專利名稱：一種用hplc儀檢測地溝油的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及地溝油檢測技術領域，特別是涉及一種用HPLC儀檢測地溝油的方法。
背景技術：
地溝油，是不法分子將下水道中的油膩漂浮物或者將賓館、酒樓的剩飯、剩菜(通稱泔水)回收，經過過濾、加熱、沉淀、分離、脫色、洗油等工序加工、提煉出的油，其主要成分仍然是甘油三酯，這種被稱作地溝油的三無產品，不僅質量極差、極不衛(wèi)生，而且也比真正的食用油多了許多致病、致癌的毒性物質。一旦食用地溝油，它會破壞人們的白血球和消化道黏膜，引起食物中毒，甚至致癌的嚴重后果。所以地溝油是嚴禁用于食用油領域的。但是，也確有一些不法商販受利益驅動而不顧人民群眾生命安全私自生產加工地溝油并作為食用油低價銷售給一些小餐館，給人們的身心都帶來極大傷害。購買普通食用油時，一般的消費者會被建議要學會感官鑒別。根據經驗，食用植物油一般通過看、聞、嘗、聽、問五個方面來進行鑒別。但是對于對于摻雜有有害物質的劣質地溝油，僅僅靠人為的看、聞、嘗、聽的感官來進行鑒別是十分困難的。目前，國內尚未制定地溝油鑒別檢測的國家標準方法，雖然國內外研究人員進行了一些探索，鑒別油脂優(yōu)劣的常規(guī)指標一般是水分、含量、比重、折光率、皂化值、酸價、氧化值、過氧化值、羰基值、碘值、揮發(fā)性組分、動物油脂、醛和酮類化合物(合格食用油所不含的)、電導率等指標。但是對地溝油檢測的研究報道并不多見，其主要原因是高酸值的地溝油成分比較復雜，其檢測的特異性理化指標還處于實驗研討階段，要準確定性定量目前仍比較困難。

發(fā)明內容
為了解決上述問題，本發(fā)明的目的之一在于提供了一種用HPLC儀檢測地溝油的方法；為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術方案如下一種用HPLC儀檢測地溝油的方法，包括如下步驟步驟A、標準溶液的配置(1)、乙酸銨溶液稱取乙酸銨加水溶解，搖勻配制成質量濃度為0. 6 0. 8mg/ml 的乙酸銨溶液；(2) ,DBS (十二烷基苯磺酸鈉的簡稱，以下同)標準儲備溶液取DBS加乙醇稀釋， 搖勻配制成質量濃度為0. 5 2mg/ml的DBS標準儲備溶液；(3) ,DBS標準系列溶液分別取DBS標準儲備液加乙醇稀釋，制得質量濃度分別為 4 μ g/ml UO μ g/ml, 20 μ g/ml, 50 μ g/ml UOO μ g/ml, 500 μ g/ml 的 DBS 標準系列溶液；在所構建的色譜條件下，分別精密量取 ο μ 1注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以DBS濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線；步驟B、樣品處理
先取樣品10.01111，加入乙醇10 201111，80 1001水浴加熱5 101^11，渦旋混合 3 5min，5000 10000r/min離心5 lOmin，棄去油層，旋轉蒸發(fā)至干；再加甲醇-2%乙酸的水溶液3 5ml復溶，5000 10000r/min離心5 lOmin，取上清液加入到已活化的固相萃取柱，接著用正己烷3 5ml淋洗，棄去淋洗液，最后用體積比為98 2的甲醇-乙酸銨溶液3 5ml洗脫，洗脫液用0. 45 μ m濾膜濾過，收集濾液，得到待測樣品；步驟C、HPLC儀色譜條件的構建色譜柱(18柱O50mmX4.6mmX5ym)，流動相甲醇-乙酸銨混合溶液，所述甲醇和乙酸銨的體積比為75 85 15 25，流速1.Oml/min，檢測波長244nm，柱溫30 40°C;步驟D、樣品測定和結果判斷在構建的色譜條件下，精密量取待測樣品10 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積，用所述DBS標準系列溶液所得標準曲線計算待測溶液中十二烷基苯磺酸鈉含量；如待測樣品色譜圖中能檢出與DBS標準物質色譜圖中任一主峰保留時間一致的色譜峰，則表明待測樣品中存在十二烷基苯磺酸鈉，判斷待測樣品為地溝油(因為DBS實際上是一種由十、十一、十二和十三烷基苯磺酸鈉組成的混合物，所以只要待測樣品色譜圖中能檢出與DBS標準物質色譜圖中任一主峰保留時間一致的色譜峰，則表明待測樣品中存在十二烷基苯磺酸鈉，判斷待測樣品為地溝油)。較佳地、所述乙醇為體積濃度為40 60%的乙醇溶液。較佳地、步驟B樣品處理中，所述渦旋混合3 5min后，重復80 100°C水浴加熱 5 IOmin兩次。較佳地、步驟B樣品處理中，所述已活化的固相萃取柱為依次用甲醇3ml和水:3ml 活化的固相萃取柱。其篩查原理為地溝油，是不法分子將下水道中的油膩漂浮物或者將賓館、酒樓的剩飯、剩菜(通稱泔水)回收，經過過濾、加熱、沉淀、分離、脫色、洗油等工序加工、提煉出的油。DBS(十二烷基苯磺酸鈉的簡稱)為常用洗滌劑，被大量使用于餐飲業(yè)的清洗消毒環(huán)節(jié)中，具有中等毒性，動物實驗表明有明顯促致癌作用。該物質在天然食用油中不可能存在， 但用于精制地溝油的原材料-含有洗碗水中的洗滌劑，且加工、精制過程難以去除該洗滌劑化學成分，導致性質穩(wěn)定的DBS殘留在地溝油中，因此，選擇DBS作為鑒別地溝油的特異指標，專屬性強。本發(fā)明包括乙酸銨溶液配置、DBS標準儲備溶液的配置、DBS標準系列溶液的配置、樣品處理、HPLC儀色譜條件的構建、樣品測定和結果判斷等步驟，以DBS為鑒別地溝油的特異性指標，利用高效液相色譜儀為主要檢測工具，通過反復試驗構建出完整的檢測條件，本發(fā)明能快速、精確地檢測鑒別出樣品是否是地溝油，檢出限為20yg/ml，彌補了現(xiàn)行國家標準缺陷。


圖1為溶劑空白HPLC圖譜，圖2為DBS對照HPLC圖譜，圖3為地溝油HPLC圖譜。
具體實施例方式
為了使本領域技術人員更好的理解本發(fā)明，以下通過幾個具體實施例來進行詳盡說明。實施例1一種用HPLC儀檢測地溝油的方法，包括如下步驟步驟A、標準溶液的配置(1)、乙酸銨溶液稱取乙酸銨0. 3855g，加水500ml溶解，搖勻，即得；(2)、DBS標準儲備溶液取DBS約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加50%乙醇稀
釋至刻度，搖勻、即得；(3)、DBS標準系列溶液分別取DBS標準儲備液適量，加50%乙醇稀釋，制得含 DBS 分別為 4μ g/ml、10y g/ml、20y g/ml、50y g/ml、100y g/ml、500y g/ml 的標準系列溶液；在所構建的色譜條件下，分別精密量取 ο μ 1注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以DBS 濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線；步驟B、樣品處理取樣品10. Oml，加入50 %乙醇20ml，80 °C水浴加熱20min，渦旋混合5min，自 “80°C水浴加熱20min”重復二次，10000r/min離心lOmin，棄去油層，旋轉蒸發(fā)至干，加加甲醇-2 %乙酸的水溶液3ml復溶，10000r/min離心lOmin，取上清液加入到已活化的固相萃取柱(依次用甲醇3ml和水3ml活化)，用正己烷3ml淋洗，棄去淋洗液，用體積比為98 2 的甲醇-乙酸銨溶液3ml洗脫，洗脫液用0. 45 μ m濾膜濾過，收集濾液，得到待測樣品。步驟C、HPLC儀色譜條件的構建色譜柱C18柱 Q50mmX4. 6mmX5ym)；流動相甲醇-乙酸銨(80 20)混合溶液；流速1. Oml/min ；檢測波長244nm；柱溫40°C；步驟D、樣品測定和結果判斷在構建的色譜條件下，精密量取待測樣品10 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積，用所述DBS標準系列溶液所得標準曲線計算待測溶液中十二烷基苯磺酸鈉含量；如待測樣品色譜圖中能檢出與DBS標準物質色譜圖中任一主峰保留時間一致的色譜峰，則表明待測樣品中存在十二烷基苯磺酸鈉，判斷待測樣品為地溝油。實施例2一種用HPLC儀檢測地溝油的方法，包括如下步驟步驟A、標準溶液的配置
(1)、乙酸銨溶液稱取乙酸銨0. 3g，加水500ml溶解，搖勻，即得；(2)、DBS標準儲備溶液取DBS約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加40%乙醇稀
釋至刻度，搖勻、即得；(3)、DBS標準系列溶液分別取DBS標準儲備液適量，加40%乙醇稀釋，制得含 DBS 分別為 4μ g/ml、10y g/ml、20y g/ml、50y g/ml、100y g/ml、500y g/ml 的標準系列溶液；在所構建的色譜條件下，分別精密量取 ο μ 1注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以DBS 濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線；步驟B、樣品處理取樣品10. 0ml，加入40%乙醇10ml，90°C水浴加熱&iiin，渦旋混合;3min，自“90°C 水浴加熱20min”重復二次，5000r/min離心8min，棄去油層，旋轉蒸發(fā)至干，加加甲醇乙酸的水溶液細1復溶，5000r/min離心8min，取上清液加入到已活化的固相萃取柱(依次用甲醇細1和水細1活化)，用正己烷細1淋洗，棄去淋洗液，用體積比為98 2的甲醇-乙酸銨溶液細1洗脫，洗脫液用0. 45 μ m濾膜濾過，收集濾液，得到待測樣品。步驟C、HPLC儀色譜條件的構建色譜柱C18柱 Q50mmX4· 6mmX5ym)；流動相甲醇-乙酸銨(75 25)混合溶液；流速1. Oml/min ；檢測波長244nm;柱溫30°C；步驟D、樣品測定和結果判斷在構建的色譜條件下，精密量取待測樣品10 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積，用所述DBS標準系列溶液所得標準曲線計算待測溶液中十二烷基苯磺酸鈉含量；如待測樣品色譜圖中能檢出與DBS標準物質色譜圖中任一主峰保留時間一致的色譜峰，則表明待測樣品中存在十二烷基苯磺酸鈉，判斷待測樣品為地溝油。實施例3一種用HPLC儀檢測地溝油的方法，包括如下步驟步驟A、標準溶液的配置(1)、乙酸銨溶液稱取乙酸銨0. 4g，加水500ml溶解，搖勻，即得；(2)、DBS標準儲備溶液取DBS約lOOmg，精密稱定，置50ml量瓶中，加60%乙醇
稀釋至刻度，搖勻、即得；(3)、DBS標準系列溶液分別取DBS標準儲備液適量，加60%乙醇稀釋，制得含 DBS 分別為 4μ g/ml、10y g/ml、20y g/ml、50y g/ml、100y g/ml、500y g/ml 的標準系列溶液；在所構建的色譜條件下，分別精密量取 ο μ 1注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以DBS 濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線；步驟B、樣品處理取樣品10. 0ml，加入60%乙醇15ml，100°C水浴加熱5min，渦旋混合鈿化，自 “ 100°C水浴加熱20min”重復二次，8000r/min離心5min，棄去油層，旋轉蒸發(fā)至干，加加甲醇-2 %乙酸的水溶液5ml復溶，8000r/min離心5min，取上清液加入到已活化的固相萃取柱
6(依次用甲醇5ml和水5ml活化)，用正己烷5ml淋洗，棄去淋洗液，用體積比為98 2的甲醇-乙酸銨溶液5ml洗脫，洗脫液用0. 45 μ m濾膜濾過，收集濾液，得到待測樣品。步驟C、HPLC儀色譜條件的構建色譜柱C18柱 Q50mmX4· 6mmX5ym)；流動相甲醇-乙酸銨(85 15)混合溶液；流速1.Oml/min ；檢測波長244nm；柱溫35°C；步驟D、樣品測定和結果判斷在構建的色譜條件下，精密量取待測樣品10 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，計算峰面積，用所述DBS標準系列溶液所得標準曲線計算待測溶液中十二烷基苯磺酸鈉含量；如待測樣品色譜圖中能檢出與DBS標準物質色譜圖中任一主峰保留時間一致的色譜峰，則表明待測樣品中存在十二烷基苯磺酸鈉，判斷待測樣品為地溝油。以上所述僅為了是本領域技術人員理解本發(fā)明所列舉的幾個具體實施例，并非用來限制本發(fā)明所要求保護的范圍。故凡以本發(fā)明權利要求所述的特征、結構及原理所做的等效變化或修飾，均應包括在本發(fā)明權利要求范圍之內。由附圖1中溶劑空白HPLC圖譜可見，保留時間約為^iin的為溶劑峰；由附圖2中DBS對照HPLC圖譜，扣除空白可見，譜圖中保留時間為4. 796,5. 146、 6. 078,6. 729,8. 048,9. 143、11. 078、12. 786min的色譜峰為該成分的特征峰，每兩個相鄰峰為一組峰，共4組。這是因為DBS實際上是一種由十、十一、十二和十三烷基苯磺酸鈉組成的混合物，因此DBS的總量應按這四個化合物的峰面積總和計算。由附圖3中地溝油HPLC圖譜可見，在與DBS對照圖譜特征峰保留時間相對應的位置上可見明顯的四組峰。
權利要求
1.一種用HPLC儀檢測地溝油的方法，其特征在于，包括如下步驟 步驟A、標準溶液的配置(1)、乙酸銨溶液稱取乙酸銨加水溶解，搖勻配制成質量濃度為0.6 0. 8mg/ml的乙酸銨溶液；(2),DBS標準儲備溶液取DBS加乙醇稀釋，搖勻配制成質量濃度為0. 5 2mg/m 1的 DBS標準儲備溶液；(3)、DBS標準系列溶液分別取DBS標準儲備液加乙醇稀釋，制得質量濃度分別為 4 μ g/ml UO μ g/ml, 20 μ g/ml, 50 μ g/ml UOO μ g/ml, 500 μ g/ml 的 DBS 標準系列溶液；在所構建的色譜條件下，分別精密量取 ο μ 1注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以DBS濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線；步驟B、樣品處理先取樣品10. 0ml，加入乙醇10 20ml，80 100°C水浴加熱5 lOmin，渦旋混合3 5min，5000 10000r/min離心5 lOmin，棄去油層，旋轉蒸發(fā)至干；再加甲醇-2%乙酸的水溶液3 5ml復溶，5000 10000r/min離心5 lOmin，取上清液加入到已活化的固相萃取柱，接著用正己烷3 5ml淋洗，棄去淋洗液，最后用體積比為98 2的甲醇-乙酸銨溶液3 5ml洗脫，洗脫液用0. 45 μ m濾膜濾過，收集濾液，得到待測樣品； 步驟C、HPLC儀色譜條件的構建 色譜柱C18 柱 Q50mmX4. 6mmX5ym),流動相甲醇-乙酸銨混合溶液，所述甲醇和乙酸銨的體積比為75 85 15 25，流速:1. Oml/min,檢測波長244nm，柱溫30 40°C ；步驟D、樣品測定和結果判斷在構建的色譜條件下，精密量取待測樣品10 μ 1，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖， 計算峰面積，用所述DBS標準系列溶液所得標準曲線計算待測溶液中十二烷基苯磺酸鈉含量；如待測樣品色譜圖中能檢出與DBS標準物質色譜圖中任一主峰保留時間一致的色譜峰，則表明待測樣品中存在十二烷基苯磺酸鈉，判斷待測樣品為地溝油。
2.根據權利要求1中所述檢測地溝油的方法，其特征在于，所述乙醇為體積濃度為 40 60%的乙醇溶液。
3.根據權利要求1中所述檢測地溝油的方法，其特征在于，步驟B樣品處理中，所述渦旋混合3 5min后，重復80 100°C水浴加熱5 IOmin兩次。
4.根據權利要求1中所述檢測地溝油的方法，其特征在于，步驟B樣品處理中，所述已活化的固相萃取柱為依次用甲醇3 5ml和水3 5ml活化的固相萃取柱。
全文摘要
本發(fā)明涉及地溝油檢測技術領域，特別是涉及一種用HPLC儀檢測地溝油的方法；包括乙酸銨溶液配置、DBS標準儲備溶液的配置、DBS標準系列溶液的配置、樣品處理、HPLC儀色譜條件的構建、樣品測定和結果判斷等步驟，本發(fā)明以DBS為鑒別地溝油的特異性指標，利用高效液相色譜儀為主要檢測工具，通過反復試驗構建出完整的檢測條件，本發(fā)明能快速、精確地檢測鑒別出樣品是否是地溝油，檢出限為20μg/ml，彌補了現(xiàn)行國家標準缺陷。
文檔編號G01N30/02GK102507755SQ20111030205
公開日2012年6月20日 申請日期2011年9月28日 優(yōu)先權日2011年9月28日
發(fā)明者殷果, 江坤, 王鐵杰, 謝普, 閆研, 魯藝, 黎雪清 申請人:深圳市藥品檢驗所