專利名稱：檢測氮氧化物的方法
檢測氮氧化物的方法相關(guān)專利申請的交叉引用本申請要求2009年8月4日提交的美國臨時專利申請61/231，257、2010年8月 2日的美國臨時專利申請61/369，933的優(yōu)先權(quán)，兩專利申請以引用方式并入本文。
背景技術(shù)：
硝酸鹽化合物可存在于供水中。當(dāng)其濃度水平較高時，可在成人中引起與亞硝胺有關(guān)的胃部問題，并可引起嬰兒的高鐵血紅蛋白血癥。飲用水標(biāo)準通常包括硝酸鹽化合物在公共飲用水中的最大容許濃度。硝酸鹽化合物還可以低水平存在于生物組織中，特別是創(chuàng)傷組織中。一氧化氮合酶(N0Q在組織中產(chǎn)生一氧化氮(NO)。NO在生物組織中的半衰期為約5秒。NO通常代謝成穩(wěn)定的NO相關(guān)化合物(如硝酸鹽和亞硝酸鹽化合物)，這可在患者的尿液、血漿、組織、創(chuàng)液或其他樣本中得以測定。樣本中硝酸鹽和亞硝酸鹽化合物的水平可用作患者體內(nèi)NO合成水平的指標(biāo)?；颊唧w內(nèi)的NO在閾值水平以下時，不能實現(xiàn)正常的創(chuàng)傷修復(fù)，從而導(dǎo)致不愈合的慢性創(chuàng)傷或潰瘍。需要簡單、靈敏的方法來測量樣品中的NO相關(guān)化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及對生物樣品(如患者的尿液、血漿、組織、創(chuàng)液或其他樣本)中的NOxK 合物進行檢測和任選定量的方法。在某些優(yōu)選實施例中，采自某個部位的生物樣品可包含有限量的即刻可捕集的流體(如創(chuàng)傷部位)?？赏ㄟ^樣品采集裝置來捕集生物樣品。本發(fā)明的方法提供用于檢測生物樣品中極低量的NOx化合物。在一個方面，本發(fā)明提供檢測NOxK合物的方法。所述方法可包括提供可能含有 NOx化合物的樣品和4，4’ -磺?；p苯胺；形成包含樣品和4，4’ -磺?；p苯胺的混合物； 以及檢測指示樣品中存在NOx的有色沉淀。所述混合物還可包含N-(1-萘基)乙二胺和/ 或 VC13。在另一方面，本發(fā)明提供檢測創(chuàng)傷中NOx化合物的方法。所述方法可包括提供來自創(chuàng)傷的樣品和4，4’ -磺酰基雙苯胺；形成包含樣品和4，4’ -磺?；p苯胺的混合物；以及檢測指示樣品中存在NOx的有色沉淀。所述混合物還可包含N-(1-萘基)乙二胺和/或
VCl3O在另一方面，本發(fā)明提供檢測NOxK合物的方法。所述方法可包括提供可能包含 NOxK合物的樣品、4，4’ -磺?；p苯胺和芳香族二胺；形成包含樣品、4，4’ -磺酰基雙苯胺和芳香族二胺的混合物；和檢測指示樣品中存在NOx的有色沉淀。芳香族二胺可包括 N-(l-萘基)乙二胺。在另一方面，本發(fā)明提供檢測創(chuàng)傷中NOx化合物的方法。所述方法可包括提供樣品采集裝置、來自創(chuàng)傷的樣品、4，4’ -磺?；p苯胺和芳香族二胺；形成包含樣品和4，4’ -磺?；p苯胺以及芳香族二胺的混合物；和檢測指示樣品中存在NOx的有色化合物。芳香族二胺可包括Ν-α-萘基)乙二胺。在上述任一實施例中，所述混合物還可包含強酸。在上述任一實施例中，所述有色沉淀可包括紅色沉淀。在上述任一實施例中，所述方法還可包括加熱混合物的步驟。在上述任一實施例中，所述方法還可包括過濾混合物的至少一部分的步驟。在一些實施例中，過濾混合物的至少一部分可包括捕集表面積為約1. 5mm2至約31mm2的過濾型保留介質(zhì)中的濾液。在一些實施例中，過濾混合物的至少一部分可包括捕集表面積為約1. 5mm2至約20mm2的過濾型保留介質(zhì)中的濾液。在一些實施例中，過濾混合物的至少一部分可包括捕集表面積為約1.5mm2 至約3. Imm2的過濾型保留介質(zhì)中的濾液。在上述任一實施例中，檢測有色沉淀可包括目視檢測沉淀。在上述任一實施例中， 檢測有色沉淀可包括定量檢測有色沉淀。在上述任一實施例中，所述方法還可包括形成包含預(yù)定量的NOxK合物和4， 4’ -磺?；p苯胺的混合物。在這些實施例中，所述方法還可包括檢測有色沉淀。在這些實施例中，所述方法還可包括將包含可能含有NOx化合物的樣品的混合物中的有色沉淀的量與包含預(yù)定量的NOx化合物的樣品中的有色沉淀的量進行比較。在另一個方面，本發(fā)明提供試劑盒。該試劑盒可包含過濾型保留介質(zhì)和選自4， 4’ -磺酰基雙苯胺和Ν-α-萘基)乙二胺的化合物。在另一個方面，本發(fā)明提供試劑盒。該試劑盒可包含過濾型保留介質(zhì)和選自4， 4’ -磺?；p苯胺、N-(l-萘基)乙二胺和VCl3的兩種或更多種化合物。在上述任一實施例中，所述試劑盒還可包含強酸。在上述任一實施例中，所述試劑盒還可包括樣品采集裝置。在一些實施例中，所述樣品采集裝置可用于從創(chuàng)傷中獲得樣品。 在上述任一實施例中，所述試劑盒還可包括過濾裝置。在一個方面，本發(fā)明提供檢測創(chuàng)傷中NOx化合物的方法。所述方法可包括提供來自創(chuàng)傷的樣品和能與亞硝酸鹽化合物反應(yīng)形成有色化合物的顯色試劑。所述方法還可包括形成包含樣品和顯色試劑的第一混合物。所述方法還可包括使第一混合物的至少一部分與被構(gòu)造得適于保留有色化合物的第一保留介質(zhì)接觸。所述方法還可包括檢測保留在第一保留介質(zhì)上的有色化合物。在一些實施例中，所述方法還可包括提供能夠?qū)⑾跛猁}化合物還原成亞硝酸鹽化合物的還原劑，其中所述第一混合物包括還原劑。在上述方法的任一實施例中，與亞硝酸鹽化合物反應(yīng)形成有色化合物的顯色試劑可包含生色團或顯色劑。在上述方法的任一實施例中，與亞硝酸鹽化合物反應(yīng)形成有色化合物的顯色試劑可選自4，4'-雙_(二甲基氨基)二苯甲硫酮；奧；番木鱉堿吲哚(brucine indol)；對苯基偶氮苯胺；對硝基苯胺；鄰氨基苯甲酸；對氨基苯乙酮；對氨苯基砜；對苯基苯胺；對氨基苯磺酸；雙-(4-氨基苯基)硫醚；(4-氨基苯基)三甲基氯化銨；1-萘胺； 氯-對苯二胺；間苯二酚；N，N-二甲基苯胺；對氨基苯乙酮；4-硝基-1-萘胺；對硝基苯胺；4-硝基-1-萘胺；對苯基偶氮苯胺；對苯基偶氮苯胺；對硝基苯胺；4-硝基-1-萘胺；對氨基苯乙酮；1-萘胺；1-苯胺基萘；1-萘酚；苯甲醛2-苯并噻唑腙；蒽酮；1-蒽酚；奧；二苯胺；1，2- 二羥基苯；芝麻酚；N，N- 二甲基-1-萘胺；甲醛；高氯酸鐵(III)；和N，N- 二甲基-3-羥基苯胺。
在上述任一實施例中，所述方法還可包括加熱混合物的步驟。在上述方法的任一實施例中，使混合物的至少一部分與第一保留介質(zhì)接觸可包括使所述部分與膜濾器接觸。 在上述方法的任一實施例中，檢測有色化合物可包括定量檢測有色化合物。在上述任一實施例中，所述方法還可包括提供第二保留介質(zhì)、顯色試劑和包含預(yù)定量的NOxK合物的溶液。顯色試劑與亞硝酸鹽化合物反應(yīng)形成有色化合物。第二保留介質(zhì)被構(gòu)造成用于保留有色化合物。所述方法還可包括形成包含溶液和顯色試劑的第二混合物，使第二混合物的至少一部分與第二保留介質(zhì)接觸，檢測保留在第二保留介質(zhì)上的有色化合物，以及將保留在第一保留介質(zhì)上的有色化合物的量與保留在第二保留介質(zhì)上的有色化合物的量進行比較。在另一個方面，本發(fā)明提供試劑盒。所述試劑盒可包含被構(gòu)造用于保留有色化合物的保留介質(zhì)和可與亞硝酸鹽化合物反應(yīng)形成有色化合物的顯色試劑。在一些實施例中，所述試劑盒還可包含將硝酸鹽化合物還原成亞硝酸鹽化合物的試劑。在上述任一實施例中，所述試劑盒還可包括樣品采集裝置。在上述任一實施例中，所述試劑盒還可包括含有保留介質(zhì)的過濾裝置。^JL如本文所用，“N0X”是指一氧化氮相關(guān)(NO相關(guān))化合物。NO相關(guān)化合物包括一氧化氮及其衍生物。NO衍生物包括硝酸鹽化合物和亞硝酸鹽化合物。本文中所用的“包括”、“包含”或“具有”以及它們的變化形式意在涵蓋其后所列舉的項目及其等同項目以及附加項目。除非另有規(guī)定或限制，否則術(shù)語“偶聯(lián)”、“附接”、“連接，，及其變化形式作廣義使用并涵蓋直接連接和間接連接兩者。此外，術(shù)語“偶聯(lián)”不限于物理或機械偶聯(lián)。應(yīng)當(dāng)理解，可利用其他實施例并且在不脫離本發(fā)明的范圍的情況下可以進行結(jié)構(gòu)或邏輯上的改變。此外，諸如“頂部”、“底部”等術(shù)語僅用于描述其彼此關(guān)聯(lián)的元件，但絕非意在描述裝置的具體取向，用于表明或暗示裝置的必需或要求的取向，或規(guī)定本文描述的發(fā)明在應(yīng)用時應(yīng)如何使用、安裝、陳列或設(shè)置。詞語“優(yōu)選的”和“優(yōu)選地”是指在某些情況下，可以提供某些有益效果的本發(fā)明實施例。然而，在相同的情況或其他情況下，其他實施例也可以是優(yōu)選的。此外，對一個或多個優(yōu)選實施例的表述并不暗示其他實施例是不可用的，且并非意圖將其他實施例排除在本發(fā)明范圍之外。本文所用的“一種(個)”、“所述(該)”、“至少一種(個)”以及“一種或多種(一個或多個)”可互換使用。因此，例如，包含“一個”樣本收集區(qū)的制品可被解釋為意指制品包括“一個或多個”樣品收集區(qū)。相似地，用于檢測“一種”被分析物的方法可被解釋為意指該方法可涉及檢測“一種或多種”被分析物。術(shù)語“和/或”意指所列要素的一個或全部，或所列要素的任何兩個或更多個的組
I=I O本文所用的術(shù)語“或(或者)”通常按其意義應(yīng)用，包括“和/或”，除非上下文清楚表明并非如此。還有，本文通過端點表述的數(shù)值范圍包括該范圍內(nèi)的所有數(shù)值(比如，1-5包含1、 1. 5、2、2· 75,3,3. 80、4、5 等)。本發(fā)明的上述發(fā)明內(nèi)容并非意圖描述本發(fā)明的每一個公開的實施例或每種實施方式。以下具體實施方式
更具體地舉例說明了示例性實施例。在本專利申請全文的幾處， 通過實例列表提供指導(dǎo)，可以不同組合使用這些實例。在每一種情況下，被引用的列表均僅用作一個代表性的組，不應(yīng)被理解為是排他性列表。


將參照下面列出的附圖來進一步說明本發(fā)明，其中在這幾個視圖中類似的結(jié)構(gòu)由類似的數(shù)字標(biāo)注。圖IA是根據(jù)本發(fā)明用于檢測硝酸鹽化合物或亞硝酸鹽化合物的裝置的一個實施例的俯視圖。圖IB是圖IA裝置的分解側(cè)視圖。圖2A是根據(jù)本發(fā)明用于檢測硝酸鹽化合物或亞硝酸鹽化合物裝置的的一個實施例的俯視圖。圖2B是圖2A裝置的分解側(cè)視圖。圖3是得自反射密度計的數(shù)據(jù)圖。圖4是得自分光光度計的數(shù)據(jù)圖。圖5是得自反射密度計的數(shù)據(jù)圖。圖6是得自分光光度計的數(shù)據(jù)圖。圖7是得自反射密度計的數(shù)據(jù)圖。圖8是得自分光光度計的數(shù)據(jù)圖。圖9是得自反射密度計的數(shù)據(jù)圖。
具體實施例方式本發(fā)明整體涉及用于檢測樣品中的氮氧化物(如亞硝酸鹽和/或硝酸鹽化合物) 的制品和方法。本發(fā)明還涉及評估創(chuàng)傷狀況的制品和方法。本發(fā)明的制品和方法提供了對樣品中較低(如生理學(xué)中)水平的NOx進行測量的速測法。在一些實施例中，本發(fā)明的方法包括在過濾片中收集可溶性有色化合物或有色沉淀，該有色化合物或有色沉淀指示有亞硝酸鹽化合物或硝酸鹽化合物存在。在一些實施例中，可在具有較小橫截面積的過濾片中收集沉淀。在有較小橫截面積的過濾片中收集沉淀， 具有可允許對樣品中極低水平的NOx化合物進行檢測或定量的優(yōu)點。樣品和樣品收集本發(fā)明的方法可用于檢測多種樣品中的NOx化合物，所述多種樣品包括(但不限于)水(如地表水、池塘水、井水、工業(yè)用水、飲用水)、農(nóng)業(yè)樣品(如廢水塘、牲畜飼料、農(nóng)作物、土壤)、食物產(chǎn)品(如蔬菜、乳制品)、和患者樣品(如血液、尿液、組織、血漿、創(chuàng)面、創(chuàng)面滲出物)。本發(fā)明的方法可聯(lián)合多種樣品采集裝置使用。優(yōu)選的樣品采集裝置(如吸移管、 拭子、海綿、傷口敷料等)基本上不含反應(yīng)性亞硝酸鹽或硝酸鹽化合物。合適的樣品采集裝置的實例描述于2009年8月4日提交的名為“SAMPLING DEVICES AND METHODS OF USE” 的美國專利申請No. 61/231，236，該專利以引用方式全文并入本文。樣品采集裝置可處理得適于從創(chuàng)傷中獲得樣品。例如，在一些實施例中，使樣品采
7集裝置適于從創(chuàng)傷中獲得樣品的辦法可包括處理所述裝置以使其基本上去污、消毒、或滅菌。在一些實施例中，使樣品采集裝置適于從創(chuàng)傷中獲得樣品的辦法可包括將樣品采集裝置封裝在包裝中，所述包裝已經(jīng)過處理以使其基本上去污、消毒、或滅菌。在一些實施例中， 使樣品采集裝置適于從創(chuàng)傷中獲得樣品的辦法可包括由易于吸收或吸附創(chuàng)面滲出物的材料構(gòu)造樣品采集裝置。在一些實施例中，使樣品采集裝置適于從創(chuàng)傷中獲得樣品的辦法可包括提供具有選來抵抗與創(chuàng)傷組織粘附的面創(chuàng)層的吸收材料。用于收集樣品的裝置以可脫開的方式采集(如通過吸附和/或吸收)一定量的足以進行一個或多個測試工序的樣品(如創(chuàng)面滲出物)。檢測樣品中硝酸鹽或亞硝酸鹽化合物的方法本發(fā)明的方法包括檢測樣品中的NOx化合物。本發(fā)明的方法還包括檢測創(chuàng)面滲出物樣品中的N0X。NO通常代謝成某些穩(wěn)定的產(chǎn)物，諸如硝酸鹽和亞硝酸鹽化合物，這可在患者的尿液、血漿、組織、創(chuàng)液或其他樣本中得以測定。樣本中硝酸鹽化合物、亞硝酸鹽化合物或其他NO相關(guān)產(chǎn)物的水平可用作患者體內(nèi)NO合成水平的指標(biāo)。NO相關(guān)產(chǎn)物或氧化劑應(yīng)激相關(guān)產(chǎn)物的“水平”通常是指樣本中或樣本的流體部分中相應(yīng)產(chǎn)物的濃度(摩爾/升、微摩爾/升或其他合適的單位)。然而，還可使用其他度量單位來表示產(chǎn)物的水平。例如，可使用絕對量(以微克、毫克、納摩爾、微摩爾、摩爾或其他合適的單位計)、特別是如果量是回指患者樣本的恒定的量、質(zhì)量或體積(如克、千克、毫升、 升或其他合適的單位)。在一個方面，本發(fā)明提供采用形成有色化合物(如與以下所示化合物I類似或相同的紅色陽離子染料)的反應(yīng)來檢測樣品中NOx化合物的方法化合物I在一些實施例中，所述方法包括提供樣品、保留介質(zhì)和顯色試劑。所述顯色試劑能夠與亞硝酸鹽化合物反應(yīng)形成有色化合物。保留介質(zhì)被構(gòu)造得用于保留有色化合物。所述方法還包括在允許亞硝酸鹽化合物與顯色試劑反應(yīng)以形成有色化合物的條件下形成包含樣品和顯色試劑的混合物，使混合物的至少一部分與保留介質(zhì)接觸，以及檢測保留在保留介質(zhì)上的有色化合物。樣品可為可能包含硝酸鹽化合物和/或亞硝酸鹽化合物的任何樣品。所述方法特別適合于較小體積的樣品(如約2μ1至約10μ1)，所述樣品包含較低累積濃度(如 ^ 50μΜ)的硝酸鹽和/或亞硝酸鹽化合物。樣品可為生物樣品(如患者的尿液、血漿、 組織、創(chuàng)液或其他樣本)。所述方法的實施例特別適用于創(chuàng)傷液的樣品，因為i)難以從從創(chuàng)傷部位即刻獲得超過10微升的創(chuàng)傷液，和ii)生物材料的樣品通常具有較低濃度(如彡50 μ M、彡40 μ M、彡30 μ M、彡20 μ Μ、或彡10 μ Μ)的吣3和/或NO2化合物存在于樣品材料中。保留介質(zhì)可為被構(gòu)造用于捕集和保留有色化合物的任何介質(zhì)。例如可通過吸收、吸附和/或過濾來捕集和保留有色化合物。吸附可藉疏水性和/或庫侖(離子)相互作用來加以促進。過濾過程可包括將有色化合物捕集于過濾片的表面和/或過濾片的孔內(nèi)。在一些實施例中，保留介質(zhì)表現(xiàn)出對有色化合物的各向異性的捕集和保留(例如其將有色化合物捕集和保留在介質(zhì)表面上或附近的場合)。合適的保留介質(zhì)的實例包括片材介質(zhì)(即，大致平坦的材料片，例如塑料薄膜、膜濾器和非織造材料)和粒子。在一些實施例中，粒子可為多孔粒子。在一些實施例中，粒子可嵌入實質(zhì)上不會捕集或保留有色化合物的基質(zhì)(如纖維、微纖維或水凝膠)。保留介質(zhì)可包含與有色化合物中的離子基團相互作用離子基團， 從而將有色化合物捕集和保留在保留介質(zhì)上和/或介質(zhì)內(nèi)。用于捕集和保留陽離子有色化合物的合適離子基團的非限定性實例包括磺酸鹽基團、羧酸鹽基團、磷酸鹽基團、硫酸酯基團和磷酸酯基團。用于捕集和保留陰離子有色化合物的合適離子基團的非限定性實例包括各種季銨基團、膦基和锍基。所述方法包括使用能夠與亞硝酸鹽化合物反應(yīng)形成有色化合物的顯色試劑。顯色試劑可包括本領(lǐng)域中已知的多種顯色試劑中的至少一種，包括E. Sawicki等人(1963)的名禾爾為 “Comparison of fifty-two spectrophotometrie methods for the determination Of nitrite(用于測定亞硝酸鹽的五十二種分光光度法的比較)”(Talanta，第10卷，第 641-655頁；Pergamon Press Ltd.，Oxford, UK)的出版物中所描述的顯色試劑，該出版物以引用方式全文并入本文中。顯色試劑包含生色團和顯色劑。生色團可與顯色劑反應(yīng)形成陰離子有色化合物。形成陽離子有色化合物的合適生色團包括例如二芳基甲烷陽離子(如 4,4'-雙_( 二甲基氨基)二苯甲硫酮)、二芳基胺陽離子(如奧、番木鱉堿吲哚)、雙偶氮染料雙陽離子(如對苯基偶氮苯胺)、偶氮染料陽離子(如對硝基苯胺、鄰氨基苯甲酸、 對氨基苯乙酮、對氨苯基砜、對苯基苯胺、對氨基苯磺酸、雙-(4-氨基苯基)硫醚、氨基苯基)三甲基氯化銨和1-萘胺)、重氮陽離子(如氯-對苯二胺)和吩噁嗪雙陽離子(如間苯二酚；N，N- 二甲基苯胺)。形成陰離子有色化合物的合適生色團包括例如偶氮染料陰離子(如對氨基苯乙酮、4-硝基-1-萘胺、對硝基苯胺、4-硝基-1-萘胺)、三氮烯陰離子 (如對苯基偶氮苯胺)和甲臜(formazan)陰離子(如對苯基偶氮苯胺、對硝基苯胺、4-硝基-1-萘胺、對氨基苯乙酮)。顯色劑包括多種本領(lǐng)域中已知的顯色劑。通常，將某些顯色劑與某些生色團配合使用，以在生色團和顯色劑與NO2-反應(yīng)時得到特定的有色化合物(參見Sawicki等人，1963 年)。合適的顯色劑包括例如1-萘胺；1-苯胺基萘；1-萘酚；苯甲醛2-苯并噻唑腙；蒽酮； 1-蒽酚；奧；二苯胺；1，2-二羥基苯；芝麻酚；N，N-二甲基-1-萘胺；甲醛；高氯酸鐵(III)； 和N，N-二甲基-3-羥基苯胺)。在一些實施例中，所述方法包括形成包含可能含有NOx化合物的樣品、顯色試劑 (如4，4’_磺?；p苯胺)、顯色劑(例如，芳香族二胺如N-(l-萘基)-乙二胺)和酸(如 HCl)的混合物。所述方法還包括檢測指示樣品中存在NOx的有色化合物(如可溶性化合物或沉淀)。該混合物在允許亞硝酸鹽化合物與顯色試劑反應(yīng)形成有色化合物的條件下形成。 合適的條件是已知的并且由例如Ε. Sawicki等人描述。如反應(yīng)方案I所示，所述條件包括酸(如HC1、H3P04、H2S04、乙酸、甲酸)以有利于有色化合物的形成。在一些實施例中，所述條件可包括提高了的溫度(如約70°C )以提高有色化合物的形成速率。
在所述方法的一些實施例中，所述混合物還可包含可促使硝酸鹽化合物還原成亞硝酸鹽化合物的還原劑(如VCl3)。在其中將VCl3用作還原劑的實施例中，HCl為優(yōu)選的酸， 以i)使VCldI定，和ii)有利于有色化合物的形成。其他合適的還原劑包括例如活潑金屬 (如Cd、Al、Si)、氨和硼氫化物。在某些可供選擇的實施例中，混合物可經(jīng)受促使硝酸鹽化合物還原成亞硝酸鹽化合物的處理(如電化學(xué)還原、光化學(xué)還原)。用于使硝酸鹽化合物還原成亞硝酸鹽化合物的方法描述于J. C. Fanning的論文中(“The chemical reduction of nitrate in aqueous solution";Coordination Chemistry Reviews,第 199 卷第 159-179 頁；2000年；Elsevier, New York, NY)，其以引用方式全文并入本文中。在一個實施例中，所述方法包括形成包含可能含有NOxK合物的樣品和4，4’ -磺酰基雙苯胺的混合物。所述方法還包括檢測指示樣品中存在NOx的有色沉淀。在一些實施例中，所述混合物還可包含Ν-α-萘基)-乙二胺。在一些實施例中，所述混合物還可包含 VCl30在一些實施例中，所述混合物還可包含強酸(如HC1)。在一個實施例中，所述方法包括形成包含可能含有NOxK合物的樣品、4，4’ -磺?；p苯胺和芳香族二胺的混合物。所述方法還包括檢測指示樣品中存在NOx的有色化合物。 在一些實施例中，芳香族二胺包括Ν-α-萘基)-乙二胺。在一些實施例中，所述混合物還可包含VC13。在一些實施例中，所述混合物還可包含強酸(如HC1)。在一個實施例中，檢測NOx化合物的方法包括形成包含可能含有NOx化合物的樣品、VC13*4，4’ -磺?；p苯胺的混合物。所述方法還包括檢測指示樣品中存在NOx的有色化合物。在一個實施例中，所述檢測NOx化合物的方法包括形成包含可能含有NOx化合物的樣品、N-(l-萘基)-乙二胺和4，4’_磺酰基雙苯胺的混合物。所述方法還包括檢測指示樣品中存在NOxW有色化合物。在一個實施例中，檢測NOx化合物的方法包括形成包含可能含有NOx化合物的樣品、VCl3和N-(l-萘基)-乙二胺的混合物。所述方法還包括檢測指示樣品中存在NOx的有色化合物。不必受理論的約束，但可認為反應(yīng)方案I給出了形成有色染料的示例性推測途徑，以檢測包含硝酸鹽(或亞硝酸鹽)化合物、VC13、HC1、對二氨基二苯砜(4，4’ -磺?；p苯胺)和N-(l-萘基)-乙二胺的混合物中的NO3-(或Ν02_)反應(yīng)方案I
權(quán)利要求
1.一種檢測創(chuàng)傷中NOx化合物的方法，其包括提供來自創(chuàng)傷的樣品、第一保留介質(zhì)和顯色試劑；其中所述顯色試劑能夠與亞硝酸鹽化合物反應(yīng)形成有色化合物；其中所述第一保留介質(zhì)被構(gòu)造用于保留所述有色化合物在允許亞硝酸鹽化合物與所述顯色試劑反應(yīng)形成所述有色化合物的條件下形成包含所述樣品和所述顯色試劑的第一混合物；使所述第一混合物的至少一部分與所述第一保留介質(zhì)接觸；和檢測保留在所述第一保留介質(zhì)上的所述有色化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，該方法還包括提供還原劑，其中所述第一混合物包括所述還原劑，其中所述條件同時允許硝酸鹽化合物還原成亞硝酸鹽化合物且允許亞硝酸鹽化合物與所述顯色試劑反應(yīng)形成所述有色化合物。
3.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述顯色試劑包含生色團或顯色劑。
4.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述顯色試劑選自、4，4'-雙_(二甲基氨基)二苯甲硫酮；奧；番木鱉堿吲哚；對苯基偶氮苯胺；對硝基苯胺；鄰氨基苯甲酸；對氨基苯乙酮；對氨苯基砜；對苯基苯胺；氨基苯磺酸；雙-(4-氨基苯基)硫醚；(4-氨基苯基) 三甲基氯化銨；1-萘胺；氯-對苯二胺；間苯二酚；N，N 二甲基苯胺；對氨基苯乙酮；4-硝基-1-萘胺；對硝基苯胺；4-硝基-1-萘胺；對苯基偶氮苯胺；對苯基偶氮苯胺；對硝基苯胺；4-硝基-1-萘胺；對氨基苯乙酮；1-萘胺；1-苯胺基萘；1-萘酚；苯甲醛2-苯并噻唑腙；蒽酮；I-蒽酚；奧；二苯胺；1，2- 二羥基苯；芝麻酚；N，N- 二甲基-1-萘胺；甲醛；高氯酸鐵(III)；和N，N-二甲基-3-羥基苯胺。
5.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，該方法還包括加熱所述混合物的步驟。
6.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中檢測有色化合物包括目視檢測所述有色化合物。
7.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中檢測有色化合物包括定量檢測所述有色化合物。
8.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，該方法還包括形成第二混合物，其包含預(yù)定量的NOx化合物和與亞硝酸鹽化合物反應(yīng)形成有色化合物的顯色試劑；使所述第二混合物的至少一部分與被構(gòu)造用于保留所述有色化合物的第二保留介質(zhì)接觸；檢測保留在所述第二保留介質(zhì)上的所述有色化合物；和將保留在所述第一保留介質(zhì)上的有色化合物的量與保留在所述第二保留介質(zhì)上的有色化合物的量進行比較。
9.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中所述第一或第二保留介質(zhì)包括具有離子官能團的介質(zhì)。
10.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中使所述混合物的至少一部分與保留介質(zhì)接觸包括使所述部分與膜濾器接觸。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中使所述部分與膜濾器接觸包括使所述部分與接觸表面積為約1. 5mm2至約31mm2的膜濾器接觸。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中使所述部分與膜濾器接觸包括使所述部分與接觸表面積為約1. 5mm2至約20mm2的膜濾器接觸。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中使所述部分與膜濾器接觸包括使所述部分與接觸表面積為約1. 5mm2至約3. Imm2的膜濾器接觸。
14.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求所述的方法，其中檢測所述有色化合物包括采用儀器檢測所述有色化合物。
15.一種試劑盒，其包含被構(gòu)造用于保留有色化合物的保留介質(zhì)和與亞硝酸鹽化合物反應(yīng)形成所述有色化合物的顯色試劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的試劑盒，其還包含將硝酸鹽化合物還原成亞硝酸鹽化合物的試劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的試劑盒，其中所述試劑包括VC13。
18.根據(jù)權(quán)利要求15至17中任一項所述的試劑盒，其中所述顯色試劑包括4，4’-磺酰基雙苯胺或Ν-α-萘基)乙二胺。
19.根據(jù)權(quán)利要求15至18中任一項所述的試劑盒，其還包含強酸。
20.根據(jù)權(quán)利要求15至19中任一項所述的試劑盒，其還包括樣品采集裝置。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的試劑盒，其中所述樣品采集裝置適于從創(chuàng)傷中獲得樣品。
22.根據(jù)權(quán)利要求15至21中任一項所述的試劑盒，其還包括含有所述保留介質(zhì)的過濾直ο
全文摘要
本發(fā)明提供了對生物樣品中的NOx化合物進行檢測和定量的方法和試劑盒。所述方法包括使包含亞硝酸鹽化合物的混合物與顯色試劑反應(yīng)形成有色化合物，使所述混合物與被構(gòu)造用于保留所述有色化合物的保留介質(zhì)接觸，和檢測保留在所述保留介質(zhì)上的所述有色化合物。
文檔編號G01N33/52GK102472746SQ201080034650
公開日2012年5月23日 申請日期2010年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月4日
發(fā)明者維諾德·P·梅農(nóng) 申請人:3M創(chuàng)新有限公司