專利名稱：梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)試劑，尤其是涉及一種采用膠體金 免疫層析技術(shù)(immunochromatography)進(jìn)行的梅毒特異性IgG抗體快速檢測(cè)試劑條。
背景技術(shù)：
梅毒(Syphilis)是一種由梅毒螺旋體(Tr印onema pallidum, TP)引起的性傳播 性疾病，其病原體是梅毒螺旋體，屬螺旋體科。梅毒螺旋體主要通過性接觸、輸血、創(chuàng)口或 者胎盤等途徑傳播。梅毒螺旋體從感染區(qū)附近的淋巴結(jié)進(jìn)入血液，播散全身，使機(jī)體幾乎 所有的組織及器官受累，臨床表現(xiàn)為全身性，可分為不同臨床階段，包括一期、二期、三期和 潛伏期。世界衛(wèi)生組織(WHO)曾樂觀地預(yù)言“由于有高敏度檢測(cè)方法和高效的治療方案， 梅毒是一種能夠通過公共衛(wèi)生措施得到成功控制的性傳播性疾病”。遺憾的是，至今梅毒 依然是世界范圍的公共衛(wèi)生問題，缺乏有效的行政控制措施，每年全球大約有1200萬的患 #，胃中 60 力■^女gii#。 ( :He￡ilth Protection Agency Centre for Infections. International Encyclopediaof Public Health-Syphilis[M]. London, UK :Health Protection Agency Centre，2008，289-297.)事實(shí)上，梅毒的感染現(xiàn)狀可能要比想象中的 更讓人悲觀。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，梅毒感染者已經(jīng)較廣泛地存在于普通人群中。梅毒螺旋體尚不能進(jìn)行體外培養(yǎng)，梅毒診斷與流行病學(xué)調(diào)查主要依賴于血清學(xué)試 驗(yàn)，包括特異性抗體和反應(yīng)素檢測(cè)兩大類型。梅毒特異性抗體IgM(TP-IgM)和IgG(TP-IgG) 抗體分別于2周和4周后產(chǎn)生，即使患者經(jīng)過足夠治療，其仍能長(zhǎng)期存在，甚至終身不消失 (參見:Luis J F, Felipe U S, Santa G C, et al. Evaluation of a rapid strip and a particle agglutinationtests for syphilis diagnosis[J]. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease，2007，59 :123-126)；而另一種抗體物質(zhì)反應(yīng)素產(chǎn)生較晚，一般在 受感染后5 7周產(chǎn)生(參見林月圓.TPPA和TRUST在梅毒診斷中的價(jià)值與臨床相關(guān)問題 [J].放射免疫學(xué)雜志，2009，22 (3) :295-297)，而且晚期梅毒、梅毒治療后期以及潛伏梅毒 可能陰性。因此梅毒特異性抗體的陽性率、敏感性顯著高于反應(yīng)素。TP-IgM是梅毒感染后， 機(jī)體最先出現(xiàn)的特異性抗體。只要有活的梅毒螺旋體存在，其TP-IgM將會(huì)維持在一定的水 平。Martina H等(參見Martina H, Daan W N,Mart Μ, et al. Comparison of a Treponema pallidum IgM immunoblot with a 19S fluorescenttreponemal antibody absorption test for the diagnosis of congenital syphilis[J]. DiagnosticMicrobiology and Infectious Disease, 2007, 59 :61_66.)認(rèn)為TP-IgM是梅毒早期感染并活動(dòng)的一項(xiàng)血清 學(xué)標(biāo)志，李步榮等(參見李步榮，賀軍濤，張毅，等.梅毒螺旋體IgM抗體檢測(cè)的臨床意義 [J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007,28(16) 1495-1497)認(rèn)為TP-IgM與TP-DNA —樣，代表著梅 毒傳染性指標(biāo)。在排除近期抗梅毒治療的前提下，TP-IgM若不轉(zhuǎn)陰，提示體內(nèi)可能殘存梅毒 螺旋體或治療不徹底。TP-IgM陰轉(zhuǎn)者隨訪時(shí)再轉(zhuǎn)陽性，表明再次感染梅毒(參見=Rawstron SA, Mehta S, Bromberg K, et al.Evaluation of a Treponema pallidum2specificIgMenzyme immunoassay and Treponema pallidum western blot antibody detection in the diagnosisofmaternal and congenital syphilis[J]. Sex Transm Dis,2004,31 (2) 123-126)。盡管TP-IgM陰性不能完全排除傳染性，但TP-IgM陽性必定提示該患者具有傳 染性。TP-IgG的出現(xiàn)要遲于IgM，能長(zhǎng)期存在，甚至終身不消失，因此，TP-IgG是梅毒診斷 和流行病學(xué)調(diào)查的一項(xiàng)重要指標(biāo)。早期的血清學(xué)方法使用完整梅毒螺旋體作為抗原，研究和診斷用的TP是以TP感 染兔睪丸獲得，這種方法花費(fèi)大、獲得的TP量少、不純(混有宿主蛋白)，與其他病原體存 在交叉反應(yīng)，因此假陽性也時(shí)有發(fā)生。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的普及及梅毒螺旋體抗原的相 繼克隆，將重組抗原應(yīng)用于梅毒實(shí)驗(yàn)已經(jīng)越來越多。目前研究比較多的TP抗原有TPW7、 TPN47、TPNl5, TPN44. 5、TPN36、TP0453、TP0684 及 TPr 家族。采用重組 DNA 技術(shù)制備的重 組抗原可以克服完整TP抗原的缺點(diǎn)，能快速、經(jīng)濟(jì)地制備無限量特異重組TP抗原。梅毒特異性抗體檢測(cè)是梅毒確證試驗(yàn)，包括TPHA，TPPA, ELISA，F(xiàn)TA-ABS及 Western-blot等，其特異性均較高。然而，面對(duì)嚴(yán)峻的防制形式，不但需要特異準(zhǔn)確的檢測(cè) 手段，還需要一種更簡(jiǎn)便快捷的試劑來篩查，以便為臨床和疾病防控提供對(duì)策。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種可用于全血、血清、血漿及腦脊液等標(biāo)本中梅毒特 異性IgG抗體檢測(cè)的梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條。本實(shí)用新型設(shè)有載體板、加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜(NC膜)、梅毒特異性IgG 抗體檢測(cè)線、對(duì)照線和吸收墊。加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜和吸收墊依次粘貼在載體板上表面，加樣墊的一端 設(shè)在膠體金墊的一端上，膠體金墊的另一端設(shè)在硝酸纖維膜的一端上，吸收墊的一端設(shè)在 硝酸纖維膜的另一端上，梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線和對(duì)照線依次設(shè)在硝酸纖維膜上；在 梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線處包被抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，在對(duì)照線處包被 羊抗梅毒抗原TPNl7和TPN47的IgG抗體。所述載體板可采用PVC板。以下給出所述梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條的制備方法，包括 以下步驟1)制備梅毒重組抗原TPN17和TPN47采用基因克隆技術(shù)，PCR擴(kuò)增編碼梅毒螺旋體抗原的DNA，并插入大腸桿菌中使其 表達(dá)，得梅毒重組抗原TPN17和TPN47 ；2)硝酸纖維素膜的點(diǎn)樣在硝酸纖維素膜IgG檢測(cè)線上包被抗人IgG特異性片段Y鏈單克隆抗體，在對(duì)照 線處包被羊抗梅毒抗原TPW7和TPN47IgG抗體，晾干，所述抗人IgG特異性片段γ鏈單克 隆抗體的濃度為1 4mg/mL，羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體由抗TPm7_IgG抗 體與抗TPN47-IgG抗體按體積比1 1混合，其終濃度為1 4mg/mL;三者點(diǎn)樣量為IyL/ cm ；3)制備膠體金采用檸檬酸三鈉還原方法制備25nm膠體金，取氯金酸ImL加入到IOOmL去離子雙蒸水中，得到的氯金酸濃度為0. 01%，置于帶冷凝裝置的燒瓶中加熱至沸騰，磁力加熱 攪拌下加入檸檬酸三鈉水溶液2. OmL，繼續(xù)加熱直至溶液呈葡萄酒色為止，冷卻后置于 棕色瓶中4°C冰箱保存?zhèn)溆?，所述檸檬酸三鈉的濃度可為2% ；4)膠體金與TPm7、TPN47的標(biāo)記膠體金與梅毒特異性抗原TPW7的標(biāo)記取膠體金10ml，用0. lmol/L NaOH調(diào)至 ρΗ5· 4，加 100 μ g TPNl7,混勻，放置 5min,加入 5 % BSA Iml 混勻，4°C、10000r/min 離心 Ih, 棄上清，將沉淀用TBS緩沖液溶解至10ml，4°C、10000r/min離心lh，棄上清，沉淀用TBS稀 釋至1ml，得膠體金標(biāo)記的TPN17抗原；膠體金與梅毒特異性抗原TPN47的標(biāo)記同上操作，得膠體金標(biāo)記的TPN47抗原； 將膠體金標(biāo)記的TPN17抗原和膠體金標(biāo)記的TPN47抗原混合后，均勻地涂于玻璃 纖維膜上，烘干，制備成膠體金墊；所述將膠體金標(biāo)記的TPN17抗原和膠體金標(biāo)記的TPN47抗原混合，最好膠體金標(biāo) 記的TPN17抗原和膠體金標(biāo)記的TPN47抗原以體積比1 (0. 2 5)混合；所述烘干的溫 度可為37°C ；5)制備免疫層析檢測(cè)條將加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜和吸收墊依次粘貼在載體板上表面，加樣墊的一 端設(shè)在膠體金墊的一端上，膠體金墊的另一端設(shè)在硝酸纖維膜的一端上，吸收墊的一端設(shè) 在硝酸纖維膜的另一端上，梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線和對(duì)照線依次設(shè)在硝酸纖維膜上； 在梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線處包被抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，在對(duì)照線處包 被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體，用切條機(jī)切成條狀，得梅毒特異性IgG抗體膠 體金免疫層析檢測(cè)試劑條。本實(shí)用新型提供了一種可用于全血、血清、血漿及腦脊液等標(biāo)本中梅毒特異性I gG 抗體檢測(cè)的梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，檢測(cè)所需標(biāo)本量極小，不需 要特殊儀器，肉眼直接判讀結(jié)果，且檢測(cè)簡(jiǎn)便快速，特異性強(qiáng)，靈敏度較高，準(zhǔn)確可靠，成本 較低，應(yīng)用廣泛。

圖1為本實(shí)用新型實(shí)施例的結(jié)構(gòu)組成示意圖。圖2為實(shí)驗(yàn)結(jié)果模式示意圖。在圖2中，A為使用前的示意圖，B為無效試驗(yàn)(產(chǎn) 品質(zhì)量問題)，C為陰性結(jié)果，D為TP-IgG陽性結(jié)果；5為梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線，7為 對(duì)照線。
具體實(shí)施方式
以下實(shí)施例將結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步的說明。參見圖1，本實(shí)用新型實(shí)施例設(shè)有載體板1、加樣墊2、膠體金墊3、硝酸纖維膜(NC 膜)4、梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線5、對(duì)照線7和吸收墊8。加樣墊2、膠體金墊3、硝酸纖 維膜4和吸收墊8依次粘貼在載體板1上表面，加樣墊2的一端設(shè)在膠體金墊3的一端上， 膠體金墊3的另一端設(shè)在硝酸纖維膜4的一端上，吸收墊8的一端設(shè)在硝酸纖維膜4的另 一端上，梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線5和對(duì)照線7依次設(shè)在硝酸纖維膜4上；在梅毒特異性
5IgG抗體檢測(cè)線處包被抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，在對(duì)照線7處包被羊抗梅毒 抗原TPNl7和TPN47的IgG抗體。所述載體板1采用PVC板。所述梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條的制備方法，包括以下步 驟1)制備梅毒重組抗原TPN17和TPN47采用基因克隆技術(shù)，PCR擴(kuò)增編碼梅毒螺旋體抗原的DNA，并插入大腸桿菌中使其 表達(dá)，得梅毒重組抗原TPN17和TPN47。2)硝酸纖維素膜的點(diǎn)樣在硝酸纖維素膜IgG檢測(cè)線上包被抗人IgG特異性片段Y鏈單克隆抗體，在對(duì)照 線處(C)包被羊抗梅毒抗原TPW7和TPN47IgG抗體，晾干，所述抗人IgG特異性片段、鏈 單克隆抗體的濃度為1 4mg/mL，羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體由抗TPm7_IgG 抗體與抗TPN47-IgG抗體按體積比1 1混合，其終濃度為1 4mg/mL;三者點(diǎn)樣量為 1 μ L/cm。3)制備膠體金采用檸檬酸三鈉還原方法制備25nm膠體金，取1 %氯金酸ImL加入到IOOmL去離 子雙蒸水中，得到的氯金酸濃度為0.01%，置于帶冷凝裝置的燒瓶中加熱至沸騰，磁力加熱 攪拌下加入檸檬酸三鈉水溶液2. OmL，繼續(xù)加熱直至溶液呈葡萄酒色為止，冷卻后置于 棕色瓶中4°C冰箱保存?zhèn)溆?，所述檸檬酸三鈉的濃度可為2%。4)膠體金與TPm7、TPN47的標(biāo)記膠體金與梅毒特異性抗原TPW7的標(biāo)記取膠體金10ml，用0. lmol/L NaOH調(diào)至 ρΗ5· 4，加 100 μ g TPNl7,混勻，放置 5min,加入 5 % BSA Iml 混勻，4°C、10000r/min 離心 Ih, 棄上清，將沉淀用TBS緩沖液溶解至10ml，4°C、10000r/min離心lh，棄上清，沉淀用TBS稀 釋至1ml。膠體金與梅毒特異性抗原TPN47的標(biāo)記同上操作，得膠體金標(biāo)記的TPN47抗原。 將膠體金標(biāo)記的TPN17抗原和膠體金標(biāo)記的TPN47抗原混合后，均勻地涂于玻璃 纖維膜上，烘干，制備成膠體金墊。所述將膠體金標(biāo)記的TPN17抗原和膠體金標(biāo)記的TPN47 抗原混合，是膠體金標(biāo)記的TPN17抗原和膠體金標(biāo)記的TPN47抗原以體積比1 (0. 2 5) 混合；所述烘干的溫度為37°C。5)制備免疫層析檢測(cè)條將加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜和吸收墊依次粘貼在載體板上表面，加樣墊的一 端設(shè)在膠體金墊的一端上，膠體金墊的另一端設(shè)在硝酸纖維膜的一端上，吸收墊的一端設(shè) 在硝酸纖維膜的另一端上，梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線和對(duì)照線依次設(shè)在硝酸纖維膜上； 在梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線處包被抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，在對(duì)照線處包 被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體，用切條機(jī)切成條狀，得梅毒特異性IgG抗體膠 體金免疫層析檢測(cè)試劑條。以下給出免疫層析法檢測(cè)患者的臨床標(biāo)本取待檢標(biāo)本(全血、血清、血漿、腦脊液)5 40 μ L，加樣于梅毒特異性IgG抗體膠 體金免疫層析檢測(cè)試劑條樣品處，滴加100 μ L生理鹽水，靜置20min觀察結(jié)果。只在檢測(cè)條對(duì)照區(qū)有一紫紅色條帶出現(xiàn)，則判為陰性；在檢測(cè)區(qū)及對(duì)照區(qū)均有一紫紅色條帶出現(xiàn)，則 判為陽性；加樣檢測(cè)后，檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)均不出現(xiàn)紫紅色條帶，為無效結(jié)果(參見圖2)。以下給出梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條的性能檢定1)外觀檢查白色包被反應(yīng)膜平整、干凈無污染斑點(diǎn)、無裂縫，膠帶無開膠，無切 斜現(xiàn)象。2)陽性標(biāo)本符合率用TP-IgG陽性的不同滴度的陽性參比血清各50份采用梅毒 特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條檢定，計(jì)算陽性符合率。陽性參比血清的確定 采用FTA-ABS(德國歐蒙公司)法確定的臨床標(biāo)本。3)陰性標(biāo)本符合率用50份陰性參比血清檢定，計(jì)算陽性符合率。陰性參比血清 的確定采用TPPA(日本富士株式會(huì)社)法確定的臨床標(biāo)本。4)靈敏度檢測(cè)用衛(wèi)生部室內(nèi)質(zhì)控血清檢測(cè)，最低檢出限度應(yīng)小于或等于4NCU/ mL，與TPPA(日本富士株式會(huì)社)相當(dāng)。5)批內(nèi)差異同一批次梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，用特征 性血清檢測(cè)，要求陽性血清檢測(cè)結(jié)果顯示色帶的顏色深淺一致，陰性血清檢測(cè)的結(jié)果陰性。6)批間差異不同批次梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，用特征 性血清檢測(cè)，要求陽性血清檢測(cè)結(jié)果顯示色帶的顏色深淺一致，陰性血清檢測(cè)的結(jié)果陰性。7)干擾試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果不受標(biāo)本溶血(η = 50)、脂血(η = 50)和黃疸(η = 50) 的干擾。血清(或血漿)來自本申請(qǐng)人臨床標(biāo)本。8)交叉反應(yīng)采用本梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，進(jìn)行系統(tǒng) 性紅斑狼瘡(η = 30)、類風(fēng)濕病(η = 30)、免疫性肝炎(η = 30)等自身免疫系統(tǒng)疾病的檢 測(cè)，未發(fā)現(xiàn)交叉反應(yīng)。自身免疫系統(tǒng)疾病的血清來自本申請(qǐng)人臨床確診患者。9)穩(wěn)定性檢測(cè)應(yīng)用Arrhenius法則，將梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢 測(cè)試劑條放置37°C 20天后檢測(cè)，以上各項(xiàng)指標(biāo)無顯著變化，確保成品在室溫干燥條件下保 存，有效期為18個(gè)月。本實(shí)用新型的檢測(cè)在一條梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條上進(jìn) 行，通過以下兩種方式實(shí)現(xiàn)梅毒特異性IgG抗體的檢測(cè)方式一利用膠體金免疫層析技術(shù)，在硝酸纖維素膜上IgG檢測(cè)線和對(duì)照線處分 別包被抗人IgG特異性片段Y鏈單克隆抗體和羊抗梅毒抗原TPW7和TPN47 IgG抗體。 將已純化的金標(biāo)記的梅毒重組抗原TPN17和TPN47以一定的比例混合后預(yù)包被在玻璃纖維 紙上，干燥處理，制備成膠體金墊，再輔以恰當(dāng)?shù)募訕訅|，組合成梅毒特異性IgG抗體膠體 金免疫層析檢測(cè)試劑條(組裝方式參見圖1)。檢測(cè)陽性樣本時(shí)，樣本中梅毒特異性IgG抗 體與膠體金標(biāo)記的重組抗原TPN17和/或TPN47結(jié)合形成免疫復(fù)合物。由于層析作用，復(fù) 合物沿吸收墊的吸水紙方向向前移動(dòng)。經(jīng)過檢測(cè)線時(shí)，①TP-IgG類免疫復(fù)合物與預(yù)包被的 抗人IgG單克隆抗體結(jié)合形成“AU-TPN17 (和/或TPN47)-特異性抗梅毒IgG抗體-抗人 IgG單克隆抗體-固相材料”夾心物而凝聚顯色；②游離金標(biāo)抗原則在對(duì)照線處與羊抗梅毒 抗原TPN17和TPN47抗體結(jié)合而富集顯色。陰性標(biāo)本則僅在對(duì)照線處顯色。方式二 將方式一的包被抗原、抗體對(duì)調(diào)在硝酸纖維素膜上IgG檢測(cè)線和對(duì)照線 處分別包被梅毒重組抗原(TPm7/TPN47組合)和羊抗鼠IgG抗體，將金標(biāo)記的抗人IgG特 異性片段Y鏈單克隆抗體預(yù)包被在玻璃纖維紙上。[0059]載體板采用PVC材料，加樣墊采用玻璃纖維材料，吸收墊采用吸液紙。以下給出具體實(shí)施例。實(shí)施例1在梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線上包被抗人IgG特異性片段Y鏈單克隆抗體，在對(duì) 照線處包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47抗體，室溫晾干，密封室溫保存?zhèn)溆?。其中，抗?IgG特異性片段Y鏈單克隆抗體的濃度為lmg/mL，羊抗梅毒抗原(TPN17和TPN47) IgG抗 體由抗TPm7-IgG抗體與抗TPN47-IgG抗體按體積比1 1混合，其終濃度為lmg/mL ’二 者點(diǎn)樣量為1 μ 1/cm。將已純化的金標(biāo)記的梅毒重組抗原TPN17和TPN47以體積比1 1混合后，均勻 地涂于玻璃纖維紙上，在37°C烘干，制備成金結(jié)合物墊，密封備用。將固相化的纖維膜與膠 體金結(jié)合的玻璃纖維、吸水紙等按一定順序，通過PVC不干膠底板組合在一起，用切條機(jī)切 成一定寬度檢測(cè)條。把檢測(cè)條與干燥劑一起裝入鋁箔袋中，機(jī)器封口，密封保存。取待檢標(biāo)本血清10 μ L，加樣于梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條 加樣區(qū)，同時(shí)滴加100 μ L生理鹽水，靜置20min觀察結(jié)果。只在梅毒特異性IgG抗體膠體 金免疫層析檢測(cè)試劑條對(duì)照區(qū)有一紫紅色條帶出現(xiàn)，則判為陰性；在檢測(cè)區(qū)及對(duì)照區(qū)均有 一紫紅色條帶出現(xiàn)，則判為陽性；加樣檢測(cè)后，檢測(cè)區(qū)和對(duì)照區(qū)均不出現(xiàn)紫紅色條帶，為無 效結(jié)果(參見圖2)。實(shí)施例2與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于膠體金墊僅由TPW7組成，不含有TPN47。結(jié)果判斷與 實(shí)施例1相同。實(shí)施例3與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于膠體金墊僅由TPN47組成，不含有TPW7。結(jié)果判斷與 實(shí)施例1相同。實(shí)施例4與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于待檢標(biāo)本為腦脊液標(biāo)本，結(jié)果判斷與實(shí)施例1相同。實(shí)施例4性能驗(yàn)證試驗(yàn)按實(shí)施例1的方案制備梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè) 試劑條，然后進(jìn)行性能驗(yàn)證。1)外觀檢查白色包被反應(yīng)膜平整、干凈無污染斑點(diǎn)、無裂縫，膠帶無開膠，梅毒 特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條寬度在3士0. 1mm，無切斜現(xiàn)象。2)陽性標(biāo)本符合率50份經(jīng)FTA-ABS (德國歐蒙公司)檢測(cè)確定的TP-IgG陽性參 比血清，采用發(fā)明的梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條檢出TP-IgG陽性49 份，陽性標(biāo)本符合率98%。3)陰性標(biāo)本符合率50份梅毒螺旋體特異性抗體明膠凝集試驗(yàn)(TPPA)(日本富士 株式會(huì)社)陰性參比血清，采用發(fā)明的梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條檢 測(cè)未檢出陽性標(biāo)本，陰性標(biāo)本符合率100%。4)靈敏度檢測(cè)用衛(wèi)生部室內(nèi)質(zhì)控血清檢測(cè)，最低檢出限度應(yīng)小于或等于4NCU/ mL，與TPPA(日本富士株式會(huì)社)相當(dāng)。5)批內(nèi)差異同一批次梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，用特征
8性陽性血清(FTA-ABS(德國歐蒙公司)檢測(cè)確定的臨床標(biāo)本陽性TP-IgG參比高、中、低血 清)檢測(cè)，相同滴度檢測(cè)結(jié)果顯示色帶的顏色深淺一致，陰性血清檢測(cè)的結(jié)果陰性。6)批間差異不同批次梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，用特征 性陽性血清(FTA-ABS(德國歐蒙公司)檢測(cè)確定的臨床標(biāo)本陽性TP-IgG參比高、中、低血 清)檢測(cè)，相同滴度檢測(cè)結(jié)果顯示色帶的顏色深淺一致，陰性血清檢測(cè)的結(jié)果陰性。7)干擾試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果不受標(biāo)本溶血(η = 50)、脂血(η = 50)和黃疸(η = 50) 的干擾。8)交叉反應(yīng)采用本梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，進(jìn)行系統(tǒng) 性紅斑狼瘡(η = 30)、類風(fēng)濕病(η = 38)、免疫性肝炎(η = 40)等自身免疫系統(tǒng)疾病的檢 測(cè)，未發(fā)現(xiàn)交叉反應(yīng)。9)穩(wěn)定性檢測(cè)將梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條放置37°C 20 天后檢測(cè)，以上各項(xiàng)指標(biāo)無顯著變化。
權(quán)利要求梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，其特征在于設(shè)有載體板、加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜、梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線、對(duì)照線和吸收墊；加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜和吸收墊依次粘貼在載體板上表面，加樣墊的一端設(shè)在膠體金墊的一端上，膠體金墊的另一端設(shè)在硝酸纖維膜的一端上，吸收墊的一端設(shè)在硝酸纖維膜的另一端上，梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線和對(duì)照線依次設(shè)在硝酸纖維膜上；在梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線處包被抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，在對(duì)照線處包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，其特征在于 所述載體板為PVC板。
專利摘要梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條，提供一種可用于全血、血清、血漿及腦脊液等標(biāo)本中梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)的梅毒特異性IgG抗體膠體金免疫層析檢測(cè)試劑條。設(shè)載體板、加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜、梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線、對(duì)照線和吸收墊；加樣墊、膠體金墊、硝酸纖維膜和吸收墊依次粘貼在載體板上表面，加樣墊一端設(shè)在膠體金墊一端上，膠體金墊另一端設(shè)在硝酸纖維膜一端上，吸收墊一端設(shè)在硝酸纖維膜另一端上，梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線和對(duì)照線依次設(shè)在硝酸纖維膜上；在梅毒特異性IgG抗體檢測(cè)線處包被抗人IgG特異性片段γ鏈單克隆抗體，在對(duì)照線處包被羊抗梅毒抗原TPN17和TPN47的IgG抗體。
文檔編號(hào)G01N33/571GK201673158SQ20102019886
公開日2010年12月15日 申請(qǐng)日期2010年5月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月19日
發(fā)明者張忠英, 張長(zhǎng)弓, 楊天賜, 林麗蓉 申請(qǐng)人:廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院