本發(fā)明屬于免疫檢測試劑領(lǐng)域，具體涉及一種雌三醇均相酶免疫檢測試劑、制備方法及檢測方法。
背景技術(shù)：
：雌三醇（Estriol，E3），其結(jié)構(gòu)式如式（Ⅲ）所示：式（Ⅲ）雌三醇（Estriol，E3）是重要的內(nèi)源性雌性激素之一。人體內(nèi)存在游離雌三醇和結(jié)合雌三醇，通常男性及未孕婦女體內(nèi)的雌三醇含量低于2.2ng/mL，而妊娠期婦女體內(nèi)的雌三醇含量一般高于31.6ng/mL。在妊娠期檢查時，可以通過檢測孕婦血清或尿液中E3的含量來判斷胎兒的發(fā)育情況。正常孕齡女性體內(nèi)雌三醇的主要來源是雌二醇和雌酮的代謝產(chǎn)物，因而在血清樣品中的含量很低；孕婦體內(nèi)雌三醇的主要來源是嬰兒和胎盤，且含量一般較高(10ng/mL)。孕婦血清中游離態(tài)雌三醇含量為臨床上指示胎盤功能的重要參數(shù)。通過檢測孕婦血清或尿液中雌三醇的含量，可以判斷胎兒的發(fā)育狀況。因此，快速、準確地檢測血清或尿液中雌三醇的含量對于科學(xué)研究和臨床診斷都具有重要意義。目前，檢測游離雌三醇或總雌三醇的常用方法有高效液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)、酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)、放射免疫法(RIA)、時間分辨熒光免疫分析法(TRFIA)和化學(xué)發(fā)光免疫分析法(CLIA)等，但是這些方法在臨床大規(guī)模推廣應(yīng)用方面均具有一定的局限性。目前市場上缺乏穩(wěn)定性好、靈敏度高、特異性強的雌三醇檢測試劑，尤其是質(zhì)量好的自動化檢驗試劑。因此，研發(fā)一種質(zhì)量達到臨床要求、實用性強、性價比高，可應(yīng)用于全自動生化分析儀的雌三醇測定試劑盒已成為國內(nèi)外體外診斷試劑行業(yè)的熱點。均相酶免疫檢測試劑可以實現(xiàn)在全自動生化分析儀上對雌三醇的高通量、快速化檢測，且具有操作簡便、靈敏度高、特異性強、結(jié)果準確等優(yōu)點，能有效滿足國內(nèi)日益增長的臨床檢測需求。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，采用獨特的雌三醇制備免疫原性強的雌三醇免疫原及其抗體，用該抗體制備的雌三醇均相酶免疫檢測試劑可以實現(xiàn)在全自動生化分析儀上對雌三醇高通量、快速化的檢測。該檢測試劑具有操作簡便、靈敏度高、特異性強、結(jié)果準確等優(yōu)點，還能有效降低雌三醇檢測成本，有利于臨床推廣使用。本發(fā)明的一個目的在于提供一種雌三醇均相酶免疫檢測試劑，含有抗雌三醇特異性抗體和指示試劑，所述的指示試劑選自酶試劑、放射性同位素試劑、熒光試劑或發(fā)光試劑中的一種，優(yōu)選為酶試劑；所述的酶試劑由雌三醇酶標偶聯(lián)物和酶的底物組成，酶標偶聯(lián)物為葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原酶標偶聯(lián)物，酶的底物為葡萄糖-6-磷酸；所述的抗雌三醇特異性抗體由雌三醇免疫原免疫實驗動物后產(chǎn)生的完整抗體分子，或者為保留與雌三醇特異性結(jié)合能力的抗體片段或抗體衍生物；所述的雌三醇免疫原，其結(jié)構(gòu)式如式（Ⅰ）所示：式（Ⅰ）載體為具有免疫原性的蛋白質(zhì)或多肽。優(yōu)選為血清蛋白、血藍蛋白和甲狀腺球蛋白，更優(yōu)選為血清白蛋白，進一步優(yōu)選為牛血清白蛋白。所述的雌三醇免疫原由雌三醇衍生物與上述載體連接而成，雌三醇衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)如式（Ⅱ）所示：式（Ⅱ）。所述的雌三醇免疫原的制備步驟如下：（1）將載體蛋白100～300g溶解于25～75mL0.2M，pH8.5的磷酸緩沖液中；（2）將如下化學(xué)品加入到小燒杯中攪拌溶解：100～300mg雌三醇衍生物、1.75～5.25mL二甲基甲酰胺、1.75～5.25mL乙醇、3.5～10.5mL10mM，pH5.0的磷酸鉀緩沖液、100～300mg1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亞胺，將上述化學(xué)品在室溫下攪拌溶解反應(yīng)30～60min；（3）將溶解好的溶液滴加至載體蛋白溶液中，并在2～8℃下攪拌過夜，得到抗原；將合成好的抗原經(jīng)過透析進行純化，得到雌三醇免疫原。一種抗雌三醇特異性抗體，由上述的雌三醇免疫原免疫實驗動物后生產(chǎn)得到。所述的抗雌三醇特異性抗體由上述制得的雌三醇免疫原采用常規(guī)方法接種實驗動物，加強免疫后取抗血清，具體步驟如下：（1）用PBS將上述合成的BSA-雌三醇免疫原稀釋至0.1～3.0mg/mL，得到抗原溶液，然后用0.5～5.0mL抗原溶液與等量弗氏完全佐劑混合，對實驗動物進行注射；（2）2～3周后，再用0.5～5.0mL相同的抗原溶液與等量弗氏不完全佐劑對上述實驗動物注射一次，之后每隔四周注射一次，共計注射3～6次；（3）對上述實驗動物取血，分離純化得到效價為1:30000～1:50000的抗雌三醇特異性抗體。本發(fā)明的抗雌三醇特異性抗體為完整的抗體分子，也包括保留與雌三醇特異性結(jié)合能力的抗體片段或抗體衍生物。本發(fā)明的抗體為采用單一的雌三醇免疫原對實驗動物加強免疫所獲得的多克隆抗體，或者為免疫后經(jīng)體細胞雜交獲得的單克隆抗體；所述的實驗動物為兔、山羊、小鼠、綿羊、豚鼠或馬的一種，優(yōu)選為兔。本發(fā)明的另一個目的在于提供雌三醇均相酶免疫檢測試劑的制備方法。雌三醇均相酶免疫檢測試劑的制備方法，其特征在于包含以下步驟：（1）試劑A：將2.018～8.072g、5.625～22.50mM氧化態(tài)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸和0.856～3.422g、5.625～22.50mM葡萄糖-6-磷酸用0.5～2L55mM、pH=8.0的Tris緩沖液溶解制成均相酶底物；將抗雌三醇特異性抗體加到上述均相酶底物中，抗雌三醇特異性抗體與均相酶底物的體積比為1:200～1:7500，優(yōu)選為1:1200；（2）試劑B：將雌三醇酶標偶聯(lián)物加到120mM、pH=8.2的Tris緩沖液中，雌三醇酶標偶聯(lián)物與Tris緩沖液的體積比為1:200～1:7500，優(yōu)選為1:2500；其中，雌三醇酶標偶聯(lián)物的制備方法包含以下步驟：（1）葡萄糖-6-磷酸脫氫酶溶液的制備：稱取7.5～22.5mg規(guī)格為100KU的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶，室溫溶解于6～18mL含有72.6mg0.05MTris、8mg3.3mMMgCl2和100mgNaCl的溶液中，pH=8.5～9.0；在溶液中加入112.5～337.5mg還原態(tài)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸、67.5～202.5mg葡萄糖-6-磷酸以及0.375～1.125mL卡必醇；加熱到30-35攝氏度，再一次性加入1～3mL二甲基亞砜，搖勻后靜置5-15s；（2）雌三醇衍生物的激活：在無水狀態(tài)下稱取5～15mg雌三醇衍生物，溶解于300～900μL二甲基甲酰胺中；使上述溶液溫度降到-10~-14℃；加入1.5～4.5μL三丁胺；加入0.75～2.25μL氯甲酸異丁酯；加入0.1～2μL碳二亞胺（EDC）；5～15mgN-羥基硫代琥珀酰亞胺；-10~-14℃攪拌30～60分鐘；（3）葡萄糖-6-磷酸脫氫酶與雌三醇衍生物的連接：將步驟（2）激活的溫度為-10~-14℃的雌三醇衍生物溶液逐滴加入到步驟（1）溶解的溫度為30-35攝氏度的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶溶液中；2-8℃攪拌過夜；（4）純化產(chǎn)物：通過G-25凝膠層析柱純化連接產(chǎn)物，獲得的最終產(chǎn)物為葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物，于2-8℃下儲存。所述的雌三醇衍生物結(jié)構(gòu)式如式（Ⅱ）所示：式（Ⅱ）。本發(fā)明的又一個目的在于提供雌三醇含量的檢測方法。雌三醇含量的檢測方法，采用前述的制備方法制備得到雌三醇均相酶免疫檢測試劑并用于雌三醇含量的檢測，包括如下步驟：1）將待測樣本與抗雌三醇特異性抗體接觸；2）根據(jù)待測樣本中雌三醇與抗雌三醇特異性抗體的結(jié)合情況，利用指示試劑判斷樣本中雌三醇的含量；所述的待測樣本為生理樣本，所述的生理樣本為尿液樣本或者血液樣本，優(yōu)選尿液樣本。本發(fā)明的雌三醇免疫原，免疫原性高，可以誘導(dǎo)得到高效價的抗雌三醇特異性抗體。該抗體特異性高，與雌三醇的結(jié)合力強。由該抗體制備得到的雌三醇檢測試劑，可以快速、準確地確定樣品中的雌三醇含量。雌三醇均相酶免疫檢測試劑在使用之前，為了避免指示試劑中的酶標偶聯(lián)物和酶的底物發(fā)生反應(yīng)，酶標偶聯(lián)物和酶的底物是不混合的且分開放置，所以將酶的底物與上述抗雌三醇特異性抗體混合在一起。本發(fā)明的制備方法中，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶溶液的制備時，加熱到30-35攝氏度，再一次性而非逐滴加入1～3mL二甲基亞砜，搖勻后靜置5-15s，采用相對室溫更高的溫度，使得一次性加入二甲基亞砜成為可行，且靜置時間也比較短，節(jié)約了操作時間，且有助于實現(xiàn)雌三醇的高通量快速化測定，準確度高，特異性強。雌三醇衍生物的激活過程選取-10~-14℃的溫度范圍，低于常規(guī)的-2至-8攝氏度，有助于提高雌三醇衍生物的激活效率且使得雌三醇衍生物與蒲萄糖-6-磷酸脫氫酶溶液混合時，混合溶液的溫度接近于室溫。本發(fā)明的雌三醇免疫原特異性強、免疫原性高，制備出的抗雌三醇特異性抗體特異性強、效價高，并且與常見的62種藥物無任何交叉反應(yīng)；含有上述抗雌三醇特異性抗體的均相酶免疫檢測試劑可以方便、快速、準確地確定尿液、血液等生物樣品中的雌三醇含量，并且可以在全自動生化分析儀上同時測定多個樣品，實現(xiàn)雌三醇的高通量快速化測定，準確度高，特異性強，精確度和檢測效率相比之前都有了較大的提高，同時實現(xiàn)了檢測過程的全自動化，對檢測人員的要求不高，易于實現(xiàn)和推廣使用。附圖說明圖1是雌三醇的ELISA檢測反應(yīng)曲線；圖2是雌三醇的均相酶免疫反應(yīng)曲線；圖3是雌三醇均相酶免疫相關(guān)性分析圖。具體實施方式實施例一：雌三醇免疫原的合成雌三醇免疫原由牛血清白蛋白（BovineSerumAlbumin，BSA）與式（Ⅱ）所示的雌三醇衍生物的末端羧基連接而成，具體步驟如下：1.將牛血清白蛋白200mg溶解于50mL0.2M，pH8.5的磷酸緩沖液中；2.將如下化學(xué)品加入到小燒杯中攪拌溶解：200mg雌三醇衍生物、3.5mL二甲基甲酰胺、3.5mL乙醇、7.0mL10mM，pH5.0的磷酸鉀緩沖液、200mg1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亞胺，將這些化學(xué)品在室溫下攪拌溶解反應(yīng)30min；3.將溶解好的溶液滴加至BSA溶液中，并在2～8℃下攪拌過夜，得到抗原；將合成好的抗原經(jīng)過透析進行純化，得到雌三醇免疫原。實施例二：抗雌三醇特異性抗體的制備將實施例一制備得到的雌三醇免疫原采用常規(guī)方法接種實驗動物兔，加強免疫后取抗血清，具體步驟如下：1.用PBS將上述合成的雌三醇免疫原稀釋至1.0mg/mL，得到抗原溶液，然后用1.0mL抗原溶液與等量弗氏完全佐劑混合，對實驗動物兔進行注射。2.2～3周后，再用1.0mL相同的抗原溶液與等量弗氏不完全佐劑對上述實驗動物兔注射一次，之后每隔四周注射一次，共計注射4次。3.對步驟2的實驗動物兔取血，分離純化得到效價為1:30000～1:50000的抗雌三醇特異性抗體。實施例三：雌三醇的ELISA檢驗1.雌三醇的ELISA檢測標準曲線的建立(1)標準品的制備將雌三醇粉末(購于Sigma公司)溶解于甲醇溶液，制備成1mg/mL的儲存液。用ELISA緩沖液將儲存液依次稀釋為16.00ng/mL、8.00ng/mL、4.00ng/mL、2.00ng/mL、1.00ng/mL和0.00ng/mL的標準溶液。其中，ELISA緩沖液含有50.0mMTris，145mMNaCl和0.25％的BSA。(2)利用雌三醇的ELISA檢驗方法制備標準曲線用PBS將實施例二中所制備的抗雌三醇特異性抗體稀釋成1:7500的終濃度溶液，100μL/孔包被在96孔酶聯(lián)板上，4℃放置12-24h；用PBS將上述包被有抗雌三醇抗體的96孔酶聯(lián)板洗滌3次后，加入200μL/孔的0.5％的BSA溶液，4℃封閉放置8-16h。然后用PBS洗滌3次，加入20μL/孔的標準品。再加入100μL/孔工作濃度的HRP-雌三醇偶聯(lián)物；室溫下孵育30min后PBS洗板5次；然后每孔加入100μLTMB底物，室溫孵育30min。再每孔加入100μL終止液(2M硫酸)。測定450nm的吸光值。根據(jù)各標準品所對應(yīng)的450nm的吸光值定標，制作標準曲線，結(jié)果如附圖2所示。2.待測樣品中雌三醇含量的檢測(1)制作待測樣品制備方法：將雌三醇粉末(購于Sigma公司)溶解于甲醇溶液制成1mg/mL的儲存液，并將此儲存液稀釋于空白尿液中，至終濃度分別為0.00，2.00，8.00，16.00ng/mL，形成空白、低、中、高濃度的尿液樣本。該空白尿液為不含雌三醇的健康人尿液。(2)測試方法利用上述雌三醇的ELISA檢驗方法，將上述空白、低、中、高濃度的尿液樣本代替標準品，測試上述空白、低、中、高濃度的尿液樣本在450nm的吸光值。(3)測試結(jié)果對照圖1中所示的雌三醇的ELISA檢驗的標準曲線，計算每個樣本中雌三醇含量，并對每個樣本進行3個復(fù)孔測定，根據(jù)上述樣本中雌三醇的實際含量計算回收率，結(jié)果如表1所示。表1雌三醇的ELISA檢測回收實驗?zāi)蛞簶悠房瞻椎椭懈邩悠窛舛?ng/mL)0.002.008.0016.00測試10.002.157.7916.29測試20.011.937.9916.46測試30.012.218.1216.11平均值(ng/mL)0.012.097.9716.29回收率(％)-104.899.6101.8由表1中結(jié)果可知：采用本發(fā)明雌三醇的ELISA檢測試劑測定不同濃度樣品中的雌三醇回收率都較高，均＞95％，說明本發(fā)明所述的抗雌三醇特異性抗體可以用于樣本中雌三醇的檢測，并且結(jié)果準確度高。實施例四：葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物的制備1.葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PDH）溶液的制備：（1）準確稱取15mg規(guī)格為100KU的G6PDH，室溫溶解于12mL含有72.6mg（0.05M）Tris、8mgMgCl2（3.3mM）和100mgNaCl的溶液中，該溶液pH=8.9，本步驟在燒杯C中進行。（2）在上述燒杯C中加入225mg還原態(tài)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH），135mg葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）以及0.75mL卡必醇（Carbitol）。（3）加熱到35攝氏度，在上述燒杯C中一次性加入2mL二甲基亞砜(dimethysulfoxide，DMSO)，搖勻后靜置5-15s。雌三醇衍生物的激活：（1）在無水狀態(tài)下稱取10mg上述雌三醇衍生物，溶解于600μLDMF中。（2）使上述溶液溫度降到-10℃。（3）加入3μL三丁胺（tributylamine）。（4）加入1.5μL氯甲酸異丁酯（isobutylchloroformate）。（5）加入0.1～2μL碳二亞胺EDC；5～15mgN-羥基硫代琥珀酰亞胺；（6）-12℃攪拌30分鐘。值得一提的是，另選取-4攝氏度、-8攝氏度兩個不同溫度進行雌三醇衍生物的激活，且在室溫下逐滴加入二甲基亞砜，其余條件相同。與雌三醇衍生物的連接：（1）將上述激活的雌三醇衍生物溶液逐滴加入到上述溶解的G6PDH溶液中。（2）2-8℃攪拌過夜。純化產(chǎn)物：通過G-25凝膠層析柱純化步驟3中的溶液，獲得的最終產(chǎn)物為葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物，于2-8℃下儲存。分別采用-4攝氏度（逐滴加入二甲基亞砜，室溫）、-8攝氏度（逐滴加入二甲基亞砜，室溫）、-10攝氏度（35攝氏度一次性加入二甲基亞砜，搖勻靜置）3個條件進行雌三醇衍生物的激活，最終得到的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物的回收率為83.9%、88.2%、97.3%，回收率指的是加入的G6PDH最終生成葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物的比率。實施例五：雌三醇均相酶免疫檢測試劑的制備1.試劑A的制備：將4.036g（11.25mM）氧化態(tài)的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）、1.711g（11.25mM）葡萄糖-6-磷酸（G-6-P）置于燒杯D中，用1L55mM、pH=8.0的Tris緩沖液溶解制成均相酶底物；將上述制備的抗雌三醇特異性抗體加到上述均相酶底物中，抗體與均相酶底物的體積比為1:1200。2.試劑B的制備：將實施例四制備的葡萄糖-6-磷酸脫氫酶-半抗原偶聯(lián)物加到120mM、pH=8.2的Tris緩沖液中，上述偶聯(lián)物與Tris緩沖液的體積比為1:2500。實施例六：雌三醇均相酶免疫檢驗及結(jié)果1.獲得標準曲線：（1）設(shè)置邁瑞B(yǎng)S-480全自動生化分析儀反應(yīng)參數(shù)（見表2）。（2）操作步驟為：先加試劑A，再加入標準品，最后加入試劑B。加入試劑B后，測定不同時間點的OD340吸光值，算出不同標準品濃度時的反應(yīng)速率，實際操作過程中需不斷調(diào)整試劑A和試劑B的體積比例，同時調(diào)整測光點，最后得出較理想的反應(yīng)標準曲線圖，如圖3所示。表2邁瑞B(yǎng)S-480全自動生化分析儀反應(yīng)參數(shù)2.樣本檢測：通過本發(fā)明的均相酶免疫檢測試劑得到的標準曲線，重復(fù)測定低、中、高濃度質(zhì)控樣本10次，上述質(zhì)控樣本為：將雌三醇標準品溶解于人尿液中，至濃度分別為2.00，15.00，35.00ng/mL。檢測數(shù)據(jù)及數(shù)據(jù)分析見表3。表3樣品測定及精密度和回收率評估尿液樣品低中高樣品濃度(ng/mL)2.0015.0035.0012.1515.8134.5522.0415.6236.3132.0316.0335.8941.9015.3336.0751.9915.4036.7262.0614.7934.1572.1815.2837.2481.9315.0036.1092.0914.6535.98102.0215.3536.00平均值(ng/mL)2.0415.3335.90標準差（SD）0.090.430.92精密度（CV%）4.41%2.80%2.56%回收率%102.0102.2102.6檢測結(jié)果：本發(fā)明的均相酶免疫檢測試劑測定的準確度高，回收率達到95%-105%，精密度高，CV均低于5%。實施例七：藥物干擾試驗選取62種常見藥物進行干擾檢測，調(diào)整濃度至1.00ng/mL，采用實施例六的均相酶免疫方法進行測定：1.將待測干擾藥物與實施例五制備的試劑A接觸反應(yīng)，再加入試劑B；2.檢測上述混合溶液的OD340吸光值，根據(jù)實施例六的標準曲線得到相應(yīng)物質(zhì)的濃度。常見的62種藥物名稱以及測定結(jié)果具體參見表4。表4常見干擾藥物測定結(jié)果ID#化合物名稱等價于雌三醇的濃度(ng/mL)ID#化合物名稱等價于雌三醇的濃度(ng/mL)1阿司匹林0.032苯丙醇胺0.02β-苯基乙胺0.033普魯卡因酰胺0.03安非他命0.034普魯卡因0.04氨芐青霉素0.035奎尼丁0.05甲氨二氮卓0.036佐美酸0.06氯丙嗪0.037苯腎上腺素0.07氯拉卓酸0.038桂皮酰艾克寧0.08二甲苯氧庚酸0.039芽子堿0.09非諾洛芬0.040地西洋0.010甲基苯丙胺0.041可替寧0.011龍膽酸0.042阿替洛爾0.012吉非貝齊0.043心得安0.013氫可酮0.044苯乙哌啶酮0.014布洛芬0.045苯基丁氮酮0.015丙咪嗪0.046麥角酸二乙基酰胺0.016二氨基二苯砜0.047大麻酚0.017萘普生0.048洛哌丁胺0.018氫氯噻嗪0.049異克舒令0.019哌替啶0.050苯基丙氨酸0.020烯丙羥嗎啡酮0.051鹽酸氟西汀0.021麻黃素0.052柳丁氨醇0.022煙酰胺0.053青霉素0.023甲胺呋硫0.054甲基二乙醇胺0.024異戊巴比妥0.055二亞甲基雙氧苯丙胺0.025甲撐二氧苯丙胺0.056琥珀酸多西拉敏0.026四氫大麻酚0.057納布啡0.027制霉菌素0.058去甲嗎啡0.028乙酰嗎啡0.059羥考酮0.029芐非他明0.060克他命0.030異丙嗪0.061苯海拉明0.031阿司帕坦0.062苯丁胺0.0測定結(jié)果顯示：上述62種常見藥物等價于雌三醇的濃度均小于0.01ng/mL。由此可見，本發(fā)明的抗體是抗雌三醇的特異性抗體，與其它藥物無交叉反應(yīng)。實施例八：相關(guān)性分析對100例臨床標本分別使用高效液相色譜法和本發(fā)明的均相酶免疫法試劑進行相關(guān)性分析，測定的數(shù)據(jù)參見表5。表5臨床樣本測定值樣本號均相酶免疫法測定值（ng/mL）高效液相色譜法測定值（ng/mL）13.263.3021.071.09321.3721.5642.732.7650.680.6661.051.0773.663.7381.991.8695.245.221011.0211.801126.7925.25121.261.23130.951.00142.012.07153.333.261635.2233.98173.993.891813.7714.51190.350.36201.071.08212.222.20225.736.112326.2527.432414.0014.25252.522.45261.211.242712.2212.792819.2321.05290.220.233025.8126.76317.997.663218.2017.92331.231.23340.590.603528.8028.073630.0031.99371.781.77383.213.153916.5316.00400.180.204122.5523.194236.0135.85431.161.15443.893.924515.7215.08462.052.074735.9135.03488.087.67490.931.015017.2617.06516.786.52525.034.91531.851.905424.6424.12557.287.090562.001.975734.7733.985811.9512.37591.901.76600.991.02613.263.59625.556.04632.792.83640.850.926510.519.88667.417.20671.341.406826.6228.21694.094.537036.0534.297118.8819.45724.064.27731.381.34747.287.41752.592.46760.960.977716.5715.58781.781.877923.2523.90804.063.83811.972.028227.9326.51830.520.50844.684.668522.8622.41864.274.25870.980.988835.9537.928914.4313.56908.008.979117.2517.95922.552.35933.973.78941.891.989513.5912.34962.502.629718.8016.03986.855.99991.631.6010022.0222.85對上述數(shù)據(jù)作圖，參見圖3，得到的線性方程為：y=0.9962x+0.0202，相關(guān)系數(shù)R2=0.9958，表明本發(fā)明的檢測試劑測定雌三醇臨床標本的準確度高。需要說明的是，以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書及附圖內(nèi)容所做的等效結(jié)構(gòu)或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關(guān)
技術(shù)領(lǐng)域：
，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內(nèi)。當(dāng)前第1頁1 2 3