專利名稱：光敏染料鋨配合物及其制備方法、癌變早期 dna 氧化損傷快速檢測試劑盒及檢測方法
技術領域：
本發(fā)明具體涉及一種光敏染料鋨配合物及其制備方法、使用該光敏染料鋨配合物進行癌變早期DNA氧化損傷快速檢測的試劑盒及檢測方法。
背景技術：
癌癥，一旦發(fā)現大多已處于晚期，令醫(yī)者回天乏術，只有早期診斷才能防患于未然。化學反應、輻射以及單線態(tài)氧、超氧自由基和羥基自由基等需氧代謝的副產物都可導致DNA的氧化損傷，產生基因突變，誘發(fā)腫瘤、機體細胞的老化和某些退行性疾病。而DNA的四個堿基中鳥嘌呤G最容易被氧化，其主要氧化產物是8-氧-7，8- 二氫脫氧鳥嘌呤(8-羥基鳥嘌呤，8-oxoG)，它在體內形成后較為穩(wěn)定，是DNA氧化損傷的重要生物標識物，對它的監(jiān)測可以反映DNA受損程度，從而對癌變進行早期預警、預防。因此，快速、專一、可靠地檢測DNA中的8-oxoG方法的研究，具有十分重要的理論和現實意義。目前DNA中8-oxoG的常規(guī)檢測方法主要有:酶聯(lián)免疫分析、高效液相色譜與電化學/質譜聯(lián)用、毛細管氣象色譜-質譜聯(lián)用、凝膠電泳等。但這些方法都不具備專一性，并且需要先對DNA進行水解、酶解、衍生化、雜交等預處理，再借助專門的技術和儀器進行檢測，分析時間較長，限制了它們在常規(guī)體檢及門診化驗上的推廣應用。三聯(lián)卩比卩定鋨(Os(bpy) 33+, 0.63V vs Ag/AgCl)是文獻報道(R.C.Holmberg, Μ.T.Tierney, P.A.Ropp, E.E.Berg, M.ff.Grinstaff, Η.H.Thorp, Inorg.Chem.2003, 42, 6379 ；V.A.Szalai, M.J.Singer, H.H.Thorp, J.Am.Chem.Soc.2002, 124, 1625 ；P.A.Ropp, H.H.Thorp, Chem.Biol.1999, 6，599 ； A.Mugweru, B.Wang, J.Rus I ing, Anal.Chem.2004, 76, 5557 ；L.Dennany, R.J.Forster, B.White, M.Smyth, J.F.Rusling, J.Am.Chem.Soc.2002，124，1625)中唯一可以專一氧化 8-oxoG (0.5±0.IV vs Ag/AgCl)的化
學試劑，目前它已在8-oxoG的電化學檢測中得到了很好的應用，其原理如下所示。
權利要求
1.一種光敏染料鋨配合物，其特征在于，該光敏染料鋨配合物具有下列結構通式1: LL，L，，Os-Y4( 1 ) 通式I中，Y為鹵素離子、C104_、BF4_、PF6_*0Ts_，L、L’各自獨立地選自以下配體:
2.一種用于制備權利要求1所述的光敏染料鋨配合物的方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)制備以L、L’為配體的鋨配合物中間體 將各自獨立地選自下述化合物的配體L、L’與以Y’為負離子的金屬鋨鹽同時或依次進行配位反應，得到通式LL’ Os-Y’的鋨配合物中間體，反應溫度為20-200°C，反應時間為l-24h，反應溶劑選自甲醇、乙醇、乙二醇、乙腈、水、DMF、DMS0以及其中任意兩種或兩種以上按照任意比例組成的混合溶劑，
3.一種癌變早期DNA氧化損傷快速檢測試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括A、B、D三種成分: (1)成分A:主體化合物八元瓜環(huán)； (2)成分B:作為客體化合物I的權利要求1所述的光敏染料鋨配合物； (3)成分D:純水或磷酸鹽、硼酸鹽緩沖溶液。
4.如權利要求3所述的試劑盒,其特征在于,該試劑盒還進一步包括: (4)成分C:作為客體化合物II的熒光小分子，該熒光小分子具有下列結構通式II:
5.一種癌變早期DNA氧化損傷快速檢測方法，其特征在于，該方法使用權利要求3所述的試劑盒進行檢測，具體包括如下步驟: (1)首先將成分A、B按照摩爾比1-5:1的比例溶解到成分D中，以成分B的濃度計，配成濃度為10 μ M-1mM的溶液，然后取適量的該溶液加入到透明容器中，惰性氣體除氧，密封待用； (2)將待測樣品加入到上述透明容器中，光照15-30分鐘后，肉眼觀察顏色變化或用光學儀器檢測吸收光譜變化。
6.一種癌變早期DNA氧化損傷快速檢測方法，其特征在于，該方法使用權利要求4所述的試劑盒進行檢測，具體包括如下步驟: (1)首先將成分Α、B、C按照摩爾比1-5:1:1的比例溶解到成分D中，以成分B或C的濃度計，配成濃度為IOyM-1mM的溶液，然后取適量的該溶液加入到透明容器中，惰性氣體除氧，密封待用； (2)將待測樣品加入到上述透明容器中，光照15-30分鐘后，肉眼觀察顏色變化或用光學儀器檢測紫外可見吸收和/或熒光發(fā)射光譜變化。
7.如權利要求5或6所述的檢測方法，其特征在于，所述光照采用的光源為太陽光或能夠激發(fā)所述光敏 染料鋨配合物的照明燈光。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種光敏染料鋨配合物及其制備方法、使用該光敏染料鋨配合物進行癌變早期DNA氧化損傷快速檢測的試劑盒及檢測方法。光敏染料鋨配合物具有結構通式LL’L’’Os-Y4，其中Y為鹵素離子、ClO4-、BF4-、PF6-或OTs-，L、L’各自獨立地選自2,2’-聯(lián)吡啶及其衍生物、鄰菲羅啉及其衍生物或DPPZ，L’’為具有2,2’-聯(lián)吡啶和4,4’-聯(lián)吡啶結構的配體。試劑盒至少包括主體化合物八元瓜環(huán)(成分A)、上述光敏染料鋨配合物(成分B)及純水或磷酸鹽、硼酸鹽緩沖溶液(成分D)。使用該試劑盒，僅需一滴血樣，即使在不借助任何儀器設備的條件下，憑借肉眼，在可見光照射下即可專一、快速檢測8-oxoG。
文檔編號G01N21/31GK103205135SQ201310148539
公開日2013年7月17日 申請日期2013年4月25日 優(yōu)先權日2013年4月25日
發(fā)明者孫世國, 慕道洲, 彭孝軍, 蔡明珠, 王繼濤 申請人:大連理工大學