一種熒光石墨烯量子點(diǎn)抑制過(guò)氧化物酶活性的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種熒光石墨烯量子點(diǎn)抑制過(guò)氧化物酶活性的方法，包括1)將碳源加入一定量水配制混合溶液，加熱此溶液至水分完全蒸發(fā)后轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中，加熱反應(yīng)一段時(shí)間后將產(chǎn)物溶于水中，用堿液調(diào)節(jié)體系pH值中性，提純產(chǎn)物、干燥后得到固體石墨烯量子點(diǎn)。2)將1)所得的量子點(diǎn)分散于二次蒸餾水，取適量量子點(diǎn)溶液、酶溶液加入緩沖溶液中，一段時(shí)間后加入顯色劑、H2O2，將此混合溶液搖勻后迅速加入到比色皿中，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物最大吸收波長(zhǎng)處的吸光值，并作空白樣品對(duì)照，以此確定酶的相對(duì)活性。采用廉價(jià)易得的原料制備石墨烯量子點(diǎn)，綠色環(huán)保。石墨烯量子點(diǎn)與酶蛋白之間的相互作用可以改變酶的結(jié)構(gòu)，實(shí)現(xiàn)酶活性的調(diào)節(jié)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種熒光石墨烯量子點(diǎn)抑制過(guò)氧化物酶活性的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于化工領(lǐng)域，特別涉及一種熒光石墨烯量子點(diǎn)抑制過(guò)氧化物酶活性的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]納米材料是三維中至少有一維處于納米級(jí)別的材料，當(dāng)處于納米尺度時(shí)，材料所具備的某些性能也隨之發(fā)生明顯的改變，同時(shí)會(huì)具有一些不同于普通材料的特殊性能，如小尺寸效應(yīng)、量子限域效應(yīng)、宏觀量子隧道效應(yīng)，表面效應(yīng)等。這些特殊的效應(yīng)賦予納米材料獨(dú)特的物理化學(xué)、電學(xué)、力學(xué)及熱學(xué)性質(zhì)，已被廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。近年來(lái)，研究納米材料在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用也受到密切的關(guān)注。隨著納米材料在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域展示出越來(lái)越廣闊的應(yīng)用前景，研究納米材料與生物分子、細(xì)胞以及生物體之間的相互作用就顯得尤為重要。然而，由于大多數(shù)的納米材料都含有金屬元素，在生物學(xué)中具有潛在的生物毒性，這限制了它們?cè)谏镝t(yī)學(xué)上的使用。而碳元素是人體內(nèi)最重要的元素之一，因此，碳納米材料被認(rèn)定為最有前景的一類(lèi)納米材料，各式各樣的碳納米材料也隨之產(chǎn)生，其中包括零維的富勒烯、一維的碳納米管和二位的石墨烯等。尤其是石墨烯的出現(xiàn)(Rao, C.N.R.；Biswas, Κ.；Subrahmanyam, K.S.；Govindaraj, A.J.Mater.Chem.2009, 19, 2457-2469.)，引起了諸多研究者的關(guān)注，氧化石墨烯除了具有特殊的物理化學(xué)性質(zhì)外，表面還含有大量的富氧基團(tuán)，如環(huán)氧基、羥基、羧基和羰基，這些官能團(tuán)使得石墨烯具有表現(xiàn)出了優(yōu)異生物相容性，更為重要的是，通過(guò)表面基團(tuán)可以直接進(jìn)行物理化學(xué)修飾，從而豐富了石墨烯在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用。然而，二維的石墨烯在常用的溶劑中容易聚集和分散性差，這限制了它的廣泛應(yīng)用。石墨烯量子點(diǎn)(GQDs)的出現(xiàn)彌補(bǔ)了石墨烯分散性差這一缺點(diǎn)。石墨烯量子點(diǎn)(Zhang, Z.；Zhang, J.；Chen, N.;etal.Energy&Environmental Science,2012,5 (10):8869—8890.),它的三個(gè)維度的尺寸都處于納米尺度的新型碳納米材料，其原料豐富廉價(jià)易得，具有優(yōu)異的水溶性，低細(xì)胞毒性，除了具有石墨烯的特殊結(jié)構(gòu)和性質(zhì)外，還具有獨(dú)特的發(fā)光性質(zhì)。
[0003]蛋白質(zhì)和酶活性的調(diào)節(jié)在生物體內(nèi)有著非常重要的作用，如細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、DNA復(fù)制及新陳代謝，酶功能的紊亂會(huì)導(dǎo)致很多疾病的產(chǎn)生，更有甚者會(huì)導(dǎo)致死亡的發(fā)生。納米材料具有特殊的物理化學(xué)性質(zhì)，可以通過(guò)與酶的相互作用實(shí)現(xiàn)對(duì)酶結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)，從而達(dá)到對(duì)酶活性調(diào)節(jié)的目的。
[0004]石墨烯及其衍生物可以通過(guò)靜電吸附、輸水作用或π-π吸附和酶相互作用(Tan, X.；Feng, L.；Zhang, J.；Yang, K.；Zhang, S.；Liu, Z.；Peng, R.ACS appliedmaterials&interfaces 2013, 1370-1377),選擇性的改變酶的結(jié)構(gòu),進(jìn)而改變酶的活性。由于石墨烯量子點(diǎn)具有石墨烯的特殊結(jié)構(gòu)，又因?yàn)楹铣删G色、生物相容性好以及對(duì)酶有很好的調(diào)節(jié)作用，因此，可以代替石墨烯與酶相互作用，實(shí)現(xiàn)酶的活性的調(diào)節(jié)。有很強(qiáng)的抑制酶的活性的納米材料可以作為酶的抑制劑，用臨床上疾病的治療。加上石墨烯量子點(diǎn)發(fā)光的特性，可直接用于生物成像。因此，石墨烯量子點(diǎn)作為酶的調(diào)節(jié)劑具有很廣闊的應(yīng)用前景。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題就是針對(duì)現(xiàn)有的氧化石墨作為酶的調(diào)節(jié)劑存在分散性差，尺寸在微米級(jí)，容易限制酶結(jié)構(gòu)的打開(kāi)，干擾酶活性的不足，提供一種新的酶調(diào)節(jié)劑的制備方法及用于對(duì)酶活性的調(diào)劑。高壓反應(yīng)制備方法原料廉價(jià)易得，綠色環(huán)保，不會(huì)造成環(huán)境污染，制備的石墨烯量子點(diǎn)水溶性好，表面具有大量的基團(tuán)，具有較好的生物相容性，此外還具有較高的熒光強(qiáng)度和熒光穩(wěn)定性，與酶相互作用后具有抑制酶的活性的作用，且對(duì)酶穩(wěn)定性具有一定程度的提高。
[0006]本發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛的研究和反復(fù)的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用碳水化合物為原料、氨基酸類(lèi)為表面鈍化劑，高壓反應(yīng)制備出石墨烯量子點(diǎn)，然后利用該石墨烯量子點(diǎn)與酶間的特殊的相互作用，實(shí)現(xiàn)了酶活性的調(diào)節(jié)。本發(fā)明人進(jìn)一步對(duì)石墨烯量子點(diǎn)制備件以及石墨烯量子點(diǎn)與酶相互作用進(jìn)行優(yōu)化選擇，最終發(fā)現(xiàn)石墨烯量子點(diǎn)與酶相互作用后可作為酶的抑制劑抑制酶的活性。
[0007]本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是:一種熒光石墨烯量子點(diǎn)抑制過(guò)氧化物酶活性的方法。包括
[0008]1)石墨烯量子點(diǎn)的制備:將碳源或碳源和表面鈍化劑按一定比例混合，加入一定量水配制混合溶液，加熱此混合溶液至水分完全蒸發(fā)后轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中，加熱至一定溫度下反應(yīng)一段時(shí)間。在反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶于一定體積的水中，用堿液調(diào)節(jié)體系pH值至中性，用透析袋(截留分子量lOOODa)透析后得到均勻溶液，干燥后得到固體石墨烯量子點(diǎn)。
[0009]2)將1)所得的石墨烯量子點(diǎn)分散于二次蒸餾水形成濃度為10?10000 μ g/mL的穩(wěn)定的石墨烯量子點(diǎn)溶液，取適量此量子點(diǎn)溶液、酶溶液按一定比例加入到緩沖溶液中，室溫放置一段時(shí)間，加入顯色劑、h202標(biāo)準(zhǔn)溶液，將此混合溶液搖勻后迅速加入到比色皿中，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物在最大吸收波長(zhǎng)處lOmin時(shí)的吸光值，并作空白樣品對(duì)照，以此確定酶的相對(duì)活性。
[0010]2、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)所述的碳源是檸檬酸、葡萄糖、果糖、蔗糖或甘油等碳水化合物中的任何一種。表面鈍化劑是賴(lài)氨酸、半胱氨酸或甘氨酸中的任何一種。表面鈍化劑與碳源的比例為0?1。
[0011]3、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟1)所述的反應(yīng)溫度為180?280°C,反應(yīng)時(shí)間為0.5?3h。所述的堿液為氫氧化鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鉀中的任何一種。
[0012]4、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述的酶為辣根過(guò)氧化物酶、細(xì)胞色素等具有過(guò)氧化物酶特性的酶中的任何一種。其濃度為50ng/mL?1000ng/mL。
[0013]5、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述的緩沖溶液的pH值為4-9，石墨烯量子點(diǎn)和酶的反應(yīng)時(shí)間為0?2h。
[0014]6、如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟，2)所述的顯色劑為四甲基聯(lián)苯胺、二氨基聯(lián)苯胺或鄰苯二胺中的任何一種。顯色劑的濃度為0.1?5mM，H202標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為0.1?ImM。
[0015]本發(fā)明的一種熒光石墨烯量子點(diǎn)抑制過(guò)氧化物酶活性的方法較佳實(shí)施例包括以下步驟:
[0016]1)石墨烯量子點(diǎn)的制備:將檸檬酸和賴(lài)氨酸按2:1混合，加入5mL水配制混合溶液，加熱此混合溶液至水分完全蒸發(fā)后轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中，加熱至20(TC反應(yīng)3h。在反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶于一定體積的水中，用1M氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系pH值值中性，用透析袋(截留分子量lOOODa)透析后得到均勻溶液，冷凍干燥后得到固體石墨烯量子點(diǎn)。
[0017]2)將1)所得的石墨烯量子點(diǎn)分散于二次蒸餾水形成濃度為10?10000 μ g/mL的穩(wěn)定的石墨烯量子點(diǎn)溶液，取適量此量子點(diǎn)溶液、酶溶液按一定比例加入到緩沖溶液中，室溫放置lOmin，，加入顯色劑四甲基聯(lián)苯胺、H202標(biāo)準(zhǔn)溶液，將此混合溶液搖勻后迅速加入到比色皿中，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物在最大吸收波長(zhǎng)處lOmin時(shí)的吸光值，并作空白樣品對(duì)照，以此確定酶的相對(duì)活性。
[0018]在該較佳實(shí)施例中，以檸檬酸為碳源、賴(lài)氨酸為表面鈍化劑高壓反應(yīng)制備石墨烯量子點(diǎn)。冷卻后將所得到的量子點(diǎn)用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)體系的pH值至中性，透析提純，冷凍干燥收集固體。重新分散于二次蒸餾水中，并加入至一定量辣根過(guò)氧化物酶的溶液中，反應(yīng)lOmin后用紫外分光光度計(jì)在652nm處進(jìn)行時(shí)間掃描。研究表明，所得到的石墨烯量子點(diǎn)對(duì)辣根過(guò)氧化物酶的催化活性具有一定程度的抑制，且對(duì)酶的熱穩(wěn)定性有所提高。
[0019]本發(fā)明所用的原料或試劑除特別說(shuō)明之外，均市售可得。
[0020]本發(fā)明的各優(yōu)選方案和互相組合使用。
[0021]相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果如下:
[0022](1)采用碳水化合物為原料制備石墨烯量子點(diǎn)，原料廉價(jià)易得，，這大大降低了成本，同時(shí)也避免了使用有毒物質(zhì)，制備過(guò)程綠色環(huán)保，并且能夠大量生產(chǎn)。相比于其他的酶活性調(diào)節(jié)劑，生物毒性小。
[0023](2)石墨烯量子點(diǎn)具有尺寸小，能夠深入到酶結(jié)構(gòu)的各個(gè)部分，使得兩者之間的相互作用更加充分，更有利于酶活性的調(diào)節(jié)，這有效的解決了氧化石墨因?yàn)槠瑢虞^大束縛酶在反應(yīng)過(guò)程中性能的充分發(fā)，使用石墨烯量子點(diǎn)與酶等蛋白質(zhì)相互作用，解決了石墨烯等較大顆粒容易產(chǎn)生的聚集等缺點(diǎn)，從而使所得到的石墨烯量子點(diǎn)在酶活性調(diào)節(jié)方面明顯優(yōu)于現(xiàn)有調(diào)節(jié)劑。
[0024](2)石墨烯量子點(diǎn)具有較強(qiáng)的熒光，可代替其他熒光物質(zhì)直接用于生物成像方面，而不需要生物分子或細(xì)胞與其他成像物質(zhì)相互作用，可廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。

【具體實(shí)施方式】
[0025]下面用實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受其限制。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。本發(fā)明中所述的“室溫”、“常壓”是指日常操作間的溫度和氣壓，一般為25 °C，一大氣壓。
[0026]下述實(shí)施例中，所用的紫外分光光度計(jì)為T(mén)U-1901紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)。
[0027]實(shí)施例1
[0028]將4g檸檬酸、lg甘氨酸加入到5mL水配制混合溶液，加熱此混合溶液至水分完全蒸發(fā)后轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中，加熱至220°C反應(yīng)3h。在反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶于一定體積的水中，用1M氫氧化鈉調(diào)節(jié)體系pH值至中性，用透析袋(截留分子量lOOODa)透析后得到均勻溶液，干燥后得到固體石墨烯量子點(diǎn)。將所得的石墨烯量子點(diǎn)分散于二次蒸餾水形成濃度為750 μ g/mL的穩(wěn)定的石墨烯量子點(diǎn)溶液，取200 μ L此量子點(diǎn)溶液、100 μ L 200ng/mL辣根過(guò)氧化物酶加入到4mL pH值為4的醋酸緩沖溶液中，室溫放置30min，加入200 μ L 5mM顯色劑四甲基聯(lián)苯胺、500 μ L ImM H202標(biāo)準(zhǔn)溶液，將此混合溶液搖勻后迅速加入到比色皿中，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物在最大吸收波長(zhǎng)652nm處lOmin時(shí)的吸光值，并作空白樣品對(duì)照，得到酶的相對(duì)活性是純酶的65%。
[0029]實(shí)施例2
[0030]將4g檸檬酸、2g賴(lài)氨酸加入5mL水配制混合溶液，加熱此混合溶液至水分完全蒸發(fā)后轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中，加熱至200°C反應(yīng)3h。在反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶于一定體積的水中，用1M氫氧化鈉調(diào)節(jié)體系pH值至中性，用透析袋(截留分子量lOOODa)透析后得到均勻溶液，干燥后得到固體石墨烯量子點(diǎn)。將所得的石墨烯量子點(diǎn)分散于二次蒸餾水形成濃度為200 μ g/mL的穩(wěn)定的石墨烯量子點(diǎn)溶液，取200 μ L此量子點(diǎn)溶液、100 μ L 500ng/mL辣根過(guò)氧化物酶加入到4mL pH值為9的磷酸緩沖溶液中，室溫放置2h，加入200 μ L 0.5mM顯色劑四甲基聯(lián)苯胺、500yL ImM H202標(biāo)準(zhǔn)溶液，將此混合溶液搖勻后迅速加入到比色皿中，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物在最大吸收波長(zhǎng)652nm處lOmin時(shí)的吸光值，并作空白樣品對(duì)照，得到酶的相對(duì)活性是純酶的50%。
[0031]實(shí)施例3
[0032]將2g檸檬酸、lg甘氨酸按加入5mL水配制混合溶液，加熱此混合溶液至水分完全蒸發(fā)后轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中，加熱至250°C反應(yīng)2h。在反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶于一定體積的水中，用1M碳酸氫鈉調(diào)節(jié)體系pH值至中性，用透析袋(截留分子量lOOODa)透析后得到均勻溶液，干燥后得到固體石墨烯量子點(diǎn)。將所得的石墨烯量子點(diǎn)分散于二次蒸餾水形成濃度為250 μ g/mL的穩(wěn)定的石墨烯量子點(diǎn)溶液，取200 μ L此量子點(diǎn)溶液、100 μ L 500ng/mL辣根過(guò)氧化物酶加入到4mL pH值為4的醋酸緩沖溶液中，室溫放置1.5h，加入200 μ L 5mM顯色劑二氨基聯(lián)苯胺、500 μ L 0.5mM H202標(biāo)準(zhǔn)溶液，將此混合溶液搖勻后迅速加入到比色皿中，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物在最大吸收波長(zhǎng)420nm處lOmin時(shí)的吸光值，并作空白樣品對(duì)照，得到酶的相對(duì)活性是純酶的65%。
[0033]實(shí)施例4
[0034]將10g檸檬酸、5g賴(lài)氨酸加入10mL水配制混合溶液，加熱此混合溶液至水分完全蒸發(fā)后轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中，加熱至20(TC反應(yīng)2.5h。在反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶于一定體積的水中，用1M氫氧化鈉調(diào)節(jié)體系pH值至中性，用透析袋(截留分子量lOOODa)透析后得到均勻溶液，干燥后得到固體石墨烯量子點(diǎn)。將所得的石墨烯量子點(diǎn)分散于二次蒸餾水形成濃度為500 μ g/mL的穩(wěn)定的石墨烯量子點(diǎn)溶液，取200 μ L此量子點(diǎn)溶液、100 μ L 250ng/mL細(xì)胞色素加入到4mL pH值為7的磷酸緩沖溶液中，室溫放置lh，加入200 μ L ImM顯色劑四甲基聯(lián)苯胺、500 μ L 0.5mM H202標(biāo)準(zhǔn)溶液，將此混合溶液搖勻后迅速加入到比色皿中，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物在最大吸收波長(zhǎng)652nm處lOmin時(shí)的吸光值，并作空白樣品對(duì)照，得到酶的相對(duì)活性是純酶的60%。
[0035]實(shí)施例5
[0036]將2g葡萄糖加入5mL水配制混合溶液,加熱此混合溶液至水分完全蒸發(fā)后轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中，加熱至180°C反應(yīng)3h。在反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶于一定體積的水中，調(diào)節(jié)體系pH值至中性，用透析袋(截留分子量lOOODa)透析后得到均勻溶液，干燥后得到固體石墨烯量子點(diǎn)。將所得的石墨烯量子點(diǎn)分散于二次蒸餾水形成濃度為1000 μ g/mL的穩(wěn)定的石墨烯量子點(diǎn)溶液，取200 μ L此量子點(diǎn)溶液、100 μ L 100ng/mL辣根過(guò)氧化物酶加入到4mL pH值為6的磷酸緩沖溶液中，室溫放置30min，加入200 μ L 5mM顯色劑二氨基聯(lián)苯胺、500 uL ImM H202標(biāo)準(zhǔn)溶液，將此混合溶液搖勻后迅速加入到比色皿中，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物在最大吸收波長(zhǎng)420nm處lOmin時(shí)的吸光值，并作空白樣品對(duì)照，得到酶的相對(duì)活性是純酶的80%。
[0037]實(shí)施例6
[0038]將10g檸檬酸和5g半胱氨酸混合后加入10mL水配制混合溶液，加熱此混合溶液至水分完全蒸發(fā)后轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中，加熱至20(TC反應(yīng)3h。在反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶于一定體積的水中，用1M碳酸氫鈉調(diào)節(jié)體系pH值至中性，用透析袋(截留分子量lOOODa)透析后得到均勻溶液，干燥后得到固體石墨烯量子點(diǎn)。將所得的石墨烯量子點(diǎn)分散于二次蒸餾水形成濃度為10000 μ g/mL的穩(wěn)定的石墨烯量子點(diǎn)溶液，取200 μ L此量子點(diǎn)溶液、100 μ L 50ng/mL辣根過(guò)氧化物酶加入到4mL pH值為4的醋酸緩沖溶液中，室溫放置lOmin，加入200 μ L 5mM顯色劑四甲基聯(lián)苯胺、500 μ L ImM H202標(biāo)準(zhǔn)溶液，將此混合溶液搖勻后迅速加入到比色皿中，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物在最大吸收波長(zhǎng)652nm處lOmin時(shí)的吸光值，并作空白樣品對(duì)照，得到酶的相對(duì)活性是純酶的70%。
【權(quán)利要求】
1.一種熒光石墨烯量子點(diǎn)抑制過(guò)氧化物酶活性的方法，包括 1)石墨烯量子點(diǎn)的制備:將碳源或碳源和表面鈍化劑按一定比例混合，加入一定量水配制混合溶液，加熱此混合溶液至水分完全蒸發(fā)后轉(zhuǎn)移至高壓反應(yīng)釜中，加熱至一定溫度下反應(yīng)一段時(shí)間。在反應(yīng)結(jié)束后，將產(chǎn)物溶于一定體積的水中，用堿液調(diào)節(jié)體系PH值至中性，用透析袋(截留分子量100Da)透析后得到均勻溶液，干燥后得到固體石墨烯量子點(diǎn)。 2)將I)所得的石墨烯量子點(diǎn)分散于二次蒸餾水形成濃度為10?10000μ g/mL的穩(wěn)定的石墨烯量子點(diǎn)溶液，取適量此量子點(diǎn)溶液、酶溶液按一定比例加入到緩沖溶液中，室溫放置一段時(shí)間，加入顯色劑、H2O2標(biāo)準(zhǔn)溶液，將此混合溶液搖勻后迅速加入到比色皿中，在紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)上測(cè)定產(chǎn)物在最大吸收波長(zhǎng)處1min時(shí)的吸光值，并作空白樣品對(duì)照，以此確定酶的相對(duì)活性。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)所述的碳源是檸檬酸、葡萄糖、果糖、蔗糖或甘油等碳水化合物中的任何一種。表面鈍化劑是賴(lài)氨酸、半胱氨酸或甘氨酸中的任何一種。表面鈍化劑與碳源的比例為O?I。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I)所述的反應(yīng)溫度為180?280°C，反應(yīng)時(shí)間為0.5?3h。所述的堿液為氫氧化鈉、碳酸氫鈉、氫氧化鉀中的任何一種。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述的酶為辣根過(guò)氧化物酶、細(xì)胞色素等具有過(guò)氧化物酶特性的酶中的任何一種。其濃度為50ng/mL?1000ng/mL。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)所述的緩沖溶液的pH值為4-9，石墨烯量子點(diǎn)和酶的反應(yīng)時(shí)間為O?2h。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟，2)所述的顯色劑為四甲基聯(lián)苯胺、二氨基聯(lián)苯胺或鄰苯二胺中的任何一種。顯色劑的濃度為0.1?5mM，H2O2標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為.0.1 ?ImM0
【文檔編號(hào)】G01N21/33GK104458729SQ201410746182
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月9日
【發(fā)明者】李在均, 周曉燕 申請(qǐng)人:江南大學(xué)