一種用于檢測尿液中纖維連接蛋白濃度的試劑盒及其方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種用于檢測尿液中纖維連接蛋白濃度的試劑盒，包括兩種試劑，Ⅰ試劑由磷酸鹽緩沖液組成，Ⅱ試劑是兔抗人纖維連接蛋白抗血清、或羊抗人纖維連接蛋白抗血清、或鼠抗人纖維連接蛋白抗血清、或鼠抗人纖維連接蛋白單克隆抗體交聯(lián)在膠乳顆粒上構(gòu)成的懸濁液。解決了現(xiàn)有技術(shù)采用免疫擴散法和ELISA雙抗體夾心技術(shù)測定纖維連接蛋白濃度步驟復雜，準確性不高、重復性差問題。本發(fā)明還提供采用上述試劑盒檢測人尿液中纖維連接蛋白濃度的方法，本發(fā)明的試劑盒和方法用于測定尿液中纖維連接蛋白濃度步驟簡單，準確度高、重復性好，用于自動化分析儀。
【專利說明】一種用于檢測尿液中纖維連接蛋白濃度的試劑盒及其方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測試劑盒，特別是一種采用增強膠乳免疫比濁法檢測人尿液中纖維連接蛋白又稱纖維結(jié)合蛋白(FN)濃度的試劑盒及其方法。
【背景技術(shù)】
[0002]纖維連接蛋白又稱纖維結(jié)合蛋白(Fibronectin,簡稱FN),有兩條相類似的多肽鏈亞基組成，亞基的分子量為220-250KD?，F(xiàn)有技術(shù)中采用免疫擴散法和ELISA雙抗體夾心技術(shù)測定尿液中纖維連接蛋白(FN)濃度，其缺點為操作繁瑣、工作強度大、保持時間長，一般需8-48小時、其定量的精確度差。
[0003]因尿液中纖維連接蛋白(FN)的濃度低，所以國內(nèi)外至今未見有用本試劑盒及方法的報導。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的上述缺陷，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種用于檢測尿液中纖維連接蛋白濃度的試劑盒及其方法，所述的這種用于檢測尿液中纖維連接蛋白濃度的試劑盒及其方法要解決現(xiàn)有技術(shù)中采用免疫擴散法和ELISA雙抗體夾心技術(shù)測定尿纖維連接蛋白(FN)濃度過程復雜，準確性不高的技術(shù)問題。
[0005]本發(fā)明提供了一種用于檢測尿液中纖維連接蛋白濃度的試劑盒，包括兩種試劑，I試劑由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、PEG6000-8000、乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-NA2)和曲拉通100 (TX-100)組成，在所述的I試劑中，所述的磷酸氫二鈉的質(zhì)量百分比濃度為28.6g/L，所述的磷酸二氫鉀的質(zhì)量百分比濃度為2.7g/L，所述的PEG6000-8000的質(zhì)量百分比濃度為50g/L，所述的EDTA-NA2的質(zhì)量百分比濃度為lg/L，所述的TX-100的體積濃度為0.2ml/L, II試劑是兔抗人纖維連接蛋白抗血清、或羊抗人纖維連接蛋白抗血清、或鼠抗人纖維連接蛋白抗血清、或鼠抗人纖維連接蛋白單克隆抗體交聯(lián)在膠乳顆粒上構(gòu)成的懸濁液。
[0006]進一步的，所述的II試劑是利用碳二亞胺反應將兔抗人纖維連接蛋白抗血清、或羊抗人纖維連接蛋白抗血清、或鼠抗人纖維連接蛋白抗血清、或純化后的鼠抗人纖維連接蛋白單克隆抗體IgG共價結(jié)合到膠乳顆粒上。
[0007]具體的，膠乳顆粒的直徑為60 - 160nm，材料為聚苯乙烯。
[0008]具體的，上述的曲拉通100的純度為100%。
[0009]進一步的，所述的兔抗人纖維連接蛋白抗血清、或羊抗人纖維連接蛋白抗血清、或鼠抗人纖維連接蛋白抗血清的效價為1:64。
[0010]本發(fā)明還提供了一種檢測人尿液中纖維連接蛋白(FN)濃度的方法，采用上述的試劑盒，包括一個將尿樣本采用生化分析儀測定的步驟，在所述的一個將尿樣本采用生化分析儀測定的步驟中，將尿樣品加入第一種試劑Rl后，37°C孵育5min，讀測第I點樣本Al，加入第二種試劑R2，37°C孵育5min，讀測第2點樣本A2，樣本A=樣本A2-樣本Al ;還包括一個將尿校準品采用生化分析儀測定的步驟，在所述的一個將尿校準采用生化分析儀測定的步驟中，將尿校準品加入第一種試劑Rl后，37°C孵育5min，讀測第I點校準Al，加入第二種試劑R2，37°C孵育5min，讀測第2點校準A2，校準A=校準A2-校準Al ；
[0011]結(jié)果計算:
[0012]
【權(quán)利要求】
1.一種用于檢測尿液中纖維連接蛋白濃度的試劑盒，包括兩種試劑，其特征在于:I試劑由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、PEG6000-8000、EDTA-NA2和TX-1OO組成，在所述的I試劑中，所述的磷酸氫二鈉的質(zhì)量百分比濃度為28.6g/L，所述的磷酸二氫鉀的質(zhì)量百分比濃度為2.7g/L，所述的PEG6000-8000的質(zhì)量百分比濃度為50g/L，所述的EDTA-NA2的質(zhì)量百分比濃度為lg/L，所述的TX-100的體積濃度為0.2ml/L, II試劑是兔抗人纖維連接蛋白抗血清、或羊抗人纖維連接蛋白抗血清、或鼠抗人纖維連接蛋白抗血清、或鼠抗人纖維連接蛋白單克隆抗體交聯(lián)在膠乳顆粒上構(gòu)成的懸濁液。
2.如權(quán)利要求1所述的一種用于檢測尿液中纖維連接蛋白濃度的試劑盒，其特征在于:所述的II試劑是利用碳二亞胺反應將兔抗人纖維連接蛋白抗血清、或羊抗人纖維連接蛋白抗血清、或鼠抗人纖維連接蛋白抗血清、或純化后的鼠抗人纖維連接蛋白單克隆抗體IgG共價結(jié)合到膠乳顆粒上。
3.如權(quán)利要求1所述的一種用于檢測尿液中纖維連接蛋白濃度的試劑盒，其特征在于:所述的兔抗人纖維連接蛋白抗血清、或羊抗人纖維連接蛋白抗血清、或鼠抗人纖維連接蛋白抗血清的效價為1:64。
4.采用權(quán)利要求1的試劑盒檢測尿液中纖維連接蛋白濃度的方法，其特征在于:包括一個將尿樣本采用生化分析儀測定的步驟，在所述的一個將尿樣本采用生化分析儀測定的步驟中，將尿樣品加入第一種試劑Rl后，37°C孵育5min，讀測第I點樣本Al，加入第二種試劑R2，37°C孵育5min，讀測第2點樣本A2，樣本A=樣本A2-樣本Al ;還包括一個將校準品采用生化分析儀測定的步驟，在所述的一個將校準品采用生化分析儀測定的步驟中，將校準品加入第一種試劑Rl后，37°C孵育5min，讀測第I點校準Al，加入第二種試劑R2，37°C孵育5min，讀測第2點校準A2，校準A=校準A2-校準Al ；

樣木A2-樣木ΛI 尿液纖維連接蛋G (FN )濃度(mg/L) = - X校準品濃度(mg/L)
—校準A2-校準Al—` 上述測定的參數(shù)為:溫度37°C，主波長546nm或600nm、副波長700nm，樣本或校準品3-4 μ !,R1:240 μ 1，R2:60 μ 1，反應時間為 10 分鐘。
【文檔編號】G01N21/31GK103675299SQ201310724601
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月24日
【發(fā)明者】楊杰, 王泉龍, 朱曉敏, 劉穎冰 申請人:上海北加生化試劑有限公司