專利名稱：一種免疫組化質(zhì)量控制參照物及質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物病理檢測領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種免疫組化質(zhì)量控制參照物及利用該參照物進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。
背景技術(shù)：
為了促進(jìn)免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)化、檢測免疫組織化學(xué)染色結(jié)果的可靠性，免疫組化過程應(yīng)該進(jìn)行有效的質(zhì)量控制。免疫組織化學(xué)質(zhì)量控制是指，采取不斷優(yōu)化的措施和技術(shù)制定實(shí)驗(yàn)室制度及常規(guī)工作，規(guī)范和完善實(shí)驗(yàn)室的免疫組織化學(xué)染色操作流程與步驟，保證免疫組織化學(xué)染色質(zhì)量達(dá)到最佳結(jié)果，并可以做出準(zhǔn)確的診斷。在臨床病理診斷和形態(tài)學(xué)研究中，免疫組織化學(xué)染色是一種很重要的技術(shù)和手段。免疫組化技術(shù)應(yīng)用于病理診斷始于上世紀(jì)70年代，目前在全球病理界已經(jīng)得到廣泛應(yīng)用，它已成為病理醫(yī)生常規(guī)工作中不可缺少的部分。免疫組化技術(shù)擁有特異性、敏感性強(qiáng)及操作簡便等優(yōu)點(diǎn)，使得免疫組化技術(shù)在疾病診斷領(lǐng)域得到了廣泛的推廣和應(yīng)用。免疫組化技術(shù)不僅能提高了病理診斷的準(zhǔn)確性，同時(shí)也滲透到了臨床和基礎(chǔ)學(xué)科，在探討疾病的病因?qū)W、發(fā)病機(jī)制及科研工作中起到了不可估量的作用。免疫組化技術(shù)具有操作簡單，靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，在各級(jí)醫(yī)院的臨床病理診斷、研究等相關(guān)學(xué)科中得到廣泛應(yīng)用，但是由于實(shí)驗(yàn)條件的差別及其他技術(shù)因素的影響，使得免疫組化染色結(jié)果差別很大，從而影響到病理診斷的結(jié)果，目前提高免疫組化染色技術(shù)水平的需要越來越迫切，而且任重道遠(yuǎn)。質(zhì)量控制由室內(nèi)質(zhì)控(internalquality control, IQC)和室間質(zhì)控(externalquality assurance, EQA)兩部分組成。IQC是指實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部自己制定免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)的質(zhì)控方法和程序；EQA是由某個(gè)外部機(jī)構(gòu)或組織，對(duì)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室之間的不同免疫組織化學(xué)染色結(jié)果進(jìn)行檢測和評(píng)估，是在實(shí)驗(yàn)室之間進(jìn)行的。IQC和EQA對(duì)于實(shí)現(xiàn)免疫組織化學(xué)染色的標(biāo)準(zhǔn)化方面起到了非常重要的作用，并推動(dòng)了我國免疫組織化學(xué)在病理診斷中的應(yīng)用與發(fā)展。對(duì)于免疫組織化學(xué)染色的內(nèi)部質(zhì)控程序來說，主要的步驟便是對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)樣品(即參照物)的設(shè)立。只有設(shè)立陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，才能確保免疫組織化學(xué)染色過程的準(zhǔn)確性、抗體及相關(guān)試劑的有效性，確認(rèn)染色結(jié)果的真實(shí)性，檢測是否存在假陽性或假陰性結(jié)果。對(duì)照的設(shè)立包括試劑對(duì)照、組織對(duì)照以及內(nèi)部對(duì)照等。由于免疫組織化學(xué)染色有可能出現(xiàn)假陽性和假陰性結(jié)果，因此每次實(shí)驗(yàn)都必須同時(shí)設(shè)立陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，以達(dá)到質(zhì)控的最佳效果。目前免疫組織化學(xué)常規(guī)對(duì)照的設(shè)立，是由一張單獨(dú)的切片上包含有待測抗體陽性或陰性的組織組成的。在日常免疫組織化學(xué)染色中，每一種抗體都需設(shè)立一張單獨(dú)的陽性或陰性組織對(duì)照片，以確認(rèn)抗體及其他試劑是否有效，染色過程是否運(yùn)行正常。目前采用的陽性、陰性對(duì)照組織方法，雖然具有一定的效果，但是由于每張組織片都有一定差異，因此很難為檢測組織提供一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)含量的參考。且目前市場上沒有利用非生物組織的材料作為免疫組化質(zhì)量控制的對(duì)照材料。基于此，本發(fā)明提供了一種免疫組化質(zhì)量控制參照物及利用該參照物進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。該參照物是一種待測抗原含量穩(wěn)定的組織切片對(duì)照物。

發(fā)明內(nèi)容
為了在免疫組化質(zhì)控過程中提供穩(wěn)定的易于獲得的參照物，本發(fā)明提供了提供一種免疫組化質(zhì)量控制參照物及利用該參照物進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下:
一種用于免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控質(zhì)的參照物，所述參照物包括三個(gè)對(duì)照物:質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物、質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物以及抗原修復(fù)對(duì)照物。所述質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物的制備方法為:將抗原經(jīng)過葡聚糖材料處理、固化、然后包埋于石蠟中。所述質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物的制備方法為:將不含有抗原的葡聚糖材料包埋于石臘中。所述抗原修復(fù)對(duì)照物的制備方法為:將抗原經(jīng)過葡聚糖材料處理并固化，再經(jīng)福爾馬林浸泡后包埋于石蠟中。本發(fā)明將制備好的質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物、質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物以及抗原修復(fù)對(duì)照物從石蠟塊中取出，按順序包埋在同一個(gè)石蠟塊中，在切片機(jī)上實(shí)現(xiàn)切片并黏貼于載玻片上作為免疫組化質(zhì)量控質(zhì)的參照物。本發(fā)明還提供了一種免疫組化質(zhì)量控制的方法，該方法是利用包埋有待測目標(biāo)抗原的材料模擬常規(guī)石蠟組織切片，在切片機(jī)上切成薄片黏貼于載玻片上與待檢測組織一同進(jìn)行免疫組化染色，達(dá)到質(zhì)量控制的目的；所述包埋有待測目標(biāo)抗原的材料即上述的參照物。所述的包埋有待測目標(biāo)抗原的材料，是指利用葡聚糖與待測目標(biāo)抗原混合后經(jīng)過固化形成的固體顆粒。所述的待測目標(biāo)抗原，是指與病理組織中待檢測抗原相同的蛋白或者具有相同的抗原決定族的蛋白質(zhì)。所述質(zhì)量控制的陰性對(duì)照，是指沒有包埋目標(biāo)抗原的材料經(jīng)過常規(guī)石蠟切片制作，貼于載玻片上與待檢測組織一同染色；
所述質(zhì)量控制的陽性對(duì)照，是指包埋了目標(biāo)抗原的材料經(jīng)過常規(guī)石蠟切片制作，但是不經(jīng)過福爾馬林固定，使得目標(biāo)抗原的抗原決定簇不被封閉；
所述抗原修復(fù)對(duì)照，是指是包埋了目標(biāo)抗原的材料經(jīng)過常規(guī)石蠟切片制作，并經(jīng)過福爾馬林固定，使得目標(biāo)抗原的抗原決定簇被封閉。本發(fā)明方法利用體外獲得的與組織中待檢測抗原具有相同的蛋白或具有相同的抗原決定簇的蛋白質(zhì)作為對(duì)照物，包埋于多糖材料中并經(jīng)過固化形成固體顆粒，經(jīng)過脫水、透明、浸蠟和包埋等程序制作成石蠟塊，在組織切片機(jī)實(shí)現(xiàn)切片并與待測組織貼于同一張載玻片上，與待測組織一同進(jìn)行免疫組化染色。本發(fā)明方法設(shè)計(jì)了三個(gè)對(duì)照(即參照物)用于免疫組化的質(zhì)量控制，包括陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和抗原修復(fù)對(duì)照，通過參照物染色的結(jié)果直接判斷染色的成功與否，以及染色失敗后的原因。具體如下: (I)陰性對(duì)照片呈現(xiàn)陰性結(jié)果，陽性對(duì)照片呈現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原修復(fù)對(duì)照呈現(xiàn)陽性結(jié)果。說明染色過程成功，染色結(jié)果可以用于病理診斷。(2)陰性對(duì)照呈現(xiàn)陰性結(jié)果，陽性對(duì)照呈現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原修復(fù)對(duì)照呈現(xiàn)陰性結(jié)果。說明染色過程失敗，而且失敗原因是抗原修復(fù)，被封閉的抗原決定簇沒有暴露出來，應(yīng)當(dāng)選擇新的修復(fù)方法或提高修復(fù)強(qiáng)度。( 3 )陰性對(duì)照、陽性對(duì)照、抗原修復(fù)對(duì)照都為陰性結(jié)果，說明染色過程失敗，失敗的原因可能是實(shí)驗(yàn)試劑或操作過程的失誤。(4)陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和抗原修復(fù)對(duì)照都呈現(xiàn)陽性。說明染色過程失敗，即產(chǎn)生了非特異性染色。本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的參照物為非生物組織材料，該材料穩(wěn)定性高，為免疫組化技術(shù)的質(zhì)量控制提供了一個(gè)可靠的參照物。傳統(tǒng)的質(zhì)控方法是提供陽性腫瘤參照片，但是腫瘤組織的來源有限，不同組織的染色結(jié)果差異較大，無法為免疫組化過程提供一個(gè)穩(wěn)定的質(zhì)控參考標(biāo)志物。本發(fā)明提供的參照物成本低廉，具有長久的穩(wěn)定性。通過該方法制備的參照片，其標(biāo)志物濃度一致，同時(shí)還具有來源可靠、穩(wěn)定、質(zhì)控信號(hào)一致的特點(diǎn)。


圖1為載玻片對(duì)照片正確染色結(jié)果示意 圖2為免疫組化過程抗原修復(fù)不徹底對(duì)照片染色結(jié)果示意 圖3為免疫組化過程抗染色失敗結(jié)果示意 圖4為免疫組化過程抗染色失敗結(jié)果示意圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明中陰性對(duì)照材料的制備步驟如下:稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于IOmL雙蒸水中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 y L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒進(jìn)行與病理組織同樣的程序，經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，用二甲苯透明，石蠟浸泡，最后石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。按照與病理組織一樣的程序切片和貼片。本發(fā)明中陽性對(duì)照材料的制備步驟如下:量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為0.1mg/L到10mg/L濃度范圍的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 y L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。本發(fā)明中抗原修復(fù)對(duì)照材料的制備步驟如下:量取IOmL雙蒸水，加入終濃度
0.lmg/L到10mg/L濃度范圍的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉,溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 y L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過福爾馬林(35-40%甲醛和10-15%甲醇水溶液)固定，梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。下面通過具體實(shí)施示例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說明，但是不能以此限制本發(fā)明的范圍。以下所用生化試劑除特別標(biāo)明外均購自生工生物工程(上海)有限公司，抗體和臨床組織石蠟切片為申請(qǐng)人(福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)提供，操作步驟若無說明均為常規(guī)操作步驟。實(shí)施例1、陰性對(duì)照材料的制備
稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于IOmL雙蒸水中，充分?jǐn)嚢枞芙狻Ｔ俜Q取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒進(jìn)行與病理組織同樣的程序，經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，用二甲苯透明，石蠟浸泡，最后石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。按照與病理組織一樣的程序切片和貼片。實(shí)施例2、陽性對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為0.lmg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例3、抗原修復(fù)對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為lmg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加A 20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過福爾馬林(35-40%甲醛和10-15%甲醇水溶液)固定，梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例4、質(zhì)量控質(zhì)參照物的制作
獲得的陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和抗原修復(fù)對(duì)照材料，從石蠟塊中取出，按順序包埋在同一個(gè)石蠟塊中，經(jīng)過組織切片機(jī)切片貼于載玻片上，作為免疫組化質(zhì)控參照物。實(shí)施例5、陽性對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為10mg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加A 20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例6、陽性對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為lmg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加A 20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例7、抗原修復(fù)對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為0.lmg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過福爾馬林(35-40%甲醛和10-15%甲醇水溶液)固定，梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例8、抗原修復(fù)對(duì)照材料的制備
量取IOmL雙蒸水，加入終濃度為10mg/L的抗原蛋白并充分溶解。稱取0.2g脫脂奶粉，溶解于上述抗原溶液中，充分?jǐn)嚢枞芙?。再稱取0.2g葡聚糖加入到上述溶液中，攪拌后加入20 L冰乙酸，不斷攪拌使葡聚糖徹底溶解，4°C放置除去葡聚糖溶液中的氣泡。用一次性注射針頭將葡聚糖溶液打到氫氧化鈉溶液中固化，形成白色固體顆粒。獲得的固體顆粒經(jīng)過福爾馬林(35-40%甲醛和10-15%甲醇水溶液)固定，梯度酒精脫水經(jīng)過梯度酒精脫水(脫水的步驟:80%、90%、95%、100%各種濃度的乙醇分別脫水2小時(shí))，二甲苯透明，石蠟浸泡，石蠟包埋制作成石蠟標(biāo)本。實(shí)施例9、具體應(yīng)用
分別取一塊乳腺癌病理組織蠟塊和本專利技術(shù)制作的蠟塊(即含參照物的蠟塊)。然后按照公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)的程序各組織取一片進(jìn)行切片、載玻片貼片?？酒?，68°C，20分鐘，公認(rèn)的二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水(二甲苯I 20min — 二甲苯II 20min — 100%酒精I(xiàn)Omin — 100%酒精I(xiàn)Omin — 95%酒精5min — 80%酒精5min — 70%酒精5min),阻斷滅活內(nèi)源性過氧化物酶:3%H20237°C孵育lOmin，PBS沖洗3X5min ;取出后進(jìn)行抗原修復(fù):置0.0lM枸櫞酸緩沖液(PH6.0)中用煮沸(95°C，15-20min)，自然冷卻20min以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3X5min。正常羊血清工作液封閉，37°C lOmin，傾去勿洗。滴加抗ER的一抗4°C冰箱孵育過夜，PBS沖洗3X5min ;滴加生物素標(biāo)記二抗，37°C孵育30min，PBS沖洗3X5min ;滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，37°C孵育30min，PBS沖洗3X5min ； DAB/H202反應(yīng)染色，自來水充分沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。在進(jìn)行病理組織結(jié)果判斷之前，首先確定試劑及其整個(gè)處理中試劑的有效性及處理過程是否正確。根據(jù)對(duì)照片的結(jié)果進(jìn)行判斷。(具體判定方法為:圖1-4中的圓形斑點(diǎn)中，深色斑點(diǎn)為陽性，無色斑點(diǎn)為陰性):
本專利技術(shù)制備的對(duì)照質(zhì)控片染色結(jié)果若如圖1所示，即陰性對(duì)照片呈現(xiàn)陰性結(jié)果，陽性對(duì)照片呈現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原修復(fù)對(duì)照呈現(xiàn)陽性結(jié)果。則說明染色過程成功，染色結(jié)果可以用于病理診斷。
本專利技術(shù)制備的對(duì)照質(zhì)控片染色結(jié)果若如圖2所示，即陰性對(duì)照呈現(xiàn)陰性結(jié)果，陽性對(duì)照呈現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原修復(fù)對(duì)照呈現(xiàn)陰性結(jié)果。則說明染色過程失敗，而且失敗原因是抗原修復(fù)，被封閉的抗原決定簇沒有完全暴露出來，應(yīng)當(dāng)選擇新的修復(fù)方法或提高修復(fù)強(qiáng)度。病理片的染色結(jié)果可信度有一定程度的下降。本專利技術(shù)制備的對(duì)照質(zhì)控片染色結(jié)果若如圖3所示，即陰性對(duì)照、陽性對(duì)照、抗原修復(fù)對(duì)照都為陰性結(jié)果，說明染色過程失敗，失敗的原因可能是試劑或操作過程的失誤。病理染色結(jié)果不可信，應(yīng)重新進(jìn)行染色操作。本專利技術(shù)制備的對(duì)照質(zhì)控片染色結(jié)果若如圖4所示，即陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和抗原修復(fù)對(duì)照都呈現(xiàn)陽性。說明染色過程失敗，即產(chǎn)生了非特異性染色。病理染色結(jié)果不可信，應(yīng)重新進(jìn)行染色操作。如圖1所示，即陰性對(duì)照斑點(diǎn)呈現(xiàn)陰性結(jié)果，陽性對(duì)照斑點(diǎn)呈現(xiàn)陽性結(jié)果，抗原修復(fù)對(duì)照斑點(diǎn)呈現(xiàn)陽性結(jié)果，染色過程成功，則病理切片可用于進(jìn)一步的診斷。在顯微鏡下觀察，如果呈現(xiàn)棕色結(jié)果，則病理切片為陽性結(jié)果，如果無棕色顏色出現(xiàn)，則病理切片的診斷結(jié)果為陰性。
權(quán)利要求
1.一種用于免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控質(zhì)的參照物，其特征在于:所述參照物包括三個(gè)對(duì)照物:質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物、質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物以及抗原修復(fù)對(duì)照物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控質(zhì)的參照物，其特征在于:所述質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物的制備方法為:將抗原經(jīng)過葡聚糖材料處理后，然后包埋于石蠟中。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控質(zhì)的參照物，其特征在于:所述質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物的制備方法為:將不含有抗原的葡聚糖材料包埋于石蠟中。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)量控質(zhì)的參照物，其特征在于:所述抗原修復(fù)對(duì)照物的制備方法為:將抗原經(jīng)過葡聚糖材料處理并固化，再經(jīng)福爾馬林浸泡后包埋于石蠟中。
5.一種如權(quán)利要求1所述的參照物的應(yīng)用，其特征在于:所述應(yīng)用是將制備好的質(zhì)量控制的陽性對(duì)照物、質(zhì)量控制的陰性對(duì)照物以及抗原修復(fù)對(duì)照物從石蠟塊中取出，按順序包埋在同一個(gè)石蠟塊中，在切片機(jī)上實(shí)現(xiàn)切片并黏貼于載玻片上作為免疫組化質(zhì)量控質(zhì)的參照物。
6.一種免疫組化質(zhì)量控制的方法，其特征在于:該方法是利用包埋有待測目標(biāo)抗原的材料模擬常規(guī)石蠟組織切片，在切片機(jī)上切成薄片黏貼于載玻片上與待檢測組織一同進(jìn)行免疫組化染色，達(dá)到質(zhì)量控制的目的；所述包埋有待測目標(biāo)抗原的材料即為如權(quán)利要求1中所述的參照物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的免疫組化質(zhì)量控制的方法，其特征在于:所述的包埋有待測目標(biāo)抗原的材料，是指利用葡聚糖與待測目標(biāo)抗原混合后經(jīng)過固化形成的固體顆粒。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的免疫組化質(zhì)量控制的方法，其特征在于:所述的待測目標(biāo)抗原，是指與病理組織中待檢測抗原相同的蛋白或者具有相同的抗原決定簇的蛋白質(zhì)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種免疫組化質(zhì)量控制參照物及利用該參照物進(jìn)行質(zhì)量控制的方法。本發(fā)明利用葡聚糖溶液固化后的顆粒模擬生物組織，并將目標(biāo)抗原蛋白均勻包埋其中。包埋目標(biāo)抗原的葡聚糖固體顆粒經(jīng)過脫水、透明、浸蠟和石蠟包埋形成蠟塊，在切片機(jī)上實(shí)現(xiàn)切片后貼于載玻片上，與待檢測組織一同染色。本發(fā)明方法根據(jù)不同的材料設(shè)計(jì)陰性對(duì)照、陽性對(duì)照和抗原修復(fù)對(duì)照，通過參照物染色結(jié)果到達(dá)質(zhì)量控制的目的。
文檔編號(hào)G01N33/531GK103116018SQ20131002932
公開日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2013年1月25日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月25日
發(fā)明者林齊心, 熊玉林, 王小亞 申請(qǐng)人:福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司