專利名稱：一種婦炎康片的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥檢測(cè)領(lǐng)域，涉及一種婦炎康片的檢測(cè)方法，更具體地說(shuō)是檢測(cè)婦炎康片中芍藥苷的方法，
背景技術(shù)：
婦炎康片以丹參、赤芍、當(dāng)歸、醋延胡索、炒川楝子、醋香附、醋三棱、醋莪術(shù)、山藥、 炒芡實(shí)、苦參、黃柏、土茯苓等13味中藥組成，經(jīng)過(guò)中藥材炮制、提取、濃縮、干燥、粉碎、制粒、壓片、包衣而成，為純中藥制劑。方中丹參、赤芍、當(dāng)歸活血化瘀，為君藥，醋延胡索、炒川楝子、醋香附合用行氣解郁止痛，加之醋三棱、醋莪術(shù)增強(qiáng)行氣止痛兼軟堅(jiān)散結(jié)，山藥、炒芡實(shí)滋腎止帶，苦參、黃柏清熱燥濕，土茯苓解毒利濕，諸藥配合可達(dá)到活血化瘀，清熱解毒、 軟堅(jiān)散結(jié)、止痛利濕的目的，能消除炎癥，解除病人腰腹疼痛，減少白帶，有治愈慢性盆腔炎等婦科炎癥的療效。具有清熱利濕，理氣活血，散結(jié)消腫作用。用于濕熱下注，毒淤互阻所治帶下病。癥見(jiàn)帶下量多、色黃、氣臭、少腹痛、腰骶痛，口苦咽干，陰道炎、慢性附件炎、慢性盆腔炎見(jiàn)上述證候者。赤芍是方中的君藥，而原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中沒(méi)有赤芍的檢測(cè)方法，所以增加赤芍活性成分的檢測(cè)，具有保證產(chǎn)品質(zhì)量意義。赤茍為毛茛科植物茍藥 Paeonia lactiflora Pall.或川赤茍 Paeonia veitchii Lynch的干燥根。味苦，微寒。歸肝經(jīng)。具有清熱涼血，散瘀止痛作用。用于溫毒發(fā)斑，吐血衄血，目赤腫痛，肝郁脅痛，經(jīng)閉痛經(jīng)，癥瘕腹痛，跌撲損傷，癰腫瘡瘍。藥理作用1.抗血栓形成作用赤芍煎劑15_20g(生藥)/kg給大鼠灌胃，使血栓形成時(shí)間明顯延長(zhǎng)，長(zhǎng)度縮短，重量減輕；凝血酶原時(shí)間和白陶土部分凝血活酶時(shí)間延長(zhǎng)，優(yōu)球蛋白溶解時(shí)間縮短，表明對(duì)血凝有顯著抑制作用。赤芍提取液125-250mg(生藥)/ml，除使凝血酶原時(shí)間、部分凝血活酶時(shí)間明顯延長(zhǎng)外，250mg(生藥)/ml也明顯抑制凝血酶凝集牛纖維蛋白原，在500 1000mg/ml時(shí)均完全不凝。此外能激活纖溶酶原，使凝固的纖維蛋白溶解，因此赤芍通過(guò)抑制凝血酶和激活纖溶酶原而發(fā)揮抗血栓作用。赤芍精(d-兒茶精， d-catechin) 200mg/只灌服，每日1次，連續(xù)46日，使高脂飼料飼養(yǎng)的大鼠血小板聚集時(shí)間， 血小板血栓形成時(shí)間和血栓形成時(shí)間顯著延長(zhǎng)，血栓長(zhǎng)度和濕重顯著低于對(duì)照組。赤芍精對(duì)高粘滯血冠心病患者也有改善血液流變性作用，使中、低切速下全血粘度降低，紅細(xì)胞電泳時(shí)間延長(zhǎng)，血小板聚集性降低，草芍藥浸膏片能使肺原性心臟病患者的全血粘度、血漿粘度和血細(xì)胞比容明顯降低。2.抗血小板聚集作用赤芍提取物在體外對(duì)腎上腺素、二磷酸腺苷(ADP)、烙鐵頭蛇毒(TMVA)和花生四烯酸(AA)誘導(dǎo)的血小板聚集均有顯著抑制作用，并使血小板粘附與血小板第三因子活性降低，血小板內(nèi)cAMP含量升高。赤芍成分及其衍生物801、802在 5X10-4 5X 10-3ml/L時(shí)對(duì)ADP和膠原誘導(dǎo)的兔血小板聚集均有明顯抑制作用，其中802 作用最強(qiáng)，對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集尚有解聚作用。3藥的抗血小板聚集作用與降低大鼠肝線粒體氧耗量、呼吸控制率和減少磷/氧(P/0)比值等作用頗為一致，表明3藥的抗血小板作用與干擾血小板的能量代謝有關(guān)。赤芍精抑制兔富血小板血漿(PRP)與AA孵育時(shí)血栓烷A2(TXA》樣物質(zhì)的生物合成，使其生成物對(duì)兔主動(dòng)脈條的收縮幅度顯著降低，表明赤芍精抑制血小板聚集與對(duì)抗TXA2的促聚集作用有關(guān)。給冠心病心絞痛患者靜滴赤芍精可使擴(kuò)大聚集型血小板的百分?jǐn)?shù)與聚集數(shù)顯著減少，表明能使增高的血小板表面活性和聚集性明顯降低。上述實(shí)驗(yàn)表明，赤芍抑制血小板聚集的機(jī)制可能與干擾血小板的能量代謝，抑制 TXA2的生物合成及提高血小板內(nèi)cAMP含量等有關(guān)。3.降血脂和抗動(dòng)脈硬化作用赤芍浸膏片5g(生藥)/kg，每日服1次，連用10-15 星期，使高脂血兔的血漿總膽固醇(Tch)，三酰甘油(TG)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-Ch)、 極低密度脂蛋白膽固醇(VLDL-Ch)顯著降低；高密度脂蛋白膽固醇(HDL-Ch)及HDL2_Ch顯著高于對(duì)照組；Tch/HDL-Ch, Tch/HDL2_Ch，LDL-Ch/HDL-Ch 和 LDL_Ch/HDL2_Ch 比值顯著降低，同時(shí)使高脂血癥所致血栓烷A2/前列環(huán)素(TXA2/PGI2)比值趨于正常。此外并可降低血漿過(guò)氧化脂質(zhì)(LPO)，動(dòng)脈壁脂質(zhì)、鈣和磷脂及主動(dòng)脈斑塊面積。赤芍抗動(dòng)脈硬化的機(jī)制可能與改善脂蛋白組分比值、降低血漿過(guò)氧化脂質(zhì)、減少鈣沉積于動(dòng)脈壁，抑制血小板聚集，調(diào)節(jié) TXA2/PGI2平衡和激活腺苷酸環(huán)化酶而增加動(dòng)脈壁內(nèi)cAMP濃度等有關(guān)。4.對(duì)心血管系統(tǒng)的影響赤芍(草芍藥)煎劑對(duì)離體蟾蜍心臟和家兔在位心臟，小劑量(1 0.5,0. 05ml)輕度抑制，使心率減慢，搏出量減少；大劑量(1 0.5，0. 15ml)明顯抑制，并有傳導(dǎo)阻滯。血管灌流使蟾蜍內(nèi)臟、后肢和離體兔耳血管輕度擴(kuò)張。以0.2%赤芍注射液灌流大鼠離體心臟，使冠脈流量增加觀.4%。給麻醉犬動(dòng)脈注射也使冠脈流量增加，靜脈注射除增加冠脈流量外，也使外周阻力降低，血壓下降；這些作用不受利血平預(yù)處理影響，可能為直接作用。給小鼠腹腔注射赤芍注射液，使心肌86Rb攝取量增加，表明使心肌營(yíng)養(yǎng)血流量增加，此作用可被普萘洛爾抑制，表明與受體有關(guān)。對(duì)大鼠燙傷后早期出現(xiàn)的心臟功能降低，赤芍注射液IOg (生藥)/kg灌胃，有一定緩解和改善作用。赤芍注射液 lg/kg肌內(nèi)注射，對(duì)實(shí)驗(yàn)性肺動(dòng)脈高壓兔有治療和預(yù)防作用，使肺血管擴(kuò)張、肺血流改善、肺動(dòng)脈壓降低，心輸出量增加，心功能改善。赤芍注射液對(duì)肺源性心臟病患者也有擴(kuò)張肺血管，降低肺動(dòng)脈壓和肺血管阻力，增加心輸出量，改善右心功能和血液流變性等作用。草芍藥浸膏片對(duì)肺源性心臟病患者也有相似作用。赤芍注射液40g(生藥)/kg和80g(生藥)/ kg腹腔注射，明顯延長(zhǎng)小鼠常壓缺氧的存活時(shí)間。8g/kg靜脈注射對(duì)腦垂體后葉素所致大鼠急性心肌缺血有明顯保護(hù)作用。40g/kg灌胃，也能延長(zhǎng)小鼠減壓缺氧的存活時(shí)間。5.抗腫瘤作用赤芍正丁醇提取物(赤芍D)1 2g/kg腹腔注射，對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤的抑制率為31%-49%。赤芍水提取物(赤芍A)或70%乙醇提取物(赤芍C)單用對(duì)S180實(shí)體瘤無(wú)明顯作用，當(dāng)與閾下劑量的環(huán)磷酰胺合用時(shí)則有明顯抑制作用；赤芍A、C 對(duì)615小鼠白血病無(wú)明顯作用，而與小劑量甲氨蝶呤合用時(shí)，可顯著延長(zhǎng)615白血病小鼠的生存時(shí)間。腫瘤組織中的cAMP含量明顯低于正常組織，赤芍A、C、D可分別增加S180實(shí)體瘤、S180腹水癌或Lewis肺癌組織中的cAMP水平，此作用可能與抗癌或抗癌增效作用有關(guān)。 S180實(shí)體瘤小鼠的血漿纖維蛋白含量比正常高2-3倍，赤芍A2g/kg腹腔注射，可使其明顯降低，此作用也可能與抗癌增效有關(guān)。赤芍A或C單用促進(jìn)Lewis肺癌自發(fā)性轉(zhuǎn)移，小劑量環(huán)磷酰胺也無(wú)明顯影響，但與赤芍A合用可顯著減少此肺癌轉(zhuǎn)移。
6.保肝作用赤芍注射液3. 3mg/ml, 1. 67mg/ml和0. 7mg/ml，對(duì)體外培養(yǎng)肝細(xì)胞的 DNA合成有明顯促進(jìn)作用，對(duì)肝細(xì)胞再生和肝功能恢復(fù)有良好影響。赤芍注射液3. 75g/kg 靜脈注射，對(duì)D-半乳糖胺所致大鼠肝損傷有明顯保護(hù)作用，使動(dòng)物存活率增加，肝臟萎縮與丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶明顯低于對(duì)照組，F(xiàn)N(單核-巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的主要調(diào)理素)高于對(duì)照組。 保肝機(jī)制可能是提高大鼠血漿纖維聯(lián)結(jié)蛋白(PFN)的水平，從而增強(qiáng)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能和加強(qiáng)調(diào)理素活性，以保護(hù)肝細(xì)胞，防止肝臟免疫損傷和促進(jìn)肝細(xì)胞再生。赤芍801， 2%ig/kg腹腔注射，每日1次，連續(xù)2星期，對(duì)大鼠肝臟和心臟羧基酯酶(CEase)活性均有明顯誘導(dǎo)作用，此作用有促進(jìn)體內(nèi)水解過(guò)程，促進(jìn)體內(nèi)毒物排泄的作用。d-兒茶精I(xiàn)OOmg/ kg或50mg/kg腹腔注射，對(duì)乙醇誘導(dǎo)的小鼠肝線粒體急性損傷有保護(hù)作用，能降低模型動(dòng)物肝線粒體膜脂質(zhì)流動(dòng)性，增加肝線粒體還原型谷臉甘肽(GSH)含量，降低Ca葉+攝取和脂質(zhì)過(guò)氧化物生成，通過(guò)對(duì)抗乙醇的毒素作用，緩解肝線粒體膜結(jié)構(gòu)的急性損傷。7.其他作用赤芍成分沒(méi)食子酸的衍生物沒(méi)食子酸丙酯具有清除氧自由基的能力， 能明顯抑制硫酸亞鐵和維生素C等誘導(dǎo)的線粒體腫脹和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，可保護(hù)線粒體結(jié)構(gòu)和功能的正常。赤芍對(duì)正常離體豚鼠回腸無(wú)明顯作用，但能解除乙酰膽堿所致腸痙攣。赤芍正丁醇提取物3g/kg皮下注射可促進(jìn)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，增加肝臟重量，對(duì)溶血素生成與遲發(fā)型超敏反應(yīng)無(wú)明顯影響。川赤芍提取物對(duì)羥基甲基戊二酸輔酶A 和鈣離子通道阻滯劑受體有顯著抑制作用。赤芍在體外對(duì)痢疾桿菌、傷寒桿菌和溶血性鏈球菌有較強(qiáng)抑制作用。草芍藥煎劑灌胃，可使家兔血糖暫時(shí)升高，窄葉芍藥水-醇提取物有顯著鎮(zhèn)靜和一定的鎮(zhèn)痛作用，還能提高胃液的酸度，增進(jìn)食欲和消化功能。從上述文獻(xiàn)報(bào)道表明，赤芍及其有效成分芍藥苷的藥理作用與婦炎康片的臨床作用是相一致的。因此對(duì)婦炎康片中的芍藥苷進(jìn)行檢測(cè)是非常必要的，在現(xiàn)有的婦炎康片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，包括中國(guó)藥典中婦炎康片標(biāo)準(zhǔn)中，均未見(jiàn)對(duì)赤芍有效成分芍藥苷的檢測(cè)方法。由于婦炎康片是中藥復(fù)方制劑，所含成分極為復(fù)雜，各成分之間采用一般的方法很難分離開(kāi)，本法是將赤芍中的一種有效成分-芍藥苷從樣品中分離出來(lái)，采用高效液相色譜法檢測(cè)芍藥苷含量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種婦炎康片檢測(cè)方法，采用高效液相色譜法，檢測(cè)測(cè)定婦炎康片中的芍藥苷。本發(fā)明包括下列步驟(a)色譜條件選擇色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器；乙腈0. 磷酸=60 90 40 10為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ；(b)供試品溶液制備取本品50g，研細(xì)，取0. 5 2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 精密加入乙醇25ml，浸泡0. 5h,超聲處理30min，功率250W，頻率250KHz，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，搖勻，取正丁醇液5 15ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；(c)對(duì)照品溶液制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍藥苷0. 05 0. 15mg的對(duì)照品溶液；(d)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 15ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。本發(fā)明的一種實(shí)施方式是，包括如下步驟(a)色譜條件選擇色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器；乙腈0.1%磷酸=85 15為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm ；理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ；(b)供試品溶液制備取本品50g，研細(xì)，取1. 0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0. 5h,超聲處理30min，功率250W，頻率250KHz，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干， 殘?jiān)铀?0ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次25ml，合并正丁醇液，搖勻，取正丁醇液10ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；(c)對(duì)照品溶液制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍藥苷0. Img的溶液，即得；(d)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。本發(fā)明是通過(guò)大量試驗(yàn)所得到的切實(shí)可行的方法，本方法具有操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易掌握的特點(diǎn)，達(dá)到了有效控制藥物質(zhì)量的發(fā)明目的。
具體實(shí)施例方式對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，根據(jù)本發(fā)明所公開(kāi)的技術(shù)內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將很清楚本發(fā)明的其它實(shí)施方案，本發(fā)明實(shí)施例僅作為示例。在不違反本發(fā)明主旨及范圍的情況下，可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改變和改進(jìn)，但只要使用本發(fā)明所述的檢測(cè)方法，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)驗(yàn)例芍藥苷含量測(cè)定方法的建立1.方法1. 1儀器與試劑LC-10A高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器；N2000工作站；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。1. 2色譜條件色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(4. 6mm X 250mm)；乙腈-0. 磷酸(85 15)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm。理論塔板數(shù)按芍藥苷計(jì)算應(yīng)不低于2500。2.對(duì)照品的來(lái)源及純度芍藥苷對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，采用反相高效液相色譜法歸一化法標(biāo)定，色譜條件同上，進(jìn)樣量 ο μ 1，純度為芍藥苷99. 71 %。3.方法學(xué)考察3. 1流動(dòng)相的選擇比較流動(dòng)相(1)乙腈0. 磷酸=85 15 ； (2)乙腈0. 1% 磷酸=80 20 ； (3)乙腈0. 磷酸=90 10 ； (4)乙腈無(wú)水乙醇=75 25，結(jié)果流動(dòng)相(1)中芍藥苷峰達(dá)到基線分離，分離度很好，并列入正文。3. 2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇經(jīng)測(cè)定芍藥苷紫外吸收光譜，芍藥苷最大吸收波長(zhǎng)為218nm， 屬于末端吸收，在此波長(zhǎng)處，基線嚴(yán)重漂移，參考2010版藥典二部148頁(yè)赤芍的含量測(cè)定條件選擇230nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。3. 3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)根據(jù)上述確定的條件，得到赤芍對(duì)照品及樣品的色譜圖，計(jì)算
6其理論塔板數(shù)N = 2500。3. 4供試品提取條件的選擇試驗(yàn)參考2010年版藥典赤芍的含量測(cè)定的樣品溶解方法，分別采用甲醇50ml，25ml、20ml、IOml，結(jié)果見(jiàn)表1。表1不同溶解方法的樣品含量測(cè)定
權(quán)利要求
1.一種婦炎康片的檢測(cè)方法，其特征在于包括下列步驟(a)色譜條件選擇色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器； 乙腈0. 1%磷酸=60 90:40 10為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm，理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ；(b)供試品溶液制備取本品50g，研細(xì)，取0.5 2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0. 5h,超聲處理30min，功率250W，頻率250KHz，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干， 殘?jiān)铀?0 ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次25 ml，合并正丁醇液，搖勻，取正丁醇液5 15 ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；(c)對(duì)照品溶液制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍藥苷0. 05 0. 15mg的對(duì)照品溶液；(d)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 15ul，注入液相色譜儀， 測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的婦炎康片的檢測(cè)方法，其特征在于包括如下步驟(a)色譜條件選擇色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器； 乙腈0. 1%磷酸=85:15為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm ；理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算應(yīng)不低于 2500 ；(b)供試品溶液制備取本品50g，研細(xì)，取1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入乙醇25ml，浸泡0. 5h,超聲處理30min，功率250W，頻率250KHz，放冷，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0 ml，搖勻，用水飽和正丁醇振搖提取2次，每次25 ml，合并正丁醇液，搖勻，取正丁醇液10 ml，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；(c)對(duì)照品溶液制備精密稱取芍藥苷對(duì)照品適量，置5ml量瓶中，用甲醇制成每毫升中含芍藥苷0. Img的溶液，即得；(d)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種婦炎康片的檢測(cè)方法，屬于中藥檢測(cè)領(lǐng)域。包括下列步驟供試品溶液的制備，色譜條件選擇色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，乙腈-0.1%磷酸為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230nm;對(duì)照品溶液的制備，測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。本方法具有操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易掌握的特點(diǎn)，達(dá)到了有效控制藥物質(zhì)量的發(fā)明目的。
文檔編號(hào)G01N30/06GK102279235SQ20111021686
公開(kāi)日2011年12月14日 申請(qǐng)日期2011年8月1日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月1日
發(fā)明者于翠霞, 王旭佳, 蔡蕾 申請(qǐng)人:吉林省中研藥業(yè)有限公司