專利名稱：一種婦炎康丸的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種婦炎康丸的檢測(cè)方法，更具體地說(shuō)是檢測(cè)婦炎康丸中苦參堿和氧化苦參堿的總量。
背景技術(shù)：
婦炎康丸以丹參、赤芍、當(dāng)歸、延胡索、川楝子、香附、三棱、莪術(shù)、山藥、芡實(shí)、苦參、 黃柏、土茯苓等13味中藥組成，經(jīng)過(guò)中藥材炮制、提取、濃縮、干燥、粉碎、加入煉蜜制成水蜜丸。為純中藥制劑。方中丹參、赤芍、當(dāng)歸活血化瘀，為君藥。延胡索、川楝子、香附合用行氣解郁止痛，加之三棱、莪術(shù)增強(qiáng)行氣止痛兼軟堅(jiān)散結(jié)，山藥、芡實(shí)滋腎止帶，苦參、黃柏清熱燥濕，土茯苓解毒利濕，諸藥配合可達(dá)到活血化瘀，清熱解毒、軟堅(jiān)散結(jié)、止痛利濕的目的，能消除炎癥，解除病人腰腹疼痛，減少白帶，有治愈慢性盆腔炎等婦科炎癥的療效。具有活血化瘀，堅(jiān)散結(jié)，清熱解毒，消炎鎮(zhèn)痛的功能。用于慢性附件炎、盆腔炎、陰道炎、膀胱炎、 慢性闌尾炎、尿路感染?？鄥⒈酒窞槎箍浦参锟鄥ophora flavescens Ait.的干燥根。性味苦，寒。歸經(jīng)歸心、肝、胃、大腸、膀胱經(jīng)。功能主治清熱燥濕，殺蟲(chóng)，利尿。用于熱痢，便血，黃疸尿閉，赤白帶下，陰腫陰癢， 濕疹，濕瘡，皮膚瘙癢，疥癬麻風(fēng)；外治滴蟲(chóng)性陰道炎。化學(xué)成份苦參中含有大量的生物堿，其中含量最高的是苦參堿和氧化苦參堿，加總占苦參藥材根干總重的2% (其中大部分以氧化苦參堿的形式存在)，同時(shí)還有其他的相近的生物堿其中主要是槐果堿(Sophocarpine，C15H22N20)，還含有少量白勺槐酉享 sophoranol,槐月安 sophoramine, 1 PjS M (Sophoridine) allomatrine,異苦參 1 (Iosmatrine)等其他生物堿成分。藥理作用①利尿作用苦參煎劑及其中所含之苦參堿給兔口服或注射，皆可產(chǎn)生利尿作用，尿量增加前即有鹽分排出之增多。但實(shí)驗(yàn)中所用家兔之?dāng)?shù)目較少，又未敘述飲水控制之情況，因而有人認(rèn)為需進(jìn)一步研究。②抗病原體作用煎劑在試管中，高濃度(1 100)對(duì)結(jié)核桿菌有抑制作用。煎劑(8% )、水浸劑 (1 ；3)在體外對(duì)某些常見(jiàn)的皮膚真菌有不同程度的抑制作用。醇浸膏在體外尚有抗滴蟲(chóng)作用，強(qiáng)度弱于黃連，而與蛇床子相近。③其他作用苦參堿注射于家兔，發(fā)現(xiàn)中樞神經(jīng)麻痹現(xiàn)象，同時(shí)發(fā)生痙攣，終則呼吸停止而死。 注射于青蛙，初呈興奮，繼則麻痹，呼吸變?yōu)榫徛灰?guī)則，最后發(fā)生痙攣，以致呼吸停止而死；其痙攣的發(fā)作，恐系起因于脊髓反射的亢進(jìn)。對(duì)家兔的最小致死量為0. 4克/公斤。
從上述文獻(xiàn)報(bào)道表明，苦參及其有效成分生物堿的藥理作用與婦炎康丸的臨床作用是相一致的。嚴(yán)格控制婦炎康丸中苦參有效成分的含量，是保證產(chǎn)品質(zhì)量的關(guān)鍵。在現(xiàn)有國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局婦炎康丸試行標(biāo)準(zhǔn)中〔WS-10394-(ZD-0394)-2002〕，采用薄層色譜法測(cè)定苦參堿的含量，方法誤差較大，含量結(jié)果不準(zhǔn)確。另外苦參中的生物堿含量最高的是苦參堿和氧化苦參堿，占苦參藥材根干總重的2%，其中大部分以氧化苦參堿的形式存在，只測(cè)定苦參堿，不能準(zhǔn)確說(shuō)明苦參生物堿的含量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種婦炎康丸的檢測(cè)方法，以解決只測(cè)定苦參堿，不能準(zhǔn)確說(shuō)明苦參生物堿的含量，導(dǎo)致含量結(jié)果不準(zhǔn)確的問(wèn)題。采用高效液相色譜法測(cè)定婦炎康丸苦參堿和氧化苦參堿的總量。本發(fā)明包括下列步驟(a)供試品溶液制備取本品50g，研成細(xì)粉，取5 15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷50ml，濃氨試液0. 5 3. 0ml，密塞，稱定重量，放置M小時(shí)，超聲處理30 90分鐘，功率250W，頻率40kHz，放置室溫，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液IOml蒸干，殘?jiān)靡译鏌o(wú)水乙醇=80 20混合溶液適量分次使溶解并移至IOml量瓶中，加乙腈無(wú)水乙醇=80 20、混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；(b)色譜條件色譜柱為氨基鍵合硅膠柱4. 6mmX 250mm ；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器；乙腈無(wú)水乙醇3%磷酸溶液=70 90 15 5 15 5為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm， 理論塔板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ；(c)對(duì)照品溶液制備取苦參堿對(duì)照品、氧化苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加乙腈-無(wú)水乙醇=80 20混合溶液溶解，分別制成每Iml含苦參堿0. 05 0. 15mg,含氧化苦參堿0. 1 0. 3mg的溶液，即得；(d)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 15ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。本發(fā)明的一種實(shí)施方式是，包括如下步驟(a)供試品溶液制備取本品50g，研成細(xì)粉，取10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 精密加入三氯甲烷50ml，濃氨試液Iml，密塞，稱定重量，放置M小時(shí)，超聲處理60分鐘，功率250W，頻率40kHz，放置室溫，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液IOml蒸干，殘?jiān)靡译鏌o(wú)水乙醇=80 20混合溶液適量分次使溶解并移至 IOml量瓶中，加乙腈無(wú)水乙醇=80 20混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；(b)色譜條件色譜柱為氨基鍵合硅膠柱4. 6mmX 250mm ；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器；乙腈無(wú)水乙醇3%磷酸溶液=80 10 10為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，理論塔板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ；(c)對(duì)照品溶液制備取苦參堿對(duì)照品、氧化苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加乙腈無(wú)水乙醇=80 20混合溶液溶解，分別制成每Iml含苦參堿O.lmg，含氧化苦參堿 0. 2mg的溶液，即得；(d)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。本發(fā)明方法學(xué)研究表明，采用高效液相色譜法測(cè)定本品中苦參堿和氧化苦參堿的總量，具有較好重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和精密度。本發(fā)明是通過(guò)大量試驗(yàn)所得到的切實(shí)可行的方法，本方法具有操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易掌握的特點(diǎn)，達(dá)到了有效控制藥物質(zhì)量的發(fā)明目的。
具體實(shí)施例方式對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，根據(jù)本發(fā)明所公開(kāi)的技術(shù)內(nèi)容，本領(lǐng)域技術(shù)人員將很清楚本發(fā)明的其它實(shí)施方案，本發(fā)明實(shí)施例僅作為示例。在不違反本發(fā)明主旨及范圍的情況下，可對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種改變和改進(jìn)，但只要使用本發(fā)明所述的檢測(cè)方法，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。實(shí)驗(yàn)例婦炎康丸中苦參堿和氧化苦參堿的總量測(cè)定方法的建立1.方法1. 1儀器與試劑LC-10A高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器；N2000工作站；無(wú)水乙醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。1. 2色譜條件色譜柱氨基鍵合硅膠柱(4. 6mmX250mm)；乙腈無(wú)水乙醇3%磷酸溶液=80 10 10為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，理論塔板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。2.對(duì)照品的來(lái)源及純度苦參堿與氧化苦參堿對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，采用反相高效液相色譜法歸一化法標(biāo)定，色譜條件同上，進(jìn)樣量20μ 1，純度為苦參堿 99. 34 %，氧化苦參堿99. 42 %。3.方法學(xué)考察3. 1流動(dòng)相的選擇比較流動(dòng)相(1)乙腈無(wú)水乙醇=75 25 ； (2)乙腈無(wú)水乙醇=80 20 ； (3)乙腈無(wú)水乙醇3%磷酸溶液=80 10 20 ； (4)乙腈無(wú)水乙醇3%磷酸溶液=80 10 10，結(jié)果流動(dòng)相(3)、(4)中苦參堿和氧化苦參堿峰達(dá)到基線分離，分離度很好。但考慮到磷酸鹽含的越多越污染色譜柱，故選用乙腈無(wú)水乙醇3% 磷酸溶液=80 10 10。3. 2測(cè)定波長(zhǎng)的選擇經(jīng)測(cè)定苦參堿與氧化苦參堿的紫外吸收光譜，苦參堿最大吸收波長(zhǎng)為212nm，氧化苦參堿最大吸收波長(zhǎng)為206nm，屬于末端吸收，在此波長(zhǎng)處，基線嚴(yán)重漂移，參考2010版藥典二部188頁(yè)苦參的含量測(cè)定條件選擇220nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。3. 3系統(tǒng)適用性試驗(yàn)根據(jù)上述確定的條件，得到苦參堿對(duì)照品及樣品的色譜圖，計(jì)算其理論塔板數(shù)N = 2500。3. 4供試品提取條件的選擇試驗(yàn)參考2010年版藥典苦參的含量測(cè)定的樣品溶解方法，分別采用三氯甲烷50ml，濃氨試液Iml溶解，濃氨試液^iil、:3ml、0. 5ml，結(jié)果見(jiàn)表1。表1不同溶解方法的樣品含量測(cè)定
權(quán)利要求
1.一種婦炎康丸的檢測(cè)方法，其特征在于包括下列步驟(a)供試品溶液制備取本品50g，研成細(xì)粉，取5 15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 精密加入三氯甲烷50ml，濃氨試液0. 5 3. 0ml，密塞，稱定重量，放置M小時(shí)，超聲處理30 90分鐘，功率250W，頻率40kHz，放置室溫，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液IOml蒸干，殘?jiān)靡译鏌o(wú)水乙醇=80 20混合溶液適量分次使溶解并移至IOml量瓶中，加乙腈無(wú)水乙醇=80 20混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；(b)色譜條件色譜柱為氨基鍵合硅膠柱4.6mmX 250mm ；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器；乙腈 無(wú)水乙醇3%磷酸溶液=70 90 15^5 15^5為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，理論塔板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ；(c)對(duì)照品溶液制備取苦參堿對(duì)照品、氧化苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加乙腈 無(wú)水乙醇=80 20混合溶液溶解，分別制成每Iml含苦參堿0. 05、. 15mg,含氧化苦參堿 0. Γ0. 3mg的溶液，即得；(d)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 15ul，注入液相色譜儀， 測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。
2.如權(quán)利要求1所述的婦炎康丸的檢測(cè)方法，其特征包括如下步驟(a)供試品溶液制備取本品50g，研成細(xì)粉，取10g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷50ml，濃氨試液1ml，密塞，稱定重量，放置M小時(shí)，超聲處理60分鐘，功率 250W,頻率40kHz，放置室溫，再稱定重量，用三氯甲烷補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液IOml蒸干，殘?jiān)靡译鏌o(wú)水乙醇=80 20混合溶液適量分次使溶解并移至IOml 量瓶中，加乙腈無(wú)水乙醇=80 20混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得；(b)色譜條件色譜柱為氨基鍵合硅膠柱4.6mmX 250mm ；檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器；乙腈 無(wú)水乙醇3%磷酸溶液=80 10 :10為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，理論塔板數(shù)按氧化苦參堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2500 ；(c)對(duì)照品溶液制備取苦參堿對(duì)照品、氧化苦參堿對(duì)照品適量，精密稱定，加乙腈 無(wú)水乙醇=80 20混合溶液溶解，分別制成每Iml含苦參堿0. Img,含氧化苦參堿0. 2mg的溶液，即得；(d)測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種婦炎康丸的檢測(cè)方法，屬于中藥檢測(cè)領(lǐng)域。包括下列步驟供試品溶液制備色譜條件色譜柱為氨基鍵合硅膠柱，檢測(cè)器為紫外檢測(cè)器，乙腈-無(wú)水乙醇-3%磷酸溶液為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算，即得。這種方法具有操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、精密度高、重現(xiàn)性好、易掌握的特點(diǎn)，達(dá)到了有效控制藥物質(zhì)量的發(fā)明目的。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102359991SQ20111021648
公開(kāi)日2012年2月22日 申請(qǐng)日期2011年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月30日
發(fā)明者于翠霞, 王旭佳, 蔡蕾 申請(qǐng)人:吉林省中研藥業(yè)有限公司