專利名稱：篩選方法
篩選方法交叉參考相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2009年9月25日提交的第61/246，079號(hào)美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)和2010 年2月19提交的第61/306，324號(hào)美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)權(quán)益，所述臨時(shí)專利申請(qǐng)的每一個(gè)通過(guò)弓I用整體并入本文。領(lǐng)域本發(fā)明涉及篩選多肽結(jié)合劑例如抗體的方法，所述多肽結(jié)合劑展示動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)生物信號(hào)復(fù)合物例如受體-配體復(fù)合物的結(jié)合和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力。本發(fā)明還涉及特征在于期望的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)性質(zhì)的特異性多肽結(jié)合劑。附錄的合并本申請(qǐng)包括隨本申請(qǐng)一起提交的2009年9月25日創(chuàng)建的表，附錄A，“41726_ SecretedProteins. txt” (大小255KB)。該ASCII文本文件中包含的材料由此根據(jù)37C. F. R. § I. 52(e) (5)通過(guò)引用整體并入本文。背景大多數(shù)抗體藥物常規(guī)地通過(guò)篩選結(jié)合細(xì)胞表面受體或其同源配體的抗體，并且鑒定特異性阻斷或刺激受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的抗體來(lái)進(jìn)行鑒定。許多抗體藥物通過(guò)結(jié)合配體或受體，從而消除配體結(jié)合以及激活受體的能力來(lái)阻斷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。此類阻斷抗體通過(guò)阻止受體-配體復(fù)合物的形成來(lái)按化學(xué)計(jì)量介導(dǎo)它們的作用。相反地，某些抗體藥物結(jié)合并且激活受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。此類激動(dòng)劑抗體可通過(guò)模擬配體的天然活性介導(dǎo)它們的作用，從而不需要配體的存在來(lái)激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。概述本發(fā)明提供了多肽結(jié)合劑(稱為“動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)藥物”或“動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑”)的新型種類，所述多肽結(jié)合劑具有正或負(fù)調(diào)節(jié)牽涉靶及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶的細(xì)胞途徑活性的期望的性質(zhì)。靶和/或其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶可以是內(nèi)源或外源化合物，性質(zhì)上可以是蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)，但其任選地可排除離子和鹽。本發(fā)明還提供了鑒定此類動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑的新型方法，所述方法基于它們對(duì)于靶對(duì)其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶之間的結(jié)合動(dòng)力學(xué)的影響，或基于所述動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑對(duì)以復(fù)合形式相對(duì)于以未復(fù)合形式存在的靶(和/或其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶)的差異結(jié)合。多肽結(jié)合劑可結(jié)合靶、其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶和/或包含靶及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶的復(fù)合物。該發(fā)現(xiàn)使得能夠設(shè)計(jì)可鑒定適合用于治療用途的細(xì)胞途徑活性的調(diào)節(jié)劑的生物物理篩選測(cè)定法。在某些方面，提供了鑒定調(diào)節(jié)靶與其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶之間的結(jié)合動(dòng)力學(xué)的多肽結(jié)合劑的測(cè)定法。靶的非限定性實(shí)例包括例如附錄A中所示的登錄號(hào)(或SEQ ID NOS 1-88)中任一項(xiàng)的分泌性蛋白。此類分泌性蛋白包括許多分泌性膜結(jié)合受體。隨同的附錄 A 列出了由 Swissprot/EMBL 數(shù)據(jù)庫(kù)(參見(jiàn)，例如，Boeckmann 等人“The SffISS-PROT protein knowledgebase and its supplement TrEMBL in 2003，，, Nucleic Acids Res. 31 365-370(2003)匯編的人分泌性蛋白。附錄A顯示了數(shù)據(jù)庫(kù)中分泌性蛋白的氨基酸序列的 SwisspiOt登錄號(hào)、所述蛋白的名稱(和所有首字母縮寫或相關(guān)名稱)以及氨基酸序列的長(zhǎng)度。如本文中所使用的，“信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶”是靶的結(jié)合伴侶(當(dāng)其與靶結(jié)合時(shí)，形成信號(hào)復(fù)合物)或?yàn)樾盘?hào)復(fù)合物的部分(其可激活或抑制細(xì)胞途徑)。此類動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑多肽結(jié)合劑的存在改變(增強(qiáng)或減小)靶對(duì)于其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶的表觀結(jié)合親和力，從而改變靶對(duì)于激活細(xì)胞途徑的劑量-反應(yīng)?？蛇x擇地，改變(增加或減小)靶對(duì)于其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶的結(jié)合率或改變(增加或減小)靶對(duì)于其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶的解離速率的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑多肽結(jié)合劑也可改變(增加或減小)與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶復(fù)合的靶的停留時(shí)間，改變受體內(nèi)化率和/或改變被信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶復(fù)合物激活或去活化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白的磷酸化程度。此類改變可顯著改變通過(guò)靶與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶的復(fù)合產(chǎn)生的不同信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的相對(duì)激活，從而改變靶對(duì)于激活細(xì)胞途徑的劑量-反應(yīng)。預(yù)期此類動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑具有優(yōu)于常規(guī)治療性藥物的有利方面，包括提高的安全性(safety profile)、改變的清除率、更寬的治療窗(therapeutic window) 和更低頻率的給藥。在靶是待給患者施用的外源化合物時(shí)，作為利用靶的輔助療法的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑的施用可改變(例如，減少)靶的給藥的總量(每天、每周或每月)和/或頻率。本發(fā)明提供了鑒定作為多肽結(jié)合劑(不包括常規(guī)小分子藥物例如具有約1000道爾頓或更低的分子量的非聚合有機(jī)化合物)的候選動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)藥物的方法。特別地涉及的多肽結(jié)合劑的實(shí)例包括抗體，包括其抗原結(jié)合片段、肽體(peptibody)、多肽和肽(任選地綴合于其它肽部分或非肽部分)?？贵w的實(shí)例包括單克隆抗體、包含兩條重鏈和兩條輕鏈的四聚體免疫球蛋白、單鏈抗體、單結(jié)構(gòu)域抗體、抗體片段、scFv、Fab、CDR、嚙齒類動(dòng)物抗體、 哺乳動(dòng)物抗體、人抗體、嵌合抗體和人源化抗體。本發(fā)明提供了鑒定候選多肽結(jié)合劑例如抗體的方法，所述多肽結(jié)合劑調(diào)節(jié)信號(hào)復(fù)合物的第一組分與第二組分(靶與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶，或反之亦然)之間的結(jié)合。這樣的第一組分和/或第二組分的實(shí)例包括附錄A的分泌性蛋白(或SEQ ID NOS :1_88)和此類分泌性蛋白的內(nèi)源或外源信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶的任一種，或本文中描述的配體或受體或跨膜蛋白的任一種。在某些實(shí)施方案中，第一組分和第二組分是多肽。在不例性具體實(shí)施方案中，第一組分和第二組分是內(nèi)源的。在一個(gè)方面，鑒定候選動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)藥物的方法包括(a)測(cè)量在測(cè)試多肽結(jié)合劑例如抗體存在的情況下，所述第一組分對(duì)于所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，(b)測(cè)量在所述測(cè)試多肽結(jié)合劑不存在的情況下，所述第一組分對(duì)于所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)；和(c)當(dāng)所述測(cè)試多肽結(jié)合劑在于步驟(a)和(b)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)上展示至少I. 5倍差異時(shí)，將所述測(cè)試多肽結(jié)合劑鑒定為候選動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)藥物。圖I顯示舉例說(shuō)明某些示例性實(shí)施方案的示意圖。在某些實(shí)施方案中，結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的差異在約I. 5倍(即，50% )至任選地約1000倍、或約I. 5倍至約100倍、或約2倍至25倍、或約2倍至50倍、或約I. 5倍至約25倍、或約I. 5倍至約50倍之間、例如約I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、 16倍、17倍、18倍、19倍或20倍、或達(dá)到500倍、或達(dá)到200倍、或達(dá)到150倍、或達(dá)到100 倍、或達(dá)到90倍、或達(dá)到80倍、或達(dá)到70倍、或達(dá)到60倍、或達(dá)到50倍、或達(dá)到40倍、或達(dá)到30倍。在某些實(shí)施方案中，如果測(cè)試多肽結(jié)合劑增強(qiáng)所述第一組分與所述第二組分之間的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)(例如，減小的KD，或增加的KA，或減小的解離速率/結(jié)合速率比率，或增加的結(jié)合速率/解離速率比率，或增加的結(jié)合速率，或減小的解離速率)，那么所述測(cè)試多肽結(jié)合劑被鑒定為候選正調(diào)節(jié)劑。在其它實(shí)施方案中，如果所述測(cè)試多肽試劑減小所述第一組分與所述第二組分之間的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)(例如，增加的KD，或減小的Ka，或增加的解離速率/結(jié)合速率比率，或減小的結(jié)合速率/解離速率比率，或減小的結(jié)合速率，或增加的解離速率)，那么所述測(cè)試多肽試劑被定義為候選負(fù)調(diào)節(jié)劑。在某些可選擇的實(shí)施方案中，當(dāng)更強(qiáng)的結(jié)合率參數(shù)(例如，增加的締合或停留時(shí)間，通過(guò)增加的結(jié)合速率或減小的解離速率)導(dǎo)致增加的所期望信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的相對(duì)激活時(shí)，甚至當(dāng)結(jié)合親和力未被可檢測(cè)地改變時(shí)，通過(guò)確定期望倍數(shù)的結(jié)合率參數(shù)的增強(qiáng)，將測(cè)試多肽結(jié)合劑鑒定為候選正調(diào)節(jié)劑。當(dāng)更小的結(jié)合率參數(shù)(例如，減弱的締合或停留時(shí)間， 通過(guò)減小的結(jié)合速率或增加的解離速率)導(dǎo)致增加的所期望信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的相對(duì)激活，甚至當(dāng)結(jié)合親和力未被可檢測(cè)地改變時(shí)，通過(guò)確定結(jié)合率參數(shù)的期望的倍數(shù)減小，將測(cè)試多肽結(jié)合劑鑒定為候選正調(diào)節(jié)劑。類似地，當(dāng)更強(qiáng)的結(jié)合率參數(shù)(例如，增加的締合或停留時(shí)間，通過(guò)增加的結(jié)合速率或減小的解離速率)導(dǎo)致減小的所期望信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的相對(duì)激活時(shí)，甚至當(dāng)結(jié)合親和力未被可檢測(cè)地改變時(shí)，通過(guò)確定結(jié)合率參數(shù)的期望的倍數(shù)增強(qiáng)，將測(cè)試多肽結(jié)合劑鑒定為候選負(fù)調(diào)節(jié)劑。當(dāng)更弱的結(jié)合率參數(shù)(例如，減少的締合或停留時(shí)間， 通過(guò)減小的結(jié)合速率或增加的解離速率)導(dǎo)致減少的所期望信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的相對(duì)激活，甚至當(dāng)結(jié)合親和力未被可檢測(cè)地改變時(shí)，通過(guò)確定結(jié)合率參數(shù)的期望的倍數(shù)減弱，將測(cè)試多肽結(jié)合劑鑒定為候選負(fù)調(diào)節(jié)劑。在另一個(gè)方面，鑒定候選動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)藥物的方法包括(a) (i)測(cè)量在所述第二組分存在的情況下，測(cè)試多肽結(jié)合劑例如抗體對(duì)所述第一組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)， 或(ii)測(cè)量在所述第一組分存在的情況下，測(cè)試多肽結(jié)合劑對(duì)所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)；和(b) (i)測(cè)量在所述第二組分不存在的情況下，所述測(cè)試多肽結(jié)合劑對(duì)所述第一組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，或(ii)測(cè)量在所述第一組分不存在的情況下， 所述測(cè)試多肽結(jié)合劑對(duì)所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)；和(C)當(dāng)所述測(cè)試多肽結(jié)合劑在步驟(a)和(b)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)上展示I. 5倍至100倍差異時(shí)， 將所述測(cè)試多肽結(jié)合劑鑒定為候選動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)藥物。圖2顯示舉例說(shuō)明某些示例性實(shí)施方案的示意圖，其中在第二組分存在或不存在的情況下測(cè)量相互作用。在某些實(shí)施方案中，步驟(a)和(b)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的差異在約I. 5倍(S卩，50 % )，至任選地約1000倍，或約I. 5倍至約100倍，或約2倍至25倍，或約 2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約I. 5倍至約50倍之間，例如至少I. 5倍、2倍、 3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18 倍、19倍或20倍，或達(dá)到500倍，或達(dá)到200倍，或達(dá)到150倍，或達(dá)到100倍，或達(dá)到90 倍，或達(dá)到80倍，或達(dá)到70倍，或達(dá)到60倍，或達(dá)到50倍，或達(dá)到40倍，或達(dá)到30倍。在某些實(shí)施方案中，如果步驟(a)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)大于步驟(b)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，則所述測(cè)試多肽結(jié)合劑被鑒定為候選正調(diào)節(jié)劑。在其它實(shí)施方案中，如果步驟(b)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)大于步驟(a)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，則所述測(cè)試多肽結(jié)合劑被鑒定為候選負(fù)調(diào)節(jié)劑?？梢砸云渲型瑫r(shí)或相繼地篩選多種多肽結(jié)合劑(例如，至少5、10、15、20、25、30、 35、40、50、100、150、200、500、1，000、10，000或25, 000種)的高通量測(cè)定法的形式進(jìn)行上
述方法中的任何方法。在某些實(shí)施方案中，所述方法還包括任選地在測(cè)量結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的差異之前，測(cè)定多種測(cè)試多肽結(jié)合劑(例如抗體)對(duì)(a)所述第一組分、(b)所述第二組分或(C)包含所述第一組分和第二組分的復(fù)合物的任一種的結(jié)合親合力。還可以以其中同時(shí)或相繼地篩選多種多肽結(jié)合劑(例如，至少5、10、15、20、25、30、35、40、50、100、
150、200、500或1000種)的高通量測(cè)定法的方式進(jìn)行文庫(kù)的此種預(yù)篩選。在某些實(shí)施方案中，多種篩選的測(cè)試多肽結(jié)合劑是通過(guò)將一個(gè)或多個(gè)不同突變引入親代多肽結(jié)合劑來(lái)制備的親代多肽結(jié)合劑的變體。在其它實(shí)施方案中，可篩選多肽結(jié)合劑與不同結(jié)合伴侶(例如誘餌受體、清除作用受體或備選信號(hào)途徑組分)相比較對(duì)第一組分或第二組分作用的選擇性。此類方法可包括鑒定不顯著改變第一組分或第二組分對(duì)于不同結(jié)合伴侶(此類結(jié)合伴侶既不是第一組分也不是第二組分)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的多肽結(jié)合劑?？稍谄渲械谝唤M分、第二組分和多肽結(jié)合劑的一種或多種存在于溶液中的測(cè)定中，或在其中第一組分、第二組分和多肽結(jié)合劑的一種或多種連接于固相(共價(jià)或非共價(jià)地)的測(cè)定中，或在其中第一組分、第二組分以及多肽結(jié)合劑的一種或多種在細(xì)胞表面上表達(dá)的測(cè)定中進(jìn)行結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的上述測(cè)量中的任一測(cè)量。第一組分和/或第二組分各自本身可以是多種化合物的復(fù)合物。第一組分和/或第二組分(例如，靶或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶或反之亦然)可以是可溶性的或膜結(jié)合的配體或受體，包括但不限于7-跨膜受體、G-蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)、腎上腺素能受體、神經(jīng)遞質(zhì)受體、嗅覺(jué)受體、阿片樣物質(zhì)受體、 趨化因子受體、視紫質(zhì)、受體酪氨酸激酶、生長(zhǎng)因子受體、整聯(lián)蛋白以及toll-樣受體、酶或底物。上述方法中的任一方法還可包括重新克隆和表達(dá)，或合成和表達(dá)，或合成候選動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)多肽結(jié)合劑；純化所述動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑和/或測(cè)定其序列；添加或替換Fe區(qū)域或其片段；利用無(wú)菌的藥學(xué)上可接受的稀釋劑將動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑或變體(例如包含親代抗體的相同CDR的至少3個(gè)或6個(gè)CDR的抗體)配制于無(wú)菌組合物中；和/或給動(dòng)物施用所述動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑或變體。上述方法中的任一方法還可包括測(cè)量在所述測(cè)試多肽結(jié)合劑存在和不存在的情況下，由信號(hào)復(fù)合物介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的水平，和確定所述測(cè)試多肽結(jié)合劑是否額外地是激動(dòng)劑、部分激動(dòng)劑、拮抗劑或部分拮抗劑。在某些實(shí)施方案中，所述激動(dòng)劑或部分激動(dòng)劑是變構(gòu)激動(dòng)劑。在相關(guān)方面，本發(fā)明提供了通過(guò)上述方法的任一方法或本文中其它地方描述的方法的任一方法鑒定的多肽結(jié)合劑例如抗體。在分開(kāi)的方面，本發(fā)明還提供了具有期望的特征的多肽結(jié)合劑。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了正調(diào)節(jié)劑，所述正調(diào)節(jié)劑以約10_5M或更小，例如，10_6M或更小，或10_7M或更小，或IO-8M或更小(其中更小的數(shù)表示更大的結(jié)合親和力)的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合靶， 例如附錄A(或SEQ ID NOS :1-88)中任一項(xiàng)的分泌性蛋白，和(b)能夠使所述靶與其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶之間的結(jié)合親和力Kd增加至約I. 5倍(即，50% )至任選地約1000倍，或約I. 5 倍至約100倍，或約2倍至25倍，或約2倍至約50倍，或約I. 5倍至約25倍，或約I. 5倍至約50倍，例如至少I. 5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍、11倍、12倍、13 倍、14倍、15倍、16倍、17倍、18倍、19倍或20倍，或達(dá)到500倍，或達(dá)到200倍，或達(dá)到150 倍，或達(dá)到100倍，或達(dá)到90倍，或達(dá)到80倍，或達(dá)到70倍，或達(dá)到60倍，或達(dá)到50倍，或達(dá)到40倍，或達(dá)到30倍。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了負(fù)調(diào)節(jié)劑，所述負(fù)調(diào)節(jié)劑(a)以約10_5M或更小，例如10_6M或更小，或10_7M或更小，或10_8M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合靶，例如附錄A(或SEQ ID NOS :1-88)中任一項(xiàng)的分泌性蛋白，和(b)能夠使所述靶與其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶之間的結(jié)合親和力Kd減小至2/3 (即，50% )至任選地約1/1000，或約2/3至約 1/100，或約1/2至1/25倍，或約1/2至約1/50，或約2/3至約1/25，或約2/3至約1/50，例如至少 2/3、1/2、1/3、1/4、1/5、1/6、1/7、1/8、1/9、1/10、1/11、1/12、1/13、1/14、1/15、1/16、 1/17、1/18、1/19 或 1/20，或 1/500，或 1/200，或 1/150，或 1/100，或 1/90，或 1/80，或 1/70， 或 1/60，或 1/50，或 1/40，或 1/30。還可將此類多肽結(jié)合劑中的任何多肽結(jié)合劑經(jīng)歷純化，以獲得大體上均質(zhì)的組合物，例如具有至少約90%、95%、97%、98%、99%或99. 5%的純度。本發(fā)明還提供了制備無(wú)菌藥物組合物的方法(所述方法包括以例如治療有效量向此類多肽結(jié)合劑、此類多肽結(jié)合劑的無(wú)菌組合物中加入無(wú)菌的藥學(xué)上可接受的稀釋劑) 和施用此類無(wú)菌組合物例如以調(diào)節(jié)(增強(qiáng)或減弱)包含分泌性蛋白的復(fù)合物的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法。應(yīng)理解，本文中描述的每一個(gè)特征或?qū)嵤┓桨富蚪M合是本發(fā)明的任何方面的非限定性的說(shuō)明性實(shí)例，這樣其意指可與本文中描述的任何其它特征或?qū)嵤┓桨富蚪M合組合。 例如，當(dāng)用語(yǔ)言例如“一個(gè)實(shí)施方案”、“某些實(shí)施方案”、“其它實(shí)施方案”、“特定的示例性實(shí)施方案”和/或“另一個(gè)實(shí)施方案”描述特征時(shí)，這些類型的實(shí)施方案的每一個(gè)是意欲與本文中描述的任何其它特征或組合特征組合而不必列出每一個(gè)可能的組合的特征的非限定性實(shí)例。此類特征或特征的組合用于本發(fā)明的任何方面。類似地，當(dāng)方法描述鑒定特征在于某些特征的多肽結(jié)合劑例如抗體時(shí)，本發(fā)明也涉及特征在于那些特征的多肽結(jié)合劑。當(dāng)公開(kāi)落在范圍內(nèi)的值的實(shí)例時(shí)，設(shè)想這些實(shí)例中的任一實(shí)例作為范圍的可能端點(diǎn)，設(shè)想這樣的端點(diǎn)之間的任何和所有數(shù)值，并且可預(yù)期上端點(diǎn)與下端點(diǎn)的任何和所有組合。在考慮下列本發(fā)明的詳細(xì)說(shuō)明后，本發(fā)明的許多另外方面和有利方面對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將變得很顯然，所述詳細(xì)說(shuō)明描述了其目前優(yōu)選的實(shí)施方案。本申請(qǐng)中提及的所有美國(guó)專利、美國(guó)專利申請(qǐng)公布、美國(guó)專利申請(qǐng)、外國(guó)專利、外國(guó)專利申請(qǐng)以及非專利公布通過(guò)引用整體并入本文。附圖簡(jiǎn)述圖I是舉例說(shuō)明在測(cè)試多肽結(jié)合劑存在或不存在的情況下進(jìn)行的結(jié)合的測(cè)量的示意圖。圖2是舉例說(shuō)明在第二復(fù)合物組分存在或不存在的情況下進(jìn)行的結(jié)合的測(cè)量的示意圖。圖3顯示預(yù)測(cè)的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)抗體在(A)不同配體濃度；(B)不同調(diào)節(jié)劑濃度(非激動(dòng)劑抗體)；和(C)不同調(diào)節(jié)劑濃度(激動(dòng)劑抗體)上對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的作用。圖4顯示來(lái)自檢測(cè)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的調(diào)節(jié)的平衡溶液親和力測(cè)量的模擬數(shù)據(jù)。圖5顯示XOMA 052對(duì)IL-I β與IL-IsRI (A)以及與IL-IsRII (B)結(jié)合的親和力的影響。圖6顯示(A)XOMA 052以IL-I β對(duì)于細(xì)胞測(cè)定的EC5tl來(lái)中和IL-I β活性，和(B， C) IL-I β與IL-IsRI的相互作用的負(fù)親和力調(diào)節(jié)導(dǎo)致改變的對(duì)IL-I β的細(xì)胞劑量-反應(yīng)， 從而導(dǎo)致IC5tl的增加。
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圖7顯示注射抗體/IL-I β復(fù)合物后48小時(shí)保留在循環(huán)中的總IL-I β的量。圖8是T2D中不同藥物類型調(diào)節(jié)IL-I β活性的圖示。圖9顯示來(lái)自如實(shí)施例2中所述，鑒定調(diào)節(jié)GCSF-GCSFR結(jié)合相互作用的抗體的固相親和力測(cè)量測(cè)定的結(jié)果。

圖10顯示AlO (Β6)抗體對(duì)GCSFR-轉(zhuǎn)染的BAF3細(xì)胞的GCSF依賴性結(jié)合。圖11顯示來(lái)自鑒定調(diào)節(jié)hINS-INSR結(jié)合相互作用的抗體的基于細(xì)胞的親和力測(cè)量測(cè)定的樣本結(jié)果。圖12顯示來(lái)自測(cè)量測(cè)試抗體對(duì)hINS-INSR結(jié)合相互作用的調(diào)節(jié)的基于細(xì)胞的親和力測(cè)量測(cè)定的樣本結(jié)果。圖13顯示來(lái)自測(cè)量測(cè)試抗-INSR抗體刺激pIRS_l磷酸化的能力的測(cè)定的示例性結(jié)果。圖14是顯示在固定濃度的不同測(cè)試抗體存在或不存在的情況下來(lái)自pIRS-Ι測(cè)定的胰島素ECSO值的表。圖15顯示飼喂高脂飲食并且用部分激動(dòng)劑抗-INSR抗體處理的20周齡DIO小鼠的血糖水平A.葡萄糖水平的線形圖。B.顯示在部分激動(dòng)劑抗-INSR抗體注射后血糖的統(tǒng)計(jì)上顯著降低的葡萄糖水平的條形圖。圖16舉例說(shuō)明部分激動(dòng)劑抗-INSR抗體的施用改善DIO小鼠的血糖控制-X葡萄糖耐量測(cè)試時(shí)間過(guò)程空腹血糖水平；C.葡萄糖耐量測(cè)試；曲線下面積(AUC)。圖17顯示正調(diào)節(jié)劑抗-INSR抗體增強(qiáng)DIO小鼠的胰島素敏感性A.胰島素耐量測(cè)試時(shí)間過(guò)程；B.空腹血糖水平；C.胰島素耐量測(cè)試；曲線下面積(AUC)。圖18顯示正調(diào)節(jié)劑抗-INSR抗體改善DIO小鼠的血糖控制A.葡萄糖耐量測(cè)試時(shí)間過(guò)程；B.空腹血糖水平；C.胰島素耐量測(cè)試；曲線下面積(AUC)。圖19舉例說(shuō)明與對(duì)內(nèi)源配體的劑量反應(yīng)相比較的來(lái)自部分變構(gòu)激動(dòng)劑的劑量反應(yīng)(A)或在變構(gòu)激動(dòng)劑存在或不存在的情況下由配體產(chǎn)生的激活(B)。圖20顯示與對(duì)內(nèi)源配體的劑量反應(yīng)相比較的來(lái)自正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑抗體的劑量反應(yīng) (A)或在正變構(gòu)調(diào)節(jié)劑抗體存在和不存在的情況下內(nèi)源配體的劑量反應(yīng)(B)。圖21舉例說(shuō)明一組單獨(dú)的部分變構(gòu)激動(dòng)劑相對(duì)于內(nèi)源配體胰島素的激活參數(shù)。 數(shù)據(jù)獲自Akt在Ser473上的磷酸化％的測(cè)量。圖22舉例說(shuō)明在lOug/ml部分變構(gòu)激動(dòng)劑抗體存在的情況下，相對(duì)于在陰性對(duì)照抗體存在的情況下對(duì)內(nèi)源配體的最大反應(yīng)的胰島素的激活性質(zhì)。數(shù)據(jù)獲自Akt在Ser473 上的磷酸化％的測(cè)量。詳述本發(fā)明提供了作為多肽結(jié)合劑的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)藥物、其用途以及鑒定所述動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)藥物的多種方法。此類動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑可通過(guò)改變信號(hào)復(fù)合物組分的裝配和解離的動(dòng)力學(xué)速率常數(shù)(kinetic rate constant)或通過(guò)其它機(jī)制(包括改變信號(hào)復(fù)合物的結(jié)構(gòu)狀態(tài) (例如通過(guò)結(jié)合過(guò)渡態(tài)(transition state))和加速信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的激活)誘導(dǎo)對(duì)細(xì)胞反應(yīng)的正或負(fù)作用。信號(hào)復(fù)合物的調(diào)節(jié)可導(dǎo)致對(duì)信號(hào)輸入的敏感性的增強(qiáng)或減弱以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的伴隨增強(qiáng)或減弱。此類動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑的施用增強(qiáng)或減弱細(xì)胞途徑的敏感性和/或細(xì)胞反應(yīng)的絕對(duì)水平。本發(fā)明的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑，取決于它們的性質(zhì)，可用作調(diào)節(jié)劑、增強(qiáng)劑 (potentiator)、調(diào)控劑(regulator)、效應(yīng)物或敏化物(sensitizer)。許多抗體藥物通過(guò)結(jié)合細(xì)胞表面受體或其同源配體并且消除配體結(jié)合及激活受體的能力來(lái)阻斷信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。此類阻斷藥物通過(guò)阻止受體-配體復(fù)合物的形成來(lái)化學(xué)計(jì)量地介導(dǎo)它們的作用。然而，大當(dāng)被異常激活時(shí)與疾病相關(guān)的多數(shù)途徑，在正常生物學(xué)中也具有正常的發(fā)育或內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定(homeostatic)作用。該觀察對(duì)于免疫系統(tǒng)尤其如此，在所述免疫系統(tǒng)中高效力細(xì)胞因子例如TNF- α和IL-6在病理背景中驅(qū)動(dòng)炎癥但在感染的控制中也具有重要的有益作用。某些疾病的成功治療因而可能需要減弱而非完全抑制信號(hào)途徑來(lái)恢復(fù)正常生理狀態(tài)，從而具有可接受的副作用特征。預(yù)期由本發(fā)明提供的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑提供此類有利方面。其它治療性藥物通過(guò)結(jié)合細(xì)胞表面受體和改變受體的活性影響細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。此類直接激動(dòng)劑藥物可通過(guò)模擬配體的天然活性來(lái)介導(dǎo)它們的作用，從而具有固有活性，即它們不需要配體的存在來(lái)介導(dǎo)它們的作用。其它治療性藥物通過(guò)結(jié)合配體來(lái)影響細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。此類間接激動(dòng)劑藥物可通過(guò)改變配體穩(wěn)定性或效價(jià)來(lái)介導(dǎo)它們的作用。生物過(guò)程通常以連續(xù)而非二分(binary)方式被調(diào)控，從而在許多情況下，途徑活性的調(diào)節(jié)可以是比完全途徑阻斷或刺激更適當(dāng)?shù)闹委煵呗?。?duì)途徑活性的調(diào)節(jié)而非對(duì)完全途徑阻斷或刺激進(jìn)行功能性的基于細(xì)胞的篩選是很費(fèi)力的并且可能不容易以高通量方式來(lái)容易地進(jìn)行，因?yàn)榇祟惡Y選通常需要已知濃度的測(cè)試化合物并且可能對(duì)測(cè)試化合物制劑中的任何雜質(zhì)敏感。特別地，對(duì)途徑活性的調(diào)節(jié)進(jìn)行高通量功能性的基于細(xì)胞的篩選的能力因不能透過(guò)細(xì)胞的分子(其不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)環(huán)境)，特別地因在所使用的產(chǎn)生系統(tǒng)中可具有不同的表達(dá)水平、純度和穩(wěn)定性的程度的重組生物分子而受到限制。此外，某些結(jié)合相互作用可能對(duì)功能性篩選的測(cè)量不具有信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)輸出(例如，在誘餌受體、誘餌底物或靶的無(wú)活性形式的情況下)，這使得難以鑒定干擾這些相互作用的試劑。本發(fā)明克服了這些不利方面并且提供了以高通量方式鑒定期望的活性和期望的潛能的正和負(fù)動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑的方法。定義術(shù)語(yǔ)"化合物"是指任何化合物，有機(jī)的或無(wú)機(jī)的，內(nèi)源或外源的，包括但不限于多肽、蛋白質(zhì)、肽、小分子、核酸(例如，DNA和RNA)、碳水化合物、脂質(zhì)、脂肪酸、類固醇、嘌呤、喃唳、肽模擬物、聚酮(polyketides)及其衍生物、結(jié)構(gòu)類似物或組合?！皟?nèi)源的”意指天然存在于哺乳動(dòng)物中的，然而“外源的”意指非天然存在于哺乳動(dòng)物中的，例如施用的外源化合物。術(shù)語(yǔ)“多肽結(jié)合劑”是指能夠特異性結(jié)合抗原例如靶或其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶，或能夠以可測(cè)量的結(jié)合親和力結(jié)合抗原的多肽。多肽結(jié)合劑的實(shí)例包括抗體、肽體、多肽和肽(任選地綴合于其它肽部分或非肽部分)。多肽結(jié)合劑可結(jié)合的抗原可包括任何蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)分子，所述分子能夠引起抗體反應(yīng)，或能夠以大于非特異性結(jié)合的可檢測(cè)的結(jié)合親和力結(jié)合多肽結(jié)合劑。動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)多肽結(jié)合劑結(jié)合的抗原可包括靶、靶的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶和/或包含靶和其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶的復(fù)合物。術(shù)語(yǔ)“抗體”以最廣義使用，包括完全裝配的抗體、四聚體抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)、可結(jié)合抗原的抗體片段(例如，F(xiàn)ab’、F’(ab)2、Fv、單鏈抗體、雙鏈抗體)以及包含前述抗體的重組肽(只要它們展示期望的生物活性)?！懊庖咔虻鞍住被颉八木垠w抗體”是由兩條重鏈和兩條輕鏈組成的四聚體糖蛋白， 所述重鏈和輕鏈各自包含可變區(qū)和恒定區(qū)?？乖Y(jié)合部分可通過(guò)重組DNA技術(shù)或通過(guò)酶促或化學(xué)切割完整抗體來(lái)產(chǎn)生。抗體片段或抗原結(jié)合部分包括，除其它以外，F(xiàn)ab、Fab'、 F(ab/ )2、Fv、結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)、互補(bǔ)決定區(qū)(CTR)片段、單鏈抗體(scFv)、單鏈抗體片段、嵌合抗體、雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體、微小抗體(minibody)、線性抗體；螯合重組抗體、三抗體或雙抗體、內(nèi)抗體(intrabody)、納米抗體、小模塊免疫藥物(SMIP)、抗原-結(jié)合-結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白融合蛋白、駱駝化抗體、含VHH抗體或其變體或衍生物，以及包含免疫球蛋白的至少一部分的多肽，所述部分足以賦予所述多肽特異性抗原結(jié)合，例如1、2、3、
4、5或6個(gè)⑶R序列，只要所述抗體保持期望的生物活性即可?！皢慰寺】贵w”是指獲自大體上同源的抗體群體的抗體，S卩，除了可以以少量存在的可能天然發(fā)生的突變外，包括所述群體的單一抗體是相同的。如本文中所使用的“抗體變體”是指在天然抗體可變區(qū)結(jié)構(gòu)域中包含至少一個(gè)氨基酸置換、缺失或插入的抗體多肽序列。變體可與未修飾的抗體大體上同源或大體上同一。如本文中所使用的，“嵌合抗體”是指包含來(lái)源于通常源自不同物種的兩種不同的抗體(參見(jiàn)，美國(guó)專利No. 4，816，567)的序列的抗體。最常見(jiàn)地，嵌合抗體包含人和嚙齒類動(dòng)物的抗體片段，通常是人恒定區(qū)和小鼠可變區(qū)。“中和抗體”是能夠消除或顯著減弱其結(jié)合的抗原的生物功能的抗體分子。因此， “中和”抗體能夠消除或顯著減弱生物功能，例如酶活性、配體結(jié)合或細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)?！胺蛛x的”抗體是已被鑒定并且與其天然環(huán)境的組分分離和從其回收的抗體。其天然環(huán)境的污染組分是可干擾所述抗體的診斷或治療用途的物質(zhì)，并且可包括酶、激素和其它蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)溶質(zhì)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，抗體將被純化為(I)如通過(guò)Lowry法測(cè)定的，按抗體重量計(jì)高于95%，最優(yōu)選按重量計(jì)高于99%，(2)足以通過(guò)使用旋杯式序列分析儀(spinning cup sequenator)獲得N末端或內(nèi)部氨基酸序列的至少15個(gè)殘基的程度, 或(3)通過(guò)在還原或非還原條件下使用考馬斯藍(lán)或優(yōu)選銀染法進(jìn)行的SDS-PAGE純化為均質(zhì))。分離的抗體包括重組細(xì)胞內(nèi)的原位抗體，因?yàn)榭贵w的天然環(huán)境的至少一個(gè)組分可以不存在。然而，通常地分離的抗體將通過(guò)至少一個(gè)純化步驟來(lái)制備。如本文中所使用的，“特異性結(jié)合”是“抗原特異性的”，是“特異于”抗原的或與抗原“免疫反應(yīng)的”的抗體是指以大于對(duì)于相似序列的其它抗原的親和力的親和力結(jié)合抗原的本發(fā)明的抗體或多肽結(jié)合劑。在一個(gè)方面，本發(fā)明的多肽結(jié)合劑或其片段、變體或衍生物將以與其對(duì)其它物種(即非人物種)的相似抗原的結(jié)合親和力相比較更大的親和力結(jié)合人抗原，但識(shí)別并且結(jié)合靶的直系同源物的多肽結(jié)合劑在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，作為“特異于”其同源抗原的抗體或其片段的多肽結(jié)合劑顯示抗體的可變區(qū)識(shí)別并且以可檢測(cè)的偏愛(ài)性結(jié)合期望的抗原(例如，當(dāng)期望的抗原是多肽時(shí)，抗體的可變區(qū)能夠通過(guò)結(jié)合親和力的可測(cè)量的差異區(qū)別抗原多肽與相同家族的其它已知多肽，盡管在家族成員之間可能存在局部序列同一性、同源性或相似性)。應(yīng)理解，特異性抗體也可通過(guò)與抗體的可變區(qū)外的序列，特別地分子的恒定區(qū)中的序列的相互作用與其它蛋白質(zhì)(例如，在ELISA技術(shù)中，金黃色葡萄球菌(S. aureus)蛋白A或其它抗體)相互作用。用于本發(fā)明的方法的測(cè)定多肽結(jié)合劑例如抗體的結(jié)合特異性的篩選測(cè)定法在本領(lǐng)域是公知的并且在本領(lǐng)域中進(jìn)行常規(guī)地實(shí)施。關(guān)于此類測(cè)定法的綜述，參見(jiàn)Harlow等人(編)，Antibodies A Laboratory Manual ；Cold Spring Harbor Laboratory ；Cold Spring Harbor,NY(1988), 第6章。用于本發(fā)明的抗體可使用本領(lǐng)域已知的任何方法來(lái)產(chǎn)生。術(shù)語(yǔ)“表位”是指任何分子的能夠被選擇性結(jié)合劑在一個(gè)或多個(gè)抗原結(jié)合區(qū)上識(shí)別和結(jié)合的部分。表位通常由分子的化學(xué)活性表面基團(tuán)例如氨基酸或糖類側(cè)鏈組成，并且具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征以及特定的電荷特征。本文中使用的表位可以是連續(xù)的或非連續(xù)的。術(shù)語(yǔ)“衍生物”，當(dāng)與本發(fā)明的多肽結(jié)合劑和多肽結(jié)合使用時(shí)，是指通過(guò)這類技術(shù) (如遍在蛋白化、至治療劑或診斷劑的綴合、標(biāo)記(例如，利用放射性核素或不同的酶)、共價(jià)聚合物連接例如PEG化(利用聚乙二醇的衍生化)和通過(guò)通常不存在于人蛋白質(zhì)中的氨基酸例如鳥(niǎo)氨酸的化學(xué)合成產(chǎn)生的插入或置換)來(lái)化學(xué)修飾的多肽。衍生物保持本發(fā)明的未衍生的分子的結(jié)合性質(zhì)。“可檢測(cè)的部分”或“標(biāo)記”是指可通過(guò)分光光度計(jì)、光化學(xué)、生物化學(xué)、免疫化學(xué)或化學(xué)方法檢測(cè)的組合物。例如，有用的標(biāo)記包括32P、35S、熒光染料、電子致密試劑、酶(例如，常用于ELISA的)、生物素-鏈霉抗生物素蛋白、地高辛、半抗原和針對(duì)其的抗血清或單克隆抗體是可獲得的蛋白質(zhì)或具有與另一種標(biāo)記的核酸分子的序列互補(bǔ)性的核酸分子?？蓹z測(cè)的部分通常產(chǎn)生可測(cè)量的信號(hào)，例如放射性、生色或熒光信號(hào)，所述信號(hào)可用于定量樣品中結(jié)合的可檢測(cè)部分的量?！半摹被颉肮央摹笔嵌贪被嵝蛄?，通常在長(zhǎng)度上為3至100個(gè)氨基酸殘基并且包括天然存在的氨基酸殘基和殘基的非天然存在類似物(其可被單獨(dú)使用或可與天然存在的氨基酸殘基組合使用以給肽提供特殊構(gòu)象特異性或特殊生物活性，例如對(duì)蛋白酶解的抗性)。肽包括肽序列的重復(fù)，可包括2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)拷貝的頭尾或頭頭相接排列的氨基酸序列?？蓪㈦木Y合于非肽部分，例如[擴(kuò)展]。肽包括二聚體、三聚體或高級(jí)多聚體(例如，通過(guò)綴合于其它聚合物或非聚合物部分例如PEG形成的)?！岸嚯摹笔歉L(zhǎng)的氨基酸序列，通常在長(zhǎng)度上為100或更多個(gè)氨基酸殘基，并且包括天然存在的氨基酸殘基和殘基的非天然存在類似物，所述類似物可被單獨(dú)使用或可與天然存在的氨基酸殘基組合使用以給多肽提供特殊構(gòu)象特異性或特殊生物活性，例如對(duì)蛋白酶解的抗性。如本文中所使用的，“肽”是包含一個(gè)或多個(gè)融合至所有或部分免疫球蛋白(Ig)恒定區(qū)的肽的融合多肽。參見(jiàn)，例如，美國(guó)專利No. 6，660，843。肽可以是結(jié)合抗原的任何天然存在或重組制備或化學(xué)合成的肽。肽可以是重復(fù)的，可包括2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個(gè)拷貝的頭尾或頭頭相接排列的氨基酸序列。Ig恒定區(qū)的部分可包括至少一個(gè)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域(例如，CHU CH2、CH3和/或CH4)、多個(gè)結(jié)構(gòu)域(例如，CH2和CH3)、多個(gè)拷貝的結(jié)構(gòu)域(例如，CH2-CH2)、保持期望的活性的恒定結(jié)構(gòu)域的任何片段，例如負(fù)責(zé)循環(huán)中免疫球蛋白的延長(zhǎng)的半衰期的清道夫受體表位，或其任何組合。“小”分子或“小”有機(jī)分子在本文中被定義為具有約1000道爾頓或更小的分子量的非聚合物有機(jī)化合物。如本文中所使用的，“信號(hào)復(fù)合物”是蛋白質(zhì)和/或內(nèi)源或外源化合物的裝配體，其可介導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)。信號(hào)復(fù)合物的實(shí)例包括但不限于與膜結(jié)合受體結(jié)合的配體、與底物結(jié)合的酶和與傳播參與信號(hào)級(jí)聯(lián)的生化反應(yīng)相關(guān)的任何細(xì)胞分子。信號(hào)復(fù)合物還可包括共受體、輔因子、支架蛋白、變構(gòu)調(diào)節(jié)劑和許多其它類型的參與細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白質(zhì)和分子。信號(hào)復(fù)合物可短暫形成或可長(zhǎng)期形成。信號(hào)復(fù)合物的分子成份(constituent)或組分可隨時(shí)間過(guò)去而變化并且可取決于各組分的激活狀態(tài)和細(xì)胞環(huán)境。信號(hào)復(fù)合物可經(jīng)歷可化學(xué)修飾和調(diào)節(jié)，所述修飾和調(diào)節(jié)可誘導(dǎo)連串的對(duì)復(fù)合物的作用，包括轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的微妙改變、 完全滅活和基本滅活或正調(diào)節(jié)及負(fù)調(diào)節(jié)。信號(hào)復(fù)合物的組分可以是蛋白質(zhì)，例如附錄A(或 SEQ ID NOS 1-88)中任一項(xiàng)的分泌性蛋白，其可與其它蛋白質(zhì)和/或化合物締合存在于復(fù)合物中(“復(fù)合的”)或與其分開(kāi)地存在(“未復(fù)合的”)。術(shù)語(yǔ)“治療有效量”在本文中用于表示有效地改善或減輕與信號(hào)復(fù)合物的異常 (例如，異常高或異常低)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的疾病的癥狀或體征的本發(fā)明的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑組合物的量。如本文中所使用的，“結(jié)合”是兩種或更多種不同的分子實(shí)體之間物理締合，其因由一種或多種弱力(包括氫鍵、范德瓦爾斯、離子-偶極和疏水作用)和強(qiáng)力離子鍵組成的非共價(jià)相互作用的特定網(wǎng)絡(luò)而引起。結(jié)合的水平或程度可用親和力來(lái)測(cè)量。親和力或“結(jié)合親和力”是兩個(gè)或更多個(gè)不同分子實(shí)體之間的結(jié)合相互作用的強(qiáng)度的量度，其可通過(guò)平衡結(jié)合常數(shù)或動(dòng)力學(xué)結(jié)合率參數(shù)來(lái)確定。適當(dāng)?shù)某?shù)或參數(shù)以及它們的測(cè)量單位的實(shí)例在本領(lǐng)域是公知的，包括但不限于平衡結(jié)合常數(shù)(Ka)，例如，約IO5M4或更高，約ΙΟΙ1或更高， 約IO7IT1或更高，約IO8IT1或更高，約IO9IT1或更高，約101°]^1或更高，約IO11ITi或更高或約 IO12IT1或更高；平衡離解常數(shù)(Kd)，例如，約1(Γ5Μ或更小，或約1(Γ6Μ或更小，或約1(Γ7Μ或更小，或約10_8M或更小，或約10_9M或更小，或約KTkiM或更小，或約10_nM或更小，或約10_12M 或更??；結(jié)合速率(例如，秒Λ moF1)和解離速率(例如，秒I)。在Ka的情況下，更高的值表示“更強(qiáng)”或“增強(qiáng)的”結(jié)合親和力，而在Kd的情況下，更低的值表示“更強(qiáng)”或“增強(qiáng)的”結(jié)合親和力。如本文中所使用的，“增強(qiáng)的”結(jié)合率參數(shù)表示增加的停留時(shí)間、更快的締合或更慢的解離。如本文中所使用的“減弱的”結(jié)合率參數(shù)表示減少的停留時(shí)間、更慢的締合或更快的解離。在結(jié)合速率的情況下，更高的值表示更快或更頻繁的締合，從而通常導(dǎo)致增強(qiáng)的結(jié)合親和力。在解離速率的情況下，更低的數(shù)值通常表示更慢的解離，從而通常導(dǎo)致更強(qiáng)的結(jié)合親和力。然而，結(jié)合速率與解離速率的比率表明結(jié)合親和力，如在后面更詳細(xì)地解釋的?？芍苯踊蜷g接測(cè)量?jī)煞N化合物之間，例如抗體與抗原之間或信號(hào)復(fù)合物的第一組分和第二組分之間的親和力。可使用表示親和力和/或與親和力成比例的替代性質(zhì)進(jìn)行親和力的間接測(cè)量。此類替代性質(zhì)包括信號(hào)復(fù)合物的第一組分與第二組分的結(jié)合的量或水平，或預(yù)示著第一組分對(duì)第二組分的表觀結(jié)合親和力或與第一組分對(duì)第二組分的表觀結(jié)合親和力相關(guān)的第一組分或第二組分的生物物理特征。具體實(shí)例包括在第一組分或第二組分的亞飽和濃度上測(cè)量第一組分對(duì)第二組分的結(jié)合的量或水平?？蓽y(cè)量的其它生物物理特征包括但不限于第一組分和第二組分之一或兩者的凈分子電荷、旋轉(zhuǎn)活性(rotational activity)、擴(kuò)散速率、解鏈溫度(melting temperature)、靜電牽引(electrostatic steering)或構(gòu)象?？蓽y(cè)量的其它生物物理特征包括測(cè)定在不同溫度、pH或離子強(qiáng)度的影響下結(jié)合相互作用的穩(wěn)定性。測(cè)量的親和力取決于進(jìn)行測(cè)量所使用的確切條件，包括，除許多其它因素外，結(jié)合組分的濃度、測(cè)定設(shè)置、結(jié)合組分的效價(jià)、緩沖液組成、pH、離子強(qiáng)度和溫度以及添加至結(jié)合反應(yīng)的其它組分例如變構(gòu)調(diào)節(jié)劑和調(diào)控劑?？蓪⒍亢投ㄐ苑椒ㄓ糜跍y(cè)量結(jié)合相互作用的絕對(duì)強(qiáng)度和相對(duì)強(qiáng)度。表觀親和力是在其中親和力在結(jié)合反應(yīng)中被條件或組分例如變構(gòu)調(diào)節(jié)劑、抑制劑、結(jié)合組分效價(jià)等改變的條件下，兩種或更多種不同分子實(shí)體之間的結(jié)合相互作用的強(qiáng)度的量度。如本文中所使用的，“亞飽和濃度”是結(jié)合反應(yīng)中顯著低于結(jié)合親和力Kd的一種或多種組分的濃度和/或在結(jié)合反應(yīng)中低于占據(jù)其它組分的所有結(jié)合位點(diǎn)所需的濃度的一種組分的濃度。在亞飽和條件下，結(jié)合反應(yīng)中顯著百分比的結(jié)合組分之一具有可用的結(jié)合位點(diǎn)。如本文中所使用的，“生物物理測(cè)定法”是以絕對(duì)或相對(duì)方式測(cè)量至少兩種化合物之間的結(jié)合、締合、解離、結(jié)合親和力、結(jié)合水平或結(jié)合率參數(shù)的任何方法。生物物理測(cè)定法通常在體外進(jìn)行并且可用純化的結(jié)合組分、未純化的組分、細(xì)胞結(jié)合的組分以及純化的組分與細(xì)胞結(jié)合的組分的組合來(lái)進(jìn)行。激動(dòng)劑是用于描述結(jié)合并且激活信號(hào)復(fù)合物組分的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的一種類型的配體或藥物的術(shù)語(yǔ)。改變信號(hào)復(fù)合物組分(例如受體)的活性的能力(也稱為激動(dòng)劑的功效) 是區(qū)別其與拮抗劑(一種也結(jié)合信號(hào)復(fù)合物組分但不激活信號(hào)復(fù)合物組分的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的受體配體)的性質(zhì)。激動(dòng)劑的功效可以是正的，引起信號(hào)復(fù)合物組分的活性增加，或可以是負(fù)的，引起信號(hào)復(fù)合物組分的活性的減弱。完全激動(dòng)劑結(jié)合并且激活信號(hào)復(fù)合物組分，在該信號(hào)復(fù)合物上展示完全的功效。部分激動(dòng)劑也結(jié)合并且激活給定的信號(hào)復(fù)合物組分，但相對(duì)于完全激動(dòng)劑在所述信號(hào)復(fù)合物組分上只具有部分功效。反激動(dòng)劑是結(jié)合與該信號(hào)復(fù)合物組分的激動(dòng)劑相同的信號(hào)復(fù)合物組分結(jié)合位點(diǎn)并且逆轉(zhuǎn)信號(hào)復(fù)合物組分的組成型活性的試劑。反激動(dòng)劑產(chǎn)生激動(dòng)劑的相反藥理作用。共激動(dòng)劑與其它共激動(dòng)劑一起作用以一起產(chǎn)生期望的作用。在不同方面，本文中公開(kāi)的激動(dòng)劑用作變構(gòu)激動(dòng)劑。它們結(jié)合受體的部分，所述部分與活性配體結(jié)合位點(diǎn)不同，并且未明顯改變配體與受體的結(jié)合親和力，例如它們使結(jié)合親和力的改變小于2倍或3倍。它們也未明顯地影響其受體的配體激活的EC50，例如它們使EC50的改變小于2倍或3倍。此類變構(gòu)激動(dòng)劑以最大激動(dòng)劑反應(yīng)組成型地激活受體， 所述最大激動(dòng)劑反應(yīng)為配體的最大激動(dòng)劑反應(yīng)的80%或更低，例如15% -80%,20-80%, 20-60 %、20 % -40 %或15 % -30 %。在某些實(shí)施方案中，變構(gòu)激動(dòng)劑以最大激動(dòng)劑反應(yīng)組成型地激活受體，所述最大激動(dòng)劑反應(yīng)為配體的最大激動(dòng)劑反應(yīng)的至少約15 %、20 %、25 %、 30%,35%,40% ;和達(dá)到配體的最大激動(dòng)劑反應(yīng)的45%、50%、55%、60%、65%、70%、75% 或80%。應(yīng)理解，可設(shè)想這些范圍端點(diǎn)的任何端點(diǎn)的任何組合而不必引述每一個(gè)可能的組合。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了以10_5、10_6、10_7、10_8、10_9M或更小(其中更小的數(shù)值表示更大的結(jié)合親和力)的Kd親和力結(jié)合受體的變構(gòu)激動(dòng)劑。不希望受本發(fā)明的理論束縛，變構(gòu)激動(dòng)劑的弱激動(dòng)劑活性用于模擬天然基線配體激活水平的作用，同時(shí)允許外源施用的配體具有其正常作用。在某些實(shí)施方案中，變構(gòu)激動(dòng)劑是部分變構(gòu)激動(dòng)劑。拮抗劑阻斷激動(dòng)劑對(duì)受體的激活。選擇性激動(dòng)劑對(duì)于一種特定類型的信號(hào)復(fù)合物組分具有選擇性。 此外，其還可以是上述類型的任何類型。在示例性實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了變構(gòu)激動(dòng)劑多肽結(jié)合劑，例如抗體，所述多肽結(jié)合劑以至少10_5、10_6、10_7、10_8、10_9M或更小(其中更小的數(shù)值表示更大的結(jié)合親和力)的親和力結(jié)合附錄A(或SEQ ID NOS :1-88)中的任何分泌性蛋白，和(a)當(dāng)在體外測(cè)定中測(cè)量時(shí)展示為天然配體的最大激動(dòng)劑活性的20%-80%的最大激動(dòng)劑活性，(b)當(dāng)存在時(shí)，對(duì)配體對(duì)于受體的EC50的改變不超過(guò)2倍，以及(c)當(dāng)存在時(shí)，對(duì)配體對(duì)于受體的KD的改變不超過(guò)2倍。激動(dòng)劑的效力通常利用其EC50值的倒數(shù)來(lái)確定?？赏ㄟ^(guò)測(cè)定引起激動(dòng)劑的半數(shù)最大生物反應(yīng)所需的激動(dòng)劑的濃度來(lái)計(jì)算給定的激動(dòng)劑的EC50值。EC50值越低，激動(dòng)劑的效力越大。拮抗劑是一種類型的配體或藥物，其在結(jié)合信號(hào)復(fù)合物組分(例如，受體)時(shí)本身不引發(fā)生物反應(yīng)，但阻斷或減弱激動(dòng)劑介導(dǎo)的反應(yīng)。拮抗劑對(duì)它們的同源信號(hào)復(fù)合物組分可具有親和力但不具有功效，并且結(jié)合會(huì)破壞相互作用，從而抑制激動(dòng)劑或反激動(dòng)劑在受體上的功能。拮抗劑通過(guò)結(jié)合信號(hào)復(fù)合物組分上的活性位點(diǎn)或變構(gòu)位點(diǎn)來(lái)介導(dǎo)它們的作用，或它們?cè)谕ǔ２粎⑴c信號(hào)復(fù)合物組分的活性的生物調(diào)控的唯一結(jié)合位點(diǎn)上相互作用。 拮抗劑活性可以是可逆的或不可逆的，這取決于拮抗劑-受體復(fù)合物的壽命，這從而取決于結(jié)合信號(hào)復(fù)合物組分的拮抗劑的性質(zhì)。大部分拮抗劑通過(guò)與內(nèi)源配體或底物在受體上的結(jié)構(gòu)確定的結(jié)合位點(diǎn)上競(jìng)爭(zhēng)來(lái)發(fā)揮它們的效力。拮抗劑未顯示激活它們所結(jié)合的信號(hào)復(fù)合物組分的功效。然而，一旦結(jié)合，拮抗劑可抑制激動(dòng)劑、反激動(dòng)劑和部分激動(dòng)劑的功能。在功能性拮抗劑測(cè)定中，劑量-反應(yīng)曲線測(cè)量一系列濃度的拮抗劑逆轉(zhuǎn)激動(dòng)劑的活性的能力的效力。拮抗劑的效力通常通過(guò)其IC50 值來(lái)確定?？赏ㄟ^(guò)測(cè)定引起激動(dòng)劑的最大生物反應(yīng)的一半抑制所需的拮抗劑的濃度來(lái)計(jì)算給定的拮抗的IC50值。IC50越低，拮抗劑的效力越大。競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑在與配體或激動(dòng)劑相同的結(jié)合位點(diǎn)(活性部位)可逆地結(jié)合信號(hào)復(fù)合物組分，但不激活信號(hào)復(fù)合物組分，從而與激動(dòng)劑競(jìng)爭(zhēng)信號(hào)復(fù)合物組分上的相同結(jié)合位點(diǎn)。非競(jìng)爭(zhēng)性或變構(gòu)拮抗劑結(jié)合與激動(dòng)劑的結(jié)合位點(diǎn)分開(kāi)的結(jié)合位點(diǎn)，通過(guò)該分開(kāi)的結(jié)合位點(diǎn)將它們的作用施加于該信號(hào)復(fù)合物組分。因此，它們不與激動(dòng)劑競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合。無(wú)競(jìng)爭(zhēng)拮抗劑與非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑相異在于在它們可結(jié)合分開(kāi)的變構(gòu)結(jié)合位點(diǎn)之前，它們需要信號(hào)復(fù)合物組分激活。鑒定動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑的方法不受本發(fā)明的理論束縛，本公開(kāi)內(nèi)容提供了信號(hào)復(fù)合物的兩個(gè)組分(第一組分，Cl和第二組分，C2)與動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑(M)之間的相互作用的動(dòng)力學(xué)干擾(kinetic perturbation)可在被數(shù)學(xué)上描述為K，C1C2 = KC1C2(1+M/KMC1) (1+M/KMC2)(1+M/K[C1C2]M)其中組分之間的結(jié)合平衡常數(shù)(K' C1C2)的變化是組分之間的平衡常數(shù)(Kac2)、動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑濃度(M)、動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑對(duì)于復(fù)合物的親和力(KK1C2]M)和動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑對(duì)于第一組分(Ksci)或第二組分(Ksc2)的親和力的函數(shù)。在其中信號(hào)復(fù)合物是受體-配體復(fù)合物并且調(diào)節(jié)劑是抗體的情況下，抗體對(duì)受體-配體相互作用的動(dòng)力學(xué)干擾在數(shù)學(xué)上可被描述為
其中受體-配體結(jié)合平衡常數(shù)(K' EL)的變化是受體-配體平衡常數(shù)(K1J、抗體濃度(A)、抗體對(duì)于復(fù)合物的親和力(Kma)和抗體對(duì)于受體(Kak)或配體(IV)的親和力的函數(shù)。動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑以使靶對(duì)于其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)減弱或增強(qiáng)的方式結(jié)合靶或其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶、或靶與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶的復(fù)合物。例如，當(dāng)靶是受體或配體時(shí)，配體對(duì)于其受體的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)在動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑存在的情況下被減弱或增強(qiáng)。具有完全阻斷活性的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑在該分析中代表了邊界條件，因?yàn)楫?dāng)KKlffi]M充分高時(shí)，K' ac；2接近無(wú)窮大。該模型的一個(gè)含意(implication)是當(dāng)動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑的濃度 ([M])高于動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑/抗原相互作用的平衡離解常數(shù)(Kd)足以飽和結(jié)合配體時(shí)，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)的程度不依賴于動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑濃度([M])。因此，相互作用的調(diào)節(jié)與對(duì)于復(fù)合物的親和力相對(duì)對(duì)于組分的親和力的比率相關(guān)，其中[M]大于調(diào)節(jié)劑與其抗原的KD。本公開(kāi)內(nèi)容提供了 動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑與靶和/或其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶相互作用的生物物理性質(zhì)可用于預(yù)測(cè)動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑對(duì)靶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的功能作用。因此，可基于它們的對(duì)于以復(fù)合形式存在的靶(和/或其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶)相對(duì)于以未復(fù)合形式存在的靶(和/或其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶)的相對(duì)親和力來(lái)鑒定改變信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明預(yù)期可以以下列方式預(yù)測(cè)動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑(M)對(duì)信號(hào)復(fù)合物的兩個(gè)組分(第一組分，Cl和第二組分， C2)之間的相互作用的動(dòng)力學(xué)干擾 K[C1C2]M 或 K[MC2]C1 或 K[MC1]C2〈 Kmc2 或 Kmci 導(dǎo)致正動(dòng)力學(xué)調(diào)T1
K[C1C2]M 或 K[MC2]C1 或 K[MC1]C2 — Kmc2 或 Kmci 不導(dǎo)致動(dòng)力學(xué)調(diào)T1 [Ο Ο3] K[C1C2]M 或 K[MC2]C1 或 K[MC1]C2〉Kmc2 或 Kmci 導(dǎo)致負(fù)動(dòng)力學(xué)調(diào)T1在其中信號(hào)復(fù)合物是受體(R)-配體(L)復(fù)合物，并且動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑是抗體(A)的情況下，可以以下列方式預(yù)測(cè)動(dòng)力學(xué)干擾K[EL]A或K[AL]K或K[賺< Kal或Kak導(dǎo)致正動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)K[EL]A或K[AL]K或K[賺=Kal或Kak不導(dǎo)致動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)K[KL]A或K[AL]K或K[賺> Kal或Kak導(dǎo)致負(fù)動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)在某些實(shí)施方案中，動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑例如抗體(A)可通過(guò)其在第一組分或第二組分的任何給定的亞飽和濃度(例如配體(L)濃度)上改變結(jié)合相互作用例如受體(R)-配體 (L)相互作用的能力來(lái)鑒定，如圖3A中所描述的。圖3A中的數(shù)據(jù)產(chǎn)生自可逆的相互作用模型，假定受體配體相互作用的親和力為10pM、500pM或ΙΟηΜ。動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑可有效地使受體配體相互作用的親和力和相應(yīng)的劑量反應(yīng)從500pM相互作用偏移至如所描繪的IOpM(正調(diào)節(jié)劑)或IOnM(負(fù)調(diào)節(jié)劑)。在某些實(shí)施方案中，動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑在給定的配體濃度上將產(chǎn)生更高水平的R-L結(jié)合，使測(cè)定曲線向左偏移(正調(diào)節(jié))。在其它實(shí)施方案中，動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)劑在給定的配體濃度上產(chǎn)生更低水平的R-L結(jié)合，使測(cè)定曲線向右偏移(負(fù)調(diào)節(jié))。在某些實(shí)施方案中，偏移是一致的，如圖3A顯示的。在其它實(shí)施方案中，偏移是不一致的，這反映了復(fù)合物中包括其它因子例如輔助蛋白、受體內(nèi)化等。將圖3A的500pM親和力處的數(shù)據(jù)用于產(chǎn)生圖3B和3C，其中描述了不同濃度的非激動(dòng)劑(圖3B)或激動(dòng)劑(圖3C)抗體對(duì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用，假定抗原的濃度是固定。對(duì)于舉例說(shuō)明性靶，胰島素受體的結(jié)合特征與功能作用的相互關(guān)系描述于下面表 I中。表I
靶結(jié)合特征KD比率功能作用RLR-L--+K[RL]A < Kr, Kl正調(diào)節(jié)-++K[al]r〈 Kl正調(diào)節(jié)+-+K[AR]L < Kr正調(diào)節(jié)-++K[al]r〉Kl負(fù)調(diào)節(jié)+-+K[AR]L〉Kr負(fù)調(diào)節(jié)顯示預(yù)測(cè)的效應(yīng)匹配結(jié)合特征的數(shù)據(jù)的舉例說(shuō)明性實(shí)例示于下面表2中。表權(quán)利要求
1.一種鑒定調(diào)節(jié)信號(hào)復(fù)合物的第一組分與第二組分之間的結(jié)合的候選動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)抗體的方法，包括如下步驟(a)測(cè)量在測(cè)試抗體存在的情況下，所述第一組分對(duì)于所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，(b)測(cè)量在所述測(cè)試抗體不存在的情況下，所述第一組分對(duì)于所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)；和(c)當(dāng)所述測(cè)試抗體在步驟(a)和(b)測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)上顯示I.5倍至1000倍差異，則將所述測(cè)試抗體鑒定為候選動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)抗體。
2.權(quán)利要求I所述的方法，其中如果所述測(cè)試抗體使所述第一組分與所述第二組分之間的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)增強(qiáng)至約I. 5倍至1000倍，則所述測(cè)試抗體被鑒定為候選正調(diào)節(jié)抗體。
3.權(quán)利要求2所述的方法，其中所述測(cè)試抗體使所述第一組分與所述第二組分之間的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)增強(qiáng)至約2倍至200倍。
4.權(quán)利要求I所述的方法，其中如果所述測(cè)試抗體使所述第一組分與所述第二組分之間的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)減弱至約2/3至1/1000倍，則所述測(cè)試抗體被鑒定為候選負(fù)調(diào)節(jié)抗體。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其中所述測(cè)試抗體使所述第一組分與所述第二組分之間的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)減弱至約1/2至1/200倍。
6.一種鑒定調(diào)節(jié)信號(hào)復(fù)合物的第一組分與第二組分之間的結(jié)合的候選動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)抗體的方法，包括如下步驟(a)(i)測(cè)量在所述第二組分存在的情況下測(cè)試抗體對(duì)于所述第一組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，或(ii)測(cè)量在所述第一組分存在的情況下測(cè)試抗體對(duì)于所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)；和(b)(i)測(cè)量在所述第二組分不存在的情況下，所述測(cè)試抗體對(duì)于所述第一組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，或( )測(cè)量在所述第一組分不存在的情況下所述測(cè)試抗體對(duì)于所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)；和(c)當(dāng)所述測(cè)試抗體在步驟(a)和(b)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)上顯示1.5 倍至1000倍差異時(shí)，將所述測(cè)試抗體鑒定為候選動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)抗體。
7.權(quán)利要求6所述的方法，其中如果步驟(a)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為步驟(b)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的約I. 5倍至1000倍，則所述測(cè)試抗體被鑒定為候選正調(diào)節(jié)抗體。
8.權(quán)利要求7所述的方法，其中步驟(a)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為步驟(b)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率常數(shù)的約2倍至200倍。
9.權(quán)利要求6的方法，其中如果步驟(b)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為步驟(a)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的約I. 5倍至1000倍，則所述測(cè)試抗體被鑒定為候選負(fù)調(diào)節(jié)抗體。
10.權(quán)利要求9所述的方法，其步驟(b)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為步驟(a)中測(cè)量的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的約2倍至200倍。
11.權(quán)利要求6-10中任一項(xiàng)所述的方法，其中測(cè)量所述測(cè)試抗體對(duì)于單獨(dú)的所述第一組分的結(jié)合親和率或結(jié)合率參數(shù)。
12.權(quán)利要求6-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中測(cè)量所述測(cè)試抗體對(duì)于單獨(dú)的所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)。12A.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體對(duì)于包含第一組分和第二組分的復(fù)合物的結(jié)合親和力KD為約KT5IT1或更小，并且所述測(cè)試抗體不可檢測(cè)地結(jié)合單獨(dú)的所述第一組分或單獨(dú)的所述第二組分。
13.權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其中如果選自(A)所述測(cè)試抗體對(duì)于包含所述第一組分(Cl)和所述第二組分(C2)的復(fù)合物的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，任選地KK1C2](B)所述第一組分對(duì)于包含抗體和所述第二組分的復(fù)合物的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)， 任選地!^^”，或(C)所述第二組分對(duì)于包含抗體和所述第一組分的復(fù)合物的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，任選地Kfclto，的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為選自(I)所述測(cè)試抗體對(duì)于單獨(dú)的所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，任選地Ksc2，或(2)所述測(cè)試抗體對(duì)于單獨(dú)的所述第一組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，任選地ΚΜα，的約I. 5倍至1000倍，那么所述測(cè)試抗體(M)被鑒定為候選正調(diào)節(jié)抗體。
14.權(quán)利要求13所述的方法，其中(A)、⑶或(C)的任一個(gè)或多個(gè)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為(I)或(2)的任一個(gè)或多個(gè)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的約2倍或200 倍。
15.權(quán)利要求13所述的方法，其中(A)、⑶或(C)的任一個(gè)或多個(gè)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為(I)和(2)兩者的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的約I. 5倍至1000倍。
16.權(quán)利要求13所述的方法，其中(A)、⑶或(C)的任一個(gè)或多個(gè)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為(I)和(2)兩者的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的約2倍至200倍。
17.權(quán)利要求13-16中任一項(xiàng)所述的方法，其中(I)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)強(qiáng)于 (2)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)。
18.權(quán)利要求13-16中任一項(xiàng)所述的方法，其中(2)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)強(qiáng)于(I)的結(jié)合親和或結(jié)合率參數(shù)。
19.權(quán)利要求13所述的方法，其中所述結(jié)合親和力為平衡離解常數(shù)KD，并且KK1C2]M、 K[MC2]C1或Kmc2的任一個(gè)或多個(gè)為Ksc2或Kki的任一個(gè)或多個(gè)的約2/3至1/1000。
20.權(quán)利要求19所述的方法，其中Κ_]Α為Ksc2的約2/3至1/1000。
21.權(quán)利要求19所述的方法，其中Κ_α為KMe2的約2/3至1/1000。
22.權(quán)利要求19所述的方法，其中K_e2為Ksc2的約2/3至1/1000。
23.權(quán)利要求19所述的方法，其中Κ_]Α為Ksci的約2/3至1/1000。
24.權(quán)利要求19所述的方法，其中Κ_α為Ksci的2/3至1/1000。
25.權(quán)利要求19所述的方法，其中K_C2為Ksci的約2/3至1/1000。
26.權(quán)利要求13所述的方法，其中所述結(jié)合親和力是平衡締合常數(shù)KA，并且KK1C2]M、 K[MC2]C1或KKl]e2的任一個(gè)或多個(gè)為Ksc2或Kki的任一個(gè)或多個(gè)的約I. 5倍至1000倍。
27.權(quán)利要求1-12所述的方法，其中如果選自(I)測(cè)試抗體對(duì)于單獨(dú)的所述第二組分 (C2)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，任選地KK2，(2)測(cè)試抗體對(duì)于單獨(dú)的所述第一組分(Cl) 的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，任選地Ksci，的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為選自(A)測(cè)試抗體對(duì)于包含所述第一組分和第二組分的復(fù)合物的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，任選地 K[C1C2]M, (B)所述第一組分對(duì)于包含所述抗體和所述第二組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)， 任選地!^^”，或(C)所述第二組分對(duì)于包含所述抗體和所述第一組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，任選地Kfcl]e2，的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的約I. 5倍至1000倍，則所述測(cè)試抗體(M)被鑒定為候選負(fù)調(diào)節(jié)抗體。
28.權(quán)利要求27所述的方法，其中(I)或(2)的任一個(gè)或多個(gè)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為(A)、(B)或(C)的任一個(gè)或多個(gè)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的約2倍或200 倍。
29.權(quán)利要求27所述的方法，其中(I)或(2)的任一個(gè)或多個(gè)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為所有(A)、(B)和(C)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的約I. 5倍至1000倍。
30.權(quán)利要求27所述的方法，其中(I)或(2)的任一個(gè)或多個(gè)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的強(qiáng)度為所有(A)、(B)和(C)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的約2倍至200倍。
31.權(quán)利要求27-30中任一項(xiàng)所述的方法，其中(I)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)強(qiáng)于(2)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)。
32.權(quán)利要求27-30中任一項(xiàng)所述的方法，其中(2)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)強(qiáng)于(I)的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)。
33.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述結(jié)合親和力是平衡離解常數(shù)KD，，并且Kk2或Kki的任一個(gè)為KK1C2]M、K[C2]C1或Kmc2的任一個(gè)的約2/3至1/1000。
34.權(quán)利要求33所述的方法，其中Ksc2為haC2]M 的約 2/3 至 1/1000。
35.權(quán)利要求33所述的方法，其中Ksc2為i[MC2]ci 的約 2/3 至 1/1000。
36.權(quán)利要求33所述的方法，其中Ksc2為i[Mci]c2 的約 2/3 至 1/1000。
37.權(quán)利要求33所述的方法，其中Ksci為haC2]M 的約 2/3 至 1/1000。
38.權(quán)利要求33所述的方法，其中Ksci為i[MC2]ci 的約 2/3 至 1/1000。
39.權(quán)利要求33所述的方法，其中Ksci為i[Mci]c2 的約 2/3 至 1/1000。
40.權(quán)利要求27所述的方法，其中所述結(jié)合親和力為平衡締合常數(shù)KA，并且Kk2或K,的任一個(gè)或多個(gè)為K[C1C2]M、K[MC2]C1或K[MC1]C2的任一個(gè)或多個(gè)的約I. 5倍至1000倍。
41.權(quán)利要求1-40中任一項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟(a)中，將所述測(cè)試抗體和所述第二組分與多個(gè)不同濃度的所述第一組分接觸。
42.權(quán)利要求1-40中任一項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟(a)中，將所述測(cè)試抗體和所述第一組分與多個(gè)不同濃度的所述第二組分接觸。
43.權(quán)利要求1-40中任一項(xiàng)所述的方法，其中，在步驟(a)中，將多個(gè)不同濃度的所述測(cè)試抗體與所述第一組分和所述第二組分接觸。
44.權(quán)利要求2-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體結(jié)合的抗原是所述第一組分并且所述測(cè)試抗體與所述第一組分的濃度相比較處于飽和濃度。
45.權(quán)利要求2-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體結(jié)合的抗原是所述第二組分并且所述測(cè)試抗體與所述第二組分的濃度相比較處于飽和濃度。
46.權(quán)利要求44或45所述的方法，其中所述測(cè)試抗體的濃度大于或等于所述測(cè)試抗體對(duì)于包含所述第一組分和所述第二組分的復(fù)合物的KD。
47.權(quán)利要求46所述的方法，其中所述第二組分的濃度低于所述測(cè)試抗體對(duì)于所述第一組分的Kd。
48.權(quán)利要求47所述的方法，其中所述第一組分的濃度對(duì)于所述第一組分對(duì)所述第二組分的結(jié)合處于飽和濃度。
49.權(quán)利要求48所述的方法，其中所述第一組分的濃度在所述第一組分與所述第二組分的相互作用的約EC2tl至EC8tl的范圍內(nèi)。
50.權(quán)利要求2-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中在一個(gè)或多個(gè)濃度的所述第二組分存在的情況下將一個(gè)或多個(gè)濃度的所述測(cè)試抗體與多個(gè)不同濃度的所述第一組分接觸。
51.權(quán)利要求2-6中任一項(xiàng)所述的方法，其中在一個(gè)或多個(gè)濃度的所述第一組分存在的情況下將一個(gè)或多個(gè)濃度的所述測(cè)試抗體與多個(gè)不同濃度的所述第二組分接觸。
52.權(quán)利要求7-8或13-26中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體對(duì)于包含所述第一組分和所述第二組分的復(fù)合物處于飽和濃度。
53.權(quán)利要求52所述的方法，其中所述測(cè)試抗體的濃度大于或等于所述測(cè)試抗體對(duì)于包含所述第一組分和所述第二組分的復(fù)合物的KD。
54.權(quán)利要求53所述的方法，其中所述第二組分的濃度大于所述第二組分對(duì)于所述第一組分的Kd。
55.權(quán)利要求54所述的方法，其中所述第一組分的濃度對(duì)于所述第二組分為飽和濃度。
56.權(quán)利要求7-8或13-26中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體對(duì)于包含所述第一組分和所述第二組分的復(fù)合物處于飽和濃度。
57.權(quán)利要求56所述的方法，其中所述抗體的濃度在所述第一組分與所述第二組分的相互作用的約EC2tl至EC8tl的范圍內(nèi)。
58.權(quán)利要求57所述的方法，其中所述第二組分的濃度大于所述第二組分對(duì)于所述第一組分的Kd。
59.權(quán)利要求58所述的方法，其中所述第一組分的濃度對(duì)于所述第二組分處于飽和濃度。
60.權(quán)利要求9-10或27-40中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體結(jié)合的抗原是所述第一組分并且所述測(cè)試抗體對(duì)于所述第一組分處于飽和濃度。
61.權(quán)利要求60所述的方法，其中所述抗體的濃度在所述第一組分與所述第二組分的相互作用的約EC2tl至EC8tl的范圍內(nèi)。
62.權(quán)利要求61所述的方法，其中所述第二組分的濃度大于所述第二組分對(duì)于所述第一組分的Kd。
63.權(quán)利要求62所述的方法，其中所述第一組分的濃度對(duì)于所述第二組分處于飽和濃度。
64.權(quán)利要求9-10或27-40中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體結(jié)合的抗原是所述第二組分并且所述測(cè)試抗體對(duì)于所述第二組分處于飽和濃度。
65.權(quán)利要求60所述的方法，其中所述抗體的濃度在所述第一組分與所述第二組分的相互作用的約EC2tl至EC8tl的范圍內(nèi)。
66.權(quán)利要求61所述的方法，其中所述第二組分的濃度大于所述第二組分對(duì)于所述第一組分的Kd。
67.權(quán)利要求62所述的方法，其中所述第一組分的濃度對(duì)于所述第二組分而言為飽和濃度。
68.權(quán)利要求1-67中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括在步驟(a)之前，測(cè)定多個(gè)測(cè)試抗體對(duì)包含所述第一組分和所述第二組分的復(fù)合物的結(jié)合親和力，任選地具有為KT5M的平衡離解常數(shù)Kd或更強(qiáng)的結(jié)合親和力。
69.權(quán)利要求1-68中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括在步驟(a)之前，測(cè)定多個(gè)測(cè)試抗體對(duì)所述第一組分的結(jié)合親和力，任選地具有為KT5M的平衡離解常數(shù)Kd或更強(qiáng)的結(jié)合親和力。
70.權(quán)利要求1-69中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括在步驟(a)之前，測(cè)定多個(gè)測(cè)試抗體對(duì)所述第二組分的結(jié)合親和力，任選地具有為KT5M的平衡離解常數(shù)Kd或更強(qiáng)的結(jié)合親和力。
71.權(quán)利要求1-70中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括在步驟(a)之前，通過(guò)將一個(gè)或多個(gè)不同的突變引入親代抗體來(lái)產(chǎn)生多種測(cè)試抗體，所述測(cè)試抗體是親代抗體的變體。
72.權(quán)利要求1-71中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括測(cè)量在所述測(cè)試抗體存在和不存在的情況下，所述第一組分對(duì)于結(jié)合伴侶的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)，其中所述結(jié)合伴侶不是所述第二組分。
73.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述結(jié)合伴侶是誘餌受體、清除受體或備用信號(hào)途徑組分。
74.權(quán)利要求72或73所述的方法，其包括鑒定不顯著改變所述第一組分對(duì)于所述結(jié)合伴侶的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)的測(cè)試抗體。
75.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體選自抗體片段、scFv、Fab、 CDR、嚙齒類動(dòng)物抗體、哺乳動(dòng)物抗體、人抗體、嵌合抗體和人源化抗體。
76.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體是單克隆抗體。
77.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)選自前述任一項(xiàng)的平衡締合常數(shù)Ka、平衡離解常數(shù)KD、結(jié)合速率、解離速率和替代參數(shù)。
78.權(quán)利要求77所述的方法，其中所述替代參數(shù)是所述第一組分在亞飽和濃度的所述第一組分或所述第二組分下對(duì)所述第二組分的結(jié)合的量或水平。
79.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體、所述第一組分或所述第二組分全部存在于溶液中。
80.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所述測(cè)試抗體、所述第一組分和所述第二組分之一連接于固相。
81.權(quán)利要求80所述的方法，其中所述連接是非共價(jià)的。
82.權(quán)利要求80所述的方法，其中將所述測(cè)試抗體、所述第一組分和所述第二組分之一包被在珠粒上。
83.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分或所述第二組分的至少一種在細(xì)胞表面上表達(dá)。
84.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分在細(xì)胞表面上表達(dá)并且所述第二組分在不同細(xì)胞表面上表達(dá)。
85.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是可溶性配體并且所述第二組分是膜結(jié)合受體。
86.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是膜結(jié)合受體并且所述第二組分是可溶性配體。
87.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是膜結(jié)合配體并且所述第二組分是膜結(jié)合受體。
88.權(quán)利要求86或87所述的方法，其中所述膜結(jié)合受體選自7-跨膜受體、G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)、腎上腺素能受體、神經(jīng)遞質(zhì)受體、嗅覺(jué)受體、阿片樣物質(zhì)受體、趨化因子受體、 視紫質(zhì)、受體酪氨酸激酶、生長(zhǎng)因子受體、整聯(lián)蛋白和toll樣受體。
89.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是酶并且所述第二組分是所述酶的底物。
90.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是兩種或更多種化合物的復(fù)合物。
91.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第二組分是兩種或更多種化合物的復(fù)合物。
92.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是細(xì)胞因子或趨化因子并且所述第二組分是所述第一組分的受體。
93.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是生長(zhǎng)因子并且所述第二組分是所述第一組分的受體。
94.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是IL-Iβ并且所述第二組分是I型IL-I受體(IL-IRI)。
95.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括測(cè)量在所述測(cè)試抗體存在和不存在的情況下，所述第一組分和/或所述第二組分對(duì)于第三組分的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)。
96.權(quán)利要求95的方法，其中所述第一組分是IL-Ιβ，所述第二組分是IL-1RI，并且所述第三組分是IL-I受體輔助蛋白(IL-IRAcP)。
97.權(quán)利要求96所述的方法，其還包括鑒定測(cè)試抗體，在所述測(cè)試抗體存在或不存在的情況下，所述測(cè)試抗體在IL-I β與IL-IRAcP之間的結(jié)合親和力或結(jié)合率參數(shù)上未展示超過(guò)2倍差異。
98.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是GCSF并且所述第二組分是 GCSFR。
99.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是GCSFR并且所述第二組分是GCSF。
100.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是TNFa并且所述第二組分是TNFRl或2。
101.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述第一組分是TNFRl或2并且所述第二組分是TNF a。
102.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括重新克隆和表達(dá)步驟(c)中鑒定的抗體。
103.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括純化步驟(c)中鑒定的抗體。
104.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括測(cè)定步驟(c)中鑒定的抗體的序
105.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括添加或替換Fe區(qū)域或其片段。
106.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括利用無(wú)菌的藥學(xué)上可接受的稀釋劑將包含步驟(c)中鑒定的所述測(cè)試抗體的至少3個(gè)CDR的抗體配制在無(wú)菌組合物中。
107.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括給動(dòng)物施用包含步驟(c)中鑒定的所述測(cè)試抗體的至少3個(gè)CDR的抗體。
108.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其還包括測(cè)量在所述測(cè)試抗體存在和不存在的情況下由所述信號(hào)復(fù)合物介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的水平。
109.權(quán)利要求108所述的方法，其中在磷酸化測(cè)量、離子流測(cè)定、分子運(yùn)輸測(cè)定或基因表達(dá)測(cè)定中測(cè)量由所述信號(hào)復(fù)合物介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的水平。
110.權(quán)利要求108-109中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體使所述信號(hào)復(fù)合物的所述第一組分的EC5tl增加至約I. 5倍至約1000倍。
111.權(quán)利要求108-109中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體未顯著改變對(duì)由所述第一組分產(chǎn)生的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的最大激動(dòng)劑反應(yīng)。
112.權(quán)利要求108-109中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體使對(duì)由所述信號(hào)復(fù)合物產(chǎn)生的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的最大激動(dòng)劑反應(yīng)減小至約2/3至1/1000。
113.權(quán)利要求108-109中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述測(cè)試抗體使由所述信號(hào)復(fù)合物產(chǎn)生的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的EC50減小至約2/3至1/1000。
114.權(quán)利要求108-109中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述候選抗體增加對(duì)由所述第一組分產(chǎn)生的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的最大激動(dòng)劑反應(yīng)至少10%。
115.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述候選抗體未顯著地減少對(duì)所述第一組分、所述第二組分或包含所述第一和所述第二組分的復(fù)合物的清除。
116.由前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法鑒定的抗體。
117.—種正調(diào)節(jié)抗體，其以IO-5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合SEQ ID NOS : I-88中任一項(xiàng)的分泌蛋白質(zhì)，其能夠使所述分泌蛋白質(zhì)與其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶之間的結(jié)合親和力Kd增加至約I. 5至1000倍。
118.權(quán)利要求117所述的抗體，其中所述正調(diào)節(jié)抗體能夠使所述分泌蛋白質(zhì)與其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶之間的結(jié)合親和力Kd增加至約2倍至200倍。
119.一種負(fù)調(diào)節(jié)抗體，其以KT5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合SEQ ID NOS :I-88中任一項(xiàng)的分泌蛋白質(zhì)，其能夠使所述分泌蛋白質(zhì)與其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶之間的結(jié)合親和力Kd減小至 2/3 至 1/1000。
120.權(quán)利要求119所述的抗體，其中所述負(fù)調(diào)節(jié)抗體能夠使所述分泌蛋白質(zhì)與其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)伴侶之間的結(jié)合親和力Kd減小至約1/2至1/200。
121.—種正調(diào)節(jié)抗體(M)，其增強(qiáng)所述第一組分(Cl)對(duì)信號(hào)復(fù)合物的所述第二組分 (C2)的結(jié)合，所述抗體特征在于下列平衡離解常數(shù)Kd的結(jié)合性質(zhì)(i)所述抗體以KT5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合Cl、C2或包含Cl和C2的復(fù)合物(C1C2)的至少一種，和(ii) K[C1C2]M、K[MC2]C1 或Kmc2的任一個(gè)或多個(gè)為Ksc2或Ksci的任一個(gè)或多個(gè)的約2/3至1/1000， 其中Cl或C2為SEQ ID NOS :1_88中任一項(xiàng)的分泌蛋白質(zhì)。
122.權(quán)利要求121所述的正調(diào)節(jié)抗體，其中K[C1C2]M、K[MC2]C1或K[MCI ]C2的任一個(gè)或多個(gè)為Kmc2或Ksci的任一個(gè)的約1/2至1/200。
123.權(quán)利要求121所述的正調(diào)節(jié)抗體，其中K[C1C2]M、K[MC2]C1或K[MCI ]C2的任一個(gè)或多個(gè)為Kk2 或 Ksci 的約 2/3 至 1/1000。
124.—種負(fù)調(diào)節(jié)抗體(M)，其減弱所述第一組分(Cl)對(duì)信號(hào)復(fù)合物的所述第二組分 (C2)的結(jié)合，所述抗體的特征在于下列平衡離解常數(shù)Kd的結(jié)合性質(zhì)(i)所述抗體以KT5M 或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合Cl、C2或包含Cl和C2的復(fù)合物(C1C2)的任一種，和(ii) Kic2或Kki的任一個(gè)或多個(gè)為Kki⑵M、K[MC2]C1或Kmc2的任一個(gè)或多個(gè)的約2/3至1/1000， 其中Cl或C2為SEQ ID NOS :1_88中任一項(xiàng)的分泌蛋白質(zhì)。
125.權(quán)利要求124的負(fù)調(diào)節(jié)抗體，其中KAe2或ΚΑα的任一個(gè)或多個(gè)為K[C1C2]M、K[MC2]C1 ^K[MC1]C2的任一個(gè)或多個(gè)的約1/2至1/200。
126.權(quán)利要求124的負(fù)調(diào)節(jié)抗體，其中KAe2或ΚΑα的任一個(gè)或多個(gè)為K[C1C2]M、K[MC2]C1 BKK[MC1]C2 的約 2/3 至 1/1000。
127.—種正調(diào)節(jié)抗體，其以10_5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合⑴IL-I β、(ii) IL-IRl或(iii)包含IL-I β和IL-IRl的復(fù)合物的任一種，所述抗體能夠使IL-I β與 IL-IRl之間的結(jié)合親和力Kd增強(qiáng)至約I. 5倍至1000倍。
128.—種負(fù)調(diào)節(jié)抗體，其以10_5Μ或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合⑴IL-Ιβ、(ii) IL-IRl或(iii)包含IL-I β和IL-IRl的復(fù)合物的任一種，所述抗體能夠使IL-I β與 IL-IRl之間的結(jié)合親和力Kd減弱至約2/3至1/1000。
129.—種正調(diào)節(jié)抗體，其以10_5Μ或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合(i) TNF a、(ii) TNFRl 或(iii)包含TNFa和TNFRl的復(fù)合物的任一種，所述抗體能夠使TNFa與TNFRl之間的結(jié)合親和力Kd增強(qiáng)至約I. 5倍至1000倍。
130.一種負(fù)調(diào)節(jié)抗體，其以KT5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合(i)TNF a、(ii)TNFRl 或(iii)包含TNFa和TNFRl的復(fù)合物的任一種，所述抗體能夠使TNFa與TNFRl之間的結(jié)合親和力Kd減弱至約2/3至1/1000。
131.一種正調(diào)節(jié)抗體，其以10_5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合(i) TNF a、(ii) TNFRl 或(iii)包含TNFa和TNFR2的復(fù)合物的任一種，所述抗體能夠使TNFa與TNFR2之間的結(jié)合親和力Kd增強(qiáng)至約I. 5倍至1000倍。
132.—種負(fù)調(diào)節(jié)抗體，其以KT5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合(i) TNF a、(ii) TNFRl 或(iii)包含TNFa和TNFR2的復(fù)合物的任一種，所述抗體能夠使TNFa與TNFR2之間的結(jié)合親和力Kd減弱至約2/3至1/1000。
133.—種正調(diào)節(jié)抗體，其以10_5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合(i)GCSF、(ii)GCSFR 或(iii)包含GCSF和GCSFR的復(fù)合物的任一種，所述抗體能夠使GCSF與GCSFR之間的結(jié)合親和力Kd增強(qiáng)至約I. 5倍至1000倍。
134.一種負(fù)調(diào)節(jié)抗體，其以10_5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合(i)GCSF、(ii)GCSFR 或(iii)包含GCSF和GCSFR的復(fù)合物的任一種，所述抗體能夠使GCSF與GCSFR之間的結(jié)合親和力Kd減弱至約2/3至1/1000。
135.—種正調(diào)節(jié)抗體，其以10_5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合(i)胰島素、(ii)胰島素受體或(iii)包含胰島素和胰島素受體的復(fù)合物的任一種，所述抗體能夠使胰島素與胰島素受體之間的結(jié)合親和力Kd增強(qiáng)至約I. 5倍至1000倍。
136.—種負(fù)調(diào)節(jié)抗體，其以10_5M或更小的平衡離解常數(shù)Kd結(jié)合⑴胰島素、(ii)胰島素受體或(iii)包含胰島素和胰島素受體的復(fù)合物的任一種，所述抗體能夠使胰島素與胰島素受體之間的結(jié)合親和力Kd減弱至約2/3至1/1000。
137.權(quán)利要求117-136中任一項(xiàng)所述的抗體，其為純化的單克隆抗體。
138.編碼權(quán)利要求116-137所述的抗體的任一個(gè)的多核苷酸。
139.編碼權(quán)利要求116-137所述的抗體的任一個(gè)的重鏈的多核苷酸。
140.編碼權(quán)利要求116-137所述的抗體的任一個(gè)的輕鏈的多核苷酸。
141.包含權(quán)利要求138-140所述中任一項(xiàng)的多核苷酸的宿主細(xì)胞。
142.包含權(quán)利要求139和140所述的多核苷酸的宿主細(xì)胞。
143.一種產(chǎn)生抗體的方法，包括在適合的條件下將權(quán)利要求141-142所述的宿主細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)基中，然后從所述宿主細(xì)胞或培養(yǎng)基分離所述抗體。
144.由權(quán)利要求143所述的方法產(chǎn)生的抗體。
145.一種制備無(wú)菌藥物組合物的方法，包括將無(wú)菌的藥學(xué)上可接受的稀釋劑添加至前述權(quán)利要求120-141或148中任一項(xiàng)所述的抗體中。
146.一種無(wú)菌組合物，其包含前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的抗體和無(wú)菌的藥學(xué)上可接受的稀釋劑。
147.—種給哺乳動(dòng)物施用組合物的方法，包括施用權(quán)利要求146所述的無(wú)菌組合物。
148.權(quán)利要求147所述的方法，其中所述施用增強(qiáng)包含所述分泌蛋白質(zhì)的復(fù)合物的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
149.權(quán)利要求147所述的方法，其中所述施用減弱包含所述分泌蛋白質(zhì)的復(fù)合物的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。
150.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述第一組分是IL-Iβ，所述第二組分是IL-1R1， 并且所述結(jié)合伴侶是IL-1R2或IL-I輔助蛋白。
151.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述第一組分是TNFa，所述第二組分是TNFRl，并且所述結(jié)合伴侶是TNFR2。
152.權(quán)利要求72所述的方法，其中所述第一組分是TNFa，所述第二組分是TNFR2，并且所述結(jié)合伴侶是TNFRl。
全文摘要
本發(fā)明提供了肽結(jié)合試劑，例如抗體，其展示動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié)生物信號(hào)復(fù)合物例如受體-配體復(fù)合物的結(jié)合和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的能力；鑒定此類多肽結(jié)合試劑的方法，制備此類多肽結(jié)合試劑的方法，包含此類多肽結(jié)合試劑的組合物，和使用此類多肽結(jié)合試劑的方法。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102597775SQ201080048214
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2010年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月25日
發(fā)明者丹尼爾·貝丁格, 瑪麗娜·勒爾, 約翰·科爾賓, 羅伯特·鮑爾, 馬克·萊斯利·懷特 申請(qǐng)人:佐馬技術(shù)有限公司