抗s-腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體301、其雜交瘤、組合物、膠體金試紙、試劑盒及用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種特異性結(jié)合S-腺苷同型半胱氨酸的單克隆抗體301或者其抗原結(jié)合部分、產(chǎn)生其的雜交瘤、包含該單克隆抗體301或者其抗原結(jié)合部分的組合物或試劑盒，試紙條。與此同時(shí)，本發(fā)明還提供了使用上述單克隆抗體301或者其抗原結(jié)合部分、其組合物或試劑盒來(lái)檢測(cè)S-腺苷同型半胱氨酸在樣品中的存在或者其水平的非治療或診斷目的的方法和其用途。該細(xì)胞株及其產(chǎn)品第一次使得免疫方法檢測(cè)生命代謝活動(dòng)過(guò)程中甲基化指數(shù)(即S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸的比值)成為可能。本發(fā)明中獲得的抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體細(xì)胞株將有很大的實(shí)用性和應(yīng)用前景。CCTCC C201417820140915
【專利說(shuō)明】抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體301、其雜交瘤、組合 物、膠體金試紙、試劑盒及用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及免疫學(xué)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明主要涉及可特異性識(shí)別和結(jié)合S-腺苷同 型半胱氨酸的單克隆抗體或其功能性片段、其雜交瘤、組合物、試劑盒及用途。

【背景技術(shù)】
[0002] LS-腺苷同型半胱氨酸
[0003] 蛋氨酸分子含有硫⑶甲基，在與ATP作用生成-腺苷蛋氨酸 (S-AdenosyI-Lnethionine，SAM)后，可通過(guò)各種轉(zhuǎn)甲基作用為體內(nèi)已知的約50多 種具有重要生理活性的物質(zhì)（DNA，RNA，蛋白，磷脂，激素，神經(jīng)遞質(zhì)等等）提供甲 基。SAM是這些生命活動(dòng)中重要生理活性物質(zhì)甲基化調(diào)控中唯一的甲基提供者。S腺 苷蛋氨酸在甲基轉(zhuǎn)移酶作用下將甲基轉(zhuǎn)移至另一物質(zhì)后，生成S-腺苷同型半胱氨酸 (S-Adenosyl-L-homocysteine, SAH)，后者進(jìn)一步脫去腺苷，生成同型半胱氨酸（Hcy)。而同 型半胱氨酸則可通過(guò)N5甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)甲基酶（EC1. I. 1. 68)及其輔酶維生素 B12的催化 作用，接受N5甲基四氫葉酸提供的甲基，重新生成蛋氨酸。而此過(guò)程又是已知的體內(nèi)能利 用N5甲基四氫葉酸的唯一反應(yīng)。另外，同型半胱氨酸在胱硫醚-β-合成酶（EC4. 2. 1.22) 催化下也可與絲氨酸縮合生成胱硫醚，后者近一步生成半胱氨酸和α酮丁酸。
[0004] 2.生物體的甲基化指數(shù)
[0005] 生物體中甲基化指數(shù)被定義為SAM和SAH的比值。甲基化指數(shù)是一個(gè)能夠客觀地 反應(yīng)人體甲基化程度的指標(biāo)。從以上可以看出SAH和Hcy是連接提供甲基給生命活性物質(zhì) 和從甲基四氫葉酸回收甲基給活性甲基供體的SAM之間的重要橋梁。他們含量的高低將 會(huì)直接決定或反映一碳代謝和蛋氨酸循環(huán)過(guò)程正常與否的重要指標(biāo)。因此，找到準(zhǔn)確定量 SAH和Hcy的方法，甚至定量所有參與一碳代謝和蛋氨酸循環(huán)的物質(zhì)的含量，將具有很大的 實(shí)際意義。研究表明，SAH升高能導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，且這種作用與整體基因組甲基 化水平有關(guān)，SAH可能是動(dòng)脈粥樣硬化形成過(guò)程中的潛在生物標(biāo)志分子。
[0006] 目前S-腺苷同型半胱氨酸主要的檢測(cè)方法是高效液相（HPLC)方法，熒光偏振免 疫檢測(cè)（FPLA)方法以及LC-MS/MS。研發(fā)SAH特異性的單克隆抗體從而使免疫檢測(cè)成為可 能，為測(cè)量生物體內(nèi)的甲基化指數(shù)開辟了實(shí)際而可行的途徑，已有研究表明，甲基化指數(shù)能 夠比較準(zhǔn)確地反映人體內(nèi)甲基化狀態(tài)（與生命過(guò)程中重要的過(guò)程直接相關(guān)，涉及到出生， 衰老，癌變，退化等等），而且它與疾病和健康又很大的相關(guān)性。因而，本發(fā)明具有較大的實(shí) 用意義。
[0007] 3.現(xiàn)有技術(shù)中的SAH單克隆抗體
[0008] 在勾宏霞等人發(fā)表于2005年的論文（中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005年1月，第28卷 第1期，第92-95頁(yè)）中指出，通過(guò)制備SAH-BSA偶聯(lián)物和SAH單克隆抗體，建立了同型半 胱氨酸（Hcy)的免疫學(xué)測(cè)定方法。其中制備的SAH-BSA偶聯(lián)物的克分子比為3?5,結(jié)果顯 示SAH單克隆與腺苷、半胱氨酸、蛋氨酸等無(wú)交叉反應(yīng)，但是與S-腺苷蛋氨酸（SAM)存在交 叉反應(yīng)。據(jù)此作者認(rèn)為其制得了 SAH的單克隆抗體，但是作者也指出該單抗對(duì)SAM表現(xiàn)出 一定的交叉反應(yīng)。該文實(shí)際上不是定量SAH，而是定量Hcy的含量。因此，按照此方法，無(wú)法 得到生物體的甲基化指數(shù)。
[0009] 除此之外，美國(guó)abeam公司有兔抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體出售。該抗體 與類似物（S-腺苷蛋氨酸，腺苷，同型半胱氨酸，半胱氨酸，谷胱甘肽，胱硫醚）的交叉反應(yīng) 較小。但是該兔抗SAH單抗的檢測(cè)下限高于260nM，這一檢測(cè)下限較高，限制了需要高靈敏 高的檢測(cè)情況。該抗體無(wú)法用于測(cè)定血漿樣品，在競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)中，我們觀察到 了非特異性抑制反應(yīng)，使得該株抗體無(wú)法用于EDTA抗凝的血漿樣品。因此，這種市售單克 隆抗體由于靈敏度較低的限制和不適用于血漿樣品，也不適合用于測(cè)量甲基化指數(shù)。
[0010] 4.單克隆抗體技術(shù)
[0011] 動(dòng)物脾臟有上百萬(wàn)種不同的B淋巴細(xì)胞系，選擇性表達(dá)出不同基因的B淋巴細(xì)胞 合成不同的抗體。當(dāng)機(jī)體受抗原刺激時(shí)，抗原分子上的許多決定簇分別激活各個(gè)表達(dá)不同 基因的B細(xì)胞。被激活的B細(xì)胞分裂增殖形成效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）和記憶B細(xì)胞，大量 的漿細(xì)胞克隆合成和分泌大量的抗體分子分布到血液、體液中。如果能選出一個(gè)制造一種 專一抗體的漿細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，就可得到由單細(xì)胞經(jīng)分裂增殖而形成細(xì)胞群，即單克隆。單克 隆細(xì)胞將合成針對(duì)一種抗原決定簇的抗體，稱為單克隆抗體。
[0012] 單克隆抗體技術(shù)自從上世紀(jì)70年代發(fā)明以來(lái)，技術(shù)已經(jīng)非常成熟。應(yīng)用于許多領(lǐng) 域，作為有用的檢測(cè)或治療工具。用于檢測(cè)小分子的單克隆抗體，由于小分子的特性不同， 抗體制備有一定的技術(shù)難點(diǎn)和特殊性。一般而言，小分子的抗原需要耦聯(lián)合適的大分子載 體，作為免疫原，才能在動(dòng)物體內(nèi)引起足夠強(qiáng)的免疫反應(yīng)，從而產(chǎn)生抗體。
[0013] 克隆化的細(xì)胞可以在體外進(jìn)行大量培養(yǎng)，收集上清液而獲得大量的單一的克隆化 抗體。不過(guò)體外培養(yǎng)法得到的單克隆抗體有限，其不能超過(guò)特定的細(xì)胞濃度，且每天要換培 養(yǎng)液。而體內(nèi)雜交瘤細(xì)胞繁殖可以克服這些限制。雜交瘤細(xì)胞具有從親代淋巴細(xì)胞得來(lái)的 腫瘤細(xì)胞的遺傳特性。如接種到組織相容性的同系小鼠或不能排斥雜交瘤的小鼠（無(wú)胸腺 的裸鼠），雜交瘤細(xì)胞就開始無(wú)限地繁殖，直至宿主死亡。產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞的小鼠腹水和血清 中含有大量的雜交瘤細(xì)胞分泌的單克隆抗體，這種抗體的效價(jià)往往高于培養(yǎng)細(xì)胞上清液的 100 到 1000 倍。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 因此，本發(fā)明的目的是提供一種特異性更高、靈敏度也更高的單克隆抗體，從而為 SAH的檢測(cè)提供更好的工具。
[0015] 在本發(fā)明中，除非另有說(shuō)明，否則本文中使用的科學(xué)和技術(shù)名詞具有本領(lǐng)域技術(shù) 人員所通常理解的含義。并且，本文中所用的蛋白質(zhì)和核酸化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞和組織 培養(yǎng)、微生物學(xué)、免疫學(xué)相關(guān)術(shù)語(yǔ)和實(shí)驗(yàn)室操作步驟均為相應(yīng)領(lǐng)域內(nèi)廣泛使用的術(shù)語(yǔ)和常 規(guī)步驟。同時(shí)，為了更好地理解本發(fā)明，下面提供相關(guān)術(shù)語(yǔ)的定義和解釋。
[0016] 如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"抗體"是指通常由兩對(duì)相同的多肽鏈（每對(duì)具有一條 "輕"（L)鏈和一條"重"（H)鏈）組成的免疫球蛋白分子。抗體輕鏈可分類為K和λ輕 鏈。重鏈可分類為μ、δ、γ、α或ε，并且分別將抗體的同種型定義為IgM、IgD、IgG、 IgA和IgE。在輕鏈和重鏈內(nèi)，可變區(qū)和恒定區(qū)通過(guò)大約12或更多個(gè)氨基酸的"J"區(qū)連接， 重鏈還包含大約3個(gè)或更多個(gè)氨基酸的"D"區(qū)。各重鏈由重鏈可變區(qū)（VH)和重鏈恒定區(qū) (CH)組成。重鏈恒定區(qū)由3個(gè)結(jié)構(gòu)域（CHI、CH2和CH3)組成。各輕鏈由輕鏈可變區(qū)（VL) 和輕鏈恒定區(qū)（CL)組成。輕鏈恒定區(qū)由一個(gè)結(jié)構(gòu)域CL組成?？贵w的恒定區(qū)可介導(dǎo)免疫 球蛋白與宿主組織或因子，包括免疫系統(tǒng)的各種細(xì)胞（例如，效應(yīng)細(xì)胞）和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng) 的第一組分（Clq)的結(jié)合。VH和VL區(qū)還可被細(xì)分為具有高變性的區(qū)域（稱為互補(bǔ)決定 區(qū)（CDR))，其間散布有較保守的稱為構(gòu)架區(qū)（FR)的區(qū)域。各VH和VL由按下列順序：FR1、 ⑶RU FR2、⑶R2、FR3、⑶R3、FR4從氨基末端至羧基末端排列的3個(gè)⑶R和4個(gè)FR組成。 各重鏈/輕鏈對(duì)的可變區(qū)（VH和VL)分別形成抗體結(jié)合部位。氨基酸至各區(qū)域或結(jié)構(gòu)域的 分配遵循 KabatSequencesofProteinsoflmmuno Iogi cal Interest (NationalInstitutesofH ealth，Bethesda，Md. (1987andl991))，或 Chothia&Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196 :901-917 ; Chothia等人（1989)Nature342 :878-883的定義，其均以全文結(jié)合于此作為參考。術(shù)語(yǔ)"抗 體"不受任何特定的產(chǎn)生抗體的方法限制。例如，其包括，特別地，重組抗體、單克隆抗體和 多克隆抗體?？贵w可以是不同同種型的抗體，例如，IgG(例如，IgGl，IgG2, IgG3或IgG4亞 型），IgAl, IgA2, IgD，IgE 或 IgM 抗體。
[0017] 如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)抗體的"抗原結(jié)合部分"是指全長(zhǎng)抗體的一個(gè)或多個(gè)部 分，所述部分保持結(jié)合抗體所結(jié)合的相同抗原（例如，ERCC1)的能力，與完整抗體競(jìng)爭(zhēng)對(duì) 抗原的特異性結(jié)合。通常參見(jiàn)，F(xiàn)undamentallmmunology，Ch. 7(Paul，W.，ed.，第 2 版， RavenPress，N. Y. (1989)，其以其全文通過(guò)引用合并入本文，用于所有目的?？赏ㄟ^(guò)重組DNA 技術(shù)或通過(guò)完整抗體的酶促或化學(xué)斷裂產(chǎn)生抗原結(jié)合部分。在一些情況下，抗原結(jié)合部分 包括Fab、Fab'、F(ab'）2、FcU Fv、dAb和互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)片段、單鏈抗體（例如，scFv)、 嵌合抗體、雙抗體（diabody)和這樣的多肽，其包含足以賦予多肽特異性抗原結(jié)合能力的 抗體的至少一部分。
[0018] 如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"Fd片段"意指由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組成的抗體片段；術(shù) 語(yǔ)"Fv片段"意指由抗體的單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的抗體片段；術(shù)語(yǔ)"dAb片段"意指 由VH結(jié)構(gòu)域組成的抗體片段（Ward等人，Nature341 :544-546(1989));術(shù)語(yǔ)"Fab片段"意 指由VL、VH、CL和CHl結(jié)構(gòu)域組成的抗體片段；術(shù)語(yǔ)"F(ab'） 2片段"意指包含通過(guò)鉸鏈區(qū) 上的二硫橋連接的兩個(gè)Fab片段的抗體片段。
[0019] 在一些情況下，抗體的抗原結(jié)合部分是單鏈抗體（例如，scFv)，其中VL和 VH結(jié)構(gòu)域通過(guò)使其能夠產(chǎn)生為單個(gè)多肽鏈的連接體配對(duì)形成單價(jià)分子（參見(jiàn)，例如， Bird 等人，Science242 :423-426(1988)和 Huston 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA85 : 5879-5883(1988)，其以全文結(jié)合于此作為參考）。此類scFv分子可具有一般結(jié)構(gòu)： NH2-VL-接頭-VH-COOH或NH2-VH-接頭-VL-C00H。合適的現(xiàn)有技術(shù)接頭由重復(fù)的GGGGS 氨基酸序列或其變體組成。例如，可使用具有氨基酸序列（GGGGS)4的接頭，但也可使用 其變體（Holliger 等人（1993)，Proc. Natl. Acad. Sci. USA90 :6444-6448)。可用于本發(fā) 明的其他接頭由 Alfthan 等人（1995)，ProteinEng. 8 :725-731, Choi 等人（2001)，Eur. J.Immunol. 31 :94-106, Hu 等人（1996)，CancerRes. 56 :3055-3061，Kipriyanov 等人 (1999)，J. Mol. Biol. 293 :41_56 和 Roovers 等人（2001), CancerTmmunol.描述，其以全文 結(jié)合于此作為參考。
[0020] 在一些情況下，抗體是雙抗體，S卩，雙價(jià)抗體，其中VH和VL結(jié)構(gòu)域在單個(gè)多肽鏈 上表達(dá)，但使用太短的連接體以致不允許在相同鏈的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間配對(duì)，從而迫使結(jié)構(gòu) 域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)并且產(chǎn)生兩個(gè)抗原結(jié)合部位（參見(jiàn)，例如，HolligerP. 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA90 :6444-6448 (1993),和 Pol jakR. J.等人，Structure〗： 1121-1123(1994)，其以全文結(jié)合于此作為參考）。
[0021] 可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)技術(shù)（例如，重組DNA技術(shù)或酶促或化學(xué)斷裂 法）從給定的抗體獲得抗體的抗原結(jié)合部分（例如，上述抗體片段），并且以與對(duì)于完整抗 體的方式相同的方式就特異性篩選抗體的抗原結(jié)合部分。
[0022] 如本文中所使用的，以編號(hào)提及的抗體與從相同編號(hào)的雜交瘤獲得的單克隆抗體 相同。
[0023] 如本文中所使用的，術(shù)語(yǔ)"雜交瘤"和"雜交瘤細(xì)胞株"可互換使用，并且當(dāng)提及"雜 交瘤"和"雜交瘤細(xì)胞株"時(shí)，其還包括雜交瘤的亞克隆和后代細(xì)胞。
[0024] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種特異性結(jié)合S-腺苷同型半胱氨酸的單克隆抗 體301或者其抗原結(jié)合部分，所述單克隆抗體由雜交瘤細(xì)胞株301產(chǎn)生；并且所述的雜交瘤 細(xì)胞株301保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏單位地址為：湖北省武漢市武昌珞珈山， 保藏編號(hào)為：CCTCC C2014178,分類命名為：小鼠雜交瘤細(xì)胞株SAH301，保藏日期為2014年 9月15日。
[0025] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種雜交瘤，其保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心， 保藏單位地址為：湖北省武漢市武昌珞珈山，保藏編號(hào)為=CCTCC C2014178,分類命名為： 小鼠雜交瘤細(xì)胞株SAH301，保藏日期為2014年9月15日。
[0026] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種組合物，其包含前文所述的單克隆抗體或者 其抗原結(jié)合部分。
[0027] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其包含前文所述的抗 體或其抗原結(jié)合部分；優(yōu)選地，所述的試劑盒還含有：20倍濃縮洗滌液、酶標(biāo)包被板、酶標(biāo) 抗體稀釋液、酶標(biāo)抗體、樣品稀釋液、顯色液A液、顯色液B液、終止液和封板膜。
[0028] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種用于檢測(cè)樣品中SAH水平的快速膠體金檢測(cè) 試紙，其特征在于所述的試紙包括前文所述的單克隆抗體301或者其抗原結(jié)合部分。
[0029] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了一種檢測(cè)樣品中SAH水平的快速膠體金檢測(cè)試劑 盒，其特征在于，所述的試劑盒包括：（1)前文所述的快速膠體金檢測(cè)試紙；和（2)使用說(shuō) 明。
[0030] -種檢測(cè)S-腺苷同型半胱氨酸在樣品中的存在或者其水平的非治療或診斷目的 的方法，其包括使用前文所述的抗體或者其抗原結(jié)合部分、前文所述的組合物、前文所述的 酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒、前文所述的快速膠體金檢測(cè)試紙或者前文所述的快速膠體金檢測(cè) 試劑盒來(lái)進(jìn)行檢測(cè)；優(yōu)選地，所述的樣品選自血液樣品、組織樣品和細(xì)胞樣品；進(jìn)一步優(yōu)選 地，所述的血液樣品是血清樣品或者血漿樣品。
[0031] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了前文所述的抗體或者其抗原結(jié)合部分、前文所述 的雜交瘤、前文所述的組合物或者前文所述的快速膠體金檢測(cè)試紙?jiān)谥苽溆糜跈z測(cè)生物體 的甲基化指數(shù)的試劑盒中的用途，所述的試劑盒用于檢測(cè)樣品中的SAH水平；優(yōu)選地，所述 的樣品選自血液樣品、組織樣品和細(xì)胞樣品；進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的血液樣品是血清樣品或 者血漿樣品。
[0032] 在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的方面，所述的試劑盒用于輔助診斷抑郁癥、巴金森氏、腦出 血、腦栓塞、腦動(dòng)脈粥樣硬化病和肝炎等。
[0033] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了前文所述的抗體或者其抗原結(jié)合部分、前文所述 的組合物、前文所述的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒、前文所述的快速膠體金檢測(cè)試紙或者前文所 述的快速膠體金檢測(cè)試劑盒的非治療或診斷目的的用途，其用于檢測(cè)S-腺苷同型半胱氨 酸在樣品中的存在或其水平；優(yōu)選地，所述的樣品選自血液樣品、組織樣品和細(xì)胞樣品；進(jìn) 一步優(yōu)選地，所述的血液樣品是血清樣品或者血漿樣品。
[0034] 本發(fā)明還提供了以下的技術(shù)方案：
[0035] 本發(fā)明提供了抗原SAH-BSA的制備方法，具體地為：將5mgSAH、28. 8mgBSA、 14. 96mgEDC· HC1、5. 3mgN羥基丁二酰亞胺和5mL(pH7. 4)PBS緩沖液依次加入反應(yīng)瓶中，并 在磁力攪拌下反應(yīng)6個(gè)小時(shí)。將反應(yīng)產(chǎn)物裝透析袋，對(duì)pH7. 4, IOmM的PBS透析24小時(shí)，期 間換液2-3次。定量，備用。
[0036] 本發(fā)明還提供了雜交瘤和單克隆抗體的制備方法，其包括以下的步驟：以每只小 鼠 IOOug的劑量加弗氏完全佐劑乳化，分多點(diǎn)小鼠皮下注射，總量為0. 3ml?0. 6ml，間隔 3周，同樣劑量加不完全佐劑乳化，再同樣注射一次，以后隔周同樣劑量加不完全佐劑乳化， 加強(qiáng)免疫2次，斷尾取血一滴，測(cè)抗體效價(jià)，選滴度高的小鼠，融合前3天用抗原水劑加強(qiáng)，3 天后做融合試驗(yàn)。
[0037] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，做出了大量的改進(jìn)和革新，并且得到了有益的技術(shù)效果， 例如：
[0038] 1.與勾宏霞等人發(fā)表于2005年的論文（中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005年1月，第28 卷第1期，第92-95頁(yè)）相比：
[0039] 1)2005發(fā)表的文章用的分子比是SAH :BSA = 4. 47-4. 9:1，本發(fā)明是用的SAH :BSA =35-40:1。除了牛血清白蛋白，還嘗試了使用其它載體蛋白，例如多聚賴氨酸和KLH，各種 分子比SAH :載體蛋白=20-600 :1均嘗試過(guò)，有些融合細(xì)胞的上清和腹水的抗SAH抗體的 效價(jià)非常高，但是在競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)中表現(xiàn)不佳。而最有用的抗體應(yīng)該是在設(shè)計(jì)好的競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián) 免疫吸附實(shí)驗(yàn)中能夠很好的抑制游離SAH小分子抗原，并且抑制程度和所加入的游離SAH 抗原成正相關(guān)。我們還嘗試了多種來(lái)源的SAH作為免疫原。其中包括Sigma-Aldrich的 SAH，國(guó)內(nèi)公司合成的SAH和我們公司定制的SAH鈉鹽。免疫原的純度均為98%以上。
[0040] 2)免疫小鼠的過(guò)程不同。
[0041] 詳見(jiàn)實(shí)施例2的方法部分。
[0042] 3)篩選，鑒定單抗細(xì)胞的方法不同。
[0043] 文獻(xiàn)中提到的競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)，其標(biāo)準(zhǔn)曲線是同型半胱氨酸，通 過(guò)酶學(xué)反應(yīng)將同型半胱氨酸轉(zhuǎn)變成S-腺苷同型半胱氨酸，作為反應(yīng)產(chǎn)物的S-腺苷同型半 胱氨酸與包被在酶聯(lián)板上的SAH競(jìng)爭(zhēng)SAH單克隆抗體。我們的方法是直接使用SAH更穩(wěn)定 的標(biāo)準(zhǔn)品SAH鈉鹽和SAH分子直接競(jìng)爭(zhēng)抗SAH抗體。這樣結(jié)果穩(wěn)定性好，SAH的量控制得 準(zhǔn)確，不受酶學(xué)反應(yīng)多變性的限制。方法更現(xiàn)實(shí)可靠，因而結(jié)果就更加更可靠。
[0044] 4)抗體的特性有不同-特異性（交叉反應(yīng)），親和力等。
[0045] 我們根據(jù)SAH結(jié)構(gòu)，分別設(shè)置了鼠抗SAH單克隆抗體（來(lái)源于本發(fā)明的細(xì)胞株， 301或簡(jiǎn)稱301)跟S-腺苷蛋氨酸，腺苷，同型半胱氨酸，半胱氨酸，谷胱甘肽，胱硫醚的交 叉反應(yīng)。而2005年的文章僅做了 S-腺苷蛋氨酸，腺苷，半胱氨酸和蛋氨酸的交叉反應(yīng)，其 實(shí)蛋氨酸的交叉反應(yīng)沒(méi)有必要做，最應(yīng)該做的是同型半胱氨酸和S-腺苷蛋氨酸，因?yàn)檫@兩 個(gè)分子在結(jié)構(gòu)上與SAH最接近。為什么2005年那篇文獻(xiàn)沒(méi)有做同型半胱氨酸的交叉反應(yīng)？ 因此，2005年得到的鼠抗SAH單克隆抗體很有可能跟同型半胱氨酸存在交叉反應(yīng)的。如果 是與同型半胱氨酸存在交叉反應(yīng)，那么按照那篇文章的技術(shù)路線和得到的最終細(xì)胞株未必 是真正意義上的高特異性的抗SAH的單克隆抗體。
[0046] 5)抗SAH單克隆抗體用途不同。
[0047] 2005年文獻(xiàn)的目的是測(cè)定樣品中同型半胱氨酸的含量，將未知樣品或者標(biāo)準(zhǔn)品同 型半胱氨酸在S-腺苷同型半胱氨酸水解酶的作用下轉(zhuǎn)變成S-腺苷同型半胱氨酸，用SAH 抗體與該反應(yīng)的產(chǎn)物S-腺苷同型半胱氨酸特異地結(jié)合。但是，如上邊4)所述，2005年那株 抗SAH單克隆抗體有可能跟原料同型半胱氨酸有交叉反應(yīng)，試驗(yàn)設(shè)計(jì)中沒(méi)有考慮到?jīng)]有完 全反應(yīng)的同型半胱氨酸對(duì)結(jié)果的影響，也沒(méi)有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明反應(yīng)是否完全。本發(fā)明的抗SAH 單克隆抗體就是用來(lái)定量SAH含量的。我們采用的是較穩(wěn)定的SAH鈉鹽做標(biāo)準(zhǔn)品，擯棄了 酶學(xué)反應(yīng)的不足之處，因?yàn)槊笇W(xué)反應(yīng)容易受其它因素的影響。本發(fā)明也有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)證明我 們所驗(yàn)證過(guò)的三個(gè)來(lái)源的SAH標(biāo)準(zhǔn)品得到的結(jié)果是一致的。
[0048] 6)設(shè)計(jì)了更為嚴(yán)格的驗(yàn)證試驗(yàn)。
[0049] 在2005年文獻(xiàn)（見(jiàn)《中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志》2005年1月第28卷第1期第93頁(yè)表1) 中，沒(méi)有計(jì)算出其抗體特異性即交叉反應(yīng)的具體數(shù)值，SAM的交叉反應(yīng)還是可以看出較明顯 的競(jìng)爭(zhēng)抑制，但是交叉反應(yīng)大于本發(fā)明的抗SAH單抗克隆抗體301。該項(xiàng)試驗(yàn)有以下幾個(gè)問(wèn) 題：（1)該報(bào)道的交叉反應(yīng)試驗(yàn)設(shè)計(jì)存在較大的問(wèn)題，由于細(xì)胞培養(yǎng)上清分泌的抗體的量 不可能一樣，也不能準(zhǔn)確估計(jì)其準(zhǔn)確的含量，所以很難確定那些競(jìng)爭(zhēng)性ELISA試驗(yàn)條件足 夠準(zhǔn)確地得出可靠的結(jié)論。因?yàn)楦?jìng)爭(zhēng)性ELISA反應(yīng)中抗體和競(jìng)爭(zhēng)抗原的相對(duì)含量需要在比 較合適的情況下，才能看出競(jìng)爭(zhēng)性抑制。用上清做競(jìng)爭(zhēng)交叉得出的結(jié)論很不可靠。（2)競(jìng)爭(zhēng) 性游離抗原應(yīng)該用跟SAH -樣的濃度或高于SAH濃度才能安全地準(zhǔn)確地得出與SAH抗體沒(méi) 有交叉反應(yīng)的結(jié)論，而那個(gè)表2的腺苷用的濃度為0. 05mM，SAH為0. ImM，腺苷濃度明顯低 于SAH的濃度，結(jié)果不能排除該SAH抗體與腺苷存在交叉反應(yīng)的可能。
[0050] 7)此外，2005年文獻(xiàn)中提到的鼠抗SAH單克隆抗體，0D450值很低，充分反映了該 株抗體的親和力和特異性都不好。
[0051] 以上特異性，親和力，效價(jià)都是反映單抗是否有用的重要指標(biāo)。我們得到的301單 克隆抗體細(xì)胞株在以上各個(gè)方面都優(yōu)于2005年發(fā)表文章中提到的鼠抗SAH單克隆抗體。與 此同時(shí)，由于本發(fā)明的單克隆抗體301的以上特性，可以用于測(cè)量生物體內(nèi)的甲基化指數(shù)， 這是2005年論文中的單克隆抗體所無(wú)法實(shí)現(xiàn)的。
[0052] 2.美國(guó)abeam公司有兔抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆抗體出售。與之相比較，本 發(fā)明中的鼠抗SAH單抗有如下優(yōu)越之處：
[0053] 我們的鼠抗SAH單克隆抗體在免疫檢測(cè)中（如競(jìng)爭(zhēng)性ELISA)的檢測(cè)靈敏度明顯 高于兔抗SAH單抗的（兔抗SAH單抗的檢測(cè)下限260nM,我們的鼠抗SAH單抗的檢測(cè)下限 是15-30nM)。由于正常人血漿中SAH含量很低，這就對(duì)檢測(cè)方法的靈敏度有較高的要求，在 免疫檢測(cè)中，單克隆抗體的特殊性質(zhì)是決定檢測(cè)靈敏度最重要的因素。因而我們可以說(shuō)我 們的細(xì)胞株有其獨(dú)特的特性。
[0054] 本發(fā)明的技術(shù)方案還帶來(lái)了以下的技術(shù)進(jìn)步：
[0055] (1)本發(fā)明的單克隆抗體301與現(xiàn)有技術(shù)的單克隆抗體相比，具有更高的特異性， 與類似物交叉反應(yīng)很小，可以忽略不計(jì)。具體地參見(jiàn)本發(fā)明中的數(shù)據(jù)部分。
[0056] (2)本發(fā)明的單克隆抗體301與現(xiàn)有技術(shù)的單克隆抗體相比，具有更高的靈敏度。 具體地，本發(fā)明的鼠抗SAH單克隆抗體301對(duì)SAH的檢測(cè)下限是15-30nM，比現(xiàn)有的兔源抗 SAH單克隆抗體的靈敏度高10倍以上，對(duì)于低濃度下SAH含量檢測(cè)有重大意義，否則無(wú)法知 道不同樣品中SAH到底有多低。尤為重要的是，用LC-MS/MS方法檢測(cè)正常血漿中SAH含量 在20-80nM，現(xiàn)有兔抗SAH單克隆抗體無(wú)法分開正常人和SAH含量低于260nM的病人樣品。 這表明，本發(fā)明的單克隆抗體301率先使用單克隆抗體法實(shí)現(xiàn)了 LC-MS/MS方法的靈敏度， 得到了靈敏度高且特異性強(qiáng)的單克隆抗體和使用該抗體的免疫檢測(cè)方法，并由此開發(fā)了快 速簡(jiǎn)易的免疫檢測(cè)產(chǎn)品。
[0057] (3)該細(xì)胞株及其產(chǎn)品第一次使得免疫方法檢測(cè)生命代謝活動(dòng)過(guò)程中甲基化指數(shù) (即S-腺苷蛋氨酸和S-腺苷同型半胱氨酸的比值）成為可能。免疫學(xué)方法已經(jīng)被公認(rèn) 是非常靈敏，特異，精確，快速，簡(jiǎn)單而通用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，能夠以較低的花費(fèi)在臨床應(yīng)用中普 及。因而，本發(fā)明中獲得的抗SAH單克隆抗體細(xì)胞株將有很大的實(shí)用性和應(yīng)用前景。
[0058] (4)直接性競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)比間接性競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)結(jié)果更穩(wěn)定， 檢測(cè)靈敏度更高。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0059] 以下，結(jié)合附圖來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中：
[0060] 圖1抗SAH鼠單抗301做間接法競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的結(jié)果。S-腺苷同型半 胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品（SAHNa)，S-腺苷蛋氨酸（SAM)，腺苷（Ade)，同型半胱氨酸（H-Cys)，左旋半 胱氨酸（L-Cys)，谷胱甘肽（GST)，胱硫醚（L-CTT)和適當(dāng)稀釋的抗SAH單克隆抗體，孵育 后，再加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗鼠 IgG，孵育后加入TMB底物顯色。A為加了競(jìng)爭(zhēng)抗 原孔在450nm波長(zhǎng)下的OD值，AO是零競(jìng)爭(zhēng)孔在450nm波長(zhǎng)下的OD值。
[0061] 圖2本發(fā)明中的鼠抗SAH單克隆抗體和兔抗SAH單克隆抗體靈敏度比較的圖。
[0062] 圖3本發(fā)明中的抗SAH單克隆抗體301-1與S-腺苷蛋氨酸（SAM，Sigma目錄號(hào) A2408,即對(duì)苯磺酸二硫酸腺苷蛋氨酸）的交叉反應(yīng)率測(cè)定結(jié)果。該曲線的縱坐標(biāo)是LnP，其 中P = (Α/ΑΟ) Λ1-Α/Α0)。橫坐標(biāo)是LogM，其中M是游離SAH競(jìng)爭(zhēng)物的摩爾濃度。
[0063] 圖4abcam的兔抗SAH單克隆抗體與S-腺苷蛋氨酸（SAM)的交叉反應(yīng)率測(cè)定的結(jié) 果。該曲線的縱坐標(biāo)是LnP，其中P = (Α/ΑΟ) Λ1-Α/Α0)。橫坐標(biāo)是LogM，其中M是游離SAH 競(jìng)爭(zhēng)物的摩爾濃度。
[0064] 圖5A，用301抗體在健康乳腺組織中做免疫組織化學(xué)結(jié)果的圖，棕色區(qū)域表明在 細(xì)胞核和胞漿有SAH強(qiáng)陽(yáng)性染色；B:用301抗體在乳腺癌組織中做免疫組織化學(xué)，胞漿和 細(xì)胞核區(qū)域顯示為SAH陰性（或弱背景染色）；C:用301抗體在健康腎臟組織中做免疫組 織化學(xué)，棕色區(qū)域表明在細(xì)胞核和胞漿有SAH強(qiáng)陽(yáng)性染色；D:用301抗體在腎癌組織中做 免疫組織化學(xué)，胞漿和細(xì)胞核區(qū)域顯示為SAH陰性（或弱背景染色）。
[0065] 圖6流式細(xì)胞術(shù)分析的對(duì)照?qǐng)D，其中肝細(xì)胞系L02和肝癌細(xì)胞系!fepG2做空白染 色，沒(méi)有加抗SAH抗體。
[0066] 圖7肝細(xì)胞系L02和肝癌細(xì)胞H印G2用抗SAH單克隆抗體（301-1)染色結(jié)果比較 圖，其中H印G2細(xì)胞系染色后的熒光信號(hào)比L02細(xì)胞系的熒光信號(hào)低，表明癌變會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞 內(nèi)SAH濃度下降。
[0067] 圖8A中顯示了正常人血清中SAM的含量結(jié)果，橫坐標(biāo)是血清SAM含量（nM),縱坐 標(biāo)是樣品例數(shù)（總共82例）。
[0068] 圖8B中顯示了正常人血清中SAH的含量，橫坐標(biāo)是血清SAH含量（nM),縱坐標(biāo)是 樣品例數(shù)（總共82例）。
[0069] 圖8C中顯示了正常人血清甲基化指數(shù)，橫坐標(biāo)是血清甲基化指數(shù)，縱坐標(biāo)是樣品 例數(shù)（總共82例）。
[0070] 圖9A中顯示了抑郁癥和巴金森氏病人血清中SAM的含量，橫坐標(biāo)是血清SAM含量 (nM)，縱坐標(biāo)是樣品例數(shù)（總共20例）。
[0071] 圖9B中顯示了抑郁癥和巴金森氏病人血清中SAH的含量，橫坐標(biāo)是血清SAH含量 (nM)，縱坐標(biāo)是樣品例數(shù)（總共20例）。
[0072] 圖9C中顯示了抑郁癥和巴金森氏病人血清甲基化指數(shù)，橫坐標(biāo)是血清甲基化指 數(shù)，縱坐標(biāo)是樣品例數(shù)（總共20例）。
[0073] 圖IOA中顯示了腦出血，腦栓塞，腦動(dòng)脈粥樣硬化病人血清中SAM的含量，橫坐標(biāo) 是血清SAM含量（nM)，縱坐標(biāo)是樣品例數(shù)（總共20例）。
[0074] 圖IOB中顯示了腦出血，腦栓塞，腦動(dòng)脈粥樣硬化病人血清中SAH的含量，橫坐標(biāo) 是血清SAH含量（nM)，縱坐標(biāo)是樣品例數(shù)（總共20例）。
[0075] 圖IOC中顯示了腦出血，腦栓塞，腦動(dòng)脈粥樣硬化病人血清甲基化指數(shù)，橫坐標(biāo)是 血清甲基化指數(shù)，縱坐標(biāo)是樣品例數(shù)（總共20例）。
[0076] 圖IlA中顯示了正常人血楽中SAM的含量，橫坐標(biāo)是血楽SAM含量（nM),縱坐標(biāo) 是樣品例數(shù)（總共310例）。
[0077] 圖IlB中顯示了正常人血楽中SAH的含量，橫坐標(biāo)是血楽SAH含量（nM),縱坐標(biāo) 是樣品例數(shù)（總共310例）。
[0078] 圖IlC中顯示了正常人血漿甲基化指數(shù)，橫坐標(biāo)是血漿甲基化指數(shù)，縱坐標(biāo)是樣 品例數(shù)（總共310例）。
[0079] 圖12A中顯示了肝炎病人血漿中SAM的含量，橫坐標(biāo)是血漿SAM含量（nM)，縱坐 標(biāo)是樣品例數(shù)（總共24例）。
[0080] 圖12B中顯示了肝炎病人血漿中SAH的含量，橫坐標(biāo)是血漿SAH含量（nM)，縱坐 標(biāo)是樣品例數(shù)（總共24例）。
[0081] 圖12C中顯示了肝炎病人血漿甲基化指數(shù)，橫坐標(biāo)是血漿甲基化指數(shù)，縱坐標(biāo)是 樣品例數(shù)（總共24例）。
[0082] 圖13是膠體金試紙條測(cè)定尿液中SAH含量的結(jié)果的圖，A :是陰性對(duì)照（PBS)，B: 尿液用PBS進(jìn)行100稀釋尿液后上樣，C:尿液用PBS進(jìn)行10稀釋尿液后上樣，D:未經(jīng)稀釋 的尿液上樣。

【具體實(shí)施方式】
[0083] 實(shí)施例1:抗原SAH-BSA的制各
[0084] 本實(shí)施例中所使用的化學(xué)試劑和材料購(gòu)買途徑如下：
[0085] SAH購(gòu)自成都諾維生物科技有限公司；BSA，牛血清蛋白，購(gòu)自SIGMA公司；EDC. HCl 購(gòu)自SIGMA公司；N羥基丁二酰亞胺購(gòu)自SIGMA公司；透析袋截留小孔徑為8000-12000,購(gòu) 自北京博奧拓達(dá)科技有限公司；以及IOmMPBS磷酸鹽緩沖液（pH為7.4)為自行配制。
[0086] 在反應(yīng)瓶中順序加入 5mgSAH、28. 8mgBSA、14. 96mgEDC. HC1、5. 3mgN 羥基丁二酰亞 胺和5mL(10mM，pH7. 4)PBS，并在磁力攪拌下反應(yīng)6個(gè)小時(shí)。反應(yīng)物裝透析袋對(duì)pH7. 4, IOmM 的PBS透析24小時(shí)，期間換液3次。透析完畢，確定體積，濃度，分裝，凍存?zhèn)溆茫瑥亩苽?得到BSA-SAH水劑。
[0087] 實(shí)施例2:雜奪瘤和單克降抗體的制各
[0088] 所使用的8周齡雌性BALB/C小鼠，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物所。
[0089] 所使用的試驗(yàn)試劑：弗氏完全佐劑，購(gòu)自SIGMA公司；BSA，牛血清蛋白，購(gòu)自SIGMA 公司；BSA-SAH水劑，按照實(shí)施例1制備；RPMI1640液，購(gòu)自GIBCO公司；PEG4000,購(gòu)自北京 拜爾迪生物公司；SP2/0骨髓瘤細(xì)胞，購(gòu)自上海研域生物科技有限公司；多聚賴氨酸-SAH偶 聯(lián)抗原，購(gòu)自Sigma公司；酶聯(lián)板，購(gòu)自北京拜爾迪公司；羊抗鼠-HRP二抗，其購(gòu)自南京生 興生物；HAT選擇培養(yǎng)液，其購(gòu)自SIGMA公司；礦物油，購(gòu)自SIGMA公司；牛血清白蛋白偶聯(lián) 的SAH，購(gòu)自Sigma公司。
[0090] 試驗(yàn)儀器：酶標(biāo)儀MultiskanFC酶標(biāo)儀，購(gòu)自熱電科學(xué)儀器公司。
[0091] 取一組6只8周齡雌性BALB/C小鼠，每只小鼠分多點(diǎn)皮下注射前文所述的接種試 齊U，接種按照表1進(jìn)行。每次接種〇. 3mL的接種試劑，其中含有BSA-SAH100微克。
[0092] 表1BALB/C小鼠接種抗原SAH-BSA的接種方案
[0093]

【權(quán)利要求】
1. 特異性結(jié)合s-腺苷同型半胱氨酸的單克隆抗體301或者其抗原結(jié)合部分，所述單克 隆抗體由雜交瘤細(xì)胞株301產(chǎn)生；并且所述的雜交瘤細(xì)胞株301產(chǎn)生保藏在中國(guó)典型培養(yǎng) 物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC C2014178,保藏日期為2014年9月15日。
2. -種雜交瘤，其保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC C2014178,保藏日 期為2014年9月15日。
3. -種組合物，其包含權(quán)利要求1的抗體或者其抗原結(jié)合部分。
4. 一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其包含權(quán)利要求1的抗體或其抗原結(jié)合部分。
5. 權(quán)利要求4所述的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還含有：20倍濃 縮洗滌液、酶標(biāo)包被板、酶標(biāo)抗體稀釋液、酶標(biāo)抗體、樣品稀釋液、顯色液A液、顯色液B液、 終止液和封板膜。
6. -種用于檢測(cè)樣品中SAH水平的快速膠體金檢測(cè)試紙，其特征在于，所述的試紙包 括權(quán)利要求1所述的單克隆抗體301或者其抗原結(jié)合部分。
7. -種檢測(cè)樣品中SAH水平的快速膠體金檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒包 括： (1) 權(quán)利要求6所述的快速膠體金檢測(cè)試紙；和 (2) 使用說(shuō)明。
8. -種檢測(cè)S-腺苷同型半胱氨酸在樣品中的存在或者其水平的方法，其包括使用權(quán) 利要求1所述的抗體或者其抗原結(jié)合部分、權(quán)利要求3所述的組合物、權(quán)利要求4或5所述 的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒、權(quán)利要求6所述的快速膠體金檢測(cè)試紙或者權(quán)利要求7所述的快 速膠體金檢測(cè)試劑盒來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述的樣品選自血液樣品、組織樣品和細(xì) 胞樣品。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述的血液樣品是血清樣品或者血漿樣 品。
11. 權(quán)利要求1所述的抗體或者其抗原結(jié)合部分、權(quán)利要求2所述的雜交瘤、權(quán)利要求 3所述的組合物或者權(quán)利要求6所述的快速膠體金檢測(cè)試紙?jiān)谥苽溆糜跈z測(cè)生物體的甲基 化指數(shù)的試劑盒中的用途，所述的試劑盒用于檢測(cè)樣品中的SAH水平。
12. 根據(jù)權(quán)利要求11所述的用途，其特征在于，所述的樣品選自血液樣品、組織樣品和 細(xì)胞樣品。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于，所述的血液樣品是血清樣品或者血漿 樣品。
14. 根據(jù)權(quán)利要求11-13中任一項(xiàng)所述的用途，其特征在于，所述的試劑盒用于診斷抑 郁癥、巴金森氏、腦出血、腦栓塞、腦動(dòng)脈粥樣硬化病或者肝炎。
15. 權(quán)利要求1所述的抗體或者其抗原結(jié)合部分、權(quán)利要求3所述的組合物、權(quán)利要求 4或5所述的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒、權(quán)利要求6所述的快速膠體金檢測(cè)試紙或者權(quán)利要求 7所述的快速膠體金檢測(cè)試劑盒的非治療或診斷目的的用途，其用于檢測(cè)S-腺苷同型半胱 氨酸在樣品中的存在或其水平。
16. 根據(jù)權(quán)利要求15所述的用途，其特征在于，所述的樣品選自血液樣品、組織樣品和 細(xì)胞樣品。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的用途，其特征在于，所述的血液樣品是血清樣品或者血漿 樣品。
【文檔編號(hào)】G01N33/577GK104479022SQ201410570652
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月23日
【發(fā)明者】郝秀娟, 任會(huì)明, 肖平, 李惠軍, 甘鴻杰, 周雅嫻, 夏嘉志, 郝廣鈞 申請(qǐng)人:湖南天合生物技術(shù)有限公司