本發(fā)明涉及目標(biāo)化合物體外代謝物快速尋找、鑒定以及代謝酶亞型鑒定的方法，具體涉及目標(biāo)化合物體外人肝微粒體溫孵樣品使用LC-Q-TOF/MS分析以尋找與鑒定特異性化合物，并根據(jù)目標(biāo)化合物與人肝微粒體及各特征性代謝酶亞型抑制劑共溫孵后特異性代謝物量的減少判斷目標(biāo)化合物的代謝酶亞型。作為研究藥物藥物相互作用的依據(jù)。

背景技術(shù)：

藥物的代謝過程主要是在酶的催化作用下發(fā)生的，其中最主要的酶是肝臟中的細(xì)胞色素P450(CYP450)酶。CYP450酶的活性存在明顯的多態(tài)性，并且會(huì)受到多種因素的影響，如性別、年齡、種族等，從而影響藥物在人體中的生物轉(zhuǎn)化，引起該藥物在人體中的藥效與藥代動(dòng)力學(xué)行為的變化，最終導(dǎo)致藥物在不同人群中的代謝差異性。在所有影響藥物代謝的因素中，最主要的因素是代謝性藥物-藥物相互作用(Metabolic-Based Drug-Drug Interactions，DDIs)。DDIs是指兩種或兩種以上的藥物在同時(shí)或前后序貫用藥時(shí)，在代謝環(huán)節(jié)產(chǎn)生作用的干擾，結(jié)果使療效增強(qiáng)甚至產(chǎn)生毒副作用，或療效減弱甚至治療失敗，研究DDIs具有十分重要的臨床意義。對(duì)于創(chuàng)新藥物而言，在臨床前通過使用體外溫孵的方法對(duì)其生物轉(zhuǎn)化進(jìn)行研究，以預(yù)測(cè)該創(chuàng)新藥物可能存在的藥物相互作用，了解其市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力；對(duì)于已上市的藥物而言，通過了解其代謝的酶學(xué)基礎(chǔ)，提高藥物使用的合理性，減少與避免藥物相互作用的發(fā)生。

藥物在人體中的代謝主要分為I相代謝與II相代謝。在I相代謝酶中的細(xì)胞色素P450(CYP450)，是人體最重要的代謝酶，其組成人體內(nèi)外源化學(xué)物I相代謝酶的70-80％，主要是P450的家族的1，2與3亞型參與機(jī)體的各種外源性與內(nèi)源性化合物代謝，其中以CYP1A2，CYP3A4，CYP2C9，CYP2C19與CYP2D6等亞型為主要代表，參與了大約90％的臨床藥物的代謝。因此，對(duì)藥物代謝酶亞型的鑒定具有十分重要的臨床意義，一方面能夠促進(jìn)新藥的研發(fā)，對(duì)新型化合物進(jìn)行篩選；另一方面能夠提高臨床用藥的安全性。

由于目前特異性底物往往并不是單個(gè)代謝酶代謝，而是由多個(gè)代謝酶參與共同反應(yīng)，如 右美沙芬是CYP 2D6的特征性底物，在體內(nèi)被CYP 2D6代謝脫去羥基上的甲基生成Dextrorphan，但是相關(guān)研究表明，右美沙芬還能夠被CYP 3A4代謝脫去氨基上的甲基生成3-Methoxymorphinan，并且可以在CYP 2D6與CYP 3A4的共同作用下脫去這兩個(gè)甲基生成3-Hydroxymorphinan。這一部分有多種代謝酶參與代謝反應(yīng)的藥物在藥物相互作用研究中存在交叉反應(yīng)，而目前的研究方法并不能夠區(qū)分。同時(shí)，目前藥物相互作用的研究主要采用單底物或多底物的方法進(jìn)行研究，檢測(cè)方法采用選擇性離子檢測(cè)，只能檢測(cè)已知代謝物，不能對(duì)未知代謝物進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于創(chuàng)新藥物而言，由于不知道其代謝途徑與代謝物，因此其代謝物往往沒有標(biāo)準(zhǔn)品，采用常規(guī)的測(cè)定方法不能檢測(cè)。另外，目前研究創(chuàng)新藥物藥物相互作用的方法主要為底物消除法與特異性抑制劑進(jìn)行研究，或采用重組酶進(jìn)行研究，考察其主要代謝物。該過程需要分步進(jìn)行，且樣品數(shù)量巨大，效率較低，成本較高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是：建立并優(yōu)化一種新型的藥物-藥物相互研究策略，結(jié)合體外溫孵體系的便捷快速和因素可控的優(yōu)勢(shì)，以及LC-Q-TOF/MS的強(qiáng)大的定性與定量功能，對(duì)目標(biāo)化合物的體外代謝物進(jìn)行尋找、鑒定以及對(duì)代謝酶亞型進(jìn)行鑒定。

為解決上述問題，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案，包括：

檢測(cè)方法的建立：建立合適的液相條件與質(zhì)譜條件，以期能夠用于多種化合物及其代謝物的分離與檢測(cè)。

體外溫孵方法的建立：建立普適性的體外溫孵條件，以期能夠用于多種化合物的體外溫孵。

數(shù)據(jù)分析方法的建立：依據(jù)相關(guān)軟件如Mark View、Peak View與MetabolitePilot等，建立特定的數(shù)據(jù)處理與分析方法，以期能夠快速、全面地對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與分析。

藥物-藥物相互作用研究策略的建立：以CYP 1A2、2C9、2C19、2D6與3A4的特征性底物為工具藥，體外溫孵后根據(jù)建立的檢測(cè)方法使用LC-Q-TOF/MS進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，并根據(jù)建立的數(shù)據(jù)分析方法對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，以尋找工具藥的特征性代謝物并進(jìn)行半定量，研究其代謝酶亞型，并根據(jù)體外人重組酶溫孵結(jié)果對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。

藥物-藥物相互作用研究策略的驗(yàn)證與應(yīng)用：使用建立的藥物-藥物相互作用研究策略，對(duì)已知代謝物的化合物以及未知代謝物的化合物進(jìn)行代謝物尋找與代謝酶亞型鑒定，判斷該 研究策略的可行性。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明所建立的藥物-藥物相互研究策略能夠?qū)δ繕?biāo)化合物的體外代謝物進(jìn)行快速尋找并對(duì)目標(biāo)化合物的代謝酶亞型進(jìn)行快速鑒定。該策略一方面能夠用于新藥臨床前快速篩選，提高研究效率，縮短研究時(shí)間，降低研究成本，對(duì)其成藥性進(jìn)行初步評(píng)價(jià)；另一方面能夠用于已上市藥物的相互作用研究，減少疾病治療過程中易發(fā)生的藥物-藥物相互作用，為合理用藥提供依據(jù)。

附圖說明

圖1：PN的特征性代謝物APAP在不同人肝微粒體與重組酶溫孵系統(tǒng)中峰面積的比較

圖2：TB的特征性代謝物4’-OH TB在不同人肝微粒體與重組酶溫孵系統(tǒng)中峰面積的比較

圖3：(s)-MP的兩個(gè)特征性代謝物在不同人肝微粒體與重組酶溫孵系統(tǒng)中峰面積的比較

圖4：DT的特征性代謝物DMT與3-MM在不同人肝微粒體與重組酶溫孵系統(tǒng)中峰面積的比較

圖5：MZ的特征性代謝物1-OH MZ與4-OH MZ在不同人肝微粒體與重組酶溫孵系統(tǒng)中峰面積的比較

圖6：PA的四個(gè)代謝物在在不同人肝微粒體與重組酶溫孵系統(tǒng)中峰面積的比較

圖7：PA的四個(gè)代謝物結(jié)構(gòu)、m/z及其代謝通路

圖8：一類新藥HS-10162的代謝物在不同人肝微粒體與重組酶溫孵系統(tǒng)中峰面積的比較

圖9：一類新藥GT0918的代謝物在不同人肝微粒體與重組酶溫孵系統(tǒng)中峰面積的比較

具體實(shí)施方式

本發(fā)明通過下面的實(shí)施例進(jìn)行詳細(xì)的解釋，但并不意味著本發(fā)明僅限于此。

1檢測(cè)方法的建立

1.1色譜條件

HPLC系統(tǒng)包含一個(gè)島津DGU-20A5在線脫氣機(jī)，兩個(gè)島津LC-30AD泵，一個(gè)島津CTO-20A柱溫箱，以及一個(gè)島津SIL-30AC自動(dòng)進(jìn)樣器。在色譜分離過程中，使用的色譜柱為Kromasil 100-5C₁₈柱(150×2.1mm)；流動(dòng)相為0.5‰甲酸(A)與乙腈(B)；洗脫過程采用梯度洗脫，梯度見表2；柱溫設(shè)定為40℃；流速為0.7ml/min。

表1色譜分離過程梯度洗脫程序

1.2質(zhì)譜條件

質(zhì)譜檢測(cè)使用高分辨率的LC-Q-TOF/MS質(zhì)譜檢測(cè)器，使用電噴霧離子源(ESI)。所有進(jìn)樣方法均包含兩種掃描模式。在TOF MS掃描模式中，參數(shù)設(shè)定如下：掃描范圍100-1000；離子源氣體1 60Arb；離子源氣體2 60Arb；溫度550℃；氣簾氣30Arb；離子噴霧電壓正離子模式為5500V，負(fù)離子模式為-4500V；去簇電壓正離子模式為80V，負(fù)離子模式為-80V；碰撞電壓正離子模式為10V，負(fù)離子模式為-10V。在Product Ion掃描模式中，參數(shù)設(shè)定如下：掃描范圍50-1000；離子源氣體1 60Arb；離子源氣體2 60Arb；溫度550℃；氣簾氣30Arb；離子噴霧電壓正離子模式為5500V，負(fù)離子模式為-4500V；去簇電壓正離子模式為80V，負(fù)離子模式為-80V；碰撞電壓正離子模式為40V，負(fù)離子模式為-40V。

2體外溫孵方法的建立

2.1實(shí)驗(yàn)材料

人肝微粒體(HLMs，20mg/ml)購自中國上海瑞德肝臟疾病研究公司；cDNA表達(dá)的人重組酶(CYP1A2，2C9，2C19，2D6，3A4)購自美國BD Gentest公司；非那西汀(PN，CYP1A2的特征性底物)、咪達(dá)唑侖(MZ，CYP3A4的特征性底物)、甲苯磺丁脲(TB，CYP2C9的特征性底物)、(s)-美芬妥英((s)-MP，CYP2C19的特征性底物)、右美沙芬(DT，CYP2D6的特征性底物)、磺胺苯吡唑(CYP2C9的特征性抑制劑)、奧美拉唑(CYP2C19的特征性抑制劑)、奎尼丁(CYP2D6的特征性抑制劑)、6-磷酸葡萄糖脫氫酶(PDH)、β-煙酰胺腺嘌呤二 核苷酸磷酸(β-NADP⁺)、6-磷酸葡萄糖(G-6-P)均購自美國Sigma公司；α-萘黃酮(CYP1A2的特征性抑制劑)、酮康唑(CYP3A4的特征性抑制劑)購自日本東京化成工業(yè)；其他試劑均為HPLC級(jí)。各CYP的特征性底物與對(duì)應(yīng)的特征性抑制劑如表2所示。

表2 CYP1A2，2C9，2C19，2D6，3A4的特征性底物與特征性代謝物

磷酸鹽緩沖液(PBS)：0.1M KCl-磷酸鹽緩沖液：含0.1M KCl、0.1M Na₂HPO4、0.1M NaH₂PO4；pH＝7.4。

NADPH能量再生系統(tǒng)(NRS)：含10mM G-6-P、1.0mM NADP⁺、2.0U/mL G6PDH

2.2實(shí)驗(yàn)方法

本實(shí)驗(yàn)中所有溫孵實(shí)驗(yàn)均在水浴鍋中37℃水浴進(jìn)行。所有的底物儲(chǔ)備液與抑制劑儲(chǔ)備液均使用合適的有機(jī)溶劑進(jìn)行溶解，且在溫孵體系中有機(jī)溶劑的量不超過1％(v/v)，以保證人肝微粒體中CYPs的活性。HLMs與重組酶在冰上融化，隨后在PBS緩沖液中與底物、MgCl₂等進(jìn)行混合，經(jīng)過預(yù)溫孵后，加入G-6-P、NADP⁺與PDH啟動(dòng)反應(yīng)，使體系終體積為200μl。經(jīng)過37℃水浴30min后(重組酶體系溫孵20min)，在體系中加入200μl冰乙腈并振蕩3min以終止反應(yīng)，兩次離心18000rpm×5min后，取上清80μl進(jìn)樣。陰性對(duì)照樣品在預(yù)溫孵后先加入200μl冰乙腈使酶失活而終止反應(yīng)，隨后與其他樣品一起溫孵以保證操作的平行。在加入特征性抑制劑的樣品中，特征性抑制劑在溫孵之前與底物同時(shí)加入。

3數(shù)據(jù)分析方法的建立

本藥物相互作用研究策略中數(shù)據(jù)處理共分為四個(gè)步驟。第一步為數(shù)據(jù)采集：所有溫孵樣品處理完成后，通過高分辨率的LC-Q-TOF/MS質(zhì)譜儀(配備ESI源)的全掃描模式對(duì)樣品數(shù)據(jù)進(jìn)行采集；第二步為代謝物尋找：通過軟件PeakView將樣品與陰性對(duì)照進(jìn)行比對(duì)，尋找到樣品中獨(dú)有的物質(zhì)，并使用XIC與MDF提取MS信息，隨后使用質(zhì)量虧損分析、峰面積 分析、保留時(shí)間分析等從中篩選出可能的代謝物；第三步是結(jié)構(gòu)確證：通過對(duì)原藥的精確質(zhì)量數(shù)檢測(cè)、MS/MS信息分析、藥物生物轉(zhuǎn)化規(guī)律研究以及碎裂方式研究，并使用軟件MetabolitePilot 1.5進(jìn)行計(jì)算分析，推測(cè)代謝物的結(jié)構(gòu)；第四步是代謝酶亞型鑒定：在微粒體溫孵體系中加入不同代謝酶亞型的特征性抑制劑共溫孵，觀察比較其代謝物生成量的變化，判斷哪種代謝酶對(duì)代謝物的生成具有決定性作用，從而推斷其代謝酶亞型。

4藥物-藥物相互作用研究策略的建立

4.1 PN的代謝酶亞型鑒定

PN是對(duì)乙酰氨基酚(APAP)的前藥，是一類解熱鎮(zhèn)痛藥，以往臨床上主要用于治療發(fā)熱頭痛、神經(jīng)痛等，由于其嚴(yán)重的腎毒性，目前臨床上已不再使用。PN在人體中通過CYP 1A2進(jìn)行氧位脫甲基反應(yīng)代謝生成APAP。目前，該P(yáng)N的氧位脫甲基反應(yīng)已經(jīng)作為用于表征體外CYP 1A2活性的特征性反應(yīng)。

在本次實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過體外溫孵，僅發(fā)現(xiàn)了APAP(m/z 152.0699)這一個(gè)PN的代謝物。根據(jù)PN與CYP特征性抑制劑共溫孵的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加入CYP 1A2的特征性抑制劑α-萘黃酮后，APAP的生成量顯著性減少，表明PN通過CYP1A2代謝成APAP，結(jié)果如圖1A-1所示。使用重組酶與CYP特征性抑制劑共溫孵對(duì)該結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果如圖1A-2所示，在人重組酶CYP 1A2中，PN代謝生成APAP，而加入了CYP 1A2的特征性抑制劑α-萘黃酮后，該代謝被抑制，APAP生成量顯著減少。本微粒體溫孵結(jié)果與重組酶溫孵驗(yàn)證結(jié)果相一致，且與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相一致，即PN通過CYP 1A2代謝生成APAP。

4.2 TB的代謝酶亞型鑒定

TB是一種磺酰脲衍生物，臨床上作為一種降血糖藥用于治療II型糖尿病。TB在人體內(nèi)的代謝主要是甲基的羥基化，其中4’-羥基化是由CYP 2C9代謝，該代謝反應(yīng)用于表征體外CYP 2C9的反應(yīng)活性，用于體內(nèi)外的研究。

在本次實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過體外溫孵，僅發(fā)現(xiàn)了TB 4’-羥基化(m/z 285.0918)這一個(gè)TB的代謝物。根據(jù)TB與CYP特征性抑制劑共溫孵的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在加入了CYP 2C9的特征性抑制劑磺胺苯吡唑后，TB的4’-羥基化代謝物生成量顯著性降低，表明TB通過CYP 2C9代謝成285.0918，結(jié)果如圖2A-1所示。使用重組酶與CYP特征性抑制劑共溫孵對(duì)該結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果如圖2A-2所示，在人重組酶CYP 2C9中，TB代謝生成285.0918，而加入了CYP 2C9 的特征性抑制劑磺胺苯吡唑后，該代謝被抑制，285.0918的生成量顯著性降低。本微粒體溫孵結(jié)果與重組酶溫孵結(jié)果相一致，且與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果相一致，即TB通過CYP 2C9代謝生成4’-羥基化代謝物。

4.3 (s)-MP的代謝酶亞型鑒定

MP是一種廣譜的抗驚厥藥物。在西方國家MP主要用于治療使用其他藥物沒有療效的癲癇患者，但是由于MP個(gè)體差異很大，同時(shí)副作用明顯，因此MP目前僅僅用作氧化代謝多態(tài)性研究。MP在人體內(nèi)主要以兩種通路代謝，并且存在立體選擇性。(s)-MP可在體內(nèi)快速羥基化并以4-OH-MP葡萄糖醛酸結(jié)合物的形式排出體外，而(r)-MP在體內(nèi)緩慢去甲基化成為苯乙基內(nèi)酰脲并以該形式排出體外。

在本次實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過體外溫孵，(s)-MP發(fā)現(xiàn)了兩種(m/z 190.0878與233.0937)代謝物。根據(jù)(s)-MP與CYP特征性抑制劑共溫孵的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在加入了CYP 2C19特征性抑制劑奧美拉唑后，(s)-MP的兩個(gè)代謝物的生成量均顯著性減少，結(jié)果表明(s)-MP通過CYP2C19代謝成190.0878和233.0937，結(jié)果如圖3A-1和3B-1所示。使用重組酶與CYP特征性抑制劑共溫孵對(duì)該結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果如圖3A-2和3B-2所示，在人重組酶CYP 2C19中，(s)-MP代謝生成190.0878與233.0937，而加入了CYP 2C19的特征性抑制劑奧美拉唑后，該代謝被抑制。本微粒體溫孵結(jié)果與重組酶溫孵結(jié)果相一致。

4.4 DT的代謝酶亞型鑒定

DT是一種低毒的鎮(zhèn)咳類藥物。作為人CYP 2D6的特異性底物，DT常作為探針?biāo)幬镉糜谘芯啃滤帉?duì)CYP 2D6的活性以及CYP 2D6多態(tài)性。¹⁶DT可被CYP 2D6代謝為右啡烷(DMT)，被CYP 3A4代謝為3-甲氧嗎啡喃(3-MM)。

在本次實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過體外溫孵，DT發(fā)現(xiàn)了三種(m/z 258.1851(DMT)，258.1851(3-MM)和288.1960)代謝物。根據(jù)DT與CYP特征性抑制劑共溫孵的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，DT通過CYP 2D6代謝生成258.1851(DMT)，通過CYP 3A4代謝成258.1851(3-MM)和288.1960，結(jié)果如圖4A-1、4B-1和4C-1所示。使用重組酶與CYP特征性抑制劑共溫孵對(duì)該結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果如圖4A-2、4B-2和4C-2所示，在人重組酶CYP 2D6中，DT代謝生成258.1851(DMT)，而加入了CYP 2D6的特征性抑制劑奎尼丁后，該代謝被抑制；在人重組酶CYP 3A4中，DT代謝生成258.1851(3-MM)和288.1960，而加入了CYP 3A4的特征性抑制劑酮康唑后，該 代謝被抑制。本微粒體溫孵結(jié)果與重組酶溫孵結(jié)果相一致。

4.5 MZ的代謝酶亞型鑒定

MZ是一種水溶性的短效苯二氮-類藥物，用于麻醉、鎮(zhèn)靜及治療持續(xù)性癲癇的重癥患者。作為人CYP 3A4的特異性底物，MZ常作為探針?biāo)幬镉糜谘芯啃滤帉?duì)CYP 3A4的活性。MZ可被CYP 3A4代謝為1-OH MZ與4-OH MZ。

在本次實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過體外溫孵，MZ的兩個(gè)代謝物1-OH MZ(m/z 342.0796)與4-OH MZ(m/z 342.0803)均被發(fā)現(xiàn)。根據(jù)MZ與CYP特征性抑制劑共溫孵的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在加入了CYP 3A4特征性抑制劑酮康唑后，1-OH MZ與4-OH MZ的生成量顯著性減少，結(jié)果表明MZ通過CYP 3A4代謝生成1-OH MZ與4-OH MZ，結(jié)果如圖5A-1與5B-1所示。使用重組酶與CYP特征性抑制劑共溫孵對(duì)該結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果如圖5A-2和5B-2所示，在人重組酶CYP 3A4中，MZ代謝生成1-OH MZ與4-OH MZ，而加入了CYP 3A4的特征性抑制劑酮康唑后，該代謝被抑制。本微粒體溫孵結(jié)果與重組酶溫孵結(jié)果一致，與文獻(xiàn)中的報(bào)道也一致。

5藥物-藥物相互作用研究策略的驗(yàn)證與應(yīng)用

5.1丹皮酚的代謝物亞型鑒定

丹皮酚(PA，2-羥基-4-甲氧基苯乙酮)是牡丹皮、白芍等中藥的主要成分之一。PA具有抗菌、抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化、增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能等藥效。研究表明，PA在體內(nèi)和體外通過代謝均能產(chǎn)生代謝物，如I相代謝產(chǎn)物二羥苯乙酮。

在本次實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過體外溫孵，PA發(fā)現(xiàn)了四個(gè)(m/z 151.0404，167.0347，167.0347和181.0502)代謝物。使用微粒體與CYP特征性抑制劑共溫孵，代謝物的生成均未被抑制，提示該四個(gè)代謝物不是被單一酶亞型代謝，因而不能被單一抑制劑抑制其生成。使用重組酶溫孵體系，該四個(gè)代謝物在五種不同人重組酶溫孵體系中均有生成且特異性抑制劑可抑制代謝物的生成，表明PA在體外被多種酶亞型廣泛代謝。結(jié)果見圖6，代謝通路圖見圖7。

5.2肉桂酸的代謝酶亞型鑒定

肉桂酸(CA)具有抗菌、抗癌等藥理學(xué)活性，同時(shí)也是一種被廣泛應(yīng)用于藥物、香料、殺蟲劑、塑料、光敏樹脂合成的重要中間體。體外CYP450酶對(duì)CA的代謝研究尚未見報(bào)道。

在本次實(shí)驗(yàn)中，體外微粒體溫孵未發(fā)現(xiàn)CA代謝物。重組酶溫孵體系中也未發(fā)現(xiàn)代謝物生 成，驗(yàn)證了CA未被五種代謝酶亞型代謝。微粒體溫孵結(jié)果與重組酶溫孵結(jié)果相一致，證實(shí)CA在體外未被代謝。

5.3一類新藥的代謝酶亞型鑒定

HS-10162(m/z 473.1308)、GT0918(m/z 518.1268)和SIPI7623(m/z 382.2024)均為本實(shí)驗(yàn)室正在進(jìn)行臨床前研究的一類新藥，有望作為抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床。臨床前階段對(duì)藥物生物轉(zhuǎn)化與藥物相互作用研究具有十分重要的意義，可提供藥物-藥物相互作用信息來指導(dǎo)臨床研究并預(yù)測(cè)藥物的市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力。

在本次實(shí)驗(yàn)中，通過使用人肝微粒體對(duì)三個(gè)一類新藥進(jìn)行體外溫孵，以及重組酶對(duì)微粒體溫孵的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，SH-10162存在1個(gè)經(jīng)CYP 3A4代謝的氧化代謝物(m/z489.1299)，見圖8。GT0918存在3個(gè)經(jīng)CYP 3A4代謝的代謝物，其中兩個(gè)(m/z 534.1214，534.1215)為氧化代謝物，另一個(gè)代謝物(m/z 570.1426)在微粒體溫孵體系中表現(xiàn)為CYP 3A4代謝，在重組酶溫孵體系中表現(xiàn)為CYP 2D6與CYP 3A4代謝，可能的原因是該代謝物主要由CYP 3A4代謝生成，當(dāng)CYP 3A4活性被抑制后，也能夠代償性通過CYP 2D6代謝生成，在微粒體溫孵體系中，由于溫孵時(shí)間較短，因此表現(xiàn)出加入CYP 3A4抑制劑后，代謝被抑制的情況，見圖9。SIPI7623存在9個(gè)經(jīng)過CYP 3A4代謝生成的代謝物。