一種檢測啤酒樣品中l(wèi)-酪氨酸含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種檢測啤酒樣品中L-酪氨酸含量的方法。采用三電極體系,在室溫下，分別以4,5-二氯鄰苯二胺鎳配合物-氧化石墨烯修飾玻碳電極為工作電極,飽和甘汞電極為參比電極,鉑金電極為輔助電極，在含有不同濃度的L-酪氨酸的PBS緩沖溶液中(pH=7.0)進行循環(huán)伏安掃描，記錄不同濃度L-酪氨酸氧化峰電流值，結果表明L-酪氨酸濃度在1.0×10-6～1.0×10-3mol/L范圍內，其濃度與氧化峰電流值具有良好的線性關系，繪制工作曲線，回歸方程為Ip（A）=0.319C（mmol/L）+0.179，相關系數(shù)為0.995（n=5），檢出限為2.3×10-7mol/L（S/N=3)；據(jù)此利用循環(huán)伏安方法，可以測定L-酪氨酸含量。本發(fā)明檢測靈敏、快速。
【專利說明】—種檢測啤酒樣品中L-酪氨酸含量的方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及ー種利用化學修飾電極快速檢測L-酪氨酸含量的方法，特別是檢測啤酒樣品中L-酪氨酸含量的方法。
【背景技術】
[0002]L-酪氨酸屬于非必需氨基酸，是人體體內合成蛋白質所需的重要氨基酸之一，在自然界酪氨酸以L-酪氨酸存在。L-酪氨酸對于促進人體的新陳代謝有非常重要的作用，也能產(chǎn)生出神經(jīng)傳導素。據(jù)研究表明，L-酪氨酸具有防止人體衰老，預防癡呆癥的作用，精密準確的測定人體組織及體液中酪氨酸的含量在臨床醫(yī)學、營養(yǎng)學上都具有重大意義。據(jù)文獻報道目前對酪氨酸的測定方法主要有酶催化分光光度法、色譜法、化學發(fā)光法、熒光分析法、電化學分析法等方法，其中電化學分析法具有成本相對較低、分析過程較簡單、準確度高、快速等優(yōu)點。電化學分析方法的靈敏度、精密度和準確度與新型的修飾電極的開發(fā)研究密切相關，席夫堿過渡金屬配合物是ー種廣泛應用的電子媒介體，具有促進電子傳遞的作用，電子媒介體的應用提高了電化學法檢測的靈敏度、精密度和準確度，促進了電分析化學的迅速發(fā)展。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種檢測啤酒樣品中L-酪氨酸含量的方法。
[0004]檢測L-酪氨酸含量的研究方法:采用三電極體系，在室溫下，分別以玻碳電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉬金電極為輔助電極，所有測量均在含有不同濃度的L-酪氨酸的PBS緩沖溶液中(pH =7.0)進行，采用循環(huán)伏安法掃描，掃描速度0.lV/s，掃描范圍為+0.2V?+1.4V。
[0005]干擾實驗結果表明，在測定相對誤差不超過±5%吋，10倍精氨酸、DL-丙氨酸、L-谷氨酸、L-絲氨酸、甘氨酸；100倍硝酸鎂、硝酸鋁、硝酸銅、硝酸鋇；50倍硝酸鐵不干擾L-酪氨酸濃度的測試。
[0006]具體步驟為:
1.取10 mg納米氧化石墨烯與0.05mmol (37.78mg) 4，5-ニ氯鄰苯ニ胺縮3，5-ニ溴水楊醛席夫堿鎳配合物溶于ニ甲基甲酰胺(DMF)溶液中，超聲分散2小時得到均一的席夫堿鎳配合物-納米氧化石墨烯懸浮液。
[0007]2.將玻碳電極依次在放有Al2O3粉末的麂皮上拋光，二次水淋洗后，依次在無水こ醇、二次水中分別超聲清洗3分鐘，紅外烘干；在玻碳電極上滴加3，5- ニ溴水楊醛席夫堿鎳配合物-納米氧化石墨烯懸浮液，紅外燈供干，獲得4，5- ニ氯鄰苯ニ胺鎳配合物-氧化石墨烯修飾玻碳電極，置于4°C冰箱中保存待用。
[0008]3.采用三電極體系，在室溫下，分別以步驟(2)所得4，5_ ニ氯鄰苯ニ胺鎳配合物-氧化石墨烯修飾玻碳電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉬金電極為輔助電極，在含有不同濃度的L-酪氨酸的PBS緩沖溶液中(pH =7.0)進行循環(huán)伏安掃描，記錄不同濃度L-酪氨酸氧化峰電流值，結果表明L-酪氨酸濃度在1.0X10_6?1.0X10_3mol/L范圍內，其濃度與氧化峰電流值具有良好的線性關系，繪制工作曲線，線性回歸方程為Jp=0.319C+0.179，Jp的單位為A即安培，C的單位為mmol/L，相關系數(shù)為0.995 (n=5)，檢出限為2.3X 10_7mol/L (S/N=3)，其中n為樣品平行測定次數(shù)，S為相對標準偏差，N為線性方程的斜率。
[0009]4.分別準確量取啤酒5.0OmL，用pH=7.0 PBS緩沖溶液定容至50mL，用步驟(2)所得4，5- ニ氯鄰苯ニ胺鎳配合物-氧化石墨烯修飾玻碳電極測定50mL溶液的氧化峰電流值，代入線性回歸方程/P=0.319C+ 0.179，Jp的單位為A即安培，C的單位為mmol/L，計算L-酪氨酸的濃度和啤酒樣品中L-酪氨酸的含量。
[0010]本發(fā)明以4，5- ニ氯鄰苯ニ胺席夫堿鎳配合物-納米氧化石墨烯為電極修飾劑，制備修飾玻碳電極，研究了 L-酪氨酸在修飾電極上的電化學特性和測定方法，并應用于檢測啤酒樣品中的L-酪氨酸的含量，檢測靈敏、快速。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1為本發(fā)明的實施例的工作曲線圖。
【具體實施方式】
[0012]實施例:
1.取10 mg納米氧化石墨烯與0.05mmol (37.78mg)4, 5-ニ氯鄰苯ニ胺縮3，5-ニ溴水楊醛席夫堿鎳配合物溶于ニ甲基甲酰胺(DMF)溶液中，超聲分散2小時得到均一的3，5-ニ溴水楊醛席夫堿鎳配合物-納米氧化石墨烯懸浮液。
[0013]2.將玻碳電極依次在放有Al2O3粉末的麂皮上拋光，二次水淋洗后，依次在無水こ醇、二次水中分別超聲清洗3分鐘，紅外烘干；在玻碳電極上滴加步驟(I)所得的3，5-ニ溴水楊醛席夫堿鎳配合物-納米氧化石墨烯懸浮液，紅外燈供干，獲得4，5- ニ氯鄰苯ニ胺鎳配合物-氧化石墨烯修飾玻碳電扱，置于4°C冰箱中保存待用。
[0014]3.采用三電極體系，在室溫下，分別以步驟(2)所得的4，5-ニ氯鄰苯ニ胺鎳配合物-氧化石墨烯修飾玻碳電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉬金電極為輔助電極，在含有不同濃度的L-酪氨酸的PBS緩沖溶液中(pH =7.0)進行循環(huán)伏安掃描，記錄不同濃度L-酪氨酸氧化峰電流值，結果表明L-酪氨酸濃度在1.0X 10_6?1.0X 10_3mol/L范圍內，其濃度與氧化峰電流值具有良好的線性關系，繪制工作曲線(見圖1)，回歸方程為Ip=0.319C+ 0.179，Jp的單位為A即安培，C的單位為mmol/L，相關系數(shù)為0.995 (n=5)，檢出限為2.3X10_7mol/L (S/N=3)，n為樣品平行測定次數(shù)，S為相對標準偏差，N為線性方程的斜率。
[0015]4.選用三種啤酒進行樣品分析。分別準確量取啤酒5.00mL，用pH=7.0 PBS緩沖溶液定容至50mL，用步驟(2)所得的4，5- ニ氯鄰苯ニ胺鎳配合物-氧化石墨烯修飾玻碳電極測定50mL溶液的氧化峰電流值，代入線性回歸方程/p=0.319C+ 0.179，Jp的單位為A即安培，C的單位為mmol/L，計算L-酪氨酸的濃度和啤酒樣品中L-酪氨酸的含量。向50mL樣品溶液中加入標準L-酪氨酸溶液，進行加標回收實驗，結果見表I。相對標準偏差RSD在1.26%-4.02%，加標回收率在96.00%?102.50%之間，表明本方法的精密度和準確度較好。
[0016]表1啤酒中L-酪氨酸含量的測試結果
【權利要求】
1.一種檢測啤酒樣品中L-酪氨酸含量的方法，其特征在于具體步驟為: (1)取10mg納米氧化石墨烯與0.05mmol即37.78mg4, 5- ニ氯鄰苯ニ胺縮3, 5- ニ溴水楊醛席夫堿鎳配合物溶于ニ甲基甲酰胺溶液中，超聲分散2小時得到均一的席夫堿鎳配合物-納米氧化石墨烯懸浮液； (2)將玻碳電極依次在放有Al2O3粉末的麂皮上拋光，二次水淋洗后，依次在無水こ醇、二次水中分別超聲清洗3分鐘，紅外烘干；再在玻碳電極上滴加3，5-ニ溴水楊醛席夫堿鎳配合物-納米氧化石墨烯懸浮液，紅外燈供干，獲得4，5- ニ氯鄰苯ニ胺鎳配合物-氧化石墨烯修飾玻碳電極，置于4°C冰箱中保存待用； (3)采用三電極體系，在室溫下，分別以步驟(2)所得4，5-ニ氯鄰苯ニ胺鎳配合物-氧化石墨烯修飾玻碳電極為工作電極，飽和甘汞電極為參比電極，鉬金電極為輔助電極，在含有不同濃度的pH =7.0的L-酪氨酸的PBS緩沖溶液中進行循環(huán)伏安掃描，記錄不同濃度L-酪氨酸氧化峰電流值，結果表明L-酪氨酸濃度在1.0X10_6?1.0X10_3mol/L范圍內，其濃度與氧化峰電流值具有良好的線性關系，繪制工作曲線，線性回歸方程為Jp=0.319C+0.179，Jp的單位為A即安培，C的單位為mmol/L，相關系數(shù)為0.995，n=5，檢出限為2.3X 10_7mol/L，S/N=3，其中n為樣品平行測定次數(shù)，S為相對標準偏差，N為線性方程的斜率； (4)分別準確量取啤酒5.00mL，_pH=7.0PBS緩沖溶液定容至50mL，用步驟(2)所得.4，5-ニ氯鄰苯ニ胺鎳配合物-氧化石墨烯修飾玻碳電極測定50mL溶液的氧化峰電流值,代入線性回歸方程/P=0.319C+ 0.179，Jp的單位為A即安培，C的單位為mmol/L，計算L-酪氨酸的濃度和啤酒樣品中L-酪氨酸的含量。
【文檔編號】G01N27/48GK103575795SQ201310533339
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年11月3日 優(yōu)先權日:2013年11月3日
【發(fā)明者】劉崢, 賴麗燕, 李巍 申請人:桂林理工大學