專利名稱：外斐氏試驗(yàn)卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種用于快速檢測(cè)斑疹傷寒外斐氏試驗(yàn)卡。
背景技術(shù)：
目前臨床檢測(cè)斑疹傷寒仍然采用經(jīng)典的外斐氏試驗(yàn)，該試驗(yàn)將外斐氏試劑(包括變形桿菌0X19診斷菌液、變形桿菌0X2診斷菌液及變形桿菌OXK診斷菌液)中的三種診斷菌液(菌體抗原)分別與病人血清樣品進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)檢測(cè)血清中的相應(yīng)抗體，37°C放置 16-18小時(shí)后判定結(jié)果，觀察試管底部凝集沉淀情況，凝集效價(jià)> 1:80以上者為陽(yáng)性，如大同地區(qū)533名健康人肥達(dá)氏及外斐氏凝集試驗(yàn)結(jié)果初步調(diào)查報(bào)告(鮑季縛等，山西醫(yī)藥雜志，1978年第I期，42-44)記載的即是上述方法。該方法存在的技術(shù)問(wèn)題1、操作繁瑣先將外斐氏試劑的三種診斷菌液分別用生理鹽水10倍稀釋；病人樣品用生理鹽水按1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1: 1280倍比稀釋，平行稀釋3份；將平行稀釋好的每個(gè)稀釋度樣品與相應(yīng)已稀釋的三種診斷菌液進(jìn)行等量混合。2、耗時(shí)長(zhǎng)混合好的樣品需在37°C放置16-18小時(shí)后才能判定結(jié)果。整個(gè)試驗(yàn)需要耗時(shí)20小時(shí)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有臨床檢測(cè)斑疹傷寒仍然采用經(jīng)典的外斐氏試驗(yàn)存在的操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)的缺陷，提供一種外斐氏試驗(yàn)卡，它能快速檢測(cè)斑疹傷寒，檢測(cè)操作簡(jiǎn)便,生產(chǎn)成本低。本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是一種外斐氏試驗(yàn)卡，包括襯墊，所述襯墊上由左至右依次固定有具有吸水性能的樣品墊、玻璃纖維墊、層析膜和具有吸水性能的吸收墊，玻璃纖維墊上均勻噴涂有帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒，樣品墊右端搭接在玻璃纖維墊上，玻璃纖維墊的右端搭接在層析膜左端上，吸收墊的左端搭接在層析膜右端上，層析膜上設(shè)有試驗(yàn)線和對(duì)照線，對(duì)照線位于試驗(yàn)線右側(cè)，所述試驗(yàn)線是將變形桿菌0X19、變形桿菌0X2及變形桿菌OXK三種菌中的一種固定在層析膜上形成。變形桿菌0X19、變形桿菌0X2及變形桿菌OXK三種菌都是作為外斐氏反應(yīng)的抗原。本發(fā)明中樣品墊、吸收墊均為市售的濾紙制成，優(yōu)選吸水性能較強(qiáng)的定性濾紙，這樣利于檢測(cè)，增加檢測(cè)速度。層析膜采用市售硝酸纖維素膜，硝酸纖維素膜又稱為NC膜， 在膠體金試紙中用做C/T線的承載體，同時(shí)也是免疫反應(yīng)的發(fā)生處。采用的硝酸纖維素膜型號(hào)135s、170s或180s (以秒為單位的定義每4cm膜，水的層析時(shí)間是多少S)。玻璃纖維墊是玻璃纖維制品的一種。玻璃纖維是一種性能優(yōu)異的無(wú)機(jī)非金屬材料。英文原名為 glassfiber。成分為二氧化硅、氧化鋁、氧化鈣、氧化硼、氧化鎂、氧化鈉等。它是以玻璃球或廢舊玻璃為原料經(jīng)高溫熔制、拉絲、絡(luò)紗、織布等工藝。最后形成各類產(chǎn)品，玻璃纖維單絲的直徑從幾個(gè)微米到二十幾米個(gè)微米，相當(dāng)于一根頭發(fā)絲的1/20-1/5，每束纖維原絲都有
3數(shù)百根甚至上千根單絲組成，通常作為復(fù)材料中的增強(qiáng)材料，電絕緣材料和絕熱保溫材料， 電路基板等，廣泛應(yīng)用于國(guó)民經(jīng)濟(jì)各個(gè)領(lǐng)域。玻璃纖維墊上均勻噴涂有帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒，彩色膠乳顆粒一般采用紅色的膠乳顆粒，這樣顯色明顯；膠乳顆粒上進(jìn)行標(biāo)記的方法在本領(lǐng)域?yàn)槌Ｒ?guī)技術(shù)手段，發(fā)明人在此不做贅述。彩色膠乳顆粒帶的標(biāo)記可以與人血清中的IgG抗體結(jié)合，試驗(yàn)線上是抗原，本發(fā)明的檢測(cè)是在層析作用的推動(dòng)下完成的。當(dāng)血清樣品被添加至樣品墊上后，通過(guò)層析作用到達(dá)玻璃纖維墊，血清樣品中的IgG抗體與帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒結(jié)合形成結(jié)合顆粒， 然后進(jìn)一步至層析膜上，在層析膜的層析作用下，結(jié)合顆粒向前移動(dòng)，如血清中含有抗變形桿菌0X19、變形桿菌0X2及變形桿菌OXK的抗體時(shí)(即病變時(shí))，與相應(yīng)的試驗(yàn)線的抗原結(jié)合，呈現(xiàn)顆粒的顏色線條，未結(jié)合的顆粒會(huì)繼續(xù)向前移動(dòng)，與對(duì)照線結(jié)合呈現(xiàn)顆粒的顏色線條，即顯示試驗(yàn)線和對(duì)照線兩條顏色線；如血清中不含有抗變形桿菌0X19、變形桿菌0X2及變形桿菌O (的抗體時(shí)，顆粒與相應(yīng)的試驗(yàn)線的抗原無(wú)法結(jié)合，試驗(yàn)線不顯色，未結(jié)合的顆粒會(huì)繼續(xù)向前移動(dòng)，與對(duì)照線結(jié)合呈現(xiàn)顆粒的顏色線條，即只顯示對(duì)照線一條顏色線。因膜層析速度較快，幾分鐘內(nèi)帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒即可移動(dòng)完整個(gè)層析膜條， 立刻可以判定結(jié)果，如試驗(yàn)線和對(duì)照線均顯色，血清抗體為陽(yáng)性；只有對(duì)照線一條線顯色， 血清抗體為陰性。變形桿菌屬的X19，X2，Xk菌株的菌體O抗原與斑疹傷寒立克次體和恙蟲病立克次體有共同抗原，故可用0X19，0X2，OXk代替立克次體作為抗原與相應(yīng)患者血清進(jìn)行交叉凝集反應(yīng)，此稱外斐試驗(yàn)，輔助診斷立克次體病。本發(fā)明使用的變形桿菌0X19、變形桿菌0X2 及變形桿菌OXK均為菌體，而非菌液，這樣檢測(cè)的靈敏度高。作為優(yōu)選，所述襯墊的主體為塑料墊，塑料墊的表面涂覆有不干膠，樣品墊、玻璃纖維墊、層析膜和吸收墊均與襯墊粘接固定。作為優(yōu)選，所述帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒為標(biāo)記有SPA的彩色膠乳顆粒。金黃色葡萄球菌A蛋白(Staphylococal Protein A, SPA)是一種從金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁分離的蛋白質(zhì)。早在1940年，Vevwey發(fā)現(xiàn)在某些金黃色葡萄球菌中,含有一種物質(zhì),在雙向擴(kuò)散試驗(yàn)中能與正常人血清形成沉淀。Jensen也發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象,并將其命名為A抗原。直到1963 年Lofkvist等分離了該抗原,并證明它是一種蛋白質(zhì)。為將A與糖相區(qū)別,Grov將其命名為金黃色葡萄球菌A蛋白，簡(jiǎn)稱SPA或蛋白A。由于SPA的一些免疫特性，它已引起廣大免疫學(xué)者的興趣，并發(fā)展成為免疫學(xué)上一種極為有用的工具。作為優(yōu)選，所述對(duì)照線是將SPA固定在層析膜上形成。對(duì)照線與標(biāo)記物對(duì)應(yīng)。作為優(yōu)選，所述帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒為標(biāo)記有鼠抗人IgG單克隆抗體的彩色膠乳顆粒。一種較好的標(biāo)記物。作為優(yōu)選，所述對(duì)照線是將羊抗鼠IgG抗體固定在層析膜上形成。羊抗鼠IgG抗體又稱羊抗鼠IgG多克隆抗體。羊抗鼠IgG(免疫球蛋白)多克隆抗體在膠體金法快速體外診斷產(chǎn)品中用來(lái)固定于硝酸纖維膜(固定相)上，與膠體金標(biāo)記的單克隆抗體發(fā)生特異性免疫反應(yīng)并顯示一定的顏色，形成控制線進(jìn)行免疫診斷。本發(fā)明的有益效果是只需要將病人樣品做1:100稀釋，直接加到本發(fā)明上即可， 操作十分簡(jiǎn)便；樣品加到本發(fā)明上，10分鐘肉眼即可觀測(cè)檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行判定，整個(gè)檢測(cè)耗時(shí)約30分鐘，耗時(shí)短。


圖I是本發(fā)明的一種俯視圖2是本發(fā)明的一種剖視分解圖。圖中1、樣品墊，2、玻璃纖維墊，3、試驗(yàn)線，4、對(duì)照線，5、層析膜，6、吸收墊，7、襯墊。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)具體實(shí)施例，并結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說(shuō)明。實(shí)施例I
一種外斐氏試驗(yàn)卡，包括襯墊7，襯墊7的主體為塑料墊，塑料墊的表面涂覆有不干膠，所述襯墊7上由左至右依次粘接固定有具有吸水性能的樣品墊I (濾紙，上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司)、玻璃纖維墊2 (Ahlstrom 8964玻纖，上海杰一生物技術(shù)有限公司，型號(hào) JY-J101)、層析膜5 (硝酸纖維素膜，Millipore公司，型號(hào)135s)和具有吸水性能的吸收墊 6 (濾紙，上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司)，玻璃纖維墊2上均勻噴涂有帶SPA標(biāo)記的紅色膠乳顆粒(紅色聚苯乙烯膠乳顆粒，上海杰一生物技術(shù)有限公司，型號(hào)PSR030N )，膠乳顆粒進(jìn)行標(biāo)記的方法為本領(lǐng)域公知技術(shù)，在此不做贅述，樣品墊I右端搭接在玻璃纖維墊2上，玻璃纖維墊2的右端搭接在層析膜5左端上，吸收墊6的左端搭接在層析膜5右端上，層析膜 5中部的左側(cè)有試驗(yàn)線3，試驗(yàn)線3是將變形桿菌0X19(市售，購(gòu)買自中國(guó)食品藥品檢定研究院下屬的中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心，購(gòu)買的產(chǎn)品編號(hào)是49101)固定在層析膜5上形成， 層析膜5中部的右側(cè)有對(duì)照線4，對(duì)照線4是將SPA (市售，鄭州百基生物技術(shù)有限公司)固定在層析膜5上形成，變形桿菌0X19、SPA的固定方法均為本領(lǐng)域公知技術(shù)，在此不做贅述。本實(shí)施例各組件規(guī)格樣品墊長(zhǎng)寬20mmX4mm ;玻璃纖維墊長(zhǎng)寬10mmX4mm ;層析膜長(zhǎng)寬25臟X4mm ;吸收塾長(zhǎng)寬2CtamX4臟；襯塾長(zhǎng)寬厚30mmX4mmX 1mmη實(shí)施例2
一種外斐氏試驗(yàn)卡，包括襯墊7，襯墊7的主體為塑料墊，塑料墊的表面涂覆有不干膠，所述襯墊7上由左至右依次粘接固定有具有吸水性能的樣品墊I (濾紙，上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司)、玻璃纖維墊2 (Ahlstrom 8964玻纖，上海杰一生物技術(shù)有限公司，型號(hào) JY-J101)、層析膜5 (硝酸纖維素膜，Millipore有限公司，型號(hào)180s)和具有吸水性能的吸收墊6 (濾紙，上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司)，玻璃纖維墊2上均勻噴涂有帶SPA標(biāo)記的紅色膠乳顆粒，樣品墊I右端搭接在玻璃纖維墊2上，玻璃纖維墊2的右端搭接在層析膜5左端上，吸收墊6的左端搭接在層析膜5右端上，層析膜5中部的左側(cè)有試驗(yàn)線3，試驗(yàn)線3是將變形桿菌0X2 (市售，購(gòu)買自中國(guó)食品藥品檢定研究院下屬的中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心， 購(gòu)買的產(chǎn)品編號(hào)是49102)固定在層析膜5上形成，層析膜5中部的右側(cè)有對(duì)照線4，對(duì)照線 4是將SPA (市售，鄭州百基生物技術(shù)有限公司)固定在層析膜5上形成，變形桿菌0X2、SPA 的固定方法均為本領(lǐng)域公知技術(shù)，在此不做贅述。本實(shí)施例各組件規(guī)格樣品墊長(zhǎng)寬18mmX4mm ;玻璃纖維墊長(zhǎng)寬10mmX4mm ;層析膜長(zhǎng)寬25臟Χ4_ ;吸收塾長(zhǎng)寬18mmX4mm ;襯塾長(zhǎng)寬厚3CtamX4_X0· 8臟。實(shí)施例3一種外斐氏試驗(yàn)卡，包括襯墊7，襯墊7的主體為塑料墊，塑料墊的表面涂覆有不干膠，所述襯墊7上由左至右依次粘接固定有具有吸水性能的樣品墊I (濾紙，上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司)、玻璃纖維墊2 (Ahlstrom 8964玻纖，上海杰一生物技術(shù)有限公司，型號(hào) JY-J101)、層析膜5 (硝酸纖維素膜，美國(guó)Pall公司，型號(hào)Pall Vivid 170s)和具有吸水性能的吸收墊6 (濾紙，上海金標(biāo)生物技術(shù)有限公司)，玻璃纖維墊2上均勻噴涂有帶鼠抗人 IgG單克隆抗體(市售，上海博耀生物科技有限公司)標(biāo)記的紅色膠乳顆粒，樣品墊I右端搭接在玻璃纖維墊2上，玻璃纖維墊2的右端搭接在層析膜5左端上，吸收墊6的左端搭接在層析膜5右端上，層析膜5中部的左側(cè)有試驗(yàn)線3，試驗(yàn)線3是將變形桿菌OXK (市售，購(gòu)買自中國(guó)食品藥品檢定研究院下屬的中國(guó)醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心，購(gòu)買的產(chǎn)品編號(hào)是49103) 固定在層析膜5上形成，層析膜5中部的右側(cè)有對(duì)照線4，對(duì)照線4是將羊抗鼠IgG抗體(市售，上海川翔生物科技有限公司)固定在層析膜5上形成，變形桿菌0ΧΚ、羊抗鼠IgG抗體的固定方法均為本領(lǐng)域公知技術(shù)，在此不做贅述。本實(shí)施例各組件規(guī)格樣品墊長(zhǎng)寬20mmX4mm ;玻璃纖維墊長(zhǎng)寬10mmX4mm ;層析膜長(zhǎng)寬25臟X 4mm ;吸收塾長(zhǎng)寬2CtamX 4臟；襯塾長(zhǎng)寬厚3CtamX 4_X I. 2臟。此外需要說(shuō)明的是本發(fā)明各組件的規(guī)格可根據(jù)實(shí)際需求做出相應(yīng)調(diào)整，發(fā)明人在此不做--列舉。本發(fā)明使用時(shí)，只需要將病人樣品做1:100稀釋，直接加到本發(fā)明上即可，操作十分簡(jiǎn)便；樣品加到本發(fā)明上，10分鐘肉眼即可觀測(cè)檢測(cè)結(jié)果，進(jìn)行判定，如試驗(yàn)線3和對(duì)照線4均顯色，血清抗體為陽(yáng)性；只有對(duì)照線4 一條線顯色，血清抗體為陰性，整個(gè)檢測(cè)耗時(shí)約30分鐘，耗時(shí)短。以上所述的實(shí)施例只是本發(fā)明的一種較佳的方案，并非對(duì)本發(fā)明作任何形式上的限制，在不超出權(quán)利要求所記載的技術(shù)方案的前提下還有其它的變體及改型。
權(quán)利要求
1.一種外斐氏試驗(yàn)卡，其特征在于包括襯墊(7)，所述襯墊(7)上由左至右依次固定有具有吸水性能的樣品墊(I)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和具有吸水性能的吸收墊(6)， 玻璃纖維墊(2)上均勻噴涂有帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒，樣品墊(I)右端搭接在玻璃纖維墊 (2)上，玻璃纖維墊(2)的右端搭接在層析膜(5)左端上，吸收墊(6)的左端搭接在層析膜 (5)右端上，層析膜(5)上設(shè)有試驗(yàn)線(3)和對(duì)照線(4)，對(duì)照線(4)位于試驗(yàn)線(3)右側(cè)， 所述試驗(yàn)線(3)是將變形桿菌0X19、變形桿菌0X2及變形桿菌OXK三種菌中的一種固定在層析膜(5)上形成。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的外斐氏試驗(yàn)卡,其特征在于所述襯墊(7)的主體為塑料墊， 塑料墊的表面涂覆有不干膠，樣品墊(I)、玻璃纖維墊(2)、層析膜(5)和吸收墊(6)均與襯墊(7)粘接固定。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的外斐氏試驗(yàn)卡，其特征在于所述帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒為標(biāo)記有SPA的彩色膠乳顆粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的外斐氏試驗(yàn)卡，其特征在于所述對(duì)照線(4)是將SPA固定在層析膜(5)上形成。
5.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的外斐氏試驗(yàn)卡，其特征在于所述帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒為標(biāo)記有鼠抗人IgG單克隆抗體的彩色膠乳顆粒。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的外斐氏試驗(yàn)卡，其特征在于所述對(duì)照線(4)是將羊抗鼠IgG 抗體固定在層析膜(5)上形成。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種用于快速檢測(cè)斑疹傷寒外斐氏試驗(yàn)卡，其目的在于解決現(xiàn)有臨床檢測(cè)斑疹傷寒仍然采用經(jīng)典的外斐氏試驗(yàn)存在的操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)的缺陷。本發(fā)明包括襯墊，所述襯墊上由左至右依次固定有具有吸水性能的樣品墊、玻璃纖維條、層析膜和具有吸水性能的吸收墊，玻璃纖維條上均勻噴涂有帶標(biāo)記的彩色膠乳顆粒，樣品墊右端搭接在玻璃纖維條上，玻璃纖維條的右端搭接在層析膜左端上，吸收墊的左端搭接在層析膜右端上，層析膜上設(shè)有試驗(yàn)線和對(duì)照線，對(duì)照線位于試驗(yàn)線右側(cè)，所述試驗(yàn)線是將變形桿菌OX19、變形桿菌OX2及變形桿菌OXK三種菌中的一種固定在層析膜上形成。本發(fā)明能快速檢測(cè)斑疹傷寒，檢測(cè)操作簡(jiǎn)便，生產(chǎn)成本低。
文檔編號(hào)G01N33/543GK102590500SQ20121001169
公開(kāi)日2012年7月18日 申請(qǐng)日期2012年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月16日
發(fā)明者張捷, 李曉霞, 范亞民 申請(qǐng)人:寧波天潤(rùn)生物藥業(yè)有限公司