一種單組份tmb顯色液的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種單組份TMB顯色液,每1000mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7-10g,磷酸氫二鈉16-20g,過(guò)硼酸鈉0.1-0.5g,甘油20-30ml,TMB5-40mg,10-40mlDMSO。通過(guò)將本發(fā)明所述范圍內(nèi)的單組份TMB顯色液用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段,避免了TMB顯色液在使用之間需要將A、B液混合,減少了操作時(shí)間,避免了TMB顯色液的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變,進(jìn)而提高了TMB顯色液的靈敏度;本發(fā)明所用溶劑TMB的溶劑為DMSO,以傳統(tǒng)溶劑乙醇相比,其溶解TMB的速度快,溶解充分,溶解后的溶液穩(wěn)定性更好,提高了顯色效果。
【專(zhuān)利說(shuō)明】-種單組份TMB顯色液
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及TMB顯色液領(lǐng)域,具體地,涉及一種單組份TMB顯色液。
【背景技術(shù)】
[0002] TMB是一種過(guò)氧化物酶底物,用于ELISA反應(yīng)。底物產(chǎn)生一種可溶性淡藍(lán)色的末端 產(chǎn)物,可在370或635nm在分光光度計(jì)上讀取。其適用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段的定量 和定性分析。其檢驗(yàn)的原理是:當(dāng)標(biāo)記在抗體或抗原上的酶與顯色液中的TMB、雙氧水等反 應(yīng),加入終止液后溶液由無(wú)色變成黃色,黃色深淺反應(yīng)ELISA體系中抗原抗體結(jié)合的多少, 從而判斷某種抗原或抗體的多少。在通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)度吸光值,判斷免疫反應(yīng)的程度。
[0003] 現(xiàn)有市售的酶聯(lián)免疫試劑盒所采用TMB顯色劑液大多為雙組份,分A液和B液,使 用之前需要先混勻,在使用上存在缺點(diǎn)一是不夠方便,二是在包裝材料上存在成本提高和 資源浪費(fèi);三是使用中的混合過(guò)程容易造成批間質(zhì)量不均一;四是還存在穩(wěn)定性差、保存 時(shí)間短、顯色背景高、靈敏度低等的缺點(diǎn),市售的酶聯(lián)免疫試劑盒也有采用單組份的TMB顯 色液,但是現(xiàn)有的單組份TMB顯色液的穩(wěn)定性不是不是特別好。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)的TMB顯色液及其制備方法,由A液和B液等體積混合后得到,所述A 液各組分的摩爾濃度為:檸檬酸〇? 01-0. 5mol/L,磷酸氫二鈉0? 01-0. 5mol/L,過(guò)氧化氫 0. 01-0. 5mol/L,EDTAO. 1-lmmol/L;所述B液包括TMB、HC1和聚乙烯吡咯烷酮,所述TMB的 摩爾濃度為〇.l-lmm〇l/L,所述HC1的摩爾濃度為0. 01-0. 5mol/L,所述聚乙烯吡咯烷酮的 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為〇. 1-10% ;現(xiàn)有的單組份TMB顯色液的氧化劑為過(guò)氧化脲。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種單組份TMB顯色液,以克服現(xiàn)有顯色液操 作麻煩、穩(wěn)定性差的問(wèn)題。
[0006] 此外,本發(fā)明還包括上述單組份TMB顯色液的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明解決上述問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是:一種單組份TMB顯色液,其特征在于, 每1000mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7-10g,磷酸氫二鈉16-20g,過(guò)硼酸鈉0. 1-0. 5g 甘油 20-30ml,TMB5-40mg,10-40mlDMS0。
[0008] 現(xiàn)有的TMB顯色液一般都是由A液和B液混合得到,A液各組分的摩爾濃度 為:朽1 樣酸 〇? 〇l_〇. 5mol/L,憐酸氫二鈉 0? 01-0. 5mol/L,過(guò)氧化氫 0? 01-0. 5mol/L, EDTAO. 1-lmmol/L;所述B液包括TMB、HC1和聚乙烯吡咯烷酮,所述TMB的摩爾濃度為 0. 1-lmmol/L,所述HC1的摩爾濃度為0. 01-0. 5mol/L,所述聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0. 1-10%,現(xiàn)有TMB顯色劑的缺點(diǎn)在于A、B兩種液體在顯色之前需要等體積混勻,操作不方 便、耗時(shí)間、效率較低、批此之間存在差異,同時(shí)成本也高,且A液B液自混合的過(guò)程中,HC1 會(huì)揮發(fā),會(huì)導(dǎo)致顯色的有效成分的濃度發(fā)生改變,因而會(huì)導(dǎo)致混合后的TMB顯色液的在顯 色過(guò)程中的靈敏度降低;本發(fā)明為單組份TMB顯色液,避免了TMB顯色液在使用之間需要 將A、B液混合的操作步驟,簡(jiǎn)化操作流程,減少了操作時(shí)間,提高了效率,同時(shí)避免了因A、B 液不同批次間的差異導(dǎo)致混合的顯色劑的顯色效果;不會(huì)存在因HC1揮發(fā)導(dǎo)致的TMB顯色 液的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變,進(jìn)而提高了TMB顯色液的靈敏度;并且,本發(fā)明將傳統(tǒng) 溶劑乙醇替換成DMSO,DMSO為一種極性非質(zhì)子溶劑,具有較好的滲透性,能與有機(jī)溶劑、水 互溶,因此,DMSO能加快TMB的溶解,使之溶解的更充分,且使溶解后的溶液更穩(wěn)定,提高了 穩(wěn)定性好的單組份TMB顯色液具有更好的顯色效果;本發(fā)明用過(guò)硼酸鈉替代現(xiàn)有的過(guò)氧化 氫、過(guò)氧化脲,實(shí)驗(yàn)證明,與過(guò)氧化氫、過(guò)氧化脲相比,過(guò)硼酸鈉具有更好的氧化性。
[0009] 進(jìn)一步地,DMS0為20-30mL。20-30mL的DMS0具有較快的溶解速度,溶解的更充 分,穩(wěn)定性更好。
[0010] 進(jìn)一步地,檸檬酸為9-10g,磷酸氫二鈉18-20g。
[0011] 實(shí)驗(yàn)證明,檸檬酸為9-10g,磷酸氫二鈉18-20g的TMB顯色液具有更好的穩(wěn)定性。
[0012] 進(jìn)一步地,TMB的質(zhì)量設(shè)置為10-30mg。將TMB的質(zhì)量設(shè)置為10-30mg能有效的提 高顯色效果,提高顯色的靈敏度。
[0013] 一種單組份TMB顯色液的應(yīng)用,將所述的單組份TMB顯色液應(yīng)用到酶聯(lián)免疫試劑 盒。
[0014] 綜上,本發(fā)明的有益效果是: 1、通過(guò)將本發(fā)明所述范圍內(nèi)的單組份TMB顯色液用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階段,避 免了TMB顯色液在使用之間需要將A、B液混合的操作步驟,減少了操作時(shí)間,提高了效率, 同時(shí)避免了因A、B液不同批次間的差異導(dǎo)致混合的顯色劑的顯色效果。
[0015] 2、通過(guò)將本發(fā)明所述范圍內(nèi)的單組份TMB顯色液用于酶聯(lián)免疫反應(yīng)中的顯色階 段,避免了TMB顯色液的有效顯色成分的濃度發(fā)生改變,進(jìn)而提高了TMB顯色液的靈敏度。[0016] 3、本發(fā)明所用的溶劑為DMS0,以傳統(tǒng)溶劑乙醇相比,其溶解TMB的速度快,溶解充 分,溶解后的溶液穩(wěn)定性更好,使得顯色效果更好。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例,對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步地的詳細(xì)說(shuō)明,但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0018] 實(shí)施例1 : 一種單組份TMB顯色液,每1000mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7g,磷酸氫二鈉 16g,過(guò)硼酸鈉 0?lg,甘油 20ml,TMB5mg,lOmLDMSO。
[0019] 實(shí)施例2: 一種單組份TMB顯色液,每1000mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7g,磷酸氫二鈉 16g,過(guò)硼酸鈉 0?lg,甘油 20ml,TMB5mg,20mLDMS0。
[0020] 實(shí)施例3 : 一種單組份TMB顯色液,每1000mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7g,磷酸氫二鈉 16g,過(guò)硼酸鈉 0?lg,甘油 20ml,TMB5mg,30mLDMS0。
[0021] 實(shí)施例4: 一種單組份TMB顯色液,每1000mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸7g,磷酸氫二鈉 16g,過(guò)硼酸鈉 0?lg,甘油 20ml,TMB5mg,40mLDMS0。
[0022] 實(shí)施例5 : 一種單組份TMB顯色液,每lOOOmL的顯色液包括以下組分:檸檬酸10g,磷酸氫二鈉 20g,過(guò)硼酸鈉 0? 5g,甘油 30ml,TMBlOmg,20mlDMS0。
[0023] 實(shí)施例6 : 一種單組份TMB顯色液,每lOOOmL的顯色液包括以下組分:檸檬酸10g,磷酸氫二鈉 20g,過(guò)硼酸鈉 0? 5g,甘油 30ml,TMB30mg,30mlDMS0。
[0024] 實(shí)施例7 : 一種單組份TMB顯色液,每1000mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸9g,磷酸氫二鈉 18g,過(guò)硼酸鈉 0. 2g,甘油 20ml,TMB20mg,20mlDMS0。
[0025] 實(shí)施例8: 一種單組份TMB顯色液,每1000mL的顯色液包括以下組分:檸檬酸9g,磷酸氫二鈉 18g,過(guò)硼酸鈉 0? 2g,甘油 20ml,TMB30mg,40mlDMS0。
【權(quán)利要求】
1. 一種單組份TMB顯色液,其特征在于,每lOOOmL的顯色液包括以下組分:檸檬酸 7-10g,磷酸氫二鈉 16-20g,過(guò)硼酸鈉 0? 1-0. 5g 甘油 20-30ml,TMB5-40mg,10-40mlDMS0。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種單組份TMB顯色液,其特征在于,所述DMS0為20-30mL。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種單組份TMB顯色液,其特征在于,所述檸檬酸為 9-10g,磷酸氫二鈉 18-20g。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種單組份TMB顯色液,其特征在于,所述TMB的質(zhì)量設(shè) 置為 10-30mg。
5. -種如權(quán)利要求1或2所述的穩(wěn)定性好的單組份TMB顯色液的應(yīng)用,其特征在于,將 所述的單組份TMB顯色液應(yīng)用到酶聯(lián)免疫試劑盒。
【文檔編號(hào)】G01N33/543GK104459110SQ201410685229
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月25日
【發(fā)明者】楊秦, 張志新, 何遠(yuǎn)立, 葉正義 申請(qǐng)人:成都威爾諾生物科技有限公司