一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份tmb顯色液的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉0.1-0.5g，甘油20-30ml，TMB5-40mg，10-40mlDMSO，每1000mL所述氧化效果好的單組份TMB顯色液中還包括EDTA1-3g。通過將本發(fā)明所述范圍內(nèi)的單組份TMB顯色液用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段，避免了TMB顯色液在使用之間需要將A、B液混合，減少了操作時(shí)間，避免了TMB顯色液的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變，進(jìn)而提高了TMB顯色液的靈敏度；本發(fā)明所用的TMB溶劑為DMSO，以溶劑乙醇相比，其溶解TMB的速度快，溶解充分，溶解后的溶液穩(wěn)定性更好；EDTA的加入能進(jìn)一步的提高TMB溶劑的穩(wěn)定性。
【專利說明】一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及TMB顯色液領(lǐng)域，具體地，涉及一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯 色液。

【背景技術(shù)】
[0002] TMB是一種過氧化物酶底物，用于ELISA反應(yīng)。底物產(chǎn)生一種可溶性淡藍(lán)色的末端 產(chǎn)物，可在370或635nm在分光光度計(jì)上讀取。其適用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段的定量 和定性分析。其檢驗(yàn)的原理是：當(dāng)標(biāo)記在抗體或抗原上的酶與顯色液中的TMB、雙氧水等反 應(yīng)，加入終止液后溶液由無色變成黃色，黃色深淺反應(yīng)ELISA體系中抗原抗體結(jié)合的多少， 從而判斷某種抗原或抗體的多少。在通過酶標(biāo)儀測度吸光值，判斷免疫反應(yīng)的程度。
[0003] 現(xiàn)有市售的酶聯(lián)免疫試劑盒所采用TMB顯色劑液大多為雙組份，分A液和B液，使 用之前需要先混勻，在使用上存在缺點(diǎn)一是不夠方便，二是在包裝材料上存在成本提高和 資源浪費(fèi)；三是使用中的混合過程容易造成批間質(zhì)量不均一；四是還存在穩(wěn)定性差、保存 時(shí)間短、顯色背景高、靈敏度低等的缺點(diǎn)，市售的酶聯(lián)免疫試劑盒也有采用單組份的TMB顯 色液，但是現(xiàn)有的單組份TMB顯色液的穩(wěn)定性不是不是特別好。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)的TMB顯色液及其制備方法，由A液和B液等體積混合后得到，所述A 液各組分的摩爾濃度為：檸檬酸〇? 01-0. 5mol/L，磷酸氫二鈉0? 01-0. 5mol/L，過氧化氫 0. 01-0. 5mol/L，EDTAO. 1-lmmol/L;所述B液包括TMB、HC1和聚乙烯吡咯烷酮，所述TMB的 摩爾濃度為〇.l-lmm〇l/L，所述HC1的摩爾濃度為0. 01-0. 5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為〇. 1-10% ;現(xiàn)有的單組份TMB顯色液的氧化劑為過氧化脲。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液， 以克服現(xiàn)有顯色液操作麻煩、穩(wěn)定性差的問題。
[0006] 此外，本發(fā)明還包括上述單組份TMB顯色液的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明解決上述問題所采用的技術(shù)方案是：一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB 顯色液，每l〇〇〇mL的顯色液包括以下組分：檸檬酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉 0? 1-0. 5g，甘油 20-30ml，TMB5-40mg，10-40mlDMS0,每 1000mL所述氧化效果好的單組份TMB 顯色液中還包括EDTAl-3g。
[0008] 現(xiàn)有的TMB顯色液一般都是由A液和B液混合得到，A液各組分的摩爾濃度 為：朽1 樣酸 〇? 〇l_〇. 5mol/L，憐酸氫二鈉 0? 01-0. 5mol/L，過氧化氫 0? 01-0. 5mol/L， EDTAO. 1-lmmol/L;所述B液包括TMB、HC1和聚乙烯吡咯烷酮，所述TMB的摩爾濃度為 0. 1-lmmol/L，所述HC1的摩爾濃度為0. 01-0. 5mol/L，所述聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0. 1-10%，現(xiàn)有TMB顯色劑的缺點(diǎn)在于A、B兩種液體在顯色之前需要等體積混勻，操作不方 便、耗時(shí)間、效率較低、批此之間存在差異，同時(shí)成本也高，且A液B液自混合的過程中，HC1 會(huì)揮發(fā)，會(huì)導(dǎo)致顯色的有效成分的濃度發(fā)生改變，因而會(huì)導(dǎo)致混合后的TMB顯色液的在顯 色過程中的靈敏度降低；本發(fā)明為單組份TMB顯色液，避免了TMB顯色液在使用之間需要 將A、B液混合的操作步驟，簡化操作流程，減少了操作時(shí)間，提高了效率，同時(shí)避免了因A、B 液不同批次間的差異導(dǎo)致混合的顯色劑的顯色效果；不會(huì)存在因HC1揮發(fā)導(dǎo)致的TMB顯色 液的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變，進(jìn)而提高了TMB顯色液的靈敏度；并且，本發(fā)明在TMB 顯色液中加入加入了l_3g的EDTA，實(shí)驗(yàn)證明，EDTA的加入提高了TMB顯色液的穩(wěn)定性；本 發(fā)明用過硼酸鈉替代現(xiàn)有的過氧化氫、過氧化脲，實(shí)驗(yàn)證明，與過氧化氫、過氧化脲相比，過 硼酸鈉具有更好的氧化性；本發(fā)明將傳統(tǒng)溶劑乙醇替換成DMSO,DMSO為一種極性非質(zhì)子溶 齊U，具有較好的滲透性，能與有機(jī)溶劑、水互溶，因此，DMSO能加快TMB的溶解，使之溶解的 更充分，且使溶解后的溶液更穩(wěn)定。
[0009] 進(jìn)一步地，檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g。
[0010] 實(shí)驗(yàn)證明，檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g的TMB顯色液具有更好的穩(wěn)定性。
[0011] 進(jìn)一步地，DMS0為20-30mL。20-30mL的DMS0具有較快的溶解速度，溶解的更充 分，穩(wěn)定性更好。
[0012] 進(jìn)一步地，TMB的質(zhì)量設(shè)置為10-30mg。將TMB的質(zhì)量設(shè)置為10-30mg能有效的提 高顯色效果，提高顯色的靈敏度。
[0013] 一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液的應(yīng)用，將所述的單組份TMB顯色液 應(yīng)用到酶聯(lián)免疫試劑盒。
[0014] 綜上，本發(fā)明的有益效果是： 1、通過將本發(fā)明所述范圍內(nèi)的單組份TMB顯色液用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段，避 免了TMB顯色液在使用之間需要將A、B液混合的操作步驟，減少了操作時(shí)間，提高了效率， 同時(shí)避免了因A、B液不同批次間的差異導(dǎo)致混合的顯色劑的顯色效果。
[0015] 2、通過將本發(fā)明所述范圍內(nèi)的單組份TMB顯色液用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階 段，避免了TMB顯色液的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變，進(jìn)而提高了TMB顯色液的靈敏度。[0016] 3、本發(fā)明的氧化效果好的單組份TMB顯色液中包括l-3g的EDTA，使得所制備的氧 化效果好的單組份TMB顯色液具有更好的吸光度，提高了TMB顯色液的穩(wěn)定性。
[0017] 4、本發(fā)明所用的溶劑為DMS0,以傳統(tǒng)溶劑乙醇相比，其溶解TMB的速度快，溶解充 分，溶解后的溶液穩(wěn)定性更好。

【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合實(shí)施例，對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步地的詳細(xì)說明，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0019] 實(shí)施例1: 一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬 酸 7g，磷酸氫二鈉 16g，過硼酸鈉 0.lg，甘油 20ml，EDTAlg，TMB5mg，lOmLDMSO。
[0020] 實(shí)施例2 : 一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬 酸 7g，磷酸氫二鈉 16g，過硼酸鈉 0.lg，甘油 20ml，EDTA2g，TMB5mg，lOmLDMSO。
[0021] 實(shí)施例3: 一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，每lOOOmL的顯色液包括以下組分：檸檬 酸 7g，磷酸氫二鈉 16g，過硼酸鈉 0.lg，甘油 20ml，EDTA3g，TMB5mg，lOmLDMSO。
[0022] 實(shí)施例4 : 一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬 酸 7g，磷酸氫二鈉 16g，過硼酸鈉 0.lg，甘油 20ml，EDTA2g，TMBlOmg，20mLDMS0。
[0023] 實(shí)施例5: 一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬 酸 7g，磷酸氫二鈉 16g，過硼酸鈉 0.lg，甘油 30ml，EDTA2g，TMB30mg，30mlDMS0。
[0024] 實(shí)施例6 : 一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬 酸l〇g，磷酸氫二鈉 20g，過硼酸鈉 0. 5g，甘油 30ml，EDTA3g，TMB40mg，40mlDMS0。
[0025] 實(shí)施例7 : 一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，每1000mL的顯色液包括以下組分：檸檬 酸 9g，磷酸氫二鈉 18g，過硼酸鈉 0? 2g，甘油 20ml，EDTA2g，TMB20mg，20mlDMS0。
[0026] 實(shí)施例8: 一種用于酶

【權(quán)利要求】
1. 一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，其特征在于，每lOOOmL的顯色液 包括以下組分：檸檬酸7-10g，磷酸氫二鈉16-20g，過硼酸鈉0. 1-0. 5g，甘油20-30ml， TMB5-40mg，10-40mlDMS0,每lOOOmL所述氧化效果好的單組份TMB顯色液中還包括 EDTAl-3g。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，其特征在于，所 述檸檬酸為9-10g，磷酸氫二鈉18-20g。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，其特征在 于，所述 DMS0 為 20-30mL。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)的單組份TMB顯色液，其特征在 于，所述TMB的質(zhì)量設(shè)置為10-30mg。
5. -種如權(quán)利要求1或2所述的穩(wěn)定性好的單組份TMB顯色液的應(yīng)用，其特征在于，將 所述的單組份TMB顯色液應(yīng)用到酶聯(lián)免疫試劑盒。
【文檔編號(hào)】G01N33/543GK104459109SQ201410685176
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月25日
【發(fā)明者】張志新, 葉正義, 楊秦, 何遠(yuǎn)立 申請(qǐng)人:成都威爾諾生物科技有限公司