以羅丹明熒光團(tuán)為母體的熒光探針及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及以羅丹明熒光團(tuán)為母體的熒光探針及其制備方法。該熒光探針的結(jié)構(gòu)式：?或--?。本發(fā)明所涉及的熒光探針的制備方法，反應(yīng)條件溫和，合成步驟少簡(jiǎn)單，產(chǎn)物產(chǎn)率高，且原料價(jià)廉易得。本發(fā)明所涉及的熒光探針可應(yīng)用于環(huán)境污染物及尿液中銅離子的檢測(cè)，具有抗干擾能力強(qiáng)、響應(yīng)時(shí)間短、選擇性和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)，檢測(cè)限可低至nM級(jí)別。此外，本發(fā)明所涉及的熒光探針可應(yīng)用于活細(xì)胞內(nèi)Cu2+的熒光成像，在生命體中Cu2+的熒光檢測(cè)，與Cu2+相關(guān)的疾病的早期診斷及致病機(jī)理研究上具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說明】以羅丹明熒光團(tuán)為母體的熒光探針及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種熒光分子探針及其制備方法，特別是一種以羅丹明熒光團(tuán)為母體 的熒光探針及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 銅元素是人體中必不可少的微量元素，在神經(jīng)系統(tǒng)、基因表達(dá)、蛋白質(zhì)的構(gòu)建等方 面起著重要的作用。人體內(nèi)缺銅容易造成缺銅性貧血、小兒發(fā)育不良、記憶力減退、反應(yīng)遲 鈍、婦女不孕等，長(zhǎng)時(shí)間缺銅還會(huì)造成動(dòng)脈硬化，導(dǎo)致冠心病的發(fā)生。另一方面，過量的銅攝 入也會(huì)產(chǎn)生毒性，這是由于銅催化產(chǎn)生了活潑的含氧物種能夠造成其他生物分子等的氧化 損傷。因此，細(xì)胞內(nèi)銅的穩(wěn)態(tài)平衡的失調(diào)將會(huì)導(dǎo)致其生長(zhǎng)和代謝的紊亂，甚至引起嚴(yán)重的疾 病和死亡。與銅相關(guān)的疾病包括Menkes綜合癥、Wilson癥、阿爾茨海默病、ALS病等。
[0003] 相對(duì)于原子發(fā)射光譜法（AES)、原子吸收光譜法（AAS)、原子熒光光譜法（AFS)以 及電化學(xué)方法等檢測(cè)方法，熒光檢測(cè)法具有靈敏度高、實(shí)時(shí)檢測(cè)、對(duì)樣品基本無損傷等優(yōu) 點(diǎn)，目前用于熒光檢測(cè)的常見熒光團(tuán)主要有羅丹明類熒光團(tuán)、萘酰亞胺類熒光團(tuán)、熒光素類 熒光團(tuán)等。其中，羅丹明及其衍生物由于具有較高的吸光系數(shù)、較強(qiáng)的熒光量子產(chǎn)率及光化 學(xué)穩(wěn)定性等良好的特點(diǎn)，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于離子探針的設(shè)計(jì)。
[0004] 目前已存在的有機(jī)分子探針主要還存在以下幾個(gè)問題：I.合成方面，探針分子的 設(shè)計(jì)合成還存在結(jié)構(gòu)復(fù)雜、步驟較繁瑣、產(chǎn)率較低的不足。II.熒光檢測(cè)方面，部分有機(jī)分 子探針存在檢測(cè)靈敏度低、響應(yīng)時(shí)間長(zhǎng)、抗干擾能力低等問題。因此，設(shè)計(jì)合成新型的熒光 探針分子，實(shí)現(xiàn)銅離子的痕量檢測(cè)和細(xì)胞內(nèi)熒光成像，將具有重要的研究意義和應(yīng)用價(jià)值。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的之一在于克服現(xiàn)有有機(jī)探針分子存在的不足，提供一類以羅丹明熒 光團(tuán)為母體的熒光探針。
[0006] 本發(fā)明的目的之二在于提供該熒光探針的制備方法。
[0007] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用如下反應(yīng)機(jī)理：

【權(quán)利要求】
1. 一種以羅丹明熒光團(tuán)為母體的熒光探針，其特征在于該熒光探針的結(jié)構(gòu)式：
2. -種制備根據(jù)權(quán)利要求1所述的以羅丹明熒光團(tuán)為母體的熒光探針的方法，其特征 在于該方法的具體步驟為： a. 將水楊醛與環(huán)氧氯丙烷按照2:1~5:1的摩爾比溶于水中，回流反應(yīng)4 h，冷卻后過濾 得到產(chǎn)物，然后用重結(jié)晶的方法純化得到1，3-二（2-甲醛基苯氧基)-2-丙醇，其結(jié)構(gòu)式為：
b. 將羅丹明B或羅丹明6G與水合肼按照1: l(Tl:40的摩爾比混合均勻， 并溶于乙醇中，然后加熱回流8 h，得到的產(chǎn)品利用硅膠柱層析分離得到羅丹 明B酰肼或羅丹明6G酰肼，其結(jié)構(gòu)式為：

c. 將上述步驟a所得的1，3-二（2-甲醛基苯氧基）-2-丙醇與步驟b所得的羅丹明B 酰肼按照1:3~1:10的摩爾比混合均勻，并溶于乙醇中，加熱回流24 h，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑， 利用硅膠柱層析分離得到羅丹明B衍生物探針分子。
3. -種根據(jù)權(quán)利要求1所述的以羅丹明熒光團(tuán)為母體的熒光探針在待測(cè)物中銅離子 的痕量檢測(cè)中的應(yīng)用。
4. 一種根據(jù)權(quán)利要求1中所述的以羅丹明熒光團(tuán)為母體的熒光探針在實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞內(nèi) 銅離子的熒光成像中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】G01N21/64GK104151325SQ201410328897
【公開日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年7月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月10日
【發(fā)明者】施利毅, 劉金亮, 孟憲福, 孫麗寧, 徐艷霞 申請(qǐng)人:上海大學(xué)