1.一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)孔雀石綠的方法，其特征在于，該方法步驟如下(1)根據(jù)孔雀石綠樣品濃度，將10_7 IO-1Hi0VL的聯(lián)吡啶釕和待測(cè)的孔雀石綠樣品分 別加入到PH值為3-11的0. IM磷酸鹽或硼酸鹽緩沖溶液中；(2)在電化學(xué)工作站上，對(duì)步驟(1)配置的溶液進(jìn)行掃描；掃描電位范圍0-1.8V ；(3)用光檢測(cè)器采集電化學(xué)工作站掃描產(chǎn)生的光信號(hào)，經(jīng)數(shù)據(jù)處理后得到樣品中孔雀 石綠的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)孔雀石綠的方法，其特征在于，該方法 適用于檢測(cè)所有含有孔雀石綠的物質(zhì)，以及孔雀石綠的代謝產(chǎn)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)孔雀石綠的方法，其特征在于，所述的 電化學(xué)工作站為任意一款電化學(xué)工作站和/或發(fā)光檢測(cè)器。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)孔雀石綠的方法，其特征在于，所述的 聯(lián)吡啶釕包括單核三聯(lián)吡啶釕、以及通過(guò)不同長(zhǎng)度碳鏈連接的雙核三聯(lián)吡啶釕，其代表性 結(jié)構(gòu)式如下聯(lián)吡啶釕
全文摘要
本發(fā)明屬于一種高靈敏電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)孔雀石綠的方法。將一定量的聯(lián)吡啶釕配合物和孔雀石綠溶于磷酸或硼酸緩沖溶液中，用電化學(xué)方法在0-1.8V電位范圍內(nèi)對(duì)其進(jìn)行掃描；分別用單核三聯(lián)吡啶釕和雙核三聯(lián)吡啶釕檢測(cè)孔雀石綠，單核釕所能達(dá)到的檢測(cè)范圍在1×10-8～1×10-5mol/L，最低檢測(cè)限在1×10-8mol/L，而雙核釕所能達(dá)到的檢測(cè)范圍在1×10-12～1×10-8mol/L，最低檢測(cè)限在1×10-12mol/L。本發(fā)明能夠更加有效的檢測(cè)孔雀石綠，檢測(cè)限更低，檢測(cè)線性范圍更寬，靈敏度高，重現(xiàn)性好，測(cè)試可在瞬間完成。
文檔編號(hào)G01N21/76GK102004099SQ20101028844
公開(kāi)日2011年4月6日 申請(qǐng)日期2010年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月17日
發(fā)明者劉鳳玉, 孫世國(guó), 楊雪 申請(qǐng)人:大連理工大學(xué)