專利名稱：人血清糖化白蛋白檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種人血清糖化白蛋白檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
糖尿病是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征，是危害人類疾病的幾大疾病之一。人體血清中白蛋白占血清蛋白的66%，其余為免疫球蛋白；血清中葡萄糖與血清蛋白的N-末端發(fā)生非酶促的糖基化反應(yīng)，生成糖化血清蛋白，而糖化白蛋白則占糖化血清蛋白的90%以上。另外，由于白蛋白在血清中含量穩(wěn)定存在，而球蛋白則會由于感染等疾病因素造成波動；故準(zhǔn)確測定糖化白蛋白對準(zhǔn)確反應(yīng)糖尿病的的血糖控制情況非常重要。所以如何能精確地測定出人血清中的糖化白蛋白量成為臨床檢測糖化白蛋白的關(guān)鍵。目前市場主要采用酶法用于檢測人血清中的糖化白蛋白，其反應(yīng)原理為首先使用蛋白酶將糖化蛋白消化成低分子量的糖化多肽，隨后使用果糖氨基酸酶催化糖化多肽發(fā)生氧化反應(yīng)生成多肽(或氨基酸)、葡萄糖醛酮和H2O2，釋放的H2O2通過終點(diǎn)反應(yīng)比色法來測定， 其在600nm處的吸收值與糖化白蛋白的濃度成比例。具體反應(yīng)過程如下
權(quán)利要求
1.ー種人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，其特征在于包括試劑1和試劑2，其中試劑1緩沖液20-200mmol/L蛋白酶共表達(dá)體5-50 KU/L過氧化物酶10-50KU/L4-氨基安替比林2-20mmol/L防腐劑0.01-1%穩(wěn)定劑0.01-1%;試劑2 緩沖液20-200mmol/L果糖賴氨酸酶5-50 U/mLN,N-雙(4-磺丁基)-3-甲基苯胺l-10mmol/L防腐劑0.01-1%穩(wěn)定劑0.01-1%;其中，所述蛋白酶共表達(dá)體指將蛋白酶的基因與抗壞血酸氧化酶的基因克隆到同一載 體上，在同一宿主菌中實(shí)現(xiàn)共表達(dá)得到的蛋白質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，其特征在于所述蛋白酶的 基因?yàn)榍箤倩蜓挎邨U菌屬或麥軸梗霉屬來源的基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，其特征在于所述蛋白酶的 基因?yàn)榱植习咨钋蚓鷣碓吹幕颉?br> 4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，其特征在于所述抗壞血酸 氧化酶的基因?yàn)橹参飦碓吹幕颉?br> 5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，其特征在于所述抗壞血酸 氧化酶的基因?yàn)辄S瓜來源的基因。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，其特征在于所述蛋白酶共 表達(dá)體表達(dá)出的蛋白酶和抗壞血酸氧化酶的N端均有5-30個(gè)氨基酸片段的増加。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，其特征在于所述緩沖液為 三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液、乙酸-乙酸鈉緩沖液、鄰苯ニ甲酸-鹽酸緩沖液或甘氨 酸-鹽酸緩沖液中的ー種。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，其特征在于所述防腐劑為 2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮或proclin300中的ー種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，其特征在于所述穩(wěn)定劑為 甘油、牛血清白蛋白、吐溫-20中的ー種。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，其特征在于還包括校準(zhǔn) 品，校準(zhǔn)品為含白蛋白和糖化白蛋白的溶液，校準(zhǔn)品的制備步驟為將人血清白蛋白與葡 萄糖以重量比11 1100混合，37°C孵育十天，透析除去葡萄糖，用葡萄糖試劑盒測定無葡萄糖后，采用HPLC測定糖化白蛋白的含量及占總蛋白的比例，并將該溶液稀釋為 200-1000 μ M，冷凍干燥作為校準(zhǔn)品，采用HPLC給校準(zhǔn)品進(jìn)行定值；根據(jù)校準(zhǔn)品與試劑1、試劑2，選用120份健康體檢個(gè)體血清，測定糖化白蛋白的參考范圍為100 285ymol/L，同時(shí)測定白蛋白，校正公式為糖化白蛋白/白蛋白=(糖化白蛋白濃度X0. 23+1. 12)/白蛋白濃度，得出糖化白蛋白/白蛋白的參考范圍為11 16%。
全文摘要
本發(fā)明提供一種人血清糖化白蛋白檢測試劑盒，它包括試劑1和試劑2，其中試劑1由以下組分構(gòu)成緩沖液20-200mmol/L，蛋白酶共表達(dá)體5-50KU/L，過氧化物酶10-50KU/L，4-氨基安替比林2-20mmol/L，防腐劑0.01-1％，穩(wěn)定劑0.01-1％，蛋白酶共表達(dá)體由蛋白酶基因與抗壞血酸氧化酶基因克隆到同一載體上進(jìn)行共表達(dá)得到；試劑2由以下組分構(gòu)成緩沖液20-200mmol/L，果糖賴氨酸酶5-50U/mL，N，N-雙(4-磺丁基)-3-甲基苯胺1-10mmol/L，防腐劑0.01-1％，穩(wěn)定劑0.01-1％。該試劑盒能排除人血清中球蛋白及抗壞血酸的干擾、穩(wěn)定性好、成本低。
文檔編號G01N33/68GK102565420SQ20111044086
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月26日
發(fā)明者徐秀芬, 沃燕波, 賈江花, 鄒炳德, 鄒繼華 申請人:寧波美康生物科技股份有限公司