專利名稱：一種顯色測定一氧化氮的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于化學(xué)與生物化學(xué)領(lǐng)域，主要涉及ー類稀土水楊酸酯配合物與一氧化氮的特征顯色反應(yīng)及其基于這ー特征反應(yīng)的ー氧化氮檢測方法，可廣泛用于化學(xué)、生物、醫(yī)藥及環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
一氧化氮不僅僅是大氣的污染物，也是生物體內(nèi)的信號分子，參與很多的生理過程。ー氧化氮是近二十年來發(fā)現(xiàn)的一種新的細(xì)胞信使分子和效應(yīng)分子，它能夠自由透過細(xì)胞膜，是迄今為止發(fā)現(xiàn)的體內(nèi)最小、最輕、最簡單的信息傳遞分子。鑒于ー氧化氮的重要性，各國的化學(xué)家、生物學(xué)家和醫(yī)學(xué)家爭相對其進(jìn)行研究。目前，雖然已有大量的關(guān)于ー氧化氮的實驗和理論化學(xué)的文獻(xiàn)，但是人們還不完全了解一氧化氮具體是怎樣參與生理過程的。為了弄清楚這個問題，就有必要發(fā)展ー種實時、特異、直接而簡單的方法來檢測生物體 內(nèi)的ー氧化氮。其實，目前已有很多關(guān)于ー氧化氮的檢測方法，比如熒光法、電子順磁共振法(EPR)、Griess試劑法、熒光探針法和電化學(xué)方法等等，但是都有其各自的優(yōu)缺點，不盡如人意。其中應(yīng)用最廣的是Griess試劑法。該方法是在酸性條件下，亞硝酸根N02_可與Griess試劑〔對氨基苯磺酸、N-(I-萘)こニ胺、鹽酸(或磷酸)〕發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成粉紅色的重氮化合物。該化合物在54(T560nm波長處有最大吸收,且吸光度的值與亞硝酸根NO2-的量成線性關(guān)系。因而可以用可見分光光度計測定亞硝酸根NO2-的含量，從而推算出一氧化氮的量，間接測量ー氧化氮。該方法簡便易行，目前已有專門的試劑盒出售，應(yīng)用范圍較廣。但是該方法靈敏度低，且不宜用于測定生物樣品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明以高氯酸釔和水楊酸甲酯的配合物與一氧化氮的特征顯色反應(yīng)為基礎(chǔ)，提出和建立一套能夠快速檢測ー氧化氮含量的，裸眼即可識別的簡便方法。其基本原理是利用稀土與水楊酸酯的配位作用來促進(jìn)ー氧化氮的部分氧化并形成穩(wěn)定的鈷藍(lán)色三氧化ニ氮，并通過觀察其在600-700nm范圍的特征顏色來進(jìn)行定性檢測，根據(jù)測定的吸光度來進(jìn)行定量分析。本發(fā)明的目的是通過以下步驟來實現(xiàn)的
以酯類、醇類或酮類有機(jī)溶劑為ー氧化氮吸收液，以高氯酸稀土和水楊酸酯摩爾比為1:1的酯類、醇類或酮類溶液為顯色液，將吸收了一氧化氮的吸收液加入到顯色液中，混合，在50-150°C之間加熱反應(yīng)一段時間后即可進(jìn)行比色測定；所用高氯酸稀土是釔或鑭系的稀土元素，所用水楊酸酯是水楊酸甲酷、水楊酸こ酷、水楊酸丁酯或水楊酸苯酷，所用溶劑是こ酸こ酷，こ酸丙酷，こ酸丁酷，こ酸戊酷，こ醇或丙酮；
上述以高氯酸稀土、水楊酸酯為反應(yīng)試劑，有機(jī)溶劑為反應(yīng)溶劑的具體比色測定步驟為取一氧化氮的有機(jī)溶劑吸收液與高氯酸稀土和水楊酸酯的有機(jī)溶劑顯色液于IOml的比色管內(nèi)混合，其中顯色液中高氯酸稀土和水楊酸酯物質(zhì)的量與一氧化氮吸收液中ー氧化氮物質(zhì)的量之比大于6:1，用有機(jī)溶劑定容至5ml或10ml，于100°C下反應(yīng)20min后將比色管置于冷水中冷卻lOmin，以試劑空白為參比，測定反應(yīng)溶液在640nm處的吸光度，根據(jù)在相同條件下所作的一氧化氮工作曲線計算出樣品中的一氧化氮含量。以高氯酸釔、水楊酸甲酯為反應(yīng)試劑，乙酸丁酯為反應(yīng)溶劑的具體比色測定方法為取一氧化氮的乙酸丁酯吸收液與高氯酸釔和水楊酸甲酯的乙酸丁酯顯色液于IOml的比色管內(nèi)混合，其中顯色液中高氯酸釔和水楊酸甲酯的物質(zhì)的量與一氧化氮吸收液中一氧化氮物質(zhì)的量之比為7 :1，用乙酸丁酯定容至10ml，于100°C下反應(yīng)20min后將比色管置于冷水中冷卻lOmin，以試劑空白為參比，測定反應(yīng)溶液在640nm處的吸光度，根據(jù)在相同條件下所作的一氧化氮工作曲線計算出樣品中的一氧化氮含量。本發(fā)明的有益效果是該方法主要基于一氧化 氮與高氯酸釔和水楊酸甲酯的配合物在一定溫度下的有機(jī)溶劑中反應(yīng)能夠形成比較穩(wěn)定的藍(lán)綠色產(chǎn)物，而且該產(chǎn)物的吸光度與一氧化氮的濃度之間有良好的線性關(guān)系。因此，可以用簡單的比色法或裸眼觀察法來進(jìn)行一氧化氮的定量和定性分析，無需專門的高檔儀器。在確定的最佳顯色反應(yīng)條件下，反應(yīng)產(chǎn)物在2h內(nèi)的穩(wěn)定性好，方法的重現(xiàn)性好,最低檢出限可達(dá)2. 61 X 10_8 mol/L,摩爾吸光系數(shù)為 I. 01 X IO3 L moF1 cnT1。
表I為高氯酸釔和水楊酸甲酯比例與反應(yīng)產(chǎn)物吸光度的關(guān)系，證明以1:1為最佳。表I
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nY3+:高氯酸釔的物質(zhì)的量；nB :水楊酸甲酯的物質(zhì)的量。表2為特征顯色反應(yīng)的重復(fù)性和穩(wěn)定性，證明有較好的重現(xiàn)性 表權(quán)利要求
1.一種顯色測定一氧化氮的新方法，其特征在于 以酯類、醇類或酮類有機(jī)溶劑為一氧化氮吸收液，以高氯酸稀土和水楊酸酯摩爾比為1:1的酯類、醇類或酮類溶液為顯色液，將吸收了一氧化氮的吸收液加入到顯色液中，混合，在50-150°C之間加熱反應(yīng)一段時間后即可進(jìn)行比色測定；所用高氯酸稀土是釔或鑭系的稀土元素，所用水楊酸酯是水楊酸甲酯、水楊酸乙酯、水楊酸丁酯或水楊酸苯酯，所用溶劑是乙酸乙酯，乙酸丙酯，乙酸丁酯，乙酸戊酯，乙醇或丙酮； 上述以高氯酸稀土、水楊酸酯為反應(yīng)試劑，有機(jī)溶劑為反應(yīng)溶劑的具體比色測定步驟為取一氧化氮的有機(jī)溶劑吸收液與高氯酸稀土和水楊酸酯的有機(jī)溶劑顯色液于IOml的比色管內(nèi)混合，其中顯色液中高氯酸稀土和水楊酸酯物質(zhì)的量與一氧化氮吸收液中一氧化氮物質(zhì)的量之比大于6:1，用有機(jī)溶劑定容至5ml或10ml，于100°C下反應(yīng)20min后將比色管置于冷水中冷卻lOmin，以試劑空白為參比，測定反應(yīng)溶液在640nm處的吸光度，根據(jù)在相同條件下所作的一氧化氮工作曲線計算出樣品中的一氧化氮含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種顯色測定一氧化氮的新方法，其特征在于 以高氯酸釔、水楊酸甲酯為反應(yīng)試劑，乙酸丁酯為反應(yīng)溶劑的具體比色測定方法為取一氧化氮的乙酸丁酯吸收液與高氯酸釔和水楊酸甲酯的乙酸丁酯顯色液于IOml的比色管內(nèi)混合，其中顯色液中高氯酸釔和水楊酸甲酯的物質(zhì)的量與一氧化氮吸收液中一氧化氮物質(zhì)的量之比為7 :1，用乙酸丁酯定容至10ml，于100°C下反應(yīng)20min后將比色管置于冷水中冷卻lOmin，以試劑空白為參比，測定反應(yīng)溶液在640nm處的吸光度，根據(jù)在相同條件下所作的一氧化氮工作曲線計算出樣品中的一氧化氮含量。
全文摘要
一種顯色測定一氧化氮的新方法，其特征是利用稀土與水楊酸酯的配位作用來促進(jìn)NO的部分氧化并形成穩(wěn)定的鈷藍(lán)色三氧化二氮，通過觀察其在600-700nm范圍的特征顏色、測定其在吸收峰波長下的吸光度來分別進(jìn)行定性、定量分析。具體方法是用乙酸丁酯等有機(jī)溶劑吸收或萃取一氧化氮，然后加入高氯酸稀土和水楊酸酯的混合物，在一定溫度下反應(yīng)一段時間，通過觀察溶液的顏色變化或測定溶液在640nm處的吸光度來判定是否含有一氧化氮及其濃度大小。該方法簡單易行，適合于氣體和生物樣品中一氧化氮的測定。
文檔編號G01N21/78GK102680466SQ20121017766
公開日2012年9月19日 申請日期2012年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月1日
發(fā)明者劉艷珠, 周雪珍, 唐群, 張玲, 張詩晗, 李東平, 李永繡, 李靜, 鄒秀新 申請人:南昌大學(xué)