專利名稱:一種小金牛草的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及ー種中藥材的分析方法,特別是涉及ー種小金牛草的檢測(cè)方法,具體地說(shuō)是以小金牛草中的有效成分芒果苷作為指標(biāo)成分,對(duì)小金牛草進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。
背景技術(shù):
小金牛草為遠(yuǎn)志科遠(yuǎn)志屬植物小花遠(yuǎn)志Polygala arvensis Willd. (P.telephioides Willd.),以全草入藥。秋季采集,曬干。味甘、微苦,平。散瘀止血,化痰止咳,解毒消腫。用于咳嗽胸痛,肺結(jié)核,咳血,尿血,便血,月經(jīng)不調(diào),跌打損傷,小兒麻痹后遺癥,肝炎,毒蛇咬傷。小金牛草為組成金喉散處方之一,且為處方中的君藥,所述的君藥是指中醫(yī)藥領(lǐng) 域術(shù)語(yǔ),是指中醫(yī)藥配伍中的君藥、臣藥、佐藥、使藥中的君藥。小金牛草作為君藥,其質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到金喉散的質(zhì)量?jī)?yōu)劣,而目前小金牛草還沒(méi)有有效的質(zhì)量控制方法,小金牛草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于上海地方藥材標(biāo)準(zhǔn)(1994年版),該標(biāo)準(zhǔn)中藥材鑒別項(xiàng)中只有性狀鑒另O,沒(méi)有薄層色譜鑒別及含量測(cè)定項(xiàng),可見(jiàn)該標(biāo)準(zhǔn)專屬性差、準(zhǔn)確性差,不能有效地控制小金牛草的質(zhì)量。
發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足,本發(fā)明的目的g在提供ー種小金牛草的檢測(cè)方法,本發(fā)明運(yùn)用薄層色譜法對(duì)小金牛草中有效成分芒果苷進(jìn)行定性測(cè)定,運(yùn)用高效液相色譜法進(jìn)行定量測(cè)定,或同時(shí)運(yùn)用這兩種方法。通過(guò)上述檢測(cè)方法能夠很好地控制小金牛草的質(zhì)量,可用于小金牛草藥材真?zhèn)渭捌焚|(zhì)優(yōu)劣的評(píng)價(jià),保證其質(zhì)量的穩(wěn)定、均一、可控。同時(shí)該檢測(cè)方法還具有操作方便、準(zhǔn)確度好、專屬性強(qiáng)的特點(diǎn)。為實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用如下技術(shù)方案
ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在于,以芒果苷作為指標(biāo)成分,用薄層色譜法對(duì)芒果苷進(jìn)行定性測(cè)定,按以下步驟進(jìn)行
1)供試品溶液的制備
a、取小金牛草粉末適量,加甲醇或こ醇作為提取溶劑,提取溶劑的加入量與小金牛草粉末取樣量的體積質(zhì)量比,以ml/g計(jì)為50:1,經(jīng)超聲處理15分鐘 90分鐘或加熱回流提取20分鐘 180分鐘,得到提取溶液;
b、取步驟a得到的提取溶液,經(jīng)濾過(guò)、濾液蒸干、殘?jiān)肐Oml甲醇或こ醇使溶解,作為供試品溶液;或取步驟a得到的提取溶液,經(jīng)靜置后,取上清液即可作為供試品溶液;
2)對(duì)照藥材溶液的制備取對(duì)照藥材粉末,具體操作同步驟a制成對(duì)照藥材溶液;
3)對(duì)照品溶液的制備取芒果苷對(duì)照品,加甲醇制成每Iml含O.Img芒果苷的溶液,作為對(duì)照品溶液;
4)鑒別吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以展開(kāi)劑展開(kāi),取出,晾干,噴以顯色劑,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的斑點(diǎn);其中,所述展開(kāi)劑是體積比為5 4:3:1:1的こ酸こ酷-丁酮-甲酸-水或體積比為8 10:1:1的こ酸こ酷-甲酸-水;顯色劑是濃度為5%三氯化鐵こ醇溶液。優(yōu)選的在步驟I)中,當(dāng)所述提取溶劑使?jié)舛葹?0%_100%的甲醇或濃度為40% 100%的こ醇溶液時(shí),取步驟a得到的提取溶液,經(jīng)濾過(guò)、濾液蒸干、殘?jiān)肐Oml甲醇或こ醇使溶解,作為供試品溶液。優(yōu)選的在步驟I)中,當(dāng)所述提取溶劑是濃度為95%_100%的甲醇或濃度為95% 100%的こ醇溶液時(shí),取步驟a得到的提取溶液,經(jīng)靜置后,取上清液即可作為供試品溶液。ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在于,運(yùn)用高效液相色譜法對(duì)小金牛草中芒果苷進(jìn)行定量測(cè)定,按以下步驟進(jìn)行
1)供試品溶液的制備取小金牛草藥材粉末適量,精密稱定,置IOOml具塞錐形瓶中,精密加入濃度為50 70%甲醇或濃度50 70%こ醇的作為提取溶劑,提取溶劑的加入量與小金牛草粉末取樣量的體積質(zhì)量比,以ml/g計(jì)200: 1,密塞,稱定重量,超聲處理25 90分鐘或回流提取0. 5 3小時(shí),放冷,再稱定重量,用相應(yīng)的提取溶劑補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液;
2)對(duì)照品溶液的制備取芒果苷對(duì)照品適量,精密稱定,加濃度為60%的こ醇制備成濃度為20. 584 1029. 2Pg/ml的對(duì)照品溶液,即得;
3)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以體積比為10 20:90 80的こ腈-酸的水溶液或體積比為10 40:90 60的甲醇-酸的水溶液或體積比為0 10 :10 30:90 60的こ腈-甲醇-酸的水溶液為液流動(dòng)相;高效液相色譜法的檢測(cè)波長(zhǎng)為240 365nm、柱溫為25 35°C、色譜柱為C18柱,理論塔板數(shù)按芒果苷峰計(jì)算應(yīng)不低于8000 ;
4)測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液5W,注入高效液相色譜儀,測(cè)定,即得。優(yōu)選的在步驟I)中,所述提取溶劑是濃度為50 70%的甲醇或濃度為50 70%的こ醇。優(yōu)選的在步驟3)中,所述酸的水溶液中的酸選自含磷酸、醋酸、甲酸,所述酸的水溶液中的酸與水的體積比為0. I 0. 5:100。ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在于,以芒果苷作為指標(biāo)成分,運(yùn)用薄層色譜法對(duì)芒果苷進(jìn)行定性測(cè)定,同時(shí),運(yùn)用高效液相色譜法對(duì)小金牛草中芒果苷進(jìn)行定量測(cè)定;它們的具體操作步驟如前文所述。本發(fā)明的有益效果在干
小金牛草作為君藥,其質(zhì)量的好壞直接關(guān)系到金喉散的質(zhì)量?jī)?yōu)劣,由于目前小金牛草沒(méi)有有效的質(zhì)量控制方法,于是對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。在研究過(guò)程中用薄層鑒別色譜技術(shù)和高效液相色譜技術(shù)對(duì)小金牛草的化學(xué)成分進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)了芒果苷成分,此芒果苷成分用購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院(批號(hào)111607-200402)芒果苷對(duì)照品進(jìn)行比對(duì),其色譜特征一致。如用多種不同極性的展開(kāi)劑進(jìn)行薄層鑒別,小金牛草供試品在與芒果苷對(duì)照品相應(yīng)的位置上顯相同顔色的特征斑點(diǎn);用高效液相色譜儀(ニ極管陣列檢測(cè)器DAD)進(jìn)行測(cè)定,小金牛草供試品與芒果苷對(duì)照品有相同的吸收光譜圖;再用多種體積比的流動(dòng)相進(jìn)行測(cè)定,小金牛草供試品在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上有相同的吸收峰,說(shuō)明小金牛草中含有芒果苷成分。小金牛草中有芒果苷成分是發(fā)明人首次發(fā)現(xiàn)。芒果苷具有抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)、抗炎、抑菌、抗單純皰疹病毒,利膽和免疫作用,對(duì)模擬高原急性低氧肝損傷有保護(hù)作用,藥理實(shí)驗(yàn)表明,本品用于治療慢性支氣管炎有較好療效,可見(jiàn)芒果苷為小金牛草中有效成分,以芒果苷作為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)來(lái)控制小金牛草的質(zhì)量具有現(xiàn)實(shí)意義。與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明以芒果苷作為指標(biāo)成分,運(yùn)用薄層色譜法對(duì)芒果苷進(jìn)行定性測(cè)定,或運(yùn)用高效液相色譜法對(duì)小金牛草中芒果苷進(jìn)行定量測(cè)定,也可以同時(shí)運(yùn)用這兩種方法,能夠很好地控制小金牛草的質(zhì)量,可用于小金牛草藥材真?zhèn)渭捌焚|(zhì)優(yōu)劣的評(píng)價(jià),保證其質(zhì)量的穩(wěn)定、均一,可控。本發(fā)明所述的檢測(cè)方法還具有操作方便、準(zhǔn)確度好、專屬性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。
圖I為本發(fā)明的薄層鑒別色譜圖,其中,I為小金牛草供試品,2為小金牛草對(duì)照藥材,3為芒果苷對(duì)照品。圖2為含量測(cè)定對(duì)照品高效液相色譜圖。圖3為含量測(cè)定供試品高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供的檢測(cè)方法中所用試劑均由市場(chǎng)購(gòu)得,其中用于薄層色譜鑒別的試劑為分析純,用于高效液相進(jìn)行含量測(cè)定的甲醇和こ醇為色譜純,小金牛草為廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司購(gòu)得,對(duì)照品芒果苷購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院(批號(hào)111607-200402)o以下為本發(fā)明的薄層色譜鑒別方法具體實(shí)施方式
,所述的實(shí)施例是為了進(jìn)ー步描述本發(fā)明,而不是限制本發(fā)明。一、薄層色譜鑒別
實(shí)施例I :
供試品溶液的制備取小金牛草粉末0. 5g,加40%甲醇25ml,超聲處理15分鐘,濾過(guò)、濾液蒸干、殘?jiān)肐Oml的甲醇使溶解,即得。對(duì)照藥材溶液的制備取對(duì)照藥材,按供試品溶液的制備方法制備對(duì)照藥材溶液。對(duì)照品溶液的制備取芒果苷對(duì)照品,加甲醇制成每Iml含0. Img的對(duì)照品溶液。鑒別吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液2W和對(duì)照品溶液IOW,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以こ酸こ酷-丁酮-甲酸-水(5:3:1:1)為展開(kāi)劑,展開(kāi),取出,晾干,噴以濃度為5%的三氯化鐵こ醇溶液,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的斑點(diǎn),參照?qǐng)DI。薄層色譜鑒別耐用性考察分別考察了在低溫條件下(4°C)、室溫條件下(25°C)、低濕條件下(濕度為30%)、高濕條件下(濕度為75%)主斑點(diǎn)的分離效果。試驗(yàn)結(jié)果表明主斑點(diǎn)分離效果好,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,均顯相同顔色的斑點(diǎn)。說(shuō)明該鑒別方法穩(wěn)定性、重復(fù)性好。實(shí)施例2 :具體操作步驟同實(shí)施例1,不同的是供試品溶液的制備步驟中超聲處理30分鐘;鑒別步驟中以こ酸こ酯-丁酮-甲酸-水(體積比為4:3:1:1)為展開(kāi)劑。實(shí)施例3 :具體操作步驟同實(shí)施例1,不同的是供試品溶液的制備步驟中超聲處理90分鐘。實(shí)施例4 :具體操作步驟同實(shí)施例1,不同的是供試品溶液的制備步驟中提取溶劑為濃度為50%的甲醇,加熱回流20分鐘;鑒別步驟中以こ酸こ酯-甲酸-水(體積比為8:1:1)為展開(kāi)劑。實(shí)施例5 :具體操作步驟同實(shí)施例1,不同的是供試品溶液的制備步驟中提取溶劑為濃度為40%的こ醇,加熱回流60分鐘,殘?jiān)肐Omlこ醇使溶解;鑒別步驟中以こ酸こ酷-甲酸-水(體積比為9:1:1)為展開(kāi)劑。實(shí)施例6 :具體操作步驟同實(shí)施例1,不同的是供試品溶液的制備步驟中提取溶劑加濃度為50%的こ醇,加熱回流180分鐘;鑒別步驟中以こ酸こ酯-甲酸-水(體積比為10:1:1)為展開(kāi)劑。
實(shí)施例7 :具體操作步驟同實(shí)施例1,不同的是供試品溶液的制備步驟中提取溶劑為濃度為95%的甲醇,提取液經(jīng)靜置后即得(提取液不需濾過(guò)及蒸干);鑒別步驟中供試品溶液、對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為10μ1。實(shí)施例8 :具體操作步驟同實(shí)施例1,不同的是供試品溶液的制備步驟中提取溶劑為濃度為100%的甲醇,提取液經(jīng)靜置后即得(提取液不需濾過(guò)及蒸干);鑒別步驟中供試品溶液、對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為5μ1。實(shí)施例9 :具體操作步驟同實(shí)施例1,不同的是供試品溶液的制備步驟中提取溶劑為濃度為95%的こ醇,濾液濾過(guò)即得;鑒別步驟中供試品溶液、對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為 ιομ ο實(shí)施例10 :具體操作步驟同實(shí)施例1,不同的是供試品溶液的制備步驟中提取溶劑為濃度為100%的こ醇,濾液濾過(guò)即得;鑒別步驟中供試品溶液、對(duì)照藥材溶液的點(diǎn)樣量為 ιομ οニ、芒果苷含量測(cè)定
實(shí)施例11
供試品溶液的制備取小金牛草藥材粉末約0. 25g,精密稱定,置IOOml具塞錐形瓶中,精密加入濃度為50%的甲醇50ml,密塞,稱定重量,超聲處理25分鐘,放冷,再稱定重量,用濃度為50%的甲醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液;
對(duì)照品溶液的制備取芒果苷對(duì)照品適量,精密稱定,加濃度為60%的こ醇制備成濃度為40(^g/ml的對(duì)照品溶液,即得。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以體積比為15:85的こ腈-0. 1%磷酸的水溶液為流動(dòng)相;高效液相色譜法的檢測(cè)波長(zhǎng)為258nm、柱溫為25°C、色譜柱為C18柱,理論塔板數(shù)按芒果苷峰計(jì)算應(yīng)不低于8000 ;
測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液5μ1,注入高效液相色譜儀,測(cè)定,即得;小金牛草含芒果苷不得少于I. 0%。實(shí)施例12 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是供試品溶液的制備步驟中用濃度為50%的こ醇為提取溶劑,采用超聲處理45分鐘;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為10:90的こ腈-0. 2%磷酸的水溶液為流動(dòng)相;高效液相色譜法的檢測(cè)波長(zhǎng)為240nmo實(shí)施例13 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是供試品溶液的制備步驟中用濃度為70%的こ醇為提取溶劑,采用超聲處理90分鐘;色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為20:80的こ腈-0. 5%磷酸的水溶液為流動(dòng)相;高效液相色譜法的檢測(cè)波長(zhǎng)為j65nm。實(shí)施例14 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是供試品溶液的制備步驟中用濃度為50%的甲醇為提取溶劑,采用回流提取0. 5小時(shí);色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為10:90的甲醇-0. 1%磷酸的水溶液為流動(dòng)相。實(shí)施例15 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是供試品溶液的制備步驟中用濃度為60%的甲醇為提取溶劑,采用回流提取I小時(shí);色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為10:90的甲醇-0. 1%磷酸的水溶液為流動(dòng)相。
實(shí)施例16 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是供試品溶液的制備步驟中用濃度為70%的甲醇為提取溶劑,采用回流提取I小時(shí);色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為20:80的甲醇-0. 1%醋酸的水溶液為流動(dòng)相。實(shí)施例17 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是供試品溶液的制備步驟中采用回流提取3小時(shí);色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為40:60的甲醇-0. 2%醋酸的水溶液為流動(dòng)相。實(shí)施例18 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為40:60的甲醇-0. 5%醋酸的水溶液為流動(dòng)相,柱溫為30°C。實(shí)施例19 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為0:10:90的こ臆-甲醇-0. 1%磷酸的水溶液為流動(dòng)相,柱溫為35°C。實(shí)施例20 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為5:15:80的こ臆-甲醇-0. 1%甲酸的水溶液為流動(dòng)相。實(shí)施例21 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為10:30:60的こ腈-甲醇-0. 2%甲酸的水溶液為流動(dòng)相。實(shí)施例22 :具體操作步驟同實(shí)施例11,不同的是色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)步驟中以體積比為10:30:60的こ臆-甲醇-0. 5%甲酸的水溶液為流動(dòng)相。含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證
儀器與試藥
高效液相色譜儀=Agilent 1260LC ;DAD檢測(cè)器。超聲儀昆山市超聲儀器有限公司KQ-600DE 型。對(duì)照品芒果苷購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院(批號(hào)111607-200402),小金牛草(批號(hào)GX120601)由廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司購(gòu)得;こ腈(色譜純,honeywell),作為溶劑用的こ醇和甲醇為分析純?cè)噭?,?gòu)于廣州試劑廠。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以體積比為15:85的こ腈-0. 1%磷酸的水溶液為流動(dòng)相;高效液相色譜法的檢測(cè)波長(zhǎng)為258nm、柱溫為25°C,色譜柱phenomenex synergiFUsion-RP (4Mm,4. 6 X 250mm),理論塔板數(shù)按芒果苷峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。供試品溶液的制備取小金牛草藥材粉末約0. 25g,精密稱定,置IOOml具塞錐形瓶中,精密加入濃度為60%的こ醇50ml,密塞,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,再稱定重量,用濃度為60%的こ醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液;其高效液相色譜圖如圖3所示。
對(duì)照品溶液的制備取芒果苷對(duì)照品適量,精密稱定,加60%こ醇制備成濃度為400μδ/πι1的對(duì)照品溶液,即得。其高效液相色譜圖如圖2所示。線性關(guān)系考察精密稱取芒果苷對(duì)照品O. 05146g,置50ml容量瓶中,加濃度為60%的こ醇溶解并定容至刻度,分別量取2ml、2ml、2ml、2ml、5ml置100ml、50ml、25ml、IOmlUOml的容量瓶中,加濃度為60%的こ醇定容至刻度,配制成系列含量為20. 584 1029. 2μδ/πι1的芒果苷對(duì)照品溶液。精密吸取上述對(duì)照品溶液各5μ1,在前文所述的色譜條件下測(cè)定,并與峰面積Y為縱坐標(biāo),濃度X (η=6)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為Υ=21. 207Χ-10. 068,r=0. 9999,芒果苷在20. 584 1029. 2μδ/πι1呈良好的線性關(guān)系。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表I.
權(quán)利要求
1.ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在干,以芒果苷作為指標(biāo)成分,用薄層色譜法對(duì)芒果苷進(jìn)行定性測(cè)定,按以下步驟進(jìn)行 1)供試品溶液的制備 a、取小金牛草粉末適量,加甲醇或こ醇作為提取溶劑,提取溶劑的加入量與小金牛草粉末取樣量的體積質(zhì)量比,以ml/g計(jì)為50:1,經(jīng)超聲處理15分鐘 90分鐘或加熱回流提取20分鐘 180分鐘,得到提取溶液; b、取步驟a得到的提取溶液,經(jīng)濾過(guò)、濾液蒸干、殘?jiān)眉状蓟颏炒际谷芙猓鳛楣┰嚻啡芤?;或取步驟a得到的提取溶液,經(jīng)靜置后,取上清液即可作為供試品溶液; 2)對(duì)照藥材溶液的制備取對(duì)照藥材粉末,具體操作同步驟a制成對(duì)照藥材溶液; 3)對(duì)照品溶液的制備取芒果苷對(duì)照品,加甲醇制成每Iml含O.Img芒果苷的溶液,作為對(duì)照品溶液; 4)鑒別吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液和對(duì)照品溶液,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上,以展開(kāi)劑展開(kāi),取出,晾干,噴以顯色劑,供試品色譜中,在與對(duì)照藥材色譜和對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顔色的斑點(diǎn);其中,所述展開(kāi)劑是體積比為5 4:3:1:1的こ酸こ酷-丁酮-甲酸-水或體積比為8 10:1:1的こ酸こ酯-甲酸-水;顯色劑是濃度為5%三氯化鐵こ醇溶液。
2.如權(quán)利要求I所述的ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在干在步驟I)中,當(dāng)所述提取溶劑是濃度為40%-100%的甲醇或濃度為40% 100%的こ醇溶液時(shí),取步驟a得到的提取溶液,經(jīng)濾過(guò)、濾液蒸干、殘?jiān)肐Oml甲醇或こ醇使溶解,作為供試品溶液。
3.如權(quán)利要求I所述的ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在干在步驟I)中,當(dāng)所述提取溶劑是濃度為95%-100%的甲醇或濃度為95% 100%的こ醇溶液時(shí),取步驟a得到的提取溶液,經(jīng)靜置后,取上清液即可作為供試品溶液。
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在于運(yùn)用高效液相色譜法對(duì)小金牛草中芒果苷進(jìn)行定量測(cè)定,按以下步驟進(jìn)行 1)供試品溶液的制備取小金牛草藥材粉末適量,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入提取溶劑,提取溶劑的加入量與小金牛草粉末取樣量的體積質(zhì)量比,以ml/g計(jì)200:1,密塞,稱定重量,超聲處理25 90分鐘或回流提取O. 5 3小時(shí),放冷,再稱定重量,用相應(yīng)的提取溶劑補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液; 2)對(duì)照品溶液的制備取芒果苷對(duì)照品適量,精密稱定,加濃度為60%的こ醇制備成濃度為20. 584 1029. 2μδ/πι1的對(duì)照品溶液,即得; 3)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以體積比為10 20:90 80的こ腈-酸的水溶液或體積比為10 40:90 60的甲醇-酸的水溶液或體積比為O 10 :10 30:90 60的こ腈-甲醇-酸的水溶液為液流動(dòng)相;高效液相色譜法的檢測(cè)波長(zhǎng)為240 365nm、柱溫為25 35°C、色譜柱為C18柱,理論塔板數(shù)按芒果苷峰計(jì)算應(yīng)不低于8000 ; 4)測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液,注入高效液相色譜儀,測(cè)定,即得。
5.如權(quán)利要求4所述的ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在于在步驟I)中,所述提取溶劑是濃度為50 70%的甲醇或濃度為50 70%的こ醇。
6.如權(quán)利要求4所述的ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在于在步驟3)中,所述酸的水溶液中的酸選自含磷酸、醋酸、甲酸,所述酸的水溶液中的酸與水的體積比為O. I O. 5:100。
7.—種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在于,運(yùn)用高效液相色譜法對(duì)小金牛草中芒果苷進(jìn)行定量測(cè)定,按以下步驟進(jìn)行 1)供試品溶液的制備取小金牛草藥材粉末適量,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入提取溶劑,提取溶劑的加入量與小金牛草粉末取樣量的體積質(zhì)量比,以ml/g計(jì)200:1,密塞,稱定重量,超聲處理25 90分鐘或回流提取O. 5 3小時(shí),放冷,再稱定重量,用相應(yīng)的提取溶劑補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液作為供試品溶液; 2)對(duì)照品溶液的制備取芒果苷對(duì)照品適量,精密稱定,加濃度為60%こ醇制備成濃度為20. 584 1029. 2μδ/πι1的對(duì)照品溶液,即得; 3)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以體積比為10 20:90 80的こ腈-酸的水溶液或體積比為10 40:90 60的甲醇-酸的水溶液或體積比為O 10 :10 30:90 60的こ腈-甲醇-酸的水溶液為液流動(dòng)相;高效液相色譜法的檢測(cè)波長(zhǎng)為240 365nm、柱溫為 25 35°C、色譜柱為C18柱,理論塔板數(shù)按芒果苷峰計(jì)算應(yīng)不低于8000 ; 4)測(cè)定分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液,注入高效液相色譜儀,測(cè)定,即得。
8.如權(quán)利要求7所述的ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在于在步驟I)中,所述提取溶劑是濃度為50 70%的甲醇或濃度為50 70%的こ醇。
9.如權(quán)利要求7所述的ー種小金牛草的檢測(cè)方法,其特征在于在步驟3)中,所述酸的水溶液中的酸選自含磷酸、醋酸、甲酸,所述酸的水溶液中的酸與水的體積比為O. I O. 5:100。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種小金牛草的檢測(cè)方法,運(yùn)用薄層色譜法對(duì)小金牛草中有效成分芒果苷進(jìn)行定性測(cè)定,運(yùn)用高效液相色譜法對(duì)小金牛草中有效成分芒果苷進(jìn)行定量測(cè)定,或同時(shí)運(yùn)用這兩種方法。通過(guò)上述檢測(cè)方法能夠很好地控制小金牛草的質(zhì)量,可用于小金牛草藥材真?zhèn)渭捌焚|(zhì)優(yōu)劣的評(píng)價(jià),保證其質(zhì)量的穩(wěn)定、均一、可控。同時(shí)該檢測(cè)方法還具有操作方便、準(zhǔn)確度好、專屬性強(qiáng)的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N30/36GK102854283SQ20121033765
公開(kāi)日2013年1月2日 申請(qǐng)日期2012年9月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月12日
發(fā)明者嚴(yán)志標(biāo), 彭紅英, 陸頌規(guī), 曾利杰, 陳曉堅(jiān), 程君璐, 劉敏珊 申請(qǐng)人:廣州白云山敬修堂藥業(yè)股份有限公司