專利名稱：一種配方煙絲中丁子香酚含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種配方煙絲中丁子香酚含量的改進(jìn)測定方法，屬于煙用原料的理化檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域。
技術(shù)背景
丁子香酚，4-烯丙基-2-甲氧基苯酚，無色至淡黃色液體，在空氣中變棕色，有強(qiáng)烈的丁香氣味。極易溶于水，溶于乙醇、乙醚、氯仿和精油。作為香味劑用于配制康乃馨型香精以及制異丁香酚和香蘭素等。也用作殺蟲劑和防腐劑，抗氧化劑，驅(qū)風(fēng)劑以及在牙科中用于止痛劑。在國際癌癥研究機(jī)構(gòu)(IARC)公布的致癌名單中，丁子香酚被列為Group 3。丁香煙是印尼馬來特有的一種香煙，其味道芳香可口清新祛暑。
2009年9月14日，美國食品和藥品管理局(FDA)發(fā)布公開信，提醒業(yè)界注意根據(jù) 《聯(lián)邦食品、藥品和化妝品法案》和《家庭吸煙預(yù)防與煙草控制法案》，自9月22日起禁止生產(chǎn)和銷售含特定香味的香煙。美國總統(tǒng)奧巴馬曾于6月22日簽署了《家庭吸煙預(yù)防與煙草控制法案》，授權(quán)FDA管控?zé)煵莓a(chǎn)品的生產(chǎn)和銷售。根據(jù)該法案第907 (a) (1) (A)章規(guī)定， 香煙或其組成部分(包括煙草、過濾嘴或煙紙)不得含有或添加除煙草薄荷醇以外的任何人造、天然香料、藥草及調(diào)味品，從而使香煙或煙霧含有草莓，葡萄，橘子，丁香等香味。該標(biāo)準(zhǔn)適用于所有煙草制品包括香煙、雪茄及其他一些煙草制品。目前國內(nèi)還沒有此方面的規(guī)定。
目前關(guān)于丁子香酚的測定的報道較少，其中Li Yong-Hong等采用液相色譜法測定了肉湯中丁子香酚的測定；配方煙絲中丁子香酚的測定由于基質(zhì)的復(fù)雜性，則更少有報道，其中加拿大方法T-314中采用外標(biāo)一液相色譜法測定了煙草中的丁子香酚，由于丁子香酚的沸點(diǎn)較低，揮發(fā)性較大，外標(biāo)法在樣品處理過程中損失較大，因此有必要開發(fā)減少樣品前處理過程損失的內(nèi)標(biāo)法測定方法；另外T-314中液相色譜檢測時間為20min，色譜條件也有進(jìn)一步優(yōu)化的不要
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在克服現(xiàn)有技術(shù)缺陷，提供一種煙絲中丁子香酚含量的測定方法，用于檢測煙絲中丁子香酚的含量，通過對液相色譜條件的優(yōu)化，使液相測定時間減少至 IOmin,有效的提高了測定效率，使得丁子香酚的色譜峰與雜質(zhì)色譜峰分離較好，具有靈敏度高等特點(diǎn)。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的 配方煙絲中丁子香酚含量的測定方法，包括以下步驟(1)含內(nèi)標(biāo)萃取劑的配制，為含有茴香腦的無水乙醇溶液，茴香腦的濃度為0. 1-0. 2mg/mL ；(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制；稱取丁子香酚標(biāo)準(zhǔn)品，用含內(nèi)標(biāo)萃取劑配制成具有濃度梯度的丁子香酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；(3)樣品溶液的制備使用含內(nèi)標(biāo)萃取劑萃取樣品，然后離心過濾后制備樣品溶液；(4)液相色譜分析利用液相色譜儀分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液進(jìn)行檢測分析；(5)煙絲中丁子香酚含量的計算。
所述含內(nèi)標(biāo)萃取劑的配制是稱取0.4 g茴香腦于4000 mL無水乙醇溶液中，其中茴香腦的濃度為lmg/mL。
所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制是稱取約0. 2g 丁子香酚，精確至0. OOOlg，用含內(nèi)標(biāo)的萃取劑溶解后轉(zhuǎn)移至IOOmL容量瓶中，并定容，定為標(biāo)準(zhǔn)儲備液。分別移取0.01mL，0. ImL, 0. 5mL, 1. OmL, 2. 5mL, 5. OmL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液到IOmL容量瓶中，用萃取劑定容，則丁子香酚的濃度為 2. 0 μ g/mL, 20 μ g/mL, 100 μ g/mL, 200 μ g/mL, 500 μ g/mL, 1000 μ g/mL。
所述樣品溶液的制備方法具體包括稱取0. 2 g煙絲樣品(精確至0. 1 mg)于50 mL 具塞三角瓶中，加入50mL含有內(nèi)標(biāo)的無水乙醇，用密封膠密封振蕩萃取池。如有必要則在 IOOOOrmp離心10分鐘。靜置后，移取2. OmL上層清液用0. 45 μ m有機(jī)濾膜過濾，得到樣品溶液。
所述的色譜分析條件為色譜柱采用Nova-pak C18液相色譜柱，色譜柱溫度為30 °C，進(jìn)樣量為10 yL，流速為1.0 ml/min ；檢測波長280nm，流動相A為水，B為乙腈，采用等梯度洗脫程序，即水是30%，甲醇為70%，洗脫時間為lOmin。
所述的色譜柱的規(guī)格為3. 9 X 150πιπι，5μπι粒徑。
丁子香酚含量的計算首先以標(biāo)準(zhǔn)溶液所檢測出的目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積之比對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；然后將樣品溶液檢出的目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積之比，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即得到樣品中的丁子香酚濃度，由此即可計算出煙絲中丁子香酚的含量。
本發(fā)明的檢測方法對樣品的處理方法和色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，達(dá)到了以下效果(1)檢測時間短采用本發(fā)明測定煙絲中丁子香酚含量周期僅需要10分鐘左右；(2)本發(fā)明具有操作簡便、靈敏度高、回收率高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明方法的色譜條件使丁子香酚的色譜峰與雜質(zhì)色譜峰分離較好，并且具有較好的線性相關(guān)性，檢測限為 0. 3μ g/g，平均加標(biāo)回收率為101. 14%，平均相對偏差小于2. 4%。


圖1為本發(fā)明的測定方法的流程圖；圖2為丁子香酚標(biāo)準(zhǔn)曲線線性方程及線性回歸系數(shù)坐標(biāo)圖； 圖3為標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖； 圖4為樣品溶液的色譜圖。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明以下結(jié)合實(shí)施例(附圖)做進(jìn)一步描述實(shí)施例1本實(shí)施例對煙絲中丁子香酚含量的檢測方法如下(所述檢測方法的流程圖如圖1所示)(1)含內(nèi)標(biāo)萃取劑的配制含有適當(dāng)濃度內(nèi)標(biāo)物(茴香腦)的無水乙醇溶液，濃度一般為 0. lmg/mL 0. 2mg/mL ；(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制稱取約0.2g 丁子香酚，精確至0. OOOlg，用含內(nèi)標(biāo)的萃取劑溶解后轉(zhuǎn)移至IOOmL容量瓶中，并定容，定為標(biāo)準(zhǔn)儲備液；分別移取0. OlmL, 0. ImL, 0. 5mL, 1. OmL, 2. 5mL, 5. OmL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液到IOmL容量瓶中， 用萃取劑定容，則丁子香酚的濃度為 2. 0 μ g/mL, 20 μ g/mL, 100 μ g/mL, 200 μ g/mL, 500 μ g/ mL，1000 μ g/mL;標(biāo)液避光4°C保存，取用時放置于常溫下，達(dá)到常溫后方可使用。每周做一次標(biāo)線；(3)樣品溶液的制備稱取0.2g煙絲樣品(精確至0.1 mg)于50 mL具塞三角瓶中， 加入50mL無水乙醇，用密封膠密封振蕩萃取池。如有必要則在IOOOOrmp離心10分鐘。靜置后，移取2. OmL上層清液用0. 45 μ m有機(jī)濾膜過濾，得到樣品溶液，于4°C保存待分析；(4)色譜分析色譜分析條件為色譜柱采用Nova-pakC18液相色譜柱，色譜柱溫度為 30 °C，進(jìn)樣量為10 μ L，流速為1. 0 ml/min ；檢測波長280nm，流動相A為水，B為甲醇， 采用等梯度洗脫程序，即水是30%，甲醇為70%，洗脫時間為IOmin ；標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜分析結(jié)果如圖3所示；樣品溶液的色譜分析結(jié)果如圖4所示；(5)配方煙絲中丁子香酚含量的計算首先以標(biāo)準(zhǔn)溶液所檢測出的目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積之比對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線(如圖2所示)；與標(biāo)準(zhǔn)曲線相對應(yīng)的回歸方程、相關(guān)系數(shù)等數(shù)據(jù)如表1 所示。
表1煙絲中丁子香酚的標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢測限名稱保留Bi間回B方程■m^SM·丁子碰 3ωF=lO.091622iPHi3.736724DJHWSS93注①檢測限以3倍信噪比(S/N = 3)計算。
然后將樣品測得的檢出目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積之比，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即得到樣品中的丁子香酚濃度，由此計算煙絲中丁子香酚的含量，計算公式如下AxS式中m—每克煙絲中丁子香酚的含量，單位為微克每克(Pg/g)； A—樣品中丁子香酚的濃度(Pg/mL)； S一溶液體積； η—稱取樣品的質(zhì)量(g)。
由表1和圖4可知，所采用的色譜條件使丁子香酚的色譜峰與雜質(zhì)色譜峰分離較好，并且具有較好的相關(guān)性，檢測限在0.3 μ g/g。本實(shí)施例樣品的丁子香酚的含量為 865. 7^gZg0
實(shí)施例2本實(shí)施例對本發(fā)明方法的重復(fù)性和加標(biāo)回收率的檢測方法如下采用樣品加標(biāo)回收率試驗(yàn)，分別在樣品中加入20. 8Pg/g，208. OPg/g，1040. OPg/g三個不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)回收率試驗(yàn)，每個樣品分別測定6次，色譜分析的條件同實(shí)施例1，根據(jù)分析結(jié)果計算本方法煙絲中丁子香酚的加標(biāo)回收率及加標(biāo)后測定值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果如表2所示；表2煙絲中丁子香酚的回收率和重復(fù)性(n=6)
權(quán)利要求
1.一種配方煙絲中丁子香酚含量的測定方法，其特征在于包括以下步驟(1)含內(nèi)標(biāo)萃取劑的配制，為含有茴香腦的無水乙醇溶液，茴香腦的濃度為0.1-0. 2mg/mL ；(2)標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制；稱取丁子香酚標(biāo)準(zhǔn)品，用含內(nèi)標(biāo)萃取劑配制成具有濃度梯度的丁子香酚標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；(3)樣品溶液的制備使用含內(nèi)標(biāo)萃取劑萃取樣品，然后離心過濾后制備樣品溶液；(4)液相色譜分析利用液相色譜儀分別對標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液進(jìn)行檢測分析；(5)煙絲中丁子香酚含量的計算。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的配方煙絲中丁子香酚含量的測定方法，其特征在于所述含內(nèi)標(biāo)萃取劑的配制是稱取0.4 g茴香腦于4000 mL無水乙醇溶液中，其中茴香腦的濃度為 lmg/mL0
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的配方煙絲中丁子香酚含量的測定方法，其特征在于所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制是稱取0. 2g 丁子香酚，精確至0. OOOlg，用含內(nèi)標(biāo)的萃取劑溶解后轉(zhuǎn)移至 IOOmL容量瓶中，并定容，定為標(biāo)準(zhǔn)儲備液；分別移取0. OlmL, 0. ImL, 0. 5mL, 1. OmL, 2. 5mL, 5. OmL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液到IOmL容量瓶中，用萃取劑定容，則丁子香酚的濃度為2. 0 μ g/mL， 20 μ g/mL,100 μ g/mL,200 μ g/mL,500 μ g/mL,1000 μ g/mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的配方煙絲中丁子香酚含量的測定方法，其特征在于所述樣品溶液的制備方法具體包括稱取0.2 g煙絲樣品于50 mL具塞三角瓶中，加入50mL含有內(nèi)標(biāo)的無水乙醇，用密封膠密封振蕩萃??；如有必要則在IOOOOrmp離心10分鐘，靜置后， 移取2. OmL上層清液用0. 45 μ m有機(jī)濾膜過濾，得到樣品溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的配方煙絲中丁子香酚含量的測定方法，其特征在于所述的色譜分析條件為色譜柱采用Nova-pak C18液相色譜柱，色譜柱溫度為30 °C，進(jìn)樣量為10 μ L，流速為1. 0 ml/min ；檢測波長280nm，流動相A為水，B為乙腈，采用等梯度洗脫程序， 即水是30%，甲醇為70%，洗脫時間為lOmin。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的配方煙絲中丁子香酚含量的測定方法，其特征在于所述的色譜柱的規(guī)格為3. 9 X 150mm，5ym粒徑。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的配方煙絲中丁子香酚含量的測定方法，其特征在于丁子香酚含量的計算首先以標(biāo)準(zhǔn)溶液所檢測出的目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積之比對其相應(yīng)濃度進(jìn)行回歸分析，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；然后將樣品溶液檢出的目標(biāo)物與內(nèi)標(biāo)的色譜峰面積之比，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即得到樣品中的丁子香酚濃度，由此即可計算出煙絲中丁子香酚的含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種配方煙絲中丁子香酚含量的測定方法，包括萃取試劑和樣品溶液的制備，液相色譜分析及測定結(jié)果的計算等步驟。經(jīng)優(yōu)化之后的檢測方法具有檢測時間短、操作簡便、靈敏度高、回收率高及重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)，本發(fā)明方法的色譜條件使丁子香酚的色譜峰與雜質(zhì)色譜峰分離較好，并且具有較好的線性范圍，檢測限為0.3μg/g，平均加標(biāo)回收率為101.14％，平均相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2.4%。
文檔編號G01N30/88GK102495162SQ201110362708
公開日2012年6月13日 申請日期2011年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月16日
發(fā)明者侯宏衛(wèi), 劉楠, 唐綱嶺, 姜興益, 龐永強(qiáng), 張洪非, 李中皓, 李雪, 程倩, 胡清源, 邊照陽, 陳再根, 陳歡 申請人:中國煙草總公司鄭州煙草研究院