一種檢測Anti-IgG濃度的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測Anti-IgG濃度的方法。以3,5-二溴水楊醛縮二乙烯三胺雙席夫堿鎳配合物為電活性物質(zhì)，通過涂滴法制備Anti-IgG電化學免疫傳感器，Anti-IgG濃度在0.01~260μg/L范圍內(nèi)與還原峰電流具有良好的線性關(guān)系，求得線性回歸方程y（μA）=154.3-0.353c(μg/L),R=0.993，據(jù)此利用循環(huán)伏安方法，測定Anti-IgG濃度。本發(fā)明的檢測方法具有操作簡單、分析快速、靈敏度高、體系穩(wěn)定和重現(xiàn)性好等優(yōu)點。
【專利說明】—種檢測Ant 1-1 gG濃度的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用電化學免疫傳感器快速檢測Ant1-1gG濃度的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]IgG是機體抗感染免疫的主力抗體，在結(jié)合補體、增強免疫細胞吞噬病原微生物和 中和細菌毒素的能力方面，具有重要作用，能有效地抗感染。因此發(fā)展快速可靠的檢測IgG 含量的方法是急需解決的問題。席夫堿化合物用于分析測試已有許多報道，但是雙席夫堿 做為電活性物質(zhì)在分析化學中的應(yīng)用研究則相對地較少，考慮到雙席夫堿配合物中較多的 配位點，有望成為良好的修飾電極中配合物修飾劑。利用石墨烯和氧化石墨烯獨特的電學 性質(zhì)與一些材料進行修飾以及制備性能更好的復合新材料是當前的研究熱點，采用石墨烯 和氧化石墨烯與一些材料進行復合，復合后具有很好的導電性及生物相容性，在化學傳感 器的制備及應(yīng)用中有著廣泛的前景。本發(fā)明制備了 3，5-二溴水楊醛雙席夫堿鎳配合物， 將此雙席夫堿鎳配合物與氧化石墨烯結(jié)合研制了電化學免疫傳感器，利用循環(huán)伏安法和交 流阻抗法對免疫傳感器制備過程進行電化學性表征，結(jié)果表明該傳感器適合檢測Ant1-1gG 濃度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種用電化學免疫傳感器快速檢測Ant1-1gG濃度的方法。
[0004]本發(fā)明方法檢測Ant1-1gG濃度的原理:以3，5_ 二溴水楊醛縮二乙烯三胺雙席夫 堿鎳配合物為電活性物質(zhì)，通過涂滴法制備Ant1-1gG電化學免疫傳感器，Ant1-1gG濃度在
0.0f260呢/1范圍內(nèi)與還原峰電流具有良好的線性關(guān)系，求得線性回歸方程，據(jù)此利用循 環(huán)伏安方法，測定Ant1-1gG濃度。
[0005]具體步驟為:
(I)制備3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器
a.取10毫克氧化石墨烯和0.05毫摩爾3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物溶于DMF即 N，N- 二甲基甲酰胺中，超聲分散2小時制得3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯 懸浮液。
[0006]b.將金電極在放有Al2O3粉末的麂皮上拋光后用二次水淋洗，再依次在無水乙醇 和二次水中分別超聲清洗3分鐘，紅外烘干，然后在金電極上滴加步驟(I)第a步制得的 3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯懸浮液，經(jīng)紅外烘干，制得3，5- 二溴水楊醛 席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為LI電極。
[0007]c.滴加10微升濃度為1.0毫克/毫升的EDAC即1- (3_ 二甲氨基丙烷)_3_乙 基碳二亞胺與NHS即羥基琥珀酰亞胺的混合溶液到步驟(I)第b步制得的LI電極上，水平 放置2小時，得到活化的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為 L2電極，置于4°C的冰箱中保存待用。
[0008]d.用10微升濃度為1.0毫克/毫升的h-1gG溶液滴涂在步驟(I)第c步制得的L2電極上，制得固定了 h-1gG的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為L3電極，置于4°C的冰箱中保存待用。
[0009]e.在步驟⑴第d步制得的L3電極表面滴加10微升濃度為I毫克/毫升的BSA 即牛血清白蛋白溶液，對L3電極表面的活性位點進行封閉，紅外烘干，記為L4電極，置于 4°C的冰箱中保存待用，L4電極即為3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器。
[0010](2)取5只步驟⑴制得的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器，在室溫下，分別滴涂不同濃度的Ant1-1gG進行特異性結(jié)合，所滴涂的 Ant1-1gG的質(zhì)量與固定在3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器上的h-1gG質(zhì)量比為0~1: 1，用二次水洗滌晾干備用。
[0011](3)以步驟⑵處理過的傳感器為工作電極，并以飽和甘汞電極為參比電極、鉬金電極為輔助電極，在PH值為6.0的PBS緩沖溶液中進行循環(huán)伏安掃描，記錄不同濃度 Ant1-1gG的循環(huán)伏安圖中對應(yīng)的還原峰電流，結(jié)果表明Ant1-1gG濃度在0.0f260微克/ 升的范圍內(nèi)，還原峰電流與Ant1-1gG濃度具有良好的線性關(guān)系，隨著Ant1-1gG濃度增加， 電流逐漸減小，以Ant1-1gG濃度為橫縱標，以還原峰電流為縱坐標，繪制工作曲線，其線性回歸方程為 y (MA) =154.3-0.353c (l^g/L)，R=0.993，檢出限為 0.006Pg/L (S/N=3)。[0012](4)另取一定量的Ant1-1gG待測溶液，同步驟(3)中的方法測定還原峰電流，再根據(jù)步驟(3)所得的線性回歸方程計算待測溶液中Ant1-1gG的濃度。
[0013]本發(fā)明方法檢測Ant1-1gG濃度具有操作簡單、分析快速、靈敏度高、體系穩(wěn)定和重現(xiàn)性好的優(yōu)點。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0014]圖1為本發(fā)明實施例中以Ant1-1gG濃度為橫縱標和以還原峰電流為縱坐標繪制的工作曲線圖。
【具體實施方式】
[0015]實施例:
(I)制備3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器
a.取10毫克氧化石墨烯和0.05毫摩爾3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物溶于DMF即 N，N- 二甲基甲酰胺中，超聲分散2小時制得3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯懸浮液。
[0016]b.將金電極在放有Al2O3粉末的麂皮上拋光后用二次水淋洗，再依次在無水乙醇和二次水中分別超聲清洗3分鐘，紅外烘干，然后在金電極上滴加步驟(1)第a步制得的 3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯懸浮液，經(jīng)紅外烘干，制得3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為LI電極。
[0017]c.滴加10微升濃度為1.0毫克/毫升的EDAC即1- (3_ 二甲氨基丙烷)_3_乙基碳二亞胺與NHS即羥基琥珀酰亞胺的混合溶液到步驟(1)第b步制得的LI電極上，水平放置2小時，得到活化的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為 L2電極，置于4°C的冰箱中保存待用。[0018]d.用10微升濃度為1.0毫克/毫升的h-1gG溶液滴涂在步驟(1)第c步制得的 L2電極上，制得固定了 h-1gG的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為L3電極，置于4°C的冰箱中保存待用。
[0019]e.在步驟⑴第d步制得的L3電極表面滴加10微升濃度為I毫克/毫升的BSA 即牛血清白蛋白溶液，對L3電極表面的活性位點進行封閉，紅外烘干，記為L4電極，置于 4°C的冰箱中保存待用，L4電極即為3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器。
[0020](2)取5只步驟(1)制得的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器，在室溫下，分別滴涂10微升濃度分別為I微克/升、37.5微克/升、105微克 /升、175微克/升、260微克/升的Ant1-1gG進行特異性結(jié)合，用二次水洗滌晾干備用。
[0021](3)以步驟⑵處理過的傳感器為工作電極，并以飽和甘汞電極為參比電極、鉬金電極為輔助電極，在PH值為6.0的PBS緩沖溶液中進行循環(huán)伏安掃描，記錄不同濃度 Ant1-1gG的循環(huán)伏安圖中對應(yīng)的還原峰電流，結(jié)果表明Ant1-1gG濃度在0.0f260微克/ 升的范圍內(nèi)，還原峰電流與Ant1-1gG濃度具有良好的線性關(guān)系，隨著Ant1-1gG濃度增加， 電流逐漸減小，以Ant1-1gG濃度為橫縱標，以還原峰電流為縱坐標，繪制工作曲線，其線性回歸方程為 y (MA) =154.3-0.353c (l^g/L)，R=0.993，檢出限為 0.006Pg/L (S/N=3)。
[0022](4)另取一定量的Ant1-1gG待測溶液，同步驟(3)中的方法測定還原峰電流，再根據(jù)步驟(3)所得的線性回歸方程計算待測溶液中Ant1-1gG的濃度為87.63 5微克/升。
【權(quán)利要求】
1.一種檢測Ant1-1gG濃度的方法，其特征在于具體步驟為:(1)制備3，5-二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器a.取10毫克氧化石墨烯和0.05毫摩爾3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物溶于DMF即 N，N- 二甲基甲酰胺中，超聲分散2小時制得3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯懸浮液；b.將金電極在放有Al2O3粉末的麂皮上拋光后用二次水淋洗，再依次在無水乙醇和二次水中分別超聲清洗3分鐘，紅外烘干，然后在金電極上滴加步驟(1)第a步制得的3，5-二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯懸浮液，經(jīng)紅外烘干，制得3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為LI電極；c.滴加10微升濃度為1.0毫克/毫升的EDAC即1- (3- 二甲氨基丙烷)-3-乙基碳二亞胺與NHS即羥基琥珀酰亞胺的混合溶液到步驟(1)第b步制得的LI電極上，水平放置 2小時，得到活化的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為L2電極，置于4°C的冰箱中保存待用；d.用10微升濃度為1.0毫克/毫升的h-1gG溶液滴涂在步驟(1)第c步制得的L2電極上，制得固定了 h-1gG的3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯修飾金電極，記為L3電極，置于4°C的冰箱中保存待用；e.在步驟(1)第d步制得的L3電極表面滴加10微升濃度為I毫克/毫升的BSA即牛血清白蛋白溶液，對L3電極表面的活性位點進行封閉，紅外烘干，記為L4電極，置于4°C 的冰箱中保存待用，L4電極即為3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器；(2)取5只步驟(1)制得的3，5-二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器，在室溫下，分別滴涂不同濃度的Ant1-1gG進行特異性結(jié)合，所滴涂的Ant1-1gG的質(zhì)量與固定在3，5- 二溴水楊醛席夫堿鎳配合物-氧化石墨烯電化學免疫傳感器上的h-1gG 質(zhì)量比為(Tl:l，用二次水洗滌晾干備用；(3)以步驟⑵處理過的傳感器為工作電極，并以飽和甘汞電極為參比電極、鉬金電極為輔助電極，在PH值為6.0的PBS緩沖溶液中進行循環(huán)伏安掃描，記錄不同濃度Ant1-1gG 的循環(huán)伏安圖中對應(yīng)的還原峰電流，結(jié)果表明Ant1-1gG濃度在0.0f260微克/升的范圍內(nèi)，還原峰電流與Ant1-1gG濃度具有良好的線性關(guān)系，隨著Ant1-1gG濃度增加，電流逐漸減小，以Ant1-1gG濃度為橫縱標，以還原峰電流為縱坐標，繪制工作曲線，其線性回歸方程為 y (似)=154.3-0.353。(吒/1)，1?=0.993，檢出限為 0.006吒/1 (S/N=3)；(4)另取一定量的Ant1-1gG待測溶液，同步驟(3)中的方法測定還原峰電流，再根據(jù)步驟(3)所得的線性回歸方程計算待測溶液中Ant1-1gG的濃度。
【文檔編號】G01N27/48GK103499630SQ201310478363
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2013年10月14日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月14日
【發(fā)明者】劉崢, 賴麗燕, 李巍 申請人:桂林理工大學