一種疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，通過選擇合適的色譜條件，特定選擇流動相組成以及梯度洗脫程序，可以同時對該藥物組成中的芍藥苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸銨、柴胡皂苷B2等有效成分進(jìn)行鑒別，克服了由于中藥藥味繁多、化學(xué)成分復(fù)雜造成的干擾以致不能全面的、清楚的對所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量進(jìn)行檢測的缺陷，實現(xiàn)了對所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物質(zhì)量的穩(wěn)定性和一致性的控制。
【專利說明】一種疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥制劑的質(zhì)量檢測領(lǐng)域，具體涉及一種疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì) 量檢測方法及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 咳嗽變異性哮喘（Coughvariantasthma,CVA)又稱隱匿型哮喘或咳嗽性哮喘，是 一種特殊類型的哮喘，咳嗽是其唯一或主要臨床表現(xiàn)，無明顯喘息、氣促等癥狀或體征，但 是由于哮喘患者的呼吸道持續(xù)存在變態(tài)反應(yīng)性的炎癥，支氣管上皮腫脹，使得氣道內(nèi)皮下 的刺激感受器興奮閥值低于正常人，因此有氣道高反應(yīng)性，對各種外界刺激物的感應(yīng)性增 高，稍有刺激就發(fā)生哮喘，并且難以治愈，容易反復(fù)發(fā)作，如感冒、冷空氣、灰塵、油煙等容易 誘發(fā)或加重咳嗽。
[0003] 咳嗽變異性哮喘主要臨床表現(xiàn)為刺激性干咳，通?？人员容^劇烈，夜間咳嗽為其 重要特征。感冒、冷空氣、灰塵、油煙等容易誘發(fā)或加重咳嗽。
[0004] 咳嗽變異性哮喘雖不會危及生命但是因其長期持續(xù)且多在夜間發(fā)作或加劇的特 征極大地降低了患者的生活質(zhì)量，若不進(jìn)行正確的早期干預(yù)治療，不僅易復(fù)發(fā)，而且易發(fā)展 成典型哮喘。又由于CVA幾乎沒有任何喘息和呼吸困難癥狀，故常被漏診、誤診、誤治，許多 患者因長期反復(fù)無效的使用抗生素和鎮(zhèn)咳藥物，導(dǎo)致病情迀延加重。
[0005] 咳嗽變異性哮喘的發(fā)病機(jī)制目前尚不完全清楚，其發(fā)病機(jī)制與典型支氣管哮喘相 同，其病理機(jī)制是由于大量細(xì)胞因子、粘附分子、炎性細(xì)胞和炎性介質(zhì)參與氣道變應(yīng)性炎 癥的調(diào)節(jié)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)對本病的治療，多以支氣管擴(kuò)張劑、吸入激素、白三烯受體調(diào)節(jié)為主，此 類藥物短期療效尚可，但是停藥后咳嗽易復(fù)發(fā)，且易產(chǎn)生耐藥和毒、副作用，患者依從性差， 也不能從根本上使氣道慢性炎癥得到有效控制，使得氣道高反應(yīng)性下降、咳嗽敏感性降低。 因而探索和尋找更有效的治療方法和藥物一直是該病研宄的一個重點。
[0006] 近年來，經(jīng)過中醫(yī)藥廣泛深入的研宄和臨床醫(yī)師多年的臨床實踐，證實其不但具 有良好的臨床療效，且彌補(bǔ)了西藥臨床療效不佳及副作用較大等不足。但是鑒于中藥是一 個由多種成分、多種因素構(gòu)成的復(fù)雜體系，其化學(xué)成分的多樣性與復(fù)雜性是其療效的物質(zhì) 基礎(chǔ)，該物質(zhì)基礎(chǔ)長久以來處于一種模糊的狀態(tài)；復(fù)方的質(zhì)量優(yōu)劣難以以明確的指標(biāo)進(jìn)行 評價，然而中藥復(fù)方的質(zhì)量不穩(wěn)定性、不可控性，直接導(dǎo)致了中藥復(fù)方治療效果的不穩(wěn)定、 不可控性。而中藥的質(zhì)量控制方法必須能對起效的全部成分如有機(jī)成分、無機(jī)成分或絡(luò)合 物成分進(jìn)行控制，只有這樣，所建立的質(zhì)量控制體系才能真正達(dá)到控制中藥質(zhì)量、保證中藥 用藥安全有效地目的。因此，建立符合中醫(yī)藥特點的現(xiàn)代質(zhì)量控制體系，攻克中藥質(zhì)量分析 與評價的難題，改進(jìn)中藥現(xiàn)有質(zhì)量控制方法已經(jīng)成為人們積極研宄的課題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢 測方法及其應(yīng)用，克服了由于中藥藥味繁多、化學(xué)成分復(fù)雜造成的干擾以致不能全面的、清 楚的對所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量進(jìn)行檢測的缺陷，提高了所述疏風(fēng)止咳的中藥組 合物質(zhì)量的穩(wěn)定性、一致性和可控性。
[0008] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方 法，所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的原料藥組成為：柴胡6-10重量份、黃芩6-10重量份、荊芥 6-10重量份、防風(fēng)6-10重量份、蜜款冬花6-10重量份、炒苦杏仁6-9重量份、炒白芍10-15 重量份、烏梅6_10重量份、穿山龍10-15重量份、虎杖10-15重量份、射干6_10重量份、生 甘草3-6重量份；
[0009] 所述中藥組合物的質(zhì)量檢測方法包括如下含量檢測的步驟：
[0010] A、芍藥苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸銨、柴胡皂苷氏的含量檢 測：
[0011] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物1克，研細(xì)，加入體積濃度為90-100%的甲 醇溶液10-30ml，超聲處理0. 5-1小時，放冷，搖勾，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0012] 對照品溶液的制備：另取芍藥苷對照品、升麻素苷對照品、虎杖苷對照品、甘草苷 對照品、射干苷對照品、甘草酸銨對照品、柴胡皂苷B2對照品適量，精密稱定，加體積濃度為 90-100%的甲醇溶液制成每Iml分別含芍藥苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘 草苷30μg、射干苷25μg、甘草酸按30μg和柴胡阜苷Β225μg的混合溶液，即得；
[0013] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定：色譜柱：以十八烷基硅烷 鍵合娃膠為填充劑，柱長為l〇cm，內(nèi)徑為4. 6mm，粒徑為2. 6μπι;流動相：以乙腈為流動相 Α，以0. 05%磷酸溶液為流動相Β，按照以下程序進(jìn)行梯度洗脫：0-25min，流動相A:流動相 B的體積比為10% :90% - 10% :90% ;25-26min，流動相A:流動相B的體積比為10% : 90% - 14% :86% ;26-35min，流動相A:流動相B的體積比為 14% :86% - 14% :86% ; 35_36min，流動相A:流動相B的體積比為14% :86%- 34% :66% ;36_54· 5min，流動相A: 流動相B的體積比為34% :66% - 34% :66% ;54. 5-55min，流動相A:流動相B的體積比 為 34% :66%- 10% :90% ;55-60min，流動相A:流動相B的體積比為 10% :90%- 10% : 90% ;控制流動相流速為0. 5-1. 5ml/min;控制柱溫為20-40°C;檢測波長：240-260nm;
[0014] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-10μ1，注入液相色譜儀，測 定并計算。
[0015] 優(yōu)選的，所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，所述中藥組合物的質(zhì)量 檢測方法包括如下含量檢測步驟：
[0016]Α、芍藥苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸銨、柴胡皂苷氏的含量檢 測：
[0017] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物1克，研細(xì)，加入甲醇20ml，超聲處理 40min，所述超聲的功率為200-300?，頻率為30-50kHz，放冷，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0018] 對照品溶液的制備：另取芍藥苷對照品、升麻素苷對照品、虎杖苷對照品、甘草苷 對照品、射干苷對照品、甘草酸銨對照品、柴胡皂苷B2對照品適量，精密稱定，加體積濃度為 100 %的甲醇溶液制成每Iml分別含茍藥苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草苷 30μg、射干苷25μg、甘草酸銨30μg和柴胡皂苷Β225μg的混合溶液，即得；
[0019] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定：色譜柱：以十八烷基硅烷 鍵合娃膠為填充劑，柱長為l〇cm，內(nèi)徑為4. 6mm，粒徑為2. 6μπι;流動相：以乙腈為流動相 A，以0. 05 %磷酸溶液為流動相B進(jìn)行梯度洗脫；控制流動相流速為0. 8ml/min;控制柱溫 為30°C;檢測波長：250nm;
[0020] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-10μ1，注入液相色譜儀，測 定并計算。
[0021 ] 所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，所述中藥組合物的質(zhì)量檢測方法 還包括如下含量測定方法中的至少一種：
[0022] B、黃芩的含量測定：
[0023] 供試品溶液的制備：精密稱定所述中藥組合物0. 5克，精密加入60-80%乙醇溶液 40-60ml，超聲處理0. 5-1小時，放冷，用60-80%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取 續(xù)濾液，即得；
[0024] 對照品溶液的制備：取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加90-100%甲醇溶液制成 每Iml含150μg黃芩苷的溶液，即得；
[0025] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基鍵合硅膠為填 充劑；以體積比為18-26% :74-82%的乙腈-0. 05%磷酸溶液為流動相：控制流動相流速為 0. 5-1. 5ml/min;控制柱溫為20-40°C;檢測波長：270-290nm，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算 不低于2000;
[0026] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1-5μ1，注入液相色譜儀，測 定并計算，即得；或
[0027]C、炒白芍的含量測定：
[0028] 供試品溶液的制備：精密稱定所述中藥組合物1克，精密加入體積濃度為60-80% 乙醇溶液20-30ml，超聲處理0. 5-1小時，放冷，用體積濃度為60-80%乙醇溶液補(bǔ)足減失的 重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0029] 對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加體積濃度為90-100%的 甲醇溶液制成每Iml含100μg芍藥苷的溶液，即得；
[0030] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基鍵合硅膠為填 充劑；以體積比為8-16% :84-92%的乙腈-0.05%磷酸溶液為流動相；控制流動相流速為 0. 5-1. 5ml/min;控制柱溫為20-40°C;檢測波長240-260nm;理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算不 低于2000;
[0031] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各3-10μ1，注入液相色譜儀，測 定并計算，即得。
[0032] 優(yōu)選的，所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，所述中藥組合物的質(zhì)量 檢測方法還包括如下含量測定方法中至少一種：
[0033]B、黃芩的含量測定：
[0034] 供試品溶液的制備：精密稱定所述中藥組合物0. 5克，精密加入70%乙醇溶液 50ml，超聲處理40min，所述超聲的功率為200-300W，頻率為30-50kHz，放冷，用70 %乙醇溶 液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0035] 對照品溶液的制備：取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含150μg 黃芩苷的溶液，即得；
[0036]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基鍵合硅膠為填 充劑；以體積比為22% :78 %的乙腈-0. 05 %磷酸溶液為流動相：控制流動相流速為lml/min;控制柱溫為25°C;檢測波長：280nm，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于2000。
[0037] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1-5μ1，注入液相色譜儀，測 定并計算，即得；或
[0038]C、炒白芍的含量測定：
[0039] 供試品溶液的制備：精密稱定所述中藥組合物1克，精密加入體積濃度為70%乙 醇溶液25ml，超聲處理40min，所述超聲的功率為200-300?，頻率為30-50kHz，放冷，用體積 濃度為70%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0040] 對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加體積濃度為90-100%的 甲醇溶液制成每Iml含100μg芍藥苷的溶液，即得；
[0041] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基鍵合硅膠為填 充劑；以體積比為12% :88%的乙腈-0. 05%磷酸溶液為流動相；控制流動相流速為Iml/ min;控制柱溫為25°C;檢測波長250nm;理論塔板數(shù)按茍藥苷峰計算不低于2000 ;
[0042] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各3-10μ1，注入液相色譜儀，測 定并計算，即得。
[0043] 所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，所述中藥組合物的質(zhì)量檢測方法 還包括如下至少一種定性鑒別的方法：
[0044] D、烏梅的鑒別：
[0045] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物3g，研細(xì)，加體積比為1-3 :1的乙醚-甲醇 溶液20-40ml，超聲處理10-60分鐘，濾過，蒸干所得濾液，然后加入體積比為1-3:1-3的甲 醇-無水乙醇溶液溶解殘渣，即得；
[0046] 對照品溶液的制備：另取烏梅對照藥材lg，加體積濃度為90-100%的甲醇溶液 20-40ml，超聲處理10-60分鐘，濾過，蒸干所得濾液，加水10-30ml溶解殘渣，隨后加體積濃 度為90-100%乙醚溶液振搖提取1-3次，每次10-30ml，合并乙醚液，蒸干，用30?60°C的 石油醚浸泡殘渣1-3次，每次10_30ml，浸泡約1-3分鐘，傾去石油醚，向所述殘渣中加入無 水乙醇l-3ml溶解，即得；
[0047] 鑒別：照薄層色譜法試驗，分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各 1-5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為18-22 :3-7 :6-10 :0. 1-0. 3的環(huán)己 烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸為展開劑展開，然后取出，晾干，噴以8-12%硫酸乙醇溶液， 在102-108°C下加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的斑點；或
[0048]E、炒苦杏仁的鑒別：
[0049] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物2g，研細(xì)，加20-40ml的30?60°C水溶解， 冷卻，離心，取上清液通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，所述大孔吸附樹脂柱內(nèi)徑為I. 5cm，柱 高為l〇cm，用70-90ml水洗脫，棄去水洗脫液，再用70-90ml體積濃度為10-30%的乙醇溶 液洗脫，棄去乙醇洗脫液，再次用90-1IOml體積濃度為40-60%的乙醇溶液洗脫，收集所述 乙醇洗脫液，減壓濃縮，向所得殘渣中加體積濃度為90-100%甲醇溶液l-3ml溶解，即得；
[0050] 對照品溶液的制備：另取苦杏仁苷對照品，加體積濃度為90-100%的甲醇溶液制 成每Iml含2mg苦杏仁苷的溶液，即得；
[0051] 鑒別：照薄層色譜法試驗，分別精密吸取上述供試品溶液和對照品溶液各 1-3μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為18-22 :8-12 :1-5 :1-3的三氯甲 烷-甲醇-冰醋酸-水溶液為展開劑，展開，然后取出，晾干，噴以含有0. 5-1. 0%磷鉬酸的 10-20 %的硫酸乙醇溶液，在102-108°C下加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照 品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；或
[0052]F、蜜款冬花的鑒別：
[0053] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物3g，研細(xì)，加體積比為1-3 :1的乙醚-甲醇 溶液20-40ml，超聲處理10-60分鐘，濾過，蒸干所得濾液，然后加入體積比為1-3:1-3的甲 醇-無水乙醇溶液溶解殘渣，即得；
[0054] 對照品溶液的制備：取蜜款冬花、款冬花對照藥材各2g，加體積濃度為90-100% 的甲醇溶液20-40ml，超聲處理10-60分鐘，濾過，蒸干所得濾液，加水10-30ml溶解殘渣，隨 后加體積濃度為90-100 %乙醚溶液振搖提取1-3次，每次加入10-30ml，合并所述乙醚液， 蒸干，用30?60°C的石油醚浸泡殘渣1-3次，每次加入10-30ml，浸泡約1-3分鐘，傾去石 油醚，向所述殘渣中加入無水乙醇l_3ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花對照品溶液；
[0055] 鑒別：照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各1?5μ1，分別點 于同一娃膠G薄層板上，以體積比為1-5:1的60?90°C的石油醚一丙酮為展開劑，展開二 次，取出，晾干，噴以8-12%硫酸乙醇溶液，在102-108°C下加熱至斑點顯色清晰；供試品色 譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0056] 優(yōu)選的，所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，所述中藥組合物的質(zhì)量 檢測方法還包括如下至少一種定性鑒別的方法：
[0057]D、烏梅的鑒別：
[0058] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物3g，研細(xì)，加體積比為2 :1的乙醚-甲醇溶 液30ml，超聲處理30分鐘，所述超聲的功率為200-300?，頻率為30-50kHz，濾過，蒸干所得 濾液，然后加入體積比為1:1的甲醇-無水乙醇溶液溶解殘渣，即得；
[0059] 對照品溶液的制備：另取烏梅對照藥材lg，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過， 蒸干所得濾液，加水20ml溶解殘渣，隨后加乙醚振搖提取2次，每次20ml，合并乙醚液，蒸 干，用30?60°C的石油醚浸泡殘渣2次，每次15ml，浸泡約1. 5分鐘，傾去石油醚，向所述 殘渣中加入無水乙醇2ml溶解，即得；
[0060] 鑒別：照薄層色譜法試驗，分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各 1-5μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20 :5 :8 :0. 1的環(huán)己烷-三氯甲烷-乙 酸乙酯-甲酸為展開劑展開，然后取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑 點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；或
[0061]E、炒苦杏仁的鑒別：
[0062] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物2g，研細(xì)，加30ml的50 °C水溶解，冷卻， 離心，取上清液通過DlOl型大孔吸附樹脂柱，所述大孔吸附樹脂柱內(nèi)徑為I. 5cm，柱高為 10cm，用80ml水洗脫，棄去水洗脫液，再用80ml體積濃度為20 %的乙醇溶液洗脫，棄去乙醇 洗脫液，再次用IOOml體積濃度為50 %的乙醇溶液洗脫，收集所述乙醇洗脫液，減壓濃縮， 向所得殘渣中加甲醇溶液Iml溶解，即得；
[0063] 對照品溶液的制備：另取苦杏仁苷對照品，加甲醇制成每Iml含2mg苦杏仁苷的溶 液，即得；
[0064] 鑒別：照薄層色譜法試驗，分別精密吸取上述供試品溶液和對照品溶液各 1-3μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20 :10 :3 :1的三氯甲烷-甲醇-冰醋 酸-水溶液為展開劑，展開，然后取出，晾干，噴以含有0.8%磷鉬酸的15%硫酸乙醇溶液， 在105°C下加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏 色的斑點；或
[0065]F、蜜款冬花的鑒別：
[0066] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物3g，研細(xì)，加體積比為2 :1的乙醚-甲醇溶 液30ml，超聲處理30分鐘，所述超聲的功率為200-300?，頻率為30-50kHz，濾過，蒸干所得 濾液，然后加入體積比為1:1的甲醇-無水乙醇溶液溶解殘渣，即得；
[0067] 對照品溶液的制備：取蜜款冬花、款冬花對照藥材各2g，加甲醇30ml，超聲處理30 分鐘，濾過，蒸干所得濾液，加水20ml溶解殘渣，隨后加乙醚振搖提取2次，每次加入20ml， 合并乙醚液，蒸干，用30?60°C的石油醚浸泡殘渣2次，每次加入15ml，浸泡約1. 5分鐘， 傾去石油醚，向所述殘渣中加入無水乙醇2ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花對照品溶液；
[0068] 鑒別：照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各1?5μ1，分別點 于同一娃膠G薄層板上，以體積比為3:1的60?90°C的石油醚一丙酮為展開劑，展開二次， 取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與 對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
[0069] 所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，所述中藥組合物的原料藥組成 為：柴胡8重量份、黃芩8重量份、荊芥8重量份、防風(fēng)8重量份、蜜款冬花8重量份、炒苦杏 仁7重量份、炒白芍13重量份、烏梅8重量份、穿山龍13重量份、虎杖13重量份、射干8重 量份、生甘草4重量份；或
[0070] 柴胡6重量份、黃苳10重量份、荊芥6重量份、防風(fēng)10重量份、蜜款冬花6重量份、 炒苦杏仁9重量份、炒白茍10重量份、烏梅10重量份、穿山龍10重量份、虎杖15重量份、 射干6重量份、生甘草6重量份；或
[0071] 柴胡10重量份、黃苳6重量份、荊芥10重量份、防風(fēng)6重量份、蜜款冬花10重量 份、炒苦杏仁6重量份、炒白芍15重量份、烏梅6重量份、穿山龍15重量份、虎杖10重量份、 射干10重量份、生甘草3重量份；或
[0072] 柴胡7重量份、黃苳9重量份、荊芥7重量份、防風(fēng)9重量份、蜜款冬花7重量份、 炒苦杏仁8重量份、炒白芍12重量份、烏梅9重量份、穿山龍12重量份、虎杖14重量份、射 干7重量份、生甘草5重量份；或
[0073] 柴胡9重量份、黃苳7重量份、荊芥9重量份、防風(fēng)7重量份、蜜款冬花9重量份、 炒苦杏仁7重量份、炒白芍14重量份、烏梅7重量份、穿山龍14重量份、虎杖11重量份、射 干9重量份、生甘草4重量份。
[0074] 所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，還包括制備所述中藥組合物的方 法，包括如下步驟：
[0075] (1)按照選定重量份數(shù)稱取柴胡、黃苳、荊芥、防風(fēng)、蜜款冬花、炒苦杏仁、炒白芍、 烏梅、穿山龍、虎杖、射干、生甘草，分別粉碎成細(xì)粉后混合或混合后粉碎成細(xì)粉，過篩備 用；
[0076] (2)取上述細(xì)粉加水提取，合并并過濾所得提取液，將所得濾液減壓濃縮獲得清 膏；
[0077] (3)將獲得的清膏進(jìn)行干燥，制成干膏粉，然后選擇性的加入常規(guī)輔料，按照常規(guī) 工藝制成臨床上可接受的劑型。
[0078] 所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，制備所述中藥組合物的方法，包 括如下步驟：
[0079] (1)按照選定重量份數(shù)稱取柴胡、黃苳、荊芥、防風(fēng)、蜜款冬花、炒苦杏仁、炒白芍、 烏梅、穿山龍、虎杖、射干、生甘草，分別粉碎成細(xì)粉后混合或混合后粉碎成細(xì)粉，過篩備 用；
[0080] ⑵取上述細(xì)粉加水煎煮1-3次，每次1-3小時，每次加入8-12倍所述細(xì)粉重量的 水，合并并過濾所得煎煮液，將所得濾液減壓濃縮至50°C下相對密度為1. 10-1. 15的清膏；
[0081] (3)將獲得的清膏進(jìn)行干燥，制成干膏粉，然后選擇性的加入常規(guī)輔料，按照常規(guī) 工藝制成臨床上可接受的劑型。
[0082] 本發(fā)明提供一種所述的質(zhì)量檢測方法在中藥組合物或藥物制劑質(zhì)量檢測領(lǐng)域中 的用途。
[0083] 本發(fā)明的上述技術(shù)方案相比現(xiàn)有技術(shù)具有以下優(yōu)點：
[0084] (1)本發(fā)明所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，通過嚴(yán)格控制高效液 相色譜的條件，選擇流動相組成以及梯度洗脫的程序，有力的克服了由于中藥藥味繁多、化 學(xué)成分復(fù)雜造成的干擾以致不能全面的、清楚的對所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量進(jìn)行 檢測的缺陷，得到以對該藥物組成中的芍藥苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸 銨、柴胡皂苷B2等有效成分的色譜峰，從而實現(xiàn)了全面的、清楚的對所述疏風(fēng)止咳的中藥組 合物進(jìn)行質(zhì)量檢測，進(jìn)一步實現(xiàn)了所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物質(zhì)量的控制，且該質(zhì)量檢測 方法具有簡單快速、穩(wěn)定可靠、精密度高、重現(xiàn)性好、易于掌握的優(yōu)勢；
[0085] (2)本發(fā)明所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，通過對供試品溶液或 對照品溶液進(jìn)行超聲處理，特定選擇了適于所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的超聲功率、頻率 以及處理時間，使得獲得的供試品溶液或?qū)φ掌啡芤焊欣谒幬锏馁|(zhì)量檢測，使得檢測 得到的色譜更精確、穩(wěn)定可靠，且該超聲處理方法具有方便，時間短，操作簡單的優(yōu)點；
[0086] (3)本發(fā)明所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，通過對黃芩和/或白 芍的含量測定，使得對所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測更全面，更完善的表征了藥 物的有效活性組分及其質(zhì)量，有利于對活性成分的全面監(jiān)控，保證了所述疏風(fēng)止咳的中藥 組合物質(zhì)量的穩(wěn)定性、一致性和可控性，并確保了所述中藥組合物的安全性和有效性；
[0087] (4)本發(fā)明所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，通過對烏梅和/或苦 杏仁的鑒別，使得對所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測更全面，更完善的表征了藥物 的有效活性組分及其質(zhì)量，有利于對活性成分的全面監(jiān)控，進(jìn)一步保證了所述疏風(fēng)止咳的 中藥組合物質(zhì)量的穩(wěn)定性、一致性和可控性，并確保了所述中藥組合物的安全性和有效性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0088] 為了使本發(fā)明的內(nèi)容更容易被清楚的理解，下面根據(jù)本發(fā)明的具體實施例并結(jié)合 附圖，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，其中
[0089] 圖1是本發(fā)明實施例2中對照品的檢測色譜圖；
[0090] 圖2是本發(fā)明實施例2中所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的檢測色譜圖；
[0091] 圖3是本發(fā)明實施例5中對照品的檢測色譜圖；
[0092] 圖4是本發(fā)明實施例5中所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的檢測色譜圖；
[0093] 圖5是本發(fā)明實施例5中所述的回歸方程的曲線圖；
[0094] 圖6是本發(fā)明實施例8中對照品的檢測色譜圖；
[0095] 圖7是本發(fā)明實施例8中所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的檢測色譜圖；
[0096] 圖8是本發(fā)明實施例8中所述的回歸方程的曲線圖；
[0097] 圖9是本發(fā)明實施例11中所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的薄層色譜圖；
[0098] 圖10是本發(fā)明實施例14中所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的薄層色譜圖；
[0099] 圖11是本發(fā)明實施例17中所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的薄層色譜圖。

【具體實施方式】
[0100] 實施例1
[0101] 本實施為所述疏風(fēng)止咳的中藥組合物的制備，具體如下：
[0102] 【處方】柴胡8重量份、黃芩8重量份、荊芥8重量份、防風(fēng)8重量份、蜜款冬花8重 量份、炒苦杏仁7重量份、炒白芍13重量份、烏梅8重量份、穿山龍13重量份、虎杖13重量 份、射干8重量份、生甘草4重量份。
[0103] 【制備方法】（1)按照選定重量份數(shù)稱取柴胡、黃芩、荊芥、防風(fēng)、蜜款冬花、炒苦杏 仁、炒白芍、烏梅、穿山龍、虎杖、射干、生甘草，分別粉碎成細(xì)粉后混合或混合后粉碎成細(xì) 粉，過篩備用；
[0104] (2)取上述細(xì)粉加水煎煮2次，每次2小時，第一次加入10倍所述細(xì)粉重量的水， 第二次加入8倍所述細(xì)粉重量的水，合并并過濾所得煎煮液，將所得濾液減壓濃縮至50°C 下相對密度為1. 13的清膏；
[0105](3)將獲得的清膏進(jìn)行干燥，制成干膏粉，然后加入甜菊素3g和二氧化硅3g和適 量糊精混合均勻，按照常規(guī)工藝制成臨床上可接受的顆粒劑。
[0106] 實施例2
[0107] 本實施例對所述中藥組合物的芍藥苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸 銨、柴胡皂苷B2的含量進(jìn)行檢測。
[0108] 取實施例1制備的所述中藥組合物進(jìn)行質(zhì)量檢測，具體包括如下步驟：
[0109] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物1克，研細(xì)，加入體積濃度為100%的甲醇 溶液20ml，超聲處理40min，所述超聲的功率為250w，頻率為40kHz，放冷，搖勻，濾過，取續(xù) 濾液，即得；
[0110] 對照品溶液的制備：另取芍藥苷對照品、升麻素苷對照品、虎杖苷對照品、甘草苷 對照品、射干苷對照品、甘草酸銨對照品、柴胡皂苷B2對照品適量，精密稱定，加體積濃度為 100 %的甲醇溶液制成每Iml分別含茍藥苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草苷 30μg、射干苷25μg、甘草酸銨30μg和柴胡皂苷Β225μg的混合溶液，即得；
[0111] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠 為填充劑，柱長為l〇cm，內(nèi)徑為4. 6mm，粒徑為2. 6μπι;以乙腈為流動相A，以0. 05%磷酸溶 液為流動相B，按照以下程序進(jìn)行梯度洗脫：0-25min，流動相A:流動相B的體積比為10%: 90% - 10% :90% ;25-26min，流動相A:流動相B的體積比為 10% :90% - 14% :86% ; 26_35min，流動相A:流動相B的體積比為14% :86%- 14% :86% ;35_36min，流動相A:流 動相B的體積比為14% :86%- 34% :66% ;36-54. 5min，流動相A:流動相B的體積比為 34% :66%-34% :66% ;54.5-55min，流動相A:流動相B的體積比為 34% :66%- 10% : 90% ;55-60min，流動相A:流動相B的體積比為10% :90%- 10% :90% ;控制流動相流速 為0· 8ml/min;控制柱溫為30°C;檢測波長：250nm;
[0112] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-10μ1，注入液相色譜儀，測 定并計算。所述對照品的譜圖見圖1所示，所述供試品檢測所得到的譜圖見圖2所示。
[0113] 可見，本實施例所述檢測方法可有效將芍藥苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干 苷、甘草酸銨、柴胡皂苷B2-次性的定性鑒別。
[0114] 實施例3
[0115] 本實施例對所述中藥組合物的芍藥苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸 銨、柴胡皂苷B2的含量進(jìn)行檢測。
[0116] 取實施例1制備的所述中藥組合物進(jìn)行質(zhì)量檢測，具體包括如下步驟：
[0117] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物1克，研細(xì)，加入體積濃度為90%的甲醇溶 液30ml，超聲處理0. 5小時，所述超聲的功率為200w，頻率為50kHz，放冷，搖勾，濾過，取續(xù) 濾液，即得；
[0118] 對照品溶液的制備：另取芍藥苷對照品、升麻素苷對照品、虎杖苷對照品、甘草苷 對照品、射干苷對照品、甘草酸銨對照品、柴胡皂苷B2對照品適量，精密稱定，加體積濃度為 90%的甲醇溶液制成每Iml分別含茍藥苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草苷 30μg、射干苷25μg、甘草酸銨30μg和柴胡皂苷Β225μg的混合溶液，即得；
[0119] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠 為填充劑，柱長為l〇cm，內(nèi)徑為4. 6mm，粒徑為2. 6μπι;以乙腈為流動相A，以0. 05%磷酸溶 液為流動相Β，按照以下程序進(jìn)行梯度洗脫：0-25min，流動相A:流動相B的體積比為10%: 90% - 10% :90% ;25-26min，流動相A:流動相B的體積比為 10% :90% - 14% :86% ; 26_35min，流動相A:流動相B的體積比為14% :86%- 14% :86% ;35_36min，流動相A:流 動相B的體積比為14% :86%- 34% :66% ;36-54. 5min，流動相A:流動相B的體積比為 34% :66%-34% :66% ;54.5-55min，流動相A:流動相B的體積比為 34% :66%- 10% : 90% ;55-60min，流動相A:流動相B的體積比為10% :90%- 10% :90% ;控制流動相流速 為I. 5ml/min;控制柱溫為20°C;檢測波長：260nm;
[0120] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-10μ1，注入液相色譜儀，測 定并計算。
[0121] 實施例4
[0122] 本實施例對所述中藥組合物的芍藥苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸 銨、柴胡皂苷B2的含量進(jìn)行檢測。
[0123] 取實施例1制備的所述中藥組合物進(jìn)行質(zhì)量檢測，具體包括如下步驟：
[0124] 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物1克，研細(xì)，加入體積濃度為95%的甲醇溶 液IOml，超聲處理1小時，所述超聲的功率為300w，頻率為30kHz，放冷，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，即得；
[0125] 對照品溶液的制備：另取芍藥苷對照品、升麻素苷對照品、虎杖苷對照品、甘草苷 對照品、射干苷對照品、甘草酸銨對照品、柴胡皂苷B2對照品適量，精密稱定，加體積濃度 為95 %的甲醇溶液制成每Iml分別含茍藥苷150μg、升麻素苷30μg、虎杖苷130μg、甘草 苷30μg、射干苷25μg、甘草酸銨30μg和柴胡皂苷Β225μg的混合溶液，即得；
[0126] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠 為填充劑，柱長為l〇cm，內(nèi)徑為4. 6mm，粒徑為2. 6μπι;以乙腈為流動相A，以0. 05%磷酸溶 液為流動相Β，按照以下程序進(jìn)行梯度洗脫：0-25min，流動相A:流動相B的體積比為10%: 90% - 10% :90% ;25-26min，流動相A:流動相B的體積比為 10% :90% - 14% :86% ; 26_35min，流動相A:流動相B的體積比為14% :86%- 14% :86% ;35_36min，流動相A:流 動相B的體積比為14% :86%- 34% :66% ;36-54. 5min，流動相A:流動相B的體積比為 34% :66%-34% :66% ;54.5-55min，流動相A:流動相B的體積比為 34% :66%- 10% : 90% ;55-60min，流動相A:流動相B的體積比為10% :90%- 10% :90% ;控制流動相流速 為0· 5ml/min;控制柱溫為40°C;檢測波長：240nm;
[0127] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-10μ1，注入液相色譜儀，測 定并計算。
[0128] 實施例5
[0129] 對實施例1制備的所述中藥組合物中的黃芩進(jìn)行含量測定，具體包括如下步驟：
[0130] 供試品溶液的制備：取裝量差異項下的所述中藥組合物，研細(xì)，取約0.5克，精 密稱定，精密加入70 %乙醇溶液50ml，超聲處理40min，所述超聲的功率為250w，頻率為 40kHz，放冷，用體積濃度為70 %乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；以 上述方法制備3個批次的樣品的供試溶液進(jìn)行檢測；
[0131] 對照品溶液的制備：取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含150μg 黃芩苷的溶液，即得；
[0132] 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基鍵合硅膠為填 充劑；以體積比為22% :78%的乙腈-0. 05 %磷酸溶液為流動相：控制流動相流速為Iml/ min;控制柱溫為25°C;檢測波長：280nm，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于2000 ;
[0133] 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1-5μ1，注入液相色譜儀，測 定并計算，即得。所述對照品的譜圖見圖3所示，所述供試品檢測所得到的譜圖見圖4所示。
[0134] 可見，本實施例所述檢測方法可有效將黃芩進(jìn)行一次性的檢測，計算并擬合待測 物的回歸方程，黃芩苷〇. 01820μg?1. 8202μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積有呈良好的線性關(guān) 系，所述回歸方程為Y= 3091x+11.03，R= 0. 9995,所述回歸方程的曲線圖見圖5所示，用 外標(biāo)一點法計算供試品中黃芩苷的含量即可。計算得到的黃芩苷含量見下表1。
[0135] 表1樣品中黃芩苷的含量
[0136]

【權(quán)利要求】
1. 一種疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述疏風(fēng)止咳的中藥組 合物的原料藥組成為：柴胡6-10重量份、黃芩6-10重量份、荊芥6-10重量份、防風(fēng)6-10重 量份、蜜款冬花6-10重量份、炒苦杏仁6-9重量份、炒白芍10-15重量份、烏梅6-10重量份、 穿山龍1〇_15重量份、虎杖10-15重量份、射干6_10重量份、生甘草3_6重量份； 所述中藥組合物的質(zhì)量檢測方法包括如下含量檢測的步驟： A、芍藥苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸銨、柴胡皂苷B2的含量檢測： 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物1克，研細(xì)，加入體積濃度為90-100%的甲醇溶 液10-30ml，超聲處理0. 5-1小時，放冷，搖勾，濾過，取續(xù)濾液，即得； 對照品溶液的制備：另取芍藥苷對照品、升麻素苷對照品、虎杖苷對照品、甘草苷對 照品、射干苷對照品、甘草酸銨對照品、柴胡皂苷B2對照品適量，精密稱定，加體積濃度為 90-100%的甲醇溶液制成每lml分別含芍藥苷150 y g、升麻素苷30 y g、虎杖苷130 y g、甘 草苷30 y g、射干苷25 y g、甘草酸按30 y g和柴胡阜苷B225 y g的混合溶液，即得； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為 填充劑；以乙腈為流動相A，以0. 05 %磷酸溶液為流動相B，按照以下程序進(jìn)行梯度洗脫： 〇-25min，流動相A :流動相B的體積比為10%:90% - 10%:90%;25_26min，流動相A :流動 相B的體積比為10% :90%- 14% :86% ;26-35min，流動相A :流動相B的體積比為14% : 86%- 14% :86% ;35-36min，流動相 A:流動相 B 的體積比為 14% :86%-34% :66% ; 36-54. 5min，流動相A :流動相B的體積比為34% :66%- 34% :66% ;54. 5-55min，流動相 A :流動相B的體積比為34% :66%- 10% :90% ;55-60min，流動相A :流動相B的體積比 為10% :90%- 10% :90% ;控制流動相流速為0. 5-1. 5ml/min ;控制柱溫為20-40°C ;檢測 波長：240-260nm ; 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-10 y 1，注入液相色譜儀，測定并 計算。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所述 中藥組合物的質(zhì)量檢測方法包括如下含量檢測步驟： A、芍藥苷、升麻素苷、虎杖苷、甘草苷、射干苷、甘草酸銨、柴胡皂苷B2的含量檢測： 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物1克，研細(xì)，加入甲醇20ml，超聲處理40min，所 述超聲的功率為200-300?，頻率為30-50kHz，放冷，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 對照品溶液的制備：另取芍藥苷對照品、升麻素苷對照品、虎杖苷對照品、甘草苷對 照品、射干苷對照品、甘草酸銨對照品、柴胡皂苷B2對照品適量，精密稱定，加體積濃度為 100%的甲醇制成每lml分別含茍藥苷150 y g、升麻素苷30 y g、虎杖苷130 y g、甘草苷 30 y g、射干苷25 y g、甘草酸銨30 y g和柴胡皂苷B225 y g的混合溶液，即得； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填 充劑；以乙腈為流動相A，以0. 05 %磷酸溶液為流動相B進(jìn)行梯度洗脫；控制流動相流速為 0. 8ml/min ;控制柱溫為30°C ;檢測波長：250nm ; 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-10 y 1，注入液相色譜儀，測定并 計算。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，所 述中藥組合物的質(zhì)量檢測方法還包括如下含量測定方法中的至少一種： B、 黃芩的含量測定： 供試品溶液的制備：精密稱定所述中藥組合物〇. 5克，精密加入體積濃度為60-80%乙 醇溶液40-60ml，超聲處理0. 5-1小時，放冷，用體積濃度為60-80%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 對照品溶液的制備：取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加體積濃度為90-100 %甲醇溶 液制成每lml含150 y g黃芩苷的溶液，即得； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基鍵合硅膠為填充 劑；以體積比為18-26% :74-82%的乙腈-0.05%磷酸溶液為流動相；控制流動相流速為 0. 5-1. 5ml/min ;控制柱溫為20-40°C ;檢測波長：270-290nm，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算 不低于2000 ; 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1-5 y 1，注入液相色譜儀，測定并 計算，即得；或 C、 炒白芍的含量測定： 供試品溶液的制備：精密稱定所述中藥組合物1克，精密加入體積濃度為60-80%乙醇 溶液20-30ml，超聲處理0. 5-1小時，放冷，用體積濃度為60-80%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重 量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加體積濃度為90-100 %的甲醇 溶液制成每lml含100 y g芍藥苷的溶液，即得； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基鍵合硅膠為填充 劑；以體積比為8-16% :84-92%的乙腈-0.05%磷酸溶液為流動相；控制流動相流速為 0. 5-1. 5ml/min ;控制柱溫為20-40°C ;檢測波長240-260nm ;理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算不 低于2000 ; 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各3-10 y 1，注入液相色譜儀，測定并 計算，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在 于，所述中藥組合物的質(zhì)量檢測方法還包括如下含量測定方法中至少一種： B、 黃芩的含量測定： 供試品溶液的制備：精密稱定所述中藥組合物〇. 5克，精密加入體積濃度為70%乙醇 溶液50ml，超聲處理40min，所述超聲的功率為200-300?，頻率為30-50kHz，放冷，用體積濃 度為70%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 對照品溶液的制備：取黃芩苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含150 y g黃芩 苷的溶液，即得； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基鍵合硅膠為填充劑； 以體積比為22% :78%的乙腈-0. 05%磷酸溶液為流動相：控制流動相流速為lml/min ;控 制柱溫為25°C ;檢測波長：280nm，理論塔板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于2000 ; 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1-5 y 1，注入液相色譜儀，測定并 計算，即得；或 C、 炒白芍的含量測定： 供試品溶液的制備：精密稱定所述中藥組合物1克，精密加入體積濃度為70%乙醇溶 液25ml，超聲處理40min，所述超聲的功率為200-300?，頻率為30-50kHz，放冷，用體積濃度 為70%乙醇溶液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得； 對照品溶液的制備：取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含100 y g芍藥 苷的溶液，即得； 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：照高效液相色譜法測定，以十八烷基鍵合硅膠為填充劑； 以體積比為12% :88%的乙腈-0. 05 %磷酸溶液為流動相；控制流動相流速為lml/min ;控 制柱溫為25°C ;檢測波長250nm ;理論塔板數(shù)按芍藥苷峰計算不低于2000 ; 測定法：分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各3-10 y 1，注入液相色譜儀，測定并 計算，即得。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在 于，所述中藥組合物的質(zhì)量檢測方法還包括如下至少一種定性鑒別的方法： D、 烏梅的鑒別： 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物3g，研細(xì)，加體積比為1-3 :1的乙醚-甲醇溶 液20-40ml，超聲處理10-60分鐘，濾過，蒸干所得濾液，然后加入體積比為1-3:1-3的甲 醇-無水乙醇溶液溶解殘渣，即得； 對照品溶液的制備：另取烏梅對照藥材lg，加體積濃度為90-100 %的甲醇溶液 20-40ml，超聲處理10-60分鐘，濾過，蒸干所得濾液，加水10-30ml溶解殘渣，隨后加體積 濃度為90-100%乙醚溶液振搖提取1-3次，每次加入10-30ml，合并所述乙醚液，蒸干，用 30?60°C的石油醚浸泡殘渣1-3次，每次加入10-30ml，浸泡約1-3分鐘，傾去石油醚，向所 述殘渣中加入無水乙醇l_3ml溶解，即得； 鑒別：照薄層色譜法試驗，分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各1-5 y 1， 分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為18-22 :3-7 :6-10 :0. 1-0. 3的環(huán)己烷-三 氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸為展開劑展開，然后取出，晾干，噴以8-12%硫酸乙醇溶液，在 102-108°C下加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相 同顏色的斑點；或 E、 炒苦杏仁的鑒別： 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物2g，研細(xì)，加20-40ml的30?60°C的水溶解，冷 卻，離心，取上清液通過D101型大孔吸附樹脂柱，所述大孔吸附樹脂柱內(nèi)徑為1. 5cm，柱高 為10〇11，用70-901111水洗脫，棄去水洗脫液，再用70-901111體積濃度為10-30%的乙醇溶液 洗脫，棄去乙醇洗脫液，再次用90-110ml體積濃度為40-60%的乙醇溶液洗脫，收集所述乙 醇洗脫液，減壓濃縮，向所得殘渣中加體積濃度為90-100%甲醇溶液l-3ml溶解，即得； 對照品溶液的制備：另取苦杏仁苷對照品，加體積濃度為90-100%的甲醇溶液制成每 lml含2mg苦杏仁苷的溶液，即得； 鑒別：照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各1-3 yl，分別點于同 一硅膠G薄層板上，以體積比為18-22 :8-12 :1-5 :1-3的三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水溶 液為展開劑，展開，然后取出，晾干，噴以含有〇. 5-1. 0%磷鉬酸的10-20%硫酸乙醇溶液， 在102-108°C下加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相 同顏色的斑點；或 F、 蜜款冬花的鑒別： 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物3g，研細(xì)，加體積比為1-3 :1的乙醚-甲醇溶 液20-40ml，超聲處理10-60分鐘，濾過，蒸干所得濾液，然后加入體積比為1-3:1-3的甲 醇-無水乙醇溶液溶解殘渣，即得； 對照品溶液的制備：分別取蜜款冬花、款冬花對照藥材各2g，加體積濃度為90-100% 的甲醇溶液20-40ml，超聲處理10-60分鐘，濾過，蒸干所得濾液，加水10-30ml溶解殘渣，隨 后加體積濃度為90-100 %乙醚溶液振搖提取1-3次，每次加入10-30ml，合并所述乙醚液， 蒸干，用30?60°C的石油醚浸泡殘渣1-3次，每次加入10-30ml，浸泡約1-3分鐘，傾去石 油醚，向所述殘渣中加入無水乙醇l_3ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花對照品溶液； 鑒別：照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各1?5 y 1，分別點于同 一硅膠G薄層板上，以體積比為1-5:1的60?90°C的石油醚一丙酮為展開劑，展開二次，取 出，晾干，噴以8-12%硫酸乙醇溶液，在102-108°C下加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中， 在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在 于，所述中藥組合物的質(zhì)量檢測方法還包括如下至少一種定性鑒別方法： D烏梅的鑒別： 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物3g，研細(xì)，加體積比為2 :1的乙醚-甲醇溶液 30ml，超聲處理30分鐘，所述超聲的功率為200-300?，頻率為30-50kHz，濾過，蒸干所得濾 液，然后加入體積比為1:1的甲醇-無水乙醇溶液溶解殘渣，即得； 對照品溶液的制備：另取烏梅對照藥材lg，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，蒸干 所得濾液，加水20ml溶解殘渣，隨后加乙醚振搖提取2次，每次加入20ml，合并乙醚液，蒸 干，用30?60°C的石油醚浸泡殘渣2次，每次加入15ml，浸泡約1. 5分鐘，傾去石油醚，向 所述殘渣中加入無水乙醇2ml溶解，即得； 鑒別：照薄層色譜法試驗，分別精密吸取上述對照品溶液和供試品溶液各1-5 y 1，分 別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20 :5 :8 :0. 1的環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲 酸為展開劑展開，然后取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在l〇5°C下加熱至斑點顯色清 晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；或 E、炒苦杏仁的鑒別： 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物2g，研細(xì)，加30ml的50°C水溶解，冷卻，離心， 取上清液通過D101型大孔吸附樹脂柱，所述大孔吸附樹脂柱內(nèi)徑為1. 5cm，柱高為10cm，用 80ml水洗脫，棄去水洗脫液，再用80ml體積濃度為20%的乙醇溶液洗脫，棄去20%乙醇洗 脫液，再次用l〇〇ml體積濃度為50 %的乙醇溶液洗脫，收集所述乙醇洗脫液，減壓濃縮，向 所得殘渣中加甲醇溶液lml溶解，即得； 對照品溶液的制備：另取苦杏仁苷對照品，加甲醇制成每lml含2mg苦杏仁苷的溶液， 即得； 鑒別：照薄層色譜法試驗，分別精密吸取上述供試品溶液和對照品溶液各1-3 y 1，分 別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20 :10 :3 :1的三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水溶液 為展開劑，展開，然后取出，晾干，噴以含有0.8%磷鉬酸的15%硫酸乙醇溶液，在105°C下 加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點； 或 F、蜜款冬花的鑒別： 供試品溶液的制備：取所述中藥組合物3g，研細(xì)，加體積比為2 :1的乙醚-甲醇溶液 30ml，超聲處理30分鐘，所述超聲的功率為200-300?，頻率為30-50kHz，濾過，蒸干所得濾 液，然后加入體積比為1:1的甲醇-無水乙醇溶液溶解殘渣，即得； 對照品溶液的制備：取蜜款冬花、款冬花對照藥材各2g，加甲醇30ml，超聲處理30分 鐘，濾過，蒸干所得濾液，加水20ml溶解殘渣，隨后加乙醚振搖提取2次，每次加入20ml，合 并乙醚液，蒸干，用30?60°C的石油醚浸泡殘渣2次，每次加入15ml，浸泡約1. 5分鐘，傾 去石油醚，向所述殘渣中加入無水乙醇2ml溶解，即得蜜款冬花、款冬花對照品溶液； 鑒別：照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液和對照品溶液各1?5 y 1，分別點于同 一硅膠G薄層板上，以體積比為3:1的60?90°C的石油醚一丙酮為展開劑，展開二次，取 出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C下加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對 照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6任一所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在 于，所述中藥組合物的原料藥組成為：柴胡8重量份、黃芩8重量份、荊芥8重量份、防風(fēng)8 重量份、蜜款冬花8重量份、炒苦杏仁7重量份、炒白芍13重量份、烏梅8重量份、穿山龍13 重量份、虎杖13重量份、射干8重量份、生甘草4重量份；或 柴胡6重量份、黃苳10重量份、荊芥6重量份、防風(fēng)10重量份、蜜款冬花6重量份、炒 杏仁9重量份、炒白茍10重量份、烏梅10重量份、穿山龍10重量份、虎杖15重量份、射干 6重量份、生甘草6重量份；或 柴胡10重量份、黃苳6重量份、荊芥10重量份、防風(fēng)6重量份、蜜款冬花10重量份、炒 苦杏仁6重量份、炒白芍15重量份、烏梅6重量份、穿山龍15重量份、虎杖10重量份、射干 10重量份、生甘草3重量份；或 柴胡7重量份、黃芩9重量份、荊芥7重量份、防風(fēng)9重量份、蜜款冬花7重量份、炒苦 杏仁8重量份、炒白茍12重量份、烏梅9重量份、穿山龍12重量份、虎杖14重量份、射干7 重量份、生甘草5重量份；或 柴胡9重量份、黃芩7重量份、荊芥9重量份、防風(fēng)7重量份、蜜款冬花9重量份、炒苦 杏仁7重量份、炒白茍14重量份、烏梅7重量份、穿山龍14重量份、虎杖11重量份、射干9 重量份、生甘草4重量份。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1-7任一所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在 于，還包括制備所述中藥組合物的方法，包括如下步驟： (1) 按照選定重量份數(shù)稱取柴胡、黃芩、荊芥、防風(fēng)、蜜款冬花、炒苦杏仁、炒白芍、烏梅、 穿山龍、虎杖、射干、生甘草，分別粉碎成細(xì)粉后混合或混合后粉碎成細(xì)粉，過篩備用； (2) 取上述細(xì)粉加水提取，合并并過濾所得提取液，將所得濾液減壓濃縮獲得清膏； (3) 將獲得的清膏進(jìn)行干燥，制成干膏粉，然后選擇性的加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝 制成臨床上可接受的劑型。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的疏風(fēng)止咳的中藥組合物的質(zhì)量檢測方法，其特征在于，制備 所述中藥組合物的方法，包括如下步驟： (1)按照選定重量份數(shù)稱取柴胡、黃芩、荊芥、防風(fēng)、蜜款冬花、炒苦杏仁、炒白芍、烏梅、 穿山龍、虎杖、射干、生甘草，分別粉碎成細(xì)粉后混合或混合后粉碎成細(xì)粉，過篩備用； (2) 取上述細(xì)粉加水煎煮1-3次，每次1-3小時，每次加入8-12倍所述細(xì)粉重量的水， 合并并過濾所得煎煮液，將所得濾液減壓濃縮至50°C下相對密度為1. 10-1. 15的清膏； (3) 將獲得的清膏進(jìn)行干燥，制成干膏粉，然后選擇性的加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝 制成臨床上可接受的劑型。
10.由權(quán)利要求1-9任一所述的質(zhì)量檢測方法在中藥組合物或中藥制劑質(zhì)量檢測領(lǐng)域 中的用途。
【文檔編號】G01N30/90GK104483417SQ201410838275
【公開日】2015年4月1日 申請日期:2014年12月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月29日
【發(fā)明者】武琳, 楊光, 肖婷婷, 彭鵬 申請人:北京中研同仁堂醫(yī)藥研發(fā)有限公司