專利名稱：一種用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體及試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及酶聯(lián)免疫吸附測定領域，具體地，涉及ー種用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體及試劑盒。
背景技術：
1971 年瑞典學者 Engvail 和 Perlmann,荷蘭學者 Van Weerman 和 Schuurs 分別報道將免疫技術發(fā)展為檢測體液中微量物質的固相免疫測定方法，即酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)。ELISA 現(xiàn)在已成為目前分析化學領域中的前沿課題，它是ー種特殊的試劑分析方法，是在免疫酶技術(immunoenzymatictechniques)的基礎上發(fā)展起來的ー種新型的免疫測定技術?；驹硭捎每乖c抗體的特異反應將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產生顏色反應，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。在這種測定方法中有3種必要的試劑①固相的抗原或抗體(免疫吸附劑)②酶標記的抗原或抗體(標記物)③酶作用的底物(顯色劑)測量時，抗原(抗體)先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性，然后加ー種抗體(抗原)與酶結合成的偶聯(lián)物(標記物)，此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性，當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原(抗體)反應結合后，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顔色。其所生成的顔色深淺與欲測的抗原(抗體)含量成正比。這種有色產物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計(酶標儀)加以測定。其方法簡單，方便訊速，特異性強?，F(xiàn)有技術中的ELISA試劑盒一般采用聚苯こ烯微孔板(40或96孔)作為固相載體，將特異性的抗原或抗體包被在聚苯こ烯微孔板的微孔內，由于該固相載體是以多孔方式存在，在檢測時，需要逐孔添加酶標記物和底物，致使酶標記物和底物的使用量大，產品成本高、靈敏度低。

實用新型內容本實用新型的目的在于克服上述現(xiàn)有技術的缺點和不足，提供ー種用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體，可降低酶標記物和底物的使用量，從而節(jié)約成本，降低產品價格，并可提高測定的靈敏度。本實用新型的另一目的在于提供ー種用于酶聯(lián)免疫吸附測定的試劑盒。實現(xiàn)上述目的的技術方案如下ー種用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體，所述固相載體為可結合蛋白的纖維素膜。[0015]進ー步地，所述纖維素膜為硝酸纖維素膜。進ー步地，所述硝酸纖維素膜上可設置檢測線，所述檢測線位置包被可與血液中IgE抗體結合的特異性過敏源。進ー步地，所述硝酸纖維素膜上還可設置有質控線。ー種用于酶聯(lián)免疫吸附測定的試劑盒，包括上述的固相載體。由于采用上述技術方案，本實用新型具有以下有益效果I、本實用新型采用可結合蛋白的纖維素膜，尤其是硝酸纖維素膜，代替?zhèn)鹘y(tǒng)的聚苯こ烯微孔板，能降低酶標記物和底物的使用量，從而節(jié)約成本，降低產品價格。 2、本實用新型采用硝酸纖維素膜作為固相載體，可以提高檢測靈敏度，即使是在血液樣本中的含量極低的特異性IgE抗體，通過將特異性過敏原結合在硝酸纖維素膜的檢測線位置處，也可進行高效地檢測。3、在硝酸纖維素膜上設置質控線，用于檢測操作是否正確或試劑是否無效，提高檢測成功率。下面通過附圖和實施例，對本實用新型的技術方案做進ー步的詳細描述。

圖I為本實用新型的用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體結構示意圖。
具體實施方式
以下結合附圖對本實用新型的優(yōu)選實施例進行說明，應當理解，此處所描述的優(yōu)選實施例僅用于說明和解釋本實用新型，并不用于限定本實用新型。本實施例以檢測血液樣本中的含量極低的特異性IgE抗體為例進行說明。如圖I所示，本實用新型的用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體為可結合蛋白的纖維素膜I，優(yōu)選硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜上可設置檢測線2和質控線3，檢測線2位置包被可與血液中IgE抗體結合的特異性過敏源(噴膜包被處理)。其中過敏原噴硝酸纖維素膜的處理方法如下(I)將過敏原溶于IOOmM的PBS (PH :8. 0)，使其濃度達到lmg/ml。(2)將BioDot噴膜機參數(shù)設置為Rate值I. Oul/cm。(3)將硝酸纖維素膜平放在操作臺上，在濕度30% -50%范圍內噴膜。(4)在室溫條件下放置1-2小吋，使其干燥。質控線的噴膜方法同上。本實用新型的用于酶聯(lián)免疫吸附測定的試劑盒，包括上述的固相載體(含檢測線及質控線)以及清洗液(PBST)、酶標ニ抗(辣根過氧化物酶標記的鼠抗人IgE單克隆抗體)和底物(四甲基聯(lián)苯胺TMB)、終止液。利用上述試劑盒進行檢測的過程如下(I)將噴好過敏原的硝酸纖維素膜置于孵育槽中，加入Iml血清樣品，室溫下在搖擺搖床上晃動孵育30分鐘。(2)吸去孵育槽中液體。每槽加入I. 5ml清洗液，室溫下在搖擺搖床上晃動5分鐘，吸去孵育槽中液體。再重復洗滌2次。[0038](3)吸去孵育槽中液體。每槽加入Iml酶標ニ抗，室溫下在搖擺搖床上晃動孵育30分鐘。(4)重復步驟⑵洗滌。(5)吸去孵育槽中液體。每槽加入Iml底物，室溫下在搖擺搖床上輕微晃動孵育10分鐘。(6)吸去孵育槽中液體。每槽加入I. 5ml蒸餾水，室溫下晃動洗滌I分鐘。(7)吸去孵育槽中液體。每槽中加入Iml終止液，室溫下晃動孵育5分鐘。(8)將硝酸纖維素膜置于濾紙上干燥，將檢測條帶(檢測線區(qū))與陽性條帶(質控線區(qū))比較，判斷結果。結果解釋陽性分別在檢測線區(qū)及質控線區(qū)各出現(xiàn)一條藍色條帶；陰性僅在質控線區(qū)出現(xiàn)一條藍色帶；質控線區(qū)未出現(xiàn)藍色帶，表明不正確的操作或試劑無效，需重新進行檢測試驗?？贵w濃度在0. 7IU/ml或以上時，本試劑檢測結果為臨界陽性或陽性；在0. 35IU/ml或以下時，本試劑檢測結果為陰性；在0. 35-0. 7IU/ml之間時，本試劑檢測結果為臨界陽性或陰性。最后應說明的是以上所述僅為本實用新型的優(yōu)選實施例而已，并不用于限制本實用新型，盡管參照前述實施例對本實用新型進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。凡在本實用新型的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本實用新型的保護范圍之內。
權利要求1.ー種用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體，其特征在于，所述固相載體為可結合蛋白的纖維素膜。
2.根據權利要求I所述的用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體，其特征在于，所述纖維素膜為硝酸纖維素膜。
3.根據權利要求2所述的用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體，其特征在于，所述硝酸纖維素膜上可設置檢測線，所述檢測線位置包被可與血液中IgE抗體結合的特異性過敏源。
4.根據權利要求3所述的用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體，其特征在于，所述硝酸纖維素膜上還可設置有質控線。
5.ー種用于酶聯(lián)免疫吸附測定的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1-4任一項所述的固相載體。
專利摘要本實用新型公開了一種用于酶聯(lián)免疫吸附測定的固相載體及含有所述固相載體的試劑盒，其中固相載體采用可結合蛋白的纖維素膜，尤其是硝酸纖維素膜，代替?zhèn)鹘y(tǒng)的聚苯乙烯微孔板，可提高檢測靈敏度，降低酶標記物和底物的使用量，從而節(jié)約成本，降低產品價格。
文檔編號G01N33/544GK202433382SQ20112054302
公開日2012年9月12日 申請日期2011年12月22日 優(yōu)先權日2011年12月22日
發(fā)明者張逸南, 李冬冬 申請人:北京海瑞祥天生物科技有限公司