專利名稱：滿山白藥材中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測(cè)定的方法
滿山白藥材中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測(cè)定的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物中多組分同時(shí)測(cè)定的方法，尤其涉及一種滿山白藥材中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測(cè)定的方法。
背景技術(shù)：
滿山白是杜醇科植物毛果杜胃$ (Rhododendron senniavinii Maxim.)的干燥嫩枝和葉，具有祛痰止咳功效，是福建省地方藥材；滿山白止咳糖漿系列產(chǎn)品是以滿山白藥材作為主要原料的臨床應(yīng)用中成藥。滿山白藥材中的金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素等黃酮類化合物是其藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素三者的含量水平直接影響到藥材
原料的質(zhì)量，并最終影響成藥的質(zhì)量。開發(fā)并應(yīng)用滿山白藥材中黃酮類化合物的快速定量測(cè)定方法，是滿山白藥材質(zhì)量科學(xué)監(jiān)控的必要手段。目前滿山白藥材中金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素的相關(guān)檢測(cè)方法的文獻(xiàn)報(bào)道有《HPLC測(cè)定毛果杜鵑中槲皮苷的含量》、《HPLC測(cè)定毛果杜鵑中金絲桃苷的含量》、及《RP-HPLC測(cè)定幾種閩產(chǎn)杜鵑中的槲皮素含量》。所報(bào)道的方法是應(yīng)用高效液相色譜方法分別對(duì)金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素進(jìn)行單獨(dú)的定量測(cè)定，使得測(cè)定滿山白藥材中多種黃酮類化合物的含量所需耗費(fèi)的時(shí)間較長(zhǎng)。因此，從業(yè)人員有待研究一種能夠同時(shí)對(duì)滿山白藥材中的多種黃銅類化合物的含量進(jìn)行測(cè)定的方法。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種滿山白藥材中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測(cè)定的方法，減少了測(cè)定的步驟，節(jié)省了時(shí)間。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題的一種滿山白藥材中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測(cè)定的方法，該方法操作如下(I)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備以2 I I的質(zhì)量比分別稱取適量純度為98%的金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素對(duì)照品并混合，之后采用甲醇對(duì)混合后的對(duì)照品進(jìn)行溶解并定容以獲得標(biāo)準(zhǔn)溶液的母液，該母液的總濃度為4. 000mg/mL，然后將母液稀釋成不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液；(2)提取液的制備稱取適量滿山白藥材粉末并加入甲醇，且料液質(zhì)量比為1:5-1: 20，之后超聲提取0.5-3小時(shí)，超聲提取結(jié)束后將溶液進(jìn)行過濾蒸干，并將蒸干獲得的樣品用甲醇定容至100-500mL，然后采用45nm孔徑濾膜過濾得滿山白藥材黃酮類化合物的提取液，該提取液即為待測(cè)液；(3)高效液相色譜檢測(cè)在色譜柱上，以乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫分離黃酮類化合物，色譜條件如下檢測(cè)儀器高效液相色譜儀；色譜柱C18色譜柱；流動(dòng)相乙腈-水；
柱溫25°C;檢測(cè)波長(zhǎng)360nm;進(jìn)樣量20yL;流動(dòng)相變化過程0min 25min內(nèi)，乙腈水的體積比為70 30 ；25min 26min內(nèi)，乙腈與水的體積比由70 30等度梯度轉(zhuǎn)變至60 40 ；26min 55min內(nèi)，乙腈與水的體積比為60 40 ；(4)測(cè)定分別取制備獲得的標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測(cè)液，并采用上述色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜圖，經(jīng)過色譜儀器自帶軟件積分得到峰面積，計(jì)算得到待測(cè)液中金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的濃度；其中，三種黃酮類化合物分別為金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素。進(jìn)一步地，所述提取液的制備操作中超聲提取結(jié)束后將溶液采用濾紙進(jìn)行過濾。本發(fā)明滿山白藥材中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測(cè)定的方法的有益效果在于能夠?qū)M山白藥材中三種黃酮類化合物即金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素的含量進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，從而減少了測(cè)定的步驟、降低了測(cè)定所需耗費(fèi)的時(shí)間。

下面參照附圖結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。圖I是本發(fā)明標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖。圖2是本發(fā)明中實(shí)施例一待測(cè)液高效液相色譜圖。圖3是本發(fā)明中實(shí)施例二待測(cè)液高效液相色譜圖。圖4是本發(fā)明中實(shí)施例三待測(cè)液高效液相色譜圖。
具體實(shí)施方式結(jié)合如下實(shí)施例對(duì)本發(fā)明滿山白藥材中三種黃酮類化合物(即金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素)含量同時(shí)測(cè)定的方法進(jìn)行進(jìn)一步說明。實(shí)施例一I.標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備分別稱取20mg金絲桃苷、IOmg槲皮苷、IOmg槲皮素對(duì)照品并混合，之后采用甲醇對(duì)混合后的對(duì)照品進(jìn)行溶解并定容以獲得總濃度為4. 000mg/mL的母液，然后將母液分別稀釋成6個(gè)濃度梯度，濃度梯度分別為母液濃度的O. 01,0. 1,0. 2,0. 5、
O.8和I. O倍；其中金絲桃苷、槲皮苷、及槲皮素對(duì)照品的純度均為98%。2.待測(cè)液的制備稱取IOg滿山白藥材粉末，加入5倍其質(zhì)量的甲醇(即料液質(zhì)量比為I : 5)，之后超聲提取3小時(shí)，超聲提取結(jié)束后將溶液進(jìn)行濾紙過濾并蒸干，將蒸干獲得的樣品用甲醇定容至IOOmL,然后采用45nm孔徑濾膜過濾得滿山白藥材黃酮類化合物的提取液，該提取液即為待測(cè)液。3.高效液相色譜檢測(cè)在色譜柱上，以乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫分離黃酮類化合物，色譜條件如下檢測(cè)儀器Agilent 1200型高效液相色譜儀；色譜柱C18色譜柱；流動(dòng)相乙腈-水；
柱溫25°C;檢測(cè)波長(zhǎng)360nm；進(jìn)樣量20yL;流動(dòng)相變化過程0min 25min內(nèi)，乙腈水的體積比為70 30 ；25min 26min內(nèi)，乙腈與水的體積比由70 30等度梯度轉(zhuǎn)變至60 40 ；26min 55min內(nèi)，乙腈與水的體積比為60 40o4.測(cè)定分別取制備獲得的標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測(cè)液注入上述色譜條件的高效液相色譜儀中進(jìn)行分析測(cè)定，得到三種對(duì)照品的線性回歸方程及樣品的高效液相色譜圖，具體地，三種對(duì)照品的線性回歸方程如下表I所示，標(biāo)準(zhǔn)溶液的高效液相色譜圖如圖I所示，待測(cè)液的高效液相色譜圖如圖2所示，且經(jīng)過色譜儀器自帶軟件積分得到峰面積，計(jì)算得到待測(cè)液
中金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的濃度分別為O. 8092mg/mL,0. 7908mg/mL和O. 0853mg/mL。表I三種對(duì)照品線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍
對(duì)照品線性方鏍相關(guān)系4t線性范圍{tng/mL)
金 it 桃苷 y = 2E-05x+ 0.0()03 0.99950.020-2,000
槲皮苷 y = 2E4)5x - OiKXn 0,99930.020-2.000
.獬皮素 V = I E-OSx .十 0.00010.99940.010-1.000為了不重復(fù)累贅，對(duì)以下實(shí)施例僅針對(duì)不同點(diǎn)進(jìn)行闡述說明。實(shí)施例二待測(cè)液的制備稱取IOg滿山白藥材粉末，加入20倍其質(zhì)量的甲醇(即料液質(zhì)量比為I : 20)，之后超聲提取O. 5小時(shí)，超聲提取結(jié)束后將溶液進(jìn)行濾紙過濾并蒸干，將蒸干獲得的樣品用甲醇定容至250mL，然后采用45nm孔徑濾膜過濾得滿山白藥材黃酮類化合物的提取液，該提取液即為待測(cè)液。測(cè)定取本實(shí)施例制備獲得的待測(cè)液注入與實(shí)施例一中色譜條件一致的高效液相色譜儀中進(jìn)行分析測(cè)定，得到待測(cè)液的高效液相色譜圖，具體地，樣品液的高效液相色譜圖如圖3所示，且經(jīng)過色譜儀器自帶軟件積分得到峰面積，計(jì)算得到待測(cè)液中金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的濃度分別為 O. 3772mg/mL,0. 0938mg/mL 和 O. 0105mg/mL。實(shí)施例三待測(cè)液的制備稱取IOg滿山白藥材粉末，加入15倍其質(zhì)量的甲醇(即料液質(zhì)量比為I : 15)，之后超聲提取2小時(shí)，超聲提取結(jié)束后將溶液進(jìn)行濾紙過濾并蒸干，將蒸干獲得的樣品用甲醇定容至500mL，然后采用45nm孔徑濾膜過濾得滿山白藥材黃酮類化合物的提取液，該提取液即為待測(cè)液。測(cè)定取本實(shí)施例制備獲得的樣品液注入與實(shí)施例一中色譜條件一致的高效液相色譜儀中進(jìn)行分析測(cè)定，得到樣品的高效液相色譜圖，具體地，樣品液的高效液相色譜圖如圖4所示，且經(jīng)過色譜儀器自帶軟件積分得到峰面積，計(jì)算得到待測(cè)液中金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的濃度 O. 0539mg/mL,0. 0333mg/mL 和 O. 0707mg/mL。
綜上，能夠?qū)M山白藥材中三種黃酮類化合物即金絲桃苷、槲皮苷和槲皮素的含
量進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，從而減少了測(cè)定的步驟、降低了測(cè)定所需耗費(fèi)的時(shí)間。
權(quán)利要求
1.一種滿山白藥材中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測(cè)定的方法，其特征在于所述三種黃酮類化合物分別為金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素；該方法操作如下 (1)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備以2 I I的質(zhì)量比分別稱取適量純度為98%的金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素對(duì)照品并混合，之后采用甲醇對(duì)混合后的對(duì)照品進(jìn)行溶解并定容以獲得標(biāo)準(zhǔn)溶液的母液，該母液的總濃度為4. OOOmg/mL，然后將母液稀釋成不同濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液； (2)提取液的制備稱取適量滿山白藥材粉末并加入甲醇，且料液質(zhì)量比為1:5-1: 20，之后超聲提取O. 5-3小時(shí)，超聲提取結(jié)束后將溶液進(jìn)行過濾蒸干，并將蒸干獲得的樣品用甲醇定容至100-500mL，然后采用45nm孔徑濾膜過濾得滿山白藥材黃酮類化合物的提取液，該提取液即為待測(cè)液； (3)高效液相色譜檢測(cè)在色譜柱上，以乙腈-水為流動(dòng)相，梯度洗脫分離黃酮類化合物，色譜條件如下 檢測(cè)儀器高效液相色譜儀； 色譜柱C18色譜柱； 流動(dòng)相乙腈-水； 柱溫25°C ； 檢測(cè)波長(zhǎng)360nm ； 進(jìn)樣量20yL ; 流動(dòng)相變化過程0min 25min內(nèi)，乙腈水的體積比為70 30 ；25min 26min內(nèi)，乙腈與水的體積比由70 30等度梯度轉(zhuǎn)變至60 40 ；26min 55min內(nèi)，乙腈與水的體積比為60 40 ； (4)測(cè)定分別取制備獲得的標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測(cè)液，并采用上述色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣檢測(cè)，記錄色譜圖，經(jīng)過色譜儀器自帶軟件積分得到峰面積，計(jì)算得到待測(cè)液中金絲桃苷、槲皮苷、槲皮素的濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述滿山白藥材中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測(cè)定的方法,其特征在于所述提取液的制備操作中超聲提取結(jié)束后將溶液采用濾紙進(jìn)行過濾。
全文摘要
本發(fā)明提供一種滿山白藥材中三種黃酮類化合物含量同時(shí)測(cè)定的方法，先配制標(biāo)準(zhǔn)溶液與待測(cè)液，然后將標(biāo)準(zhǔn)溶液及待測(cè)液進(jìn)行高效液相色譜檢測(cè)，其中，色譜條件為色譜柱C18色譜柱；流動(dòng)相乙腈-水；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)360nm；進(jìn)樣量20μL；流動(dòng)相變化過程0min～25min內(nèi)，乙腈水的體積比為7030；25min～26min內(nèi)，乙腈與水的體積比由7030等度梯度轉(zhuǎn)變至6040；26min～55min內(nèi)，乙腈與水的體積比為6040。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于能夠?qū)M山白藥材中三種黃酮類化合物含量進(jìn)行同時(shí)測(cè)定，從而減少了測(cè)定的步驟、降低了測(cè)定所需耗費(fèi)的時(shí)間。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102788854SQ201210276418
公開日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2012年8月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月3日
發(fā)明者林峰, 趙云青, 陳菁瑛, 黃穎楨 申請(qǐng)人:福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)生物資源研究所