Spa-抗體三聚體去除血液中特異抗體的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及SPA-抗體三聚體去除血液中特異抗體的用途。該三聚體由抗紅細(xì)胞抗體和SPA以及某種抗白細(xì)胞抗原或其他抗原的抗體形成。該三聚體通過(guò)自身的抗紅細(xì)胞抗體和紅細(xì)胞結(jié)合、另一種抗體和相應(yīng)的白細(xì)胞抗原（或其他抗原）結(jié)合，之后通過(guò)血沉過(guò)程或其他如密度梯度離心等方法沉淀白細(xì)胞（或其他細(xì)胞、因子）和紅細(xì)胞，起到清除相應(yīng)細(xì)胞等成分的目的，也可用于去除血液中特異抗體。
【專利說(shuō)明】SPA-抗體三聚體去除血液中特異抗體的用途
[0001]本發(fā)明是名稱為“SPA-抗體三聚體、含有該三聚體的細(xì)胞處理試劑盒及其制備方法和用途”(申請(qǐng)?zhí)?01010022753.4、申請(qǐng)日2010年01月13日)的發(fā)明專利分案申請(qǐng)專利。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及葡萄球菌A蛋白(staphylococalprotein A,以下簡(jiǎn)稱SPA)-抗體三聚體用于去除血液中特異抗體的用途。
技術(shù)背景
[0003]SPA能與人及多種哺乳動(dòng)物血清IgG分子中的Fe片段結(jié)合。結(jié)合的親和性次序依次是豬、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛。SPA除與IgG結(jié)合外，還能與血清中少量的IgM和IgA結(jié)合，SPA菌對(duì)各類免疫球蛋白的吸附率:IgG為90%?98%，IgM為2%?30%，IgA為
1.5% ?20%ο
[0004]出現(xiàn)共沉反應(yīng)的SPA與IgG必須有兩個(gè)結(jié)合部位，它們分別在Fe和Fab段上，缺一雖能與SPA結(jié)合，但不出現(xiàn)共沉反應(yīng)，這種Fab的參與并非SPA —抗體反應(yīng)。現(xiàn)已研究表明，IgG與SPA的結(jié)合部位是CH2和CH3的交界處。
[0005]SPA應(yīng)用很廣，但所有應(yīng)用的原理都離不開(kāi)SPA具有與IgG的Fe段的結(jié)合能力，主要應(yīng)用方面如下:
[0006]1.SPA菌的協(xié)同凝集作用
[0007]用已知的標(biāo)準(zhǔn)血清，吸附到SPA菌的表面，使之成為吸附抗體的載體，再以此去診斷相應(yīng)的未知抗原而產(chǎn)生肉眼可見(jiàn)的凝集顆粒，診斷的抗原可以是顆粒性的，也可以是可溶性的。此種凝集相當(dāng)于反向間接血凝，但省去間接血凝中的抗體純化，紅血球鞋化等復(fù)雜手續(xù)，而只需要SPA菌體及粗制免疫血清即可。所以此法簡(jiǎn)單、快速，特異性敏感性均較滿意。
[0008]2.作為廣譜第二抗體
[0009]用SPA代替抗體IgG的第二抗體，有如下優(yōu)點(diǎn):①SPA制備容易，性質(zhì)穩(wěn)定，易純化，對(duì)人和多種哺乳動(dòng)物的IgG都能應(yīng)用，不受種屬限制。②SPA的結(jié)合力強(qiáng)，相當(dāng)于游離抗體與抗原的結(jié)合力，對(duì)人和兔的親和常數(shù)均為IO3L/克分子，結(jié)合后對(duì)IgG的活性無(wú)影響。無(wú)論在0°C、37°C、44°C及56°C幾乎均能立即結(jié)合而無(wú)需長(zhǎng)時(shí)間的孵育，因此可以縮短試驗(yàn)時(shí)間；(D SPA容易標(biāo)上1251、熒光素、辣根過(guò)氧化物酶、鐵蛋白等，因此可與多種技術(shù)相結(jié)合SPA分子高度均一，它不是免疫球蛋白，不受Fe受體影響，所以有較高的抗IgG特異性。
[0010]3.用于提取純化IgG利用SPA與IgG的結(jié)合特性提取IgG，比常規(guī)采用硫酸銨、Sephadex柱，DEAE柱或免疫梯度離心等法要簡(jiǎn)便得多，而且純度好。
[0011]4.檢測(cè)和提純IgM IgM在病毒的早期診斷中具有重要意義，為了檢測(cè)特異性IgM抗體，必須首先在血清中除去IgG。采用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的辦法，利用此法也為1gM的提純開(kāi)辟了道路。
[0012]5.其它方面用于免疫復(fù)合物的檢測(cè)、體外激活補(bǔ)體功能試驗(yàn)、細(xì)胞表面標(biāo)記以及腫瘤表面抗原的檢測(cè)等。
[0013]干細(xì)胞(stem cell)是指具有無(wú)限或較長(zhǎng)期的自我更新能力，并能分化出至少一種高度分化子代細(xì)胞的細(xì)胞。根據(jù)細(xì)胞來(lái)源將干細(xì)胞分成胚胎性干細(xì)胞和成體干細(xì)胞，而成體干細(xì)胞包括自體干細(xì)胞和異體干細(xì)胞。
[0014]目前國(guó)內(nèi)外的最新進(jìn)展促使“骨髓干細(xì)胞”移植血管新生的作用機(jī)理、機(jī)體內(nèi)環(huán)境對(duì)干細(xì)胞療效的影響以及轉(zhuǎn)基因骨髓源干細(xì)胞的作用進(jìn)行進(jìn)一步的研究，以提高干細(xì)胞的治療效果。
[0015]臨床上的治療過(guò)程中主要采集骨髓或外周血來(lái)源的單個(gè)核細(xì)胞進(jìn)行移植，并認(rèn)為其中的⑶34+或⑶133 + /VEGF-R2+細(xì)胞為血管新生的干/祖細(xì)胞，但這類細(xì)胞的增殖分化功能、他們的歸巢到血管損傷部位的能力以及達(dá)到治療效果的有效數(shù)量等都是尚未充分了解的內(nèi)容。
[0016]表面抗原(Lineage surface antigen)是當(dāng)干細(xì)胞分化為各系的祖細(xì)胞和成熟細(xì)胞時(shí)，會(huì)出現(xiàn)各系的專一性標(biāo)志，如淋巴系⑶19\^7\粒細(xì)胞系⑶13、⑶11、⑶15、⑶16，紅細(xì)胞系的 CD47、CD51、CD71，巨核細(xì)胞系的 CD31\CD41\CD42\CD61\CD63\CD107，T\NK 系的⑶2\OT25\ra7，這些在特定類型的血細(xì)胞表面出現(xiàn)的抗原通稱為系表面抗原，Lin抗原陽(yáng)性就可以確定為祖細(xì)胞和成熟細(xì)胞，還有許多Lin抗原陰性的細(xì)胞稱之為原始干細(xì)胞，如⑶34\rai33\SCA-lV?38等等。我們可以根據(jù)各科室不同要求去除相關(guān)的成熟細(xì)胞系。
[0017]干細(xì)胞能有效治療各種細(xì)胞損傷性疾病，這已是全世界主流醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的事實(shí)。但是如何得到干細(xì)胞，如何分離、純化取得存活的、很理想的干細(xì)胞是全世界科學(xué)家共同研究的課題。目前從骨髓、臍帶血中分離提取干細(xì)胞的技術(shù)有很多，如:免疫磁珠法和流式細(xì)胞儀法等。這些方法所存在的共同問(wèn)題是:第一不能有效保留所有類型的干細(xì)胞，第二造價(jià)貴，技術(shù)條件要求較高。在臨床推廣應(yīng)用上有一定的難度。

【發(fā)明內(nèi)容】
:
[0018]本發(fā)明涉及一種涉及葡萄球菌A蛋白(staphylococalprotein A,以下簡(jiǎn)稱SPA)-抗體三聚體用于去除血液中特異抗體的用途。
[0019]本發(fā)明提供了一種將血液中紅細(xì)胞和其他細(xì)胞/因子結(jié)合的中介物:spa_抗體三聚體，通過(guò)該三聚體可以將紅細(xì)胞和所需要的白細(xì)胞或其他細(xì)胞/因子結(jié)合，通過(guò)血沉或梯度離心等方法可以將血液中的特定細(xì)胞/因子去除。
[0020]本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0021]1.Spa-抗體三聚體及其制備方法:
[0022]材料:重組SPA ；A抗體:抗紅細(xì)胞單克隆或多克隆抗體；B抗體:可根據(jù)臨床和實(shí)驗(yàn)需要選用不同的單克隆或多克隆抗體，如:特異性淋巴細(xì)胞抗體(抗cd2抗體、抗cd3抗體、抗cd4抗體、抗cdll抗體、抗cdl5抗體、抗cdl6抗體、抗cd8抗體、抗cdl9抗體、抗cd5抗體、抗cd7抗體、抗cdl3抗體、抗cd33抗體、抗cdlO抗體、抗cd21抗體、抗cd22抗體、抗cd23抗體、抗cd32抗體、抗cd35抗體、抗40cd抗體、抗cd45抗體、抗cd54抗體、抗cd56抗體、抗cd64抗體、抗cdl33抗體、抗cdll7抗體、抗cd90抗體)、抗馬立克氏病毒抗體、抗HBS抗體、抗豬瘟病毒抗體、抗副溶血性弧菌抗體、抗傷寒抗體等。
[0023]Spa以無(wú)菌PBS液稀釋，將A抗體(抗紅細(xì)胞單克隆抗體或多克隆抗體)和B抗體以抗體稀釋液稀釋，各種稀釋濃度均可(推薦spa為0.lmg/ml,抗體濃度:0.lmg/ml稀釋)。
[0024]原料質(zhì)量配比為:SPA:A抗:B抗為1.5:1:1 ;如:SPA為1.5ml，A抗為lml，B抗為Imlo (濃度均為 0.lmg/ml)
[0025]反應(yīng)溫度OC?40°C等均可，推薦37°C溫育(水浴或溫箱均可)。
[0026]反應(yīng)時(shí)間:20分鐘-2小時(shí)，推薦37°C溫育30分鐘。
[0027]產(chǎn)物濃度:0.lmg/ml。
[0028]貯存條件:4°C貯存。
[0029]該三聚體可以用于從人類骨髓和臍帶血中分離有核細(xì)胞的體外分離試劑盒等，該技術(shù)具有方法簡(jiǎn)單，造價(jià)低廉，可以工業(yè)化生產(chǎn)，易于推廣的特點(diǎn)。該技術(shù)有效的去除了血漿、紅細(xì)胞、血小板、血漿蛋白、離子，以及其他所需要去除德成熟的單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、多核細(xì)胞，而保留了所有的干細(xì)胞、祖細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞等。這是一種可以直接用于臨床分離、提取干細(xì)胞的骨髓/臍帶/外周血干細(xì)胞體外分離試劑盒的應(yīng)用方法。
[0030]2、細(xì)胞處理試劑盒:基于上述三聚體，結(jié)合淋巴細(xì)胞分離液，抗體結(jié)合的層析板，采用密度梯度離心法、免疫層析法及免疫共沉淀法相結(jié)合的方法，制作細(xì)胞處理試劑盒。其特征在于該試劑盒中包含有:
[0031]SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、特異性淋巴細(xì)胞抗體的三聚體。SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和各種抗淋巴細(xì)胞抗體的反應(yīng)濃度均為0.1?lmg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細(xì)胞單克隆抗體為lml，抗淋巴細(xì)胞抗體為lml。37°C水浴箱內(nèi)溫育30?60分鐘。調(diào)整Spa-抗體三聚體濃度為I μ g/ml，體積為100ml，PH7.4。4°C保存。
[0032]淋巴細(xì)胞分離液(市售)50ml。
[0033]抗體結(jié)合的層析板:聚苯乙烯材料的層析板，消毒滅菌后加入抗特異性淋巴細(xì)胞抗體0.1?lmg/ml，鋪滿表面即可，37°C反應(yīng)30?60分鐘，4°C保存。
[0034]上述各試劑溶液分開(kāi)存放。
[0035]本發(fā)明采用密度梯度離心法、免疫層析法及免疫沉淀法相結(jié)合的方法，所收集提取的干細(xì)胞/祖細(xì)胞無(wú)任何外來(lái)的標(biāo)記物?？梢愿鶕?jù)不同的要求去除了不同的成熟淋巴細(xì)胞系，方便簡(jiǎn)單，可直接用于臨床、實(shí)驗(yàn)室分離、提取干細(xì)胞/祖細(xì)胞。
[0036]3、Spa-抗體的應(yīng)用范圍:
[0037]用于臨床診斷作為指示劑，當(dāng)某種疾病患者血液中出現(xiàn)特殊抗原或外來(lái)抗原，將該抗原的特異性抗體連接在Spa-抗體三聚體上，使紅細(xì)胞作為指示劑，凝聚形成“紅細(xì)胞一抗紅細(xì)胞抗體一Spa—特異性抗體一特異性抗原”復(fù)合物，類似花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，可以肉眼觀察到凝聚物或顯微鏡觀察到花環(huán)結(jié)構(gòu)，作為臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷使用。
[0038]可通過(guò)Spa-抗體和特異性抗體結(jié)合，形成“紅細(xì)胞一抗紅細(xì)胞抗體一Spa—特異性抗體”復(fù)合物，通過(guò)離心等方法使特異性抗體和紅細(xì)胞結(jié)合后去除?？扇コ颊呋?qū)嶒?yàn)用血液中特異抗體。
[0039]可用于臨床干細(xì)胞/祖細(xì)胞的提取和純化試劑盒中，用以提純干細(xì)胞/祖細(xì)胞，增加干細(xì)胞/祖細(xì)胞濃度，提高療效。具體步驟:將特異性的成熟細(xì)胞系的抗體連接到Spa-抗體上,形成“紅細(xì)胞一抗紅細(xì)胞抗體一 Spa—淋巴細(xì)胞抗體一成熟淋巴細(xì)胞”，通過(guò)離心等方法去除成熟淋巴細(xì)胞系等，使干細(xì)胞/祖細(xì)胞得到純化，提高濃度，可用于相應(yīng)的干細(xì)胞/祖細(xì)胞的臨床治療和實(shí)驗(yàn)研究中。
[0040]4、細(xì)胞處理試劑盒的應(yīng)用范圍:
[0041]細(xì)胞處理試劑盒可用于骨髓血/臍帶血/外周血的干細(xì)胞/祖細(xì)胞的提取和純化，具體應(yīng)用方法為:首先將外周血、骨髓或臍帶血加入放有層析板的試劑瓶中，再將SPA-抗體三聚體液倒入其中，靜置20分鐘后收取上清液，將上清液小心的加入到淋巴細(xì)胞分離液上面，后離心20?30分鐘，收取細(xì)胞層，用注射用葡萄糖鹽水稀釋即可使用。
[0042]該細(xì)胞處理試劑盒也可用于臨床干細(xì)胞治療，自體骨髓血回輸?shù)戎委?；也可用于?shí)驗(yàn)中，操作簡(jiǎn)單，費(fèi)用低，并可通過(guò)去除相應(yīng)的血液成分，用于研究不同成熟細(xì)胞系及其他細(xì)胞/細(xì)胞因子等成分對(duì)干細(xì)胞/祖細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化的影響。
【具體實(shí)施方式】:
[0043]下述實(shí)施例將有助于進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不能限制本發(fā)明的內(nèi)容。
[0044]實(shí)施例1:細(xì)胞處理試劑盒
[0045]1、SPA(葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、特異性淋巴細(xì)胞抗體的三聚體。該三聚體制備過(guò)程:SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體的反應(yīng)濃度均為0.lmg/ml ο SPA為1.5ml,抗紅細(xì)胞單克隆抗體為lml,抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體各為0.25ml。37°C水浴箱內(nèi)溫育30分鐘。加入PBS液，調(diào)整Spa-抗體三聚體濃度為I μ g/ml，體積為100ml, PH7.4。4°C保存。
[0046]2、人淋巴細(xì)胞分離液(市售)100ml，離心密度為1.077g/ml。
[0047]3、細(xì)胞層析板:聚苯乙烯材料的層析板,消毒滅菌后加入濃度為0.lmg/ml抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體，鋪滿表面即可，37°C反應(yīng)30分鐘后室溫下過(guò)夜，置在500ml試劑瓶?jī)?nèi)。4°C保存。
[0048]所用材料通過(guò)過(guò)濾除菌，材料經(jīng)過(guò)120攝氏度，30分鐘高溫高壓滅菌，試劑經(jīng)過(guò)濾除圃，無(wú)圃操作制備后，分別存放在試劑盒中。
[0049]細(xì)胞處理試劑盒應(yīng)用方法:取外周血、骨髓或臍帶血200ml，加入到放有層析板的試劑瓶中，再加50mlSPA-抗體三聚體混勻后37度靜置30分鐘，該三聚體分別和白細(xì)胞、紅細(xì)胞結(jié)合，形成細(xì)胞團(tuán)，沉淀到試管底部。部分未結(jié)合的成熟的細(xì)胞系和層析板上的抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物。收集上清液。將淋巴細(xì)胞分離液加到離心管中，再把上面收集的上清液小心加到淋巴細(xì)胞分離液上面，700g離心20分鐘，將殘存的紅細(xì)胞、血小板、血漿以及未沉淀的白細(xì)胞紅細(xì)胞聚合體利用密度梯度離心法除去，收取細(xì)胞層，用磷酸緩沖液(PBS)清洗2-3次，然后用注射用生理鹽水/葡萄糖鹽水稀釋備用。
[0050]所制備的細(xì)胞可用于臨床自身骨髓血干細(xì)胞治療，將經(jīng)上述過(guò)程提取的干細(xì)胞/祖細(xì)胞稀釋后經(jīng)血管介入注射到肝硬化病人的肝臟內(nèi)治療肝硬化?？蓪⑻崛『蟮淖陨砉撬柩杉?xì)胞或臍帶血干細(xì)胞注射到糖尿病足患者的下肢血管周圍以及注射到狹窄或閉塞動(dòng)脈的遠(yuǎn)端，治療糖尿病足。也可將提取純化后的自身骨髓血干細(xì)胞或臍帶血干細(xì)胞注射到急性脊髓損傷患者的脊髓斷傷處，治療急性脊髓橫斷。也可用于其它細(xì)胞損傷性疾病。
[0051]實(shí)施例2:細(xì)胞處理試劑盒
[0052]1、SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、特異性淋巴細(xì)胞抗體的三聚體。該三聚體制備過(guò)程:SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體的反應(yīng)濃度均為0.lmg/ml ο SPA為1.5ml,抗紅細(xì)胞單克隆抗體為lml,抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體為0.25ml。37°C水浴箱內(nèi)溫育30分鐘。加入PBS液，使Spa-抗體三聚體濃度為I μ g/ml，體積為100ml, PH7.4。4°C保存。
[0053]2、淋巴細(xì)胞分離液100ml:0.3%的泛影酸鈉和8%的聚蔗糖400#組成的水溶液，密度為 1.077g/ml。
[0054]3、抗體結(jié)合物:將抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體和聚苯乙烯材料的納米顆?；旌?。抗體濃度為0.lmg/ml,體積為lml,聚苯乙烯顆粒為10mg。37°C水浴箱內(nèi)溫育I小時(shí)后室溫過(guò)夜。4°C保存。
[0055]所用材料通過(guò)過(guò)濾除菌，材料經(jīng)過(guò)120攝氏度，30分鐘高溫高壓滅菌，試劑經(jīng)過(guò)濾除圃，無(wú)圃操作制備后，分別存放在試劑盒中。
[0056]細(xì)胞處理試劑盒應(yīng)用方法:取骨髓或臍帶血200ml加入含抗體結(jié)合物的試劑瓶中，再加50mlSPA-抗體三聚體混勻后37°C靜置30分鐘，該三聚體分別和白細(xì)胞、紅細(xì)胞結(jié)合，形成細(xì)胞團(tuán)，沉淀到試管底部。部分未結(jié)合的成熟白細(xì)胞和抗體結(jié)合物上的抗體結(jié)合形成小顆粒懸浮。收集上清液。將淋巴細(xì)胞分離液加到離心管中，再把上面收集的細(xì)胞懸浮液小心加到淋巴細(xì)胞分離液上面，2000轉(zhuǎn)/分離心20分鐘，將殘存的紅細(xì)胞、血小板、血漿和抗體結(jié)合物利用密度梯度離心法除去，收取細(xì)胞層，用磷酸緩沖液(PBS)清洗2-3次，然后用注射用生理鹽水/葡萄糖鹽水稀釋后備用。
[0057]使用本試劑盒制備的細(xì)胞可用于臨床自身骨髓血干細(xì)胞治療，將經(jīng)上述過(guò)程提取的干細(xì)胞/祖細(xì)胞稀釋后經(jīng)血管介入注射到肝硬化病人的肝臟內(nèi)治療肝硬化?？蓪⑻崛『蟮淖陨砉撬柩杉?xì)胞或臍帶血干細(xì)胞注射到糖尿病足患者的下肢血管周圍以及注射到狹窄或閉塞動(dòng)脈的遠(yuǎn)端，治療糖尿病足。也可將提取純化后的自身骨髓血干細(xì)胞或臍帶血干細(xì)胞注射到急性脊髓損傷患者的脊髓斷傷處，治療急性脊髓橫斷。也可用于其它細(xì)胞損傷性疾病。
[0058]實(shí)施例3: Spa-抗體
[0059]雞馬立克氏病(MD)是由馬立克氏病毒引起的一種高度接觸傳染的淋巴細(xì)胞增生性疾病。其主要特征是:周圍神經(jīng)、各種臟器、虹膜和皮膚等發(fā)生淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)和形成腫病。馬立克氏病主要發(fā)生于雞，也有發(fā)生于火雞、野雞、鴨、鵪鶉、天鵝等禽類的報(bào)道。該病傳染性強(qiáng)，傳播速度快，潛伏期長(zhǎng)。急性發(fā)病雞淘汰及死亡率達(dá)10%?80%。迄今為止，在馬立克氏病的診斷上，除AGPT外，尚沒(méi)有一種能在基層便于應(yīng)用的實(shí)用技術(shù)。
[0060]SPA(葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、抗馬立克氏病毒抗體的三聚體。該三聚體制備過(guò)程:SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和抗馬立克氏病毒抗體的反應(yīng)濃度均為0.lmg/ml ο SPA為1.5ml，抗紅細(xì)胞單克隆抗體為1ml，抗馬立克氏病毒抗體lml。37°C水浴箱內(nèi)溫育60分鐘。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0061]使用時(shí)，該三聚體稀釋到1:1000工作濃度，即0.1 μ g/ml，取血樣，加入三聚體后37°C水浴箱內(nèi)溫育I小時(shí)，取樣本在顯微鏡下觀察，以生理鹽水作為對(duì)照，有聚集現(xiàn)象者為陽(yáng)性，即感染了馬立克氏病毒。
[0062]實(shí)施例4: Spa-抗體
[0063]豬瘟(SwnieFever，SF)是豬的一種高度接觸性傳染病。是由豬瘟病毒(ClassiealffSnieFeverviurs, CSFV)引起的豬的一種急性、亞急性、慢性及典型、非典型的疾病過(guò)程，是危害養(yǎng)豬業(yè)的主要傳染病之一。
[0064]SPA(葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、抗豬瘟病毒抗體的三聚體。該三聚體制備過(guò)程:SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和抗豬瘟病毒抗體的反應(yīng)濃度均為0.lmg/mKSPA為1.5ml,抗紅細(xì)胞單克隆抗體為lml，抗豬瘟病毒抗體lml。40°C水浴箱內(nèi)溫育60分鐘。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0065]使用時(shí)，該三聚體稀釋到0.1 μ g/ml，取血樣，加入三聚體后37°C水浴箱內(nèi)溫育I小時(shí)，取樣本在顯微鏡下觀察，以生理鹽水作為對(duì)照，有聚集現(xiàn)象者為陽(yáng)性，即該血樣感染了豬瘟病毒。
[0066]實(shí)施例5: Spa-抗體
[0067]副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus, VP)是海洋和鹽湖中分布廣泛的一種嗜鹽性病原菌。廣泛分布在近海岸的海水、海底沉積物、魚(yú)類、貝類中，適應(yīng)于高濃度(6%)食鹽的環(huán)境中生長(zhǎng)，在不含食鹽的培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng)。該菌是亞于霍亂弧菌的一種常見(jiàn)腸道致病菌，其污染會(huì)給海水養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p失，還會(huì)引起人類腹瀉等腸道疾病及食物中毒，出現(xiàn)腹瀉呈水樣或血樣便、腹部痙攣、惡心、嘔吐和頭痛等癥狀。自2001年以來(lái)，副溶血性弧菌性食物中毒爆發(fā)已經(jīng)成為中國(guó)最常見(jiàn)的食源性疾患，副溶血性弧菌性食物中毒的起數(shù)和人數(shù)一直處于第一位。
[0068]SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、抗副溶血性弧菌多克隆抗體的三聚體。該三聚體制備過(guò)程=SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和抗副溶血性弧菌多克隆抗體的反應(yīng)濃度均為0.lmg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細(xì)胞單克隆抗體為1ml，抗副溶血性弧菌多克隆抗體lml。12°C水浴箱內(nèi)溫育6小時(shí)。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0069]使用時(shí)，該三聚體稀釋0.1 μ g/ml，取待測(cè)血樣，加入三聚體后37°C水浴箱內(nèi)溫育I小時(shí)，取樣本在顯微鏡下觀察，以生理鹽水作為對(duì)照，有聚集現(xiàn)象者為陽(yáng)性，即該血樣感染了副溶血性弧菌。
[0070]實(shí)施例6: Spa-抗體
[0071]傷寒是由傷寒桿菌引起的經(jīng)消化道傳播的急性傳染病。臨床特征為長(zhǎng)程發(fā)熱、全身中毒癥狀、相對(duì)緩脈、肝脾腫大、玫瑰疹及白細(xì)胞減少等。主要并發(fā)癥為腸出血、腸穿孔。
[0072]SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、抗傷寒抗體的三聚體。該三聚體制備過(guò)程:SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和抗傷寒抗體的反應(yīng)濃度均為0.lmg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細(xì)胞單克隆抗體為lml，抗傷寒抗體lml。30°C水浴箱內(nèi)溫育90分鐘。Spa-抗體三聚體濃度為 0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0073]使用時(shí)，該三聚體稀釋到0.1 μ g/ml，取血樣，加入三聚體后37°C水浴箱內(nèi)溫育I小時(shí)，取樣本在顯微鏡下觀察，以生理鹽水作為對(duì)照，有聚集現(xiàn)象者為陽(yáng)性，即感染了傷寒。
[0074]實(shí)施例7: Spa-抗體
[0075]將spa和抗紅細(xì)胞單克隆/多克隆抗體以及不同的淋巴細(xì)胞抗體結(jié)合，可用來(lái)檢測(cè)血液中淋巴細(xì)胞亞群的比例，幫助判定患者的免疫功能。
[0076]SPA(葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、待測(cè)淋巴細(xì)胞亞群的抗體(如抗cd2抗體、抗cd3抗體、抗cd4抗體、抗cdll抗體、抗cdl5抗體、抗cdl6抗體、抗cd8抗體、抗cdl9抗體、抗cd5抗體、抗cd7抗體、抗cdl3抗體、抗cd33抗體、抗cdlO抗體、抗cd21抗體、抗cd22抗體、抗cd23抗體、抗cd32抗體、抗cd35抗體、抗40cd抗體、抗cd45抗體、抗cd54抗體、抗cd56抗體、抗cd64抗體、抗cdl33抗體、抗cdll7抗體、抗cd90抗體等)的三聚體。該三聚體制備過(guò)程=SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和待測(cè)淋巴細(xì)胞抗體的反應(yīng)濃度均為0.1mg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細(xì)胞單克隆抗體為lml，待測(cè)淋巴細(xì)胞抗體lml。37°C水浴箱內(nèi)溫育60分鐘。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0077]使用時(shí)，將該三聚體稀釋到1:1000工作濃度，即0.1 μ g/ml，取血樣，加入三聚體后37°C水浴箱內(nèi)溫育45分鐘，肉眼可看到凝集現(xiàn)象，取樣本在顯微鏡下觀察，觀測(cè)聚集顆粒即花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，三個(gè)紅細(xì)胞圍繞的為陽(yáng)性，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，和標(biāo)準(zhǔn)血樣結(jié)果(陽(yáng)性對(duì)照)比較。
[0078]實(shí)施例8: Spa-抗體
[0079]將spa和抗紅細(xì)胞單克隆/多克隆抗體以及待測(cè)的特殊細(xì)胞抗體結(jié)合，可用來(lái)檢測(cè)血液中待測(cè)細(xì)胞的存在與否。
[0080]SPA(葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、待測(cè)特殊細(xì)胞的抗體的三聚體。該三聚體制備過(guò)程:SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和待測(cè)特殊細(xì)胞抗體的反應(yīng)濃度均為0.lmg/ml。SPA為
1.5ml，抗紅細(xì)胞單克隆抗體為1ml，待測(cè)特殊細(xì)胞抗體lml。4°C冰箱靜置12小時(shí)。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0081]使用時(shí)，將該三聚體稀釋到1:1000工作濃度，即0.1 μ g/ml，取血樣，加入三聚體后37°C水浴箱內(nèi)溫育I小時(shí)，肉眼可看到凝集現(xiàn)象，取樣本在顯微鏡下觀察，觀測(cè)聚集顆粒即花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，三個(gè)紅細(xì)胞圍繞的為陽(yáng)性，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，和標(biāo)準(zhǔn)血樣結(jié)果(陽(yáng)性對(duì)照)比較。
[0082]Spa-抗體實(shí)施例9:
[0083]將spa和抗紅細(xì)胞單克隆/多克隆抗體以及待測(cè)腫瘤相關(guān)抗原的抗體結(jié)合，可用來(lái)檢測(cè)血液中待測(cè)腫瘤相關(guān)抗原的存在與否。
[0084]SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、待測(cè)腫瘤相關(guān)抗原的抗體的三聚體。該三聚體制備過(guò)程=SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和待測(cè)腫瘤相關(guān)抗原的抗體的反應(yīng)濃度均為
0.lmg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細(xì)胞單克隆抗體為1ml，待測(cè)腫瘤相關(guān)抗原的抗體lml。20°C冰箱靜置3小時(shí)。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0085]使用時(shí)，將該三聚體稀釋到1:1000工作濃度，即0.1 μ g/ml，取血樣，加入三聚體后37°C水浴箱內(nèi)溫育I小時(shí)，肉眼可看到凝集現(xiàn)象，取樣本在顯微鏡下觀察，觀測(cè)聚集顆粒即花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，三個(gè)紅細(xì)胞圍繞的為陽(yáng)性，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，和標(biāo)準(zhǔn)血樣結(jié)果(陽(yáng)性對(duì)照)比較。
[0086]Spa-抗體實(shí)施例10:
[0087]將spa和抗紅細(xì)胞單克隆/多克隆抗體以及待測(cè)的細(xì)胞因子抗體結(jié)合，可用來(lái)檢測(cè)血液中特殊細(xì)胞因子的存在與否。
[0088]SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細(xì)胞抗體、待測(cè)細(xì)胞因子的抗體的三聚體。該三聚體制備過(guò)程:SPA和抗紅細(xì)胞單克隆抗體和待測(cè)細(xì)胞因子抗體的反應(yīng)濃度均為0.lmg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細(xì)胞單克隆抗體為1ml，待細(xì)胞因子抗體lml。25°C冰箱靜置2小時(shí)。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0089]使用時(shí)，將該三聚體稀釋到1:1000工作濃度，即0.1 μ g/ml，取血樣，加入三聚體后37°C水浴箱內(nèi)溫育I小時(shí)，肉眼可看到凝集現(xiàn)象，取樣本在顯微鏡下觀察，觀測(cè)聚集顆粒即花環(huán)樣結(jié)構(gòu)，三個(gè)紅細(xì)胞圍繞的為陽(yáng)性，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，和標(biāo)準(zhǔn)血樣結(jié)果(陽(yáng)性對(duì)照)比較。
【權(quán)利要求】
1.一種葡萄球菌A蛋白-抗體三聚體的用途，其特征在于:用于去除血液中特異抗體。
2.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于:用以去除血液中特異抗體時(shí)，是通過(guò)以下步驟實(shí)現(xiàn):通過(guò)葡萄球菌A蛋白-抗體和特異性抗體結(jié)合，形成“紅細(xì)胞一抗紅細(xì)胞抗體一葡萄球菌A蛋白一特異性抗體”復(fù)合物，通過(guò)血沉、離心方法使特異性抗體和紅細(xì)胞結(jié)合后去除。
3.如權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于:所述特異抗體為特異性的成熟淋巴細(xì)胞抗體。
4.如權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于:所述的葡萄球菌A蛋白-抗體三聚體由下述制備方法獲得:將葡萄球菌A蛋白以無(wú)菌磷酸緩沖液稀釋，將A抗體和B抗體以抗體稀釋液稀釋，在(TC或4?40°C溫度下，溫育20分鐘-12小時(shí)，得到所述葡萄球菌A蛋白-抗體三聚體，其中，所述葡萄球菌A蛋白、A抗體和B抗體的質(zhì)量比為1.5:1:1 ;所述三聚體為葡萄球菌A蛋白同抗體A、抗體B的結(jié)合，所述抗體A為抗紅細(xì)胞單克隆抗體或多克隆抗體，所述抗體B為待測(cè)單克隆抗體或多克隆抗體。
5.如權(quán)利要求1或4所述的用途，其特征在于:所述抗體B為特異性淋巴細(xì)胞抗體、抗馬立克氏病毒抗體、抗HBS抗體、抗豬瘟病毒抗體、抗副溶血性弧菌抗體、抗傷寒抗體中任一抗體。
6.如權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于:所述特異性淋巴細(xì)胞抗體為抗cd2抗體、抗cd3抗體、抗cd4抗體、抗cdll抗體、抗cdl5抗體、抗cdl6抗體、抗cd8抗體、抗cdl9抗體、抗cd5抗體、抗cd7抗體、抗cdl3抗體、抗cd33抗體、抗cdlO抗體、抗cd21抗體、抗cd22抗體、抗cd23抗體、抗cd32抗體、抗cd35抗體、抗40cd抗體、抗cd45抗體、抗cd54抗體、抗cd56抗體、抗cd64抗體、抗cdl33抗體、抗cdll7抗體、抗cd90抗體中的一種或多種的組合。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK103604927SQ201310222053
【公開(kāi)日】2014年2月26日 申請(qǐng)日期:2010年1月13日 優(yōu)先權(quán)日:2010年1月13日
【發(fā)明者】張厚亮 申請(qǐng)人:王信