專利名稱：一種婦科洗液中苦參堿含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種苦參堿含量測定方法，特別涉及一種婦科洗液中的有效成分一苦參堿的測定方法。
背景技術(shù)：
苦參堿為豆科植物苦參、苦豆子和山豆根含有的生物堿之一，臨床主要用來治療肝病、心臟病、癌癥及病原性感染等。目前苦參堿含量的測定方法有薄層掃描法、毛細(xì)管電泳法、高效液相色譜法、氣相色譜法、微流控芯片分析法等。高效液相色譜法多采用氨基柱、離子交換柱，洗脫方式也多為梯度洗脫，由于氨基住、離子交換柱造價高、壽命短、保養(yǎng)困難，其他方法操作過程繁瑣、重復(fù)性差、分析時間長、供試品處理麻煩等，所以很難達(dá)到準(zhǔn)確測定其中苦參堿的含量的目的，從而造成婦科洗液的可控性差。
以下是部分專利及文獻的公開報道。“清柏潔身洗液中苦參堿含量的測定方法”，專利申請?zhí)?00610060119. 3，公開號CN101046467A，包括以下步驟制備對照品溶液精密稱取苦參堿對照品適量，加甲醇配制成O. 0Γ0. lmg/ml的溶液；制備供試品溶液精密量取供試品5 20ml，加濃俺試液
O.25^1ml，用氯仿振搖提取3次以上，每次15 20ml，合并氯仿液，蒸干，殘渣加約5ml氯仿溶解，裝入I 5g、8(T200目的堿性氧化鋁柱，用2 10份氯仿0 2份甲醇溶液l(T50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液即得；吸取對照品及供試品溶液5 40ml，注入液相色譜儀測定，計算得出結(jié)果?！翱鄥A液相色譜測定方法”，申請?zhí)?00810205059. 9，公開號CN101458235A ；包括以下步驟取苦參堿樣品10mg，用甲醇定溶于容量瓶中，超聲溶解得供試品樣品；取苦參堿對照品5mg，用甲醇定溶于容量瓶中，超聲溶解得苦參堿標(biāo)準(zhǔn)液；各取10μ I的供試品溶液和苦參堿標(biāo)準(zhǔn)液注入液相色譜儀進行測定；記錄峰面積，按外標(biāo)法以峰面積I對苦參堿含量X計算回歸方程，獲得所述的回歸方程為
y=l. 32 X IO6X-L 16 X IO5
相關(guān)系數(shù)為O. 9996，線性范圍為O. 32^1. 92 μ g ;根據(jù)以上步驟測定精密度、24小時穩(wěn)定性、重現(xiàn)性以及回收率測定。郭東艷等對復(fù)方苦參洗劑中苦參堿的含量測定，具體方法為采用ODS C18柱(5 μ m , 4. 6mm X 200mm ),流動相為乙腈-O. I %磷酸(55: 94. 5),檢測波長為210nm,流速為I. Oml · mirT1,柱溫室溫。張成志的苦參片中苦參堿含量的反相高效液相色譜測定，具體方法為采用高效液相色譜法，色譜柱為ODS C18烷基硅烷化色譜柱，甲醇一O. 05%三乙氨水溶液為流動相(60 :40,流速 I. OmL · mirT1,檢測波長210nm,柱溫40°C。肖淼生等用高效液相色譜法測定婦安消疹洗液中苦參堿的含量，具體方法為色譜柱為Phenomenex Luna C18 ( 150 mmX 4. 6mm, 5 μ m )不鎊鋼柱；流動相為乙腈-0.02mol · L—1磷酸二氫鉀(60:40);流速為Iml ^mirT1 ;檢測波長為210 nm。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對上述技術(shù)中存在的不足之處，提供一種婦科洗液中苦參堿含量的測定方法，
取苦參堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每Iml含O. 2mg的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，用微孔濾膜過濾，備用；
取苦參提取物原料O. 25g，超聲溶解于流動相溶液，定容至100 ml，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得苦參提取物供試品溶液； 取洗液樣品I ml，溶解于流動相溶液，定容至100 ml ;搖勻，用微孔濾膜過濾，即得洗液供試品溶液；
各取10 μ I的苦參提取物供試品溶液、洗液供試品和苦參堿標(biāo)準(zhǔn)液注入液相色譜儀，測定。本發(fā)明的有益效果提供了一種婦科洗液中有效成分——苦參堿含量的高效液相色譜檢驗法。


圖I是本發(fā)明實施例的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品圖譜。圖2是本發(fā)明實施例的苦參提取物供試品圖譜。圖3是本發(fā)明實施例的洗液供試品圖譜。圖4是本發(fā)明實施例的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品圖譜。圖5是本發(fā)明實施例的苦參提取物供試品圖譜。圖6是本發(fā)明實施例的洗液供試品圖譜。圖7是本發(fā)明實施例的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品圖譜。圖8是本發(fā)明實施例的苦參提取物供試品圖譜。圖9是本發(fā)明實施例的洗液供試品圖譜。
具體實施例方式以下結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細(xì)說明。實施例I。一.實施儀器與試劑
Aglientl200高效液相色譜儀，Lichrospher C18色譜柱(4. 6*250mm, 5um)。色譜純甲醇、異丙醇，苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品。二.色譜條件
分析柱C18(4.6*250mm，5um)色譜柱，流動相甲醇:異丙醇水:氨水=52:3:45:0. 02(體積比)；流速1. Oml/min檢測波長為220nm。柱溫室溫；理論塔板數(shù)不低于9000，進樣量10 μ I。三.檢測步驟
I.取苦參堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每Iml含O. 2mg的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，用微孔濾膜過濾，備用；
2.取苦參提取物原料O.25g，超聲溶解于流動相溶液，定容至100 ml，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得苦參提取物供試品溶液；
3.取洗液樣品Iml，溶解于流動相溶液，定容至100 ml。搖勻，用微孔濾膜過濾，即得洗液供試品溶液；
4.各取10μ I的苦參提取物供試品溶液、洗液供試品和苦參堿標(biāo)準(zhǔn)液注入液相色譜儀，測定。保留時間:1L5 lL9min之間(圖1-3)。四.計算將測得兩個供試品溶液按外標(biāo)法以峰面積對苦參堿含量計算
Hl1=Hlp · S1Zsp m2=mp · s2 · 100/sp
式中=Hi1苦參提取物供試品溶液苦參堿濃度，mg/ml
mp苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/ml
S1苦參提取物供試品樣品峰面積
Sp苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品峰面積，
m2洗液樣品中苦參堿含量，mg/ml
S2洗液供試樣品峰面積。實施例2，苦參堿含量檢測的其他方法。l.Aglientl200高效液相色譜儀，氨基鍵合色譜柱。色譜純乙腈、無水乙醇，磷酸，苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品。2.分析柱氨基鍵合色譜柱，流動相乙腈無水乙醇3%磷酸溶液=80 :10:10(體積比)；流速1. Oml/min檢測波長為220nm。柱溫室溫；理論塔板數(shù)不低于2000，進樣量20 μ I。3.取苦參堿對照品適量，精密稱定，加乙腈-無水乙醇(80 20)混合溶液制成每Iml含苦參堿50 μ g的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，用微孔濾膜過濾，備用；
4.取苦參提取物原料約O.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液O. 5-lml，密塞放置10分鐘，精密加入三氯甲烷50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz )30分鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，加在中性氧化鋁柱(100 200目，5g，內(nèi)徑Icm)上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 3)混合溶液各20ml洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加無水乙醇至刻度， 搖勻，用微孔濾膜過濾，即得苦參提取物供試品溶液；
5.取洗液10ml，真空干燥或水浴蒸干，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液O. 5-lml，密塞放置10分鐘，精密加入三氯甲烷50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，加在中性氧化鋁柱(100 200目，5g，內(nèi)徑Icm)上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 :3)混合溶液各20ml洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得洗液供試品溶液；
6.各取20μ I的苦參提取物供試品溶液、洗液供試品和苦參堿標(biāo)準(zhǔn)液注入液相色譜儀，測定。保留時間苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品保留時間7. 8 min，供試品溶液圖譜中未見符合分離度條件的苦參堿(圖4-6)。實施例3。I. Aglientl200 高效液相色譜儀，Lichrospher C18 色譜柱(4. 6*250mm, 5um)。色譜純甲醇、異丙醇，苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品。2.分析柱氨基鍵合色譜柱，流動相甲醇異丙醇冰氨水=66:5:29:0. 02 (體積比)；流速1. Oml/min檢測波長為220nm。柱溫室溫；理論塔板數(shù)不低于2000，進樣量
10 μ Io 3.取苦參堿對照品O. 005g,置于容量瓶,用流動相定容至25ml得苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，用微孔濾膜過濾，備用；
4.取苦參提取物原料稱取樣品約O.25g，超聲溶解于流動相溶液，定容至25ml，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得苦參提取物供試品溶液；
5.取洗液樣品5ml，溶解于流動相溶液，定容至50ml，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得洗液供試品溶液；
6.各取10μ I的苦參提取物供試品溶液、洗液供試品和苦參堿標(biāo)準(zhǔn)液注入液相色譜儀，測定。保留時間苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品保留時間7. 05 min，供試品溶液圖譜中未見符合分離度條件的苦參堿(圖7-9)。雖然本發(fā)明已以較佳實施例公開如上，但他們并不是用來限定本發(fā)明，任何熟悉此技藝者，在不脫離本發(fā)明之精神和范圍內(nèi)，自當(dāng)可作各種變化或潤飾，同樣屬于本發(fā)明之保護范圍。因此本發(fā)明的保護范圍應(yīng)當(dāng)以本申請的權(quán)利要求所界定的為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種婦科洗液中苦參堿含量的測定方法， 取苦參堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每Irnl含O. 2mg的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，用微孔濾膜過濾，備用； 取苦參提取物原料O. 25g，超聲溶解于流動相溶液，定容至100 ml，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得苦參提取物供試品溶液； 取洗液樣品I ml，溶解于流動相溶液，定容至100 ml ;搖勻，用微孔濾膜過濾，即得洗液供試品溶液； 各取10-20 μ I的苦參提取物供試品溶液、洗液供試品和苦參堿標(biāo)準(zhǔn)液注入液相色譜儀，測定。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的婦科洗液中苦參堿含量的測定方法，其特征在于 保留時間苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品保留時間11. 5^11. 9min之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的婦科洗液中苦參堿含量的測定方法，其特征在于 將測得兩個供試品溶液按外標(biāo)法以峰面積對苦參堿含量計算， Hl1=Hlp · S1Zsp m2=mp · s2 · 100/sp 式中=Hi1苦參提取物供試品溶液苦參堿濃度，mg/ml ； mp苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/ml ； S1苦參提取物供試品樣品峰面積； Sp苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品峰面積； m2洗液樣品中苦參堿含量，mg/ml ； S2洗液供試樣品峰面積。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的婦科洗液中苦參堿含量的測定方法，其特征在于， 實施儀器與試劑 Aglientl200 高效液相色譜儀，Lichrospher C18 色譜柱(4. 6*250mm, 5um)； 色譜純甲醇、異丙醇，苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品； 色譜條件 分析柱C18(4.6*250mm，5um)色譜柱，流動相甲醇:異丙醇水:氨水=52:3:45:0. 02(體積比)；流速1. Oml/min檢測波長為220nm ； 柱溫室溫；理論塔板數(shù)不低于9000，進樣量10μ I。
5.—種婦科洗液中苦參堿含量的測定方法， 取苦參堿對照品適量，精密稱定，加乙腈-無水乙醇(80 :20)混合溶液制成每Iml含苦參堿50 μ g的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，用微孔濾膜過濾，備用； 取苦參提取物原料約O. 3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液O. 5-lml，密塞放置10分鐘，精密加入三氯甲烷50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，加在中性氧化鋁柱(100 200目，5g，內(nèi)徑Icm)上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 3)混合溶液各20ml洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干，殘渣加無水乙醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得苦參提取物供試品溶液；取洗液10ml，真空干燥或水浴蒸干，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加濃氨試液O. 5-lml，密塞放置10分鐘，精密加入三氯甲烷50ml，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率33kHz) 30分鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5ml，加在中性氧化鋁柱(100 200目，5g，內(nèi)徑Icm)上，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 :3)混合溶液各20ml洗脫，合并收集洗脫液，回收溶劑至干,殘渣加無水こ醇適量使溶解，轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加無水こ醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得洗液供試品溶液；各取20iU的苦參提取物供試品溶液、洗液供試品和苦參堿標(biāo)準(zhǔn)液注入液相色譜儀，測定。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的婦科洗液中苦參堿含量的測定方法，其特征在于 保留時間苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品保留時間7.8 min。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的婦科洗液中苦參堿含量的測定方法，其特征在于 實施儀器與試劑 Aglientl200高效液相色譜儀，氨基鍵合色譜柱；色譜純こ腈、無水こ醇，磷酸，苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品； 色譜條件 分析柱氨基鍵合色譜柱，流動相こ腈無水こ醇3%磷酸溶液=80:10:10 (體積比)；流速I. Oml/min檢測波長為220nm ;柱溫室溫；理論塔板數(shù)不低于2000，進樣量20 u I。
8.—種婦科洗液中苦參堿含量的測定方法， 取苦參堿對照品0. 005g，置于容量瓶，用流動相定容至25ml得苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，用微孔濾膜過濾，備用； 取苦參提取物原料稱取樣品約0. 25g，超聲溶解于流動相溶液，定容至25ml，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得苦參提取物供試品溶液； 取洗液樣品5ml，溶解于流動相溶液，定容至50ml，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得洗液供試品溶液； 各取10 Ul的苦參提取物供試品溶液、洗液供試品和苦參堿標(biāo)準(zhǔn)液注入液相色譜儀，測定。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的婦科洗液中苦參堿含量的測定方法，其特征在于 保留時間苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品保留時間7.05 min。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的婦科洗液中苦參堿含量的測定方法，其特征在于 實施儀器與試劑 Aglientl200高效液相色譜儀,Lichrospher C18色譜柱(4. 6*250mm, 5um);色譜純甲醇、異丙醇，苦參堿標(biāo)準(zhǔn)品； 色譜條件 分析柱氨基鍵合色譜柱；流動相甲醇異丙醇水氨水=66:5:29:0. 02 (體積比)；流速I. Oml/min檢測波長為220nm ;柱溫室溫；理論塔板數(shù)不低于2000，進樣量10u I0
全文摘要
本發(fā)明公開了一種婦科洗液中苦參堿含量的測定方法，取苦參堿對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1ml含0.2mg的苦參堿標(biāo)準(zhǔn)溶液，用微孔濾膜過濾，備用；取苦參提取物原料0.25g，超聲溶解于流動相溶液，定容至100ml，搖勻，用微孔濾膜過濾，即得苦參提取物供試品溶液；取洗液樣品1ml，溶解于流動相溶液，定容至100ml；搖勻，用微孔濾膜過濾，即得洗液供試品溶液；各取10μl的苦參提取物供試品溶液、洗液供試品和苦參堿標(biāo)準(zhǔn)液注入液相色譜儀，測定。本發(fā)明的有益效果提供了一種婦科洗液中有效成分——苦參堿含量的高效液相色譜檢驗法。
文檔編號G01N30/88GK102854277SQ201210328928
公開日2013年1月2日 申請日期2012年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月7日
發(fā)明者董婧婧, 樂智勇, 夏培元, 劉麗玲 申請人:江蘇仁壽藥業(yè)有限公司