專利名稱：Hplc法測(cè)定維生素c泡騰片中維生素c含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及定量測(cè)定制劑中維生素C含量的方法，具體地說是一種高效液相色譜法(HPLC法)測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法。
背景技術(shù)：
國內(nèi)對(duì)用HPLC法測(cè)定藥品、果汁、食品等中的維生素C的含量的研究較多，但對(duì)泡騰片中維生素C含量測(cè)定的液相方法研究較少。測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C的含量的常用方法為中和滴定法，中華人民共和國藥典2005版有詳細(xì)的描述。但是對(duì)于添加了一些特定的輔料的維生素C泡騰片，由于這些特定輔料如維生素 B2、香精，酒石酸、糖、碳酸氫鈉等的存在，在采用滴定法測(cè)定過程中會(huì)因顏色和維生素B2的干擾，不能準(zhǔn)確地確定滴定終點(diǎn)，從而造成測(cè)定誤差；另外，試劑中碘離子易被氧化，也會(huì)造成滴定終點(diǎn)有誤差，因此，對(duì)于添加了上述特定輔料的維生素C泡騰片，不適合采用中和滴定法來測(cè)定維生素C的含量。還有，中和滴定法中所使用的碘滴定液容易揮發(fā)，易對(duì)人體造成損害。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題，針對(duì)添加有維生素B2、香精、糖等輔料的維生素C泡騰片，因無法使用中國藥典所規(guī)定的測(cè)定方法進(jìn)行維生素C的含量測(cè)定的情況，提供一種 HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，本方法具有簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好、專屬性強(qiáng)等特點(diǎn)，適用于對(duì)維生素C泡騰片中的維生素C含量進(jìn)行測(cè)定。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是
一種HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，其色譜條件為
(1)色譜柱島津VP-ODS (250 mm X4. 6 mm,5um)；
(2)流動(dòng)相為混合比例為298的甲醇和O. 03mol/L磷酸鹽緩沖液；
(3)紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。作為本發(fā)明的一種限定，所述的磷酸鹽緩沖液為磷酸二氫鉀和磷酸二氫鈉溶液中的一種。作為上述限定的進(jìn)一步限定，所述的磷酸鹽緩沖液為磷酸二氫鉀溶液。作為上述限定的再次限定，所述的磷酸二氫鉀溶液的pH值為2. 4。作為上述限定的最后限定，所述的磷酸二氫鉀溶液使用磷酸調(diào)節(jié)pH值。作為本發(fā)明的另一種限定，該HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，其色譜條件為所用流動(dòng)相的流速為O. 8mL/min,進(jìn)樣體積為20 μ L，柱溫為30°C。通過上述方法的建立過程，本方法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C的含量能夠達(dá)到真實(shí)和準(zhǔn)確地分析的要求。由于采用了上述的技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，所取得的技術(shù)進(jìn)步在于采用HPLC法檢測(cè)維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，操作簡(jiǎn)單，提高了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度，并可以適用于有顏色干擾的樣品；另外本發(fā)明避免使用傳統(tǒng)檢測(cè)方法中存在的使用碘試劑的情況，提高了操作的安全性。本發(fā)明適于對(duì)維生素C泡騰片中維生素C的含量進(jìn)行測(cè)定。


圖I為本發(fā)明實(shí)施例溶劑干擾性試驗(yàn)的HPLC圖2為本發(fā)明實(shí)施例空白輔料干擾性試驗(yàn)的HPLC圖3為本發(fā)明實(shí)施例樣品批號(hào)為100312的HPLC4為本發(fā)明實(shí)施例樣品批號(hào)為100420的HPLC5為本發(fā)明實(shí)施例樣品批號(hào)為100520的HPLC6為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品濃度為10 μ L和20 μ L線性范圍測(cè)定的HPLC7為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品濃度為25 μ L和30 μ L線性范圍測(cè)定的HPLC8為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品濃度為35 μ L和40 μ L線性范圍測(cè)定的HPLC9為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品精密度試驗(yàn)連續(xù)進(jìn)樣第1-3次測(cè)定的HPLC圖10為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品精密度試驗(yàn)連續(xù)進(jìn)樣第4-6次測(cè)定的HPLC圖11為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品穩(wěn)定性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品Oh測(cè)定的HPLC12為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品穩(wěn)定性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品2h測(cè)定的HPLC13為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品穩(wěn)定性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品4h測(cè)定的HPLC14為本發(fā)明實(shí)施例對(duì)照品穩(wěn)定性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)品6h測(cè)定的HPLC15為本發(fā)明實(shí)施例樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品Oh測(cè)定的HPLC圖16為本發(fā)明實(shí)施例樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品2h測(cè)定的HPLC圖17為本發(fā)明實(shí)施例樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品4h測(cè)定的HPLC圖18為本發(fā)明實(shí)施例樣品穩(wěn)定性試驗(yàn)樣品6h測(cè)定的HPLC圖。本發(fā)明下面將結(jié)合說明書附圖與具體實(shí)施例作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但是本發(fā)明的保
護(hù)范圍并不限于下述的實(shí)施例。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例只用于說明本發(fā)明，并不限定本發(fā)明。實(shí)施例一種測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法
本測(cè)量方法是利用HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量。該方法的色譜條件
為
(1)色譜柱島津VP-ODS (250 mm X4. 6 mm,5um)；
(2)流動(dòng)相為混合比例為298的甲醇和O. 03mol/L磷酸鹽緩沖液，混合比例為體積
比；
其中0. 03mol/L的磷酸鹽緩沖液溶液為磷酸二氫鉀(也可以用磷酸二氫鈉溶液替代)， 用磷酸調(diào)節(jié)PH值至2.4;
(3)紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。一、本發(fā)明方法的建立過程
I、儀器與試劑儀器島津LC-2010A高效液相色譜儀(LC-2010型號(hào)檢測(cè)器、LC-2010型號(hào)泵，LC-2010 柱溫箱，LC-2010自動(dòng)進(jìn)樣器)，LCsolution色譜工作站；
試劑甲醇(色譜純)，磷酸二氫鉀(優(yōu)級(jí)純)，乙二胺四乙酸二鈉即EDTA-2Na (優(yōu)級(jí)純)， 磷酸(優(yōu)級(jí)純)，水(二次去離子水)，維生素C泡騰片(樣品，河北科星藥業(yè)有限公司生產(chǎn))，維生素C對(duì)照品(美國ChemService公司生產(chǎn)，批號(hào)為418-10B，含量為99. 5%)。2、含量測(cè)定方法的建立
2.I、波長(zhǎng)的選擇
根據(jù)維生素C紫外光吸收具有的特性，測(cè)定了它的O. 02%EDTA-2Na水溶液在紫外光下的吸收?qǐng)D譜，維生素C的檢測(cè)波長(zhǎng)選用254nm。2. 2、溶液的配制
溶劑的配制取4. 08g磷酸二氫鉀，置于IOOOml的棕色容量瓶中，用二次去離子水溶解并稀釋至刻度，搖勻，配制得O. 03mol/L磷酸二氫鉀溶液A ；
取O. 2g EDTA-2Na,置于IOOOml的棕色容量瓶中用二次去離子水溶解并稀釋至刻度， 搖勻，配制得O. 02%EDTA-2Na溶液B。對(duì)照品溶液的配制取維生素C對(duì)照品50mg精密稱定置IOOml的棕色容量瓶中用溶液B溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置IOOml棕色容量瓶中，用溶液A稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液M。樣品溶液的配制取樣品10片，精密稱定，研細(xì)，取細(xì)粉O. 56g (約相當(dāng)于維生素C 50mg)精密稱定，置IOOml的棕色容量瓶中再用溶液B溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml置IOOml量瓶中，用溶液A稀釋至刻度，搖勻，即得樣品溶液D。2. 3、溶劑、空白輔料的干擾性試驗(yàn)
為排除色譜圖中有溶劑和空白輔料干擾維生素C峰的出現(xiàn)，對(duì)單獨(dú)的溶劑和空白輔料進(jìn)行專屬性試驗(yàn)，以增加檢測(cè)的準(zhǔn)確性。溶劑的影響精密量取5ml溶液B置IOOml棕色容量瓶中，加入溶液A溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為樣品I?？瞻纵o料的影響按制劑配方規(guī)定的比例，除維生素C外，其它組分和輔料稱取 10. 0g，混勻，研細(xì)，取細(xì)粉O. 56g精密稱定，置于IOOml的棕色容量瓶中，加入溶液B，溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過；精密量取濾液5ml置IOOml棕色容量瓶中，加入溶液A稀釋至刻度，搖勻，作為樣品2。照上述色譜條件進(jìn)樣，分別取樣品I和樣品2各20μ L，進(jìn)樣，記錄色譜圖，如圖I 和圖2所示。結(jié)果顯示由圖I可以看出檢測(cè)結(jié)果接近于基線沒有干擾峰出現(xiàn)，表明溶劑對(duì)維生素C的測(cè)定沒有影響。由圖2可以看出沒有干擾峰出現(xiàn)，表明空白輔料對(duì)維生素C測(cè)定沒有影響。2. 4、樣品的測(cè)定
取三批樣品，依照上述2. 2方法制備樣品溶液，每批樣品做2個(gè)平行，各取20 μ L進(jìn)樣， 記錄色譜圖，批號(hào)為100312的產(chǎn)品測(cè)定結(jié)果如圖3所示，批號(hào)為100420的產(chǎn)品測(cè)定結(jié)果如圖4所示，批號(hào)為100520的產(chǎn)品測(cè)定結(jié)果如圖5所示，按外標(biāo)法計(jì)算維生素C的含量，結(jié)果如表I所示,根據(jù)試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果,確定維生素C含量為標(biāo)示量的90. 0%-110. 0%。
權(quán)利要求
1.HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，其特征在于該方法的色譜條件為(1)色譜柱島津VP-ODS (250 mm X4. 6 mm,5um)；(2)流動(dòng)相為混合比例為298的甲醇和O. 03mol/L磷酸鹽緩沖液；(3)紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，其特征在于所述的磷酸鹽緩沖液為磷酸二氫鉀或磷酸二氫鈉溶液中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，其特征在于所述的磷酸鹽緩沖液為磷酸二氫鉀溶液。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，其特征在于所述的磷酸二氫鉀溶液的PH值為2. 4。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，其特征在于所述的磷酸二氫鉀溶液使用磷酸調(diào)節(jié)PH值。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，其特征在于所用流動(dòng)相的流速為O. 8mL/min，進(jìn)樣體積為20 μ L，柱溫為30°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了HPLC法測(cè)定維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，其色譜條件為(1)色譜柱島津VP-ODS(250mm×4.6mm，5μm)；(2)流動(dòng)相為混合比例為2:98的甲醇和0.03mol/L磷酸鹽緩沖液；(3)紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm；所用流動(dòng)相的流速為0.8mL/min，進(jìn)樣體積為20μL，柱溫為30℃。本發(fā)明采用HPLC法檢測(cè)維生素C泡騰片中維生素C含量的方法，操作簡(jiǎn)單，提高了檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確度，并可以適用于有顏色干擾的樣品；另外本發(fā)明避免使用傳統(tǒng)檢測(cè)方法中使用碘試劑，提高了操作的安全性。本發(fā)明適于對(duì)維生素C泡騰片中維生素C的含量進(jìn)行測(cè)定。
文檔編號(hào)G01N30/36GK102608231SQ20121007019
公開日2012年7月25日 申請(qǐng)日期2012年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月30日
發(fā)明者付旭東, 呂虎林, 田會(huì)彥, 魏桂香 申請(qǐng)人:河北科星藥業(yè)有限公司