專利名稱：一種檢測肉制品中紅曲色素含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，特別是一種定性或定量檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，屬于食品安全檢測領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
肉制品(meat products),是指用畜禽肉為主要原料，經(jīng)調(diào)味制作的熟肉制成品或半成品，如香腸、火腿、培根、醬鹵肉、燒烤肉等。肉制品中添加食品著色劑可以改進(jìn)其顏色， 能更好的吸引消費者的注意。食用色素通常分為兩類食用合成色素和食用天然色素。合成色素由于著色力強、色澤鮮艷、穩(wěn)定性好、易于溶解和拼色以及成本低廉等一系列優(yōu)點， 曾一度被廣泛應(yīng)用。但隨著毒理學(xué)和分析技術(shù)的不斷發(fā)展，合成色素的安全性日益受到挑戰(zhàn)，合成色素的數(shù)量已大大減少，天然色素引起了世界范圍的廣泛注意。開發(fā)天然色素，改善食品加工品質(zhì)，是我國食品添加劑工業(yè)“十五“期間的發(fā)展重點。紅曲色素是目前世界上最成功利用發(fā)酵工程法大規(guī)模生產(chǎn)的天然食用色素。紅曲色素屬純天然食用色素，有著色、防腐、保健和藥用等價值，作為食品著色劑已經(jīng)列入GB 2760-2011食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，按正常需要量加入。紅曲色素具有較強耐熱性，對酸、堿、氧化劑、還原劑均較穩(wěn)定，但光穩(wěn)定性差。有不少不法分子用某些禁用色素(如蘇丹紅)代替紅曲色素，還有不少生產(chǎn)廠家用紅曲色素直接調(diào)制紅酒，為了提高食品的品質(zhì)，保護(hù)消費者身心健康、規(guī)范市場秩序和突破國外貿(mào)易壁壘，加強對其在食品中的檢測非常重要。目前，目前國內(nèi)外對紅曲色素檢測的相關(guān)文獻(xiàn)多有報道，我國已相繼制定了三項有關(guān)紅曲色素的國家標(biāo)準(zhǔn)《GB/T5009. 150-2003食品中紅曲色素的測定》、《GB4^6_2008 食品添加劑紅曲米》和《GB 15961-2005食品添加劑紅曲紅》。目前為止，沒有相關(guān)文獻(xiàn)針對肉制品中紅曲色素測定的報道。日本也已建立了紅曲色素產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)，但在國際上尚無認(rèn)可的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。歐美國家沒有紅曲產(chǎn)品的生產(chǎn)，因此對這一類產(chǎn)品沒有標(biāo)準(zhǔn)。其中， ((GB4926-2008食品添加劑紅曲米》和《GB 15961-2005食品添加劑紅曲紅》為可見光分光光度計法，只能測定食品中紅曲色素的色價，而色價只是反應(yīng)食品中紅曲色素顏色深淺的指標(biāo)；《GB/T5009. 150-2003食品中紅曲色素的測定》為薄層層析法，方法只對樣品中紅曲色素粗略定性。以上方法只是規(guī)定紅曲色素混合物能達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn)即為合格，沒有對紅曲色素各組分進(jìn)行定性定量分析，當(dāng)樣品中添加某一種或幾種色素時就無法檢測其濃度，因此，急需要對食品中紅曲色素各組分進(jìn)行準(zhǔn)確定性定量分析。然而，迄今為止，未見關(guān)于食品中紅曲色素各組分定量定性方法的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確且經(jīng)濟、對紅曲色素各組分進(jìn)行定性定量分析的檢測肉制品中紅曲色素的方法。
本發(fā)明所述檢測肉制品中紅曲色素含量的方法包括下列步驟 a.取適量待測肉制品試樣，絞碎并均質(zhì)；
b.稱取制備好的試樣；
c.用甲醇+乙酸乙酯溶液提取，加入無水硫酸鈉脫水，并加入抗壞血酸防止樣品中的紅曲色素被氧化；
d.提取液吹至近干，用乙酸乙酯+環(huán)己烷溶液定容，待凈化處理；
e.待凈化液由試樣環(huán)注入凝膠滲透色譜柱；
f.設(shè)定高效液相色譜條件；
g.凈化液供高效液相色譜測定；
h.數(shù)據(jù)處理與分析。本發(fā)明所述步驟c中加入無水硫酸鈉脫水后再加入抗壞血酸以防止樣品中的紅曲色素被氧化。本發(fā)明所述提取液于40°C下氮氣吹至近干。本發(fā)明所述提取劑甲醇+乙酸乙酯溶液配比為0+8 V/V)。本發(fā)明所述采用乙酸乙酯+環(huán)己烷溶液定容時其配比為(1+1 V/V)。本發(fā)明方法中單點校正按式(1)計算
Ax Cs xVxlOOO
X=............................... (1)
AsXmXlOOO
式中
A—樣液色譜圖中紅曲色素各組分的峰面積；
Cs—標(biāo)準(zhǔn)工作液中紅曲色素各組分的濃度，單位為微克每毫升；
As_標(biāo)準(zhǔn)工作液色譜圖中紅曲色素各組分的峰面積；
V—樣液最終定容體積，單位為毫升；
m—試樣質(zhì)量，單位為克；
多點校正按式(2)計算
Cx xVxlOOO
X=............................... (2)
mxlOOO
Cx—標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的試樣中紅曲色素各組分的濃度，單位為微克每毫升； V—樣液最終定容體積，單位為毫升； m—試樣質(zhì)量，單位為克。本發(fā)明采用凝膠滲透色譜來凈化提取液。本發(fā)明采用高效液相色譜法測定時使用二極管陣列檢測器。本發(fā)明利用高效液相色譜法實現(xiàn)了對紅曲色素各組分定性定量的分析。高效液相色譜法的優(yōu)點是
高壓液相色譜法以液體為流動相(稱為載液)，液體流經(jīng)色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓如Agilentl200高效液相色譜壓力可達(dá)400bar。高速流動相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多，一般可達(dá)1 lOml/min。高效液相色譜法所需的分析時間較之經(jīng)典液相色譜法少得多，一般少于lh。高效近來研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高。高靈敏度高效液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測器，進(jìn)一步提高了分析的靈敏度。另外，用樣量小，一般幾個微升。適應(yīng)范圍寬氣相色譜法與高效液相色譜法的比較氣相色譜法雖具有分離能力好，靈敏度高，分析速度快，操作方便等優(yōu)點，但是受技術(shù)條件的限制，沸點太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析。而高效液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要氣化，因此不受試樣揮發(fā)性的限制。對于高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子量大 (大于400以上)的有機物(這些物質(zhì)幾乎占有機物總數(shù)的75% 80%)原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來進(jìn)行分離、分析。據(jù)統(tǒng)計，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約占20%， 而能用液相色譜分析的約占70 80%。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明采用高效液相色譜法測定肉制品中紅曲色素各組分的含量，方法前處理步驟簡單明了，所用液相色譜柱分離效果好，靈敏度、精確度和準(zhǔn)確度高， 適用于熏煮火腿類、灌腸類、熏烤雞鴨類、醬鴨類和腌臘類肉制品中紅曲色素各組分定性定量分析。本發(fā)明的優(yōu)點本發(fā)明采用甲醇+乙酸乙酯混合試劑作為肉制品中紅曲色素含量測定的提取試劑，對紅曲色素中極性不同的各組分提取效果好；針對紅曲色素中橙色素組分易氧化的性質(zhì)，本發(fā)明前處理中加入抗壞血酸(抗氧化劑)能有效地減少橙色素的氧化 紅曲色素為脂溶性色素，而肉制品中油脂含量普遍較高，本發(fā)明采用凝膠滲透色譜除油脂， 凈化效果好，試樣回收率高；已有標(biāo)準(zhǔn)或文獻(xiàn)均未對紅曲色素中各組分分離分析，本發(fā)明采用液相色譜柱C18，5mm，25cm X 4. 6mm(i. d.)，分離度高，從而能對紅曲色素中各組分進(jìn)行準(zhǔn)確的定性定量分析。


圖1是紅曲色素各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液的液相色譜圖2是本發(fā)明具體實施例1中空白香腸中添加紅曲色素各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液(lmg/kg)的液相色譜圖3是本發(fā)明具體實施例2中空白烤雞中添加紅曲色素各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液(lmg/kg)的液相色譜圖4是本發(fā)明具體實施例3中空白火腿中添加紅曲色素各組分標(biāo)準(zhǔn)溶液(lmg/kg)的液相色譜其中，橫坐標(biāo)為紅曲色素各組分的保留時間，縱坐標(biāo)為紅曲色素各組分的峰高。
具體實施例方式高效液相色譜常用的檢測器有二極管陣列檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。本發(fā)明使用二極管陣列檢測器，適用于對紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測。其特點使用面廣(如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用);靈敏度高； 線性范圍寬；對溫度和流速變化不敏感；可檢測梯度溶液洗脫的樣品。高效液相色譜系統(tǒng)一般由儲液器、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。其中輸液泵、色譜柱、檢測器是關(guān)鍵部件。輸液泵將流動相以穩(wěn)定的流速(或壓力)輸送至分析體系，在色譜柱之前通過進(jìn)樣器將樣品導(dǎo)入，流動相將樣品帶入色譜柱， 在色譜柱中各組分因在固定相中的分配系數(shù)或吸附力大小的不同而被分離，并依次隨流動相流至檢測器，檢測到的信號送至數(shù)據(jù)系統(tǒng)記錄、處理或保存。本發(fā)明以高效液相色譜法作為檢測的基本原理，現(xiàn)代高效液相色譜系統(tǒng)配置有化學(xué)工作站、計算機和軟件系統(tǒng)在內(nèi)的數(shù)據(jù)采集與處理系統(tǒng)，可檢測出待測樣品中紅曲色素的含量。高效液相色譜法分為兩個步驟數(shù)據(jù)采集與數(shù)據(jù)處理。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中作相對運動時，經(jīng)過反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。紅曲色素是一種混合物，有六種主要成分，分別為橙色素(紅斑紅曲素、 紅曲玉紅素)、黃色素(紅曲素、黃紅曲素)、紅色素(紅斑紅曲胺和紅曲玉紅胺)。因為黃紅曲素始終沒辦法購買到標(biāo)準(zhǔn)品，本發(fā)明中只檢測其中五種主要成分紅斑紅曲素、紅曲玉紅素、紅曲素、紅斑紅曲胺和紅曲玉紅胺，這五種主要成分的出峰順序為紅斑紅曲胺、紅曲玉紅胺、紅曲素、紅斑紅曲素和紅曲玉紅素。此法根據(jù)保留時間定性，外標(biāo)法定量。在設(shè)定的色譜條件下，紅曲色素五種標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖參見圖1。將紅曲色素五種標(biāo)準(zhǔn)品配成標(biāo)準(zhǔn)系列工作液依次按下述色譜條件上機測定，記錄色譜峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。當(dāng)線性范圍在0.20mg/ L 15. Omg/L，所得紅曲色素各組分濃度與峰面積呈線性關(guān)系，其線性方程和相關(guān)系數(shù)分別為
紅斑紅曲胺:Y=30. 3Χ+1. 98, R2 =0.99964 ； 紅曲玉紅胺:Υ=18. 1Χ+1. 63, R2 =0.99967 ； 紅曲素 Υ=53. 6Χ-0. 24，R2 =0.99979 ； 紅斑紅曲素:Υ=41. 5Χ+11. 3, R2 =0.99910 ； 紅曲玉紅素:Υ=40. 1Χ-0. 49, R2 =0.99960。結(jié)果計算采用單點校正和多點校正兩種
試樣中紅曲色素各組分含量以質(zhì)量分?jǐn)?shù)X計，數(shù)值以毫克每千克(mg/kg)表示，單點校正按式(1)計算
權(quán)利要求
1.一種檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，其特征在于包括以下步驟a.取適量待測肉制品試樣，絞碎并均質(zhì)；b.稱取制備好的試樣；c.用甲醇+乙酸乙酯溶液提取，加入無水硫酸鈉脫水，并加入抗壞血酸防止樣品中的紅曲色素被氧化；d.提取液吹至近干，用乙酸乙酯+環(huán)己烷溶液定容，待凈化處理；e.待凈化液由試樣環(huán)注入凝膠滲透色譜柱；f.設(shè)定高效液相色譜條件；g.凈化液供高效液相色譜測定；h.數(shù)據(jù)處理與分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，其特征在于步驟c中加入無水硫酸鈉脫水后再加入抗壞血酸以防止樣品中的紅曲色素被氧化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，其特征在于提取液于40°C下氮氣吹至近干。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，其特征在于提取劑甲醇+乙酸乙酯溶液配比為0+8 V/V)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，其特征在于采用乙酸乙酯+環(huán)己烷溶液定容時其配比為(1+1 V/V)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，其特征在于單點校正按式(1)計算
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，其特征在于 采用凝膠滲透色譜來凈化提取液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，其特征在于 高效液相色譜法測定時使用二極管陣列檢測器。
全文摘要
本發(fā)明提供一種檢測肉制品中紅曲色素含量的方法，包括以下步驟取適量待測肉制品試樣，絞碎并均質(zhì)；稱取制備好的試樣；用甲醇+乙酸乙酯溶液提取，加入無水硫酸鈉脫水，并加入抗壞血酸防止樣品中的紅曲色素被氧化；提取液吹至近干，用乙酸乙酯+環(huán)己烷溶液定容，待凈化處理；待凈化液由試樣環(huán)注入凝膠滲透色譜柱；設(shè)定高效液相色譜條件；凈化液供高效液相色譜測定；數(shù)據(jù)處理與分析。本發(fā)明方法簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、經(jīng)濟，可對紅曲色素各組分進(jìn)行定性定量分析的檢測肉制品中紅曲色素。
文檔編號G01N30/06GK102565227SQ201110456559
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月31日
發(fā)明者儲怡士, 盧普濱, 周瑤敏, 廖且根, 戴廷燦, 李偉紅, 羅林廣, 胡麗芳 申請人:江西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與標(biāo)準(zhǔn)研究所