本發(fā)明涉及PM2.5實(shí)驗(yàn)，具體地，涉及一種抗污染測(cè)試裝置及方法。
背景技術(shù)：
：近年來(lái)隨著全球工業(yè)化和城市化進(jìn)程突飛猛進(jìn)，造成的環(huán)境污染問(wèn)題也引起了人們的廣泛關(guān)注。大氣污染物包括臭氧、PM顆粒物以及有機(jī)揮發(fā)物等。PM(ParticulateMatter)指的是懸浮在空氣中的細(xì)小顆粒，其中直徑大小在2.5微米左右的我們稱之為PM2.5。PM2.5含有很多成分，多環(huán)芳烴，各種重金屬，氮化物，硫化物，二次顆粒物，細(xì)菌，病毒等，在中國(guó)主要來(lái)源是汽車尾氣和燃煤。當(dāng)我們身處空氣污染的環(huán)境中，人體最大的器官--皮膚不可避免地成為人體直接接觸外界污染的第一道防線，也是大氣污染物PM2.5進(jìn)入機(jī)體的途徑之一。德國(guó)曾做過(guò)一個(gè)實(shí)驗(yàn)，以住在德國(guó)的400名女性為對(duì)象，有研究調(diào)查過(guò)他們?cè)?4年來(lái)受到的大氣污染影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在空氣污染嚴(yán)重的地方(一天有1萬(wàn)臺(tái)車以上通過(guò)的道路100米內(nèi))居住的人額頭和臉頰有更多數(shù)量的斑和皺紋，還有法令紋等老化現(xiàn)象。研究發(fā)現(xiàn)污染物PM2.5顆粒本身接觸皮膚，引起表層皮脂氧化，造成第一層傷害；其次，污染物PM2.5顆粒、有機(jī)揮發(fā)物以及紫外線的協(xié)同作用之下，導(dǎo)致肌膚屏障受到損傷，造成第二層傷害；透過(guò)毛孔和受損的角質(zhì)層屏障滲透到皮膚深層的PM2.5顆粒最終導(dǎo)致深層細(xì)胞發(fā)炎，即第三層傷害；更深層滲透后會(huì)導(dǎo)致基底細(xì)胞的細(xì)胞及DNA損傷，引起皮膚老化等深層傷害。目前全世界對(duì)抗污染化妝品訴求越來(lái)越強(qiáng)烈，但對(duì)于PM2.5透皮吸收的研究很少。PM2.5顆粒是如何透過(guò)皮膚，透過(guò)了多少，研究很少。目前在化妝品及其原料開發(fā)領(lǐng)域主要是針對(duì)單獨(dú)的多環(huán)芳烴貨香煙提取及重金屬進(jìn)行淺層次的研究。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種抗污染測(cè)試裝置及方法，更加真實(shí)地得到能夠透過(guò)皮膚深層的大氣PM2.5，并設(shè)計(jì)相應(yīng)的抗污染測(cè)試評(píng)價(jià)方案，在體內(nèi)和體外研究PM2.5對(duì)皮膚深層影響提供可行性。根據(jù)本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試裝置，包括PM接收裝置、PM10過(guò)濾器以及第一容納容器；其中，所述PM接收裝置的輸出口連通所述PM10過(guò)濾器的輸入空；所述PM10過(guò)濾器的輸出口連通所述第一容納容器。優(yōu)選地，還包括第二容納容器、水浴燒杯和第一氣泵；其中，所述第二容納容器連通所述第一容納容器；所述第一容納容器和所述第二容納容器之間設(shè)置有第一3D皮膚仿生滲透膜；所述水浴燒杯一方面通過(guò)第一管體連通所述第二容納容器，另一方面連通第二管體連通所述第一氣泵的氣口。優(yōu)選地，還包括透皮后PM2.5提取裝置；其中，所述透皮后PM2.5提取裝置設(shè)置在所述第一管體上；所述透皮后PM2.5提取裝置的輸入口連通所述第二容納容器，輸出口連通所述水浴燒杯。優(yōu)選地，所述第一管體上設(shè)置有第一流量控制器；所述第二管體上設(shè)置有第二流量控制器。優(yōu)選地，還包括第二3D皮膚仿生滲透膜、細(xì)胞培養(yǎng)處理膜以及DMEM培養(yǎng)基；其中，所述第二3D皮膚仿生滲透膜、所述細(xì)胞培養(yǎng)處理膜依次設(shè)置在所述DMEM培養(yǎng)基上；所述DMEM培養(yǎng)基設(shè)置在所述第一容納容器的底面上。優(yōu)選地，還包括隔板和第二氣泵；其中，所述隔板將所述第一容納容器分隔與第一區(qū)域和第二區(qū)域；所述第一區(qū)域通過(guò)連接通道連通至第二區(qū)域；所述第二3D皮膚仿生滲透膜、細(xì)胞培養(yǎng)處理膜以及DMEM培養(yǎng)基設(shè)置在所述第一區(qū)域；所述DMEM培養(yǎng)基通過(guò)所述連接通道延伸至第二區(qū)域；所述第二氣泵的氣口通過(guò)第三管體連通所述第二區(qū)域；所述第三管體上設(shè)置有第三流量控制器。優(yōu)選地，還包括水浴器皿；所述水浴器皿內(nèi)盛有水浴水；所述水浴燒杯設(shè)置在所述水浴器皿中。本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試方法，采用所述的抗污染測(cè)試裝置。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果：1、本發(fā)明能夠更真實(shí)的模擬皮膚對(duì)其吸收情形，提高體外實(shí)驗(yàn)的真實(shí)性和準(zhǔn)確性；2、本發(fā)明采用3D皮膚仿生滲透膜進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。更貼近人體測(cè)試，但比直接用人體測(cè)試更方便統(tǒng)計(jì)，更為安全和節(jié)約成本。附圖說(shuō)明通過(guò)閱讀參照以下附圖對(duì)非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得更明顯：圖1為本發(fā)明的一種結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本發(fā)明的另一種結(jié)構(gòu)示意圖。圖中：1為PM接收裝置；2為PM10過(guò)濾器；3為第一容納容器；4為第二容納容器；5為第一3D皮膚仿生滲透膜；6為第一流量控制器；7為第二流量控制器；8為水浴燒杯；9為第一氣泵；10為第二3D皮膚仿生滲透膜；11為細(xì)胞培養(yǎng)處理膜；12為DMEM培養(yǎng)基；13為第三流量控制器；14為第二氣泵。具體實(shí)施方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。以下實(shí)施例將有助于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)。這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。在本實(shí)施例中，本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試裝置，包括PM接收裝置、PM10過(guò)濾器以及第一容納容器；其中，所述PM接收裝置的輸出口連通所述PM10過(guò)濾器的輸入空；所述PM10過(guò)濾器的輸出口連通所述第一容納容器。本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試裝置，還包括第二容納容器、水浴燒杯和第一氣泵；其中，所述第二容納容器連通所述第一容納容器；所述第一容納容器和所述第二容納容器之間設(shè)置有第一3D皮膚仿生滲透膜；所述水浴燒杯一方面通過(guò)第一管體連通所述第二容納容器，另一方面連通第二管體連通所述第一氣泵的氣口。本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試裝置，還包括透皮后PM2.5提取裝置；其中，所述透皮后PM2.5提取裝置設(shè)置在所述第一管體上；所述透皮后PM2.5提取裝置的輸入口連通所述第二容納容器，輸出口連通所述水浴燒杯。所述第一管體上設(shè)置有第一流量控制器；所述第二管體上設(shè)置有第二流量控制器。本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試裝置，還包括第二3D皮膚仿生滲透膜、細(xì)胞培養(yǎng)處理膜以及DMEM培養(yǎng)基；其中，所述第二3D皮膚仿生滲透膜、所述細(xì)胞培養(yǎng)處理膜依次設(shè)置在所述DMEM培養(yǎng)基上；所述DMEM培養(yǎng)基設(shè)置在所述第一容納容器的底面上。本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試裝置，還包括隔板和第二氣泵；其中，所述隔板將所述第一容納容器分隔與第一區(qū)域和第二區(qū)域；所述第一區(qū)域通過(guò)連接通道連通至第二區(qū)域；所述第二3D皮膚仿生滲透膜、細(xì)胞培養(yǎng)處理膜以及DMEM培養(yǎng)基設(shè)置在所述第一區(qū)域；所述DMEM培養(yǎng)基通過(guò)所述連接通道延伸至第二區(qū)域；所述第二氣泵的氣口通過(guò)第三管體連通所述第二區(qū)域；所述第三管體上設(shè)置有第三流量控制器。本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試裝置，還包括水浴器皿；所述水浴器皿內(nèi)盛有水浴水；所述水浴燒杯設(shè)置在所述水浴器皿中。所述第一氣泵和所述第二氣泵采用吸揚(yáng)式氣泵。第一3D皮膚仿生滲透膜、第二3D皮膚仿生滲透膜采用美國(guó)LifeScience公司生成的3D皮膚仿生滲透膜。本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試方法，采用的抗污染測(cè)試裝置。當(dāng)使用本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試裝置時(shí)，如圖1所示。地點(diǎn)：在上海市中心(徐家匯)收集大氣PM2.5；時(shí)間：2016年1月14日-16日(每天提取8小時(shí))共計(jì)24小時(shí)；大氣條件：實(shí)驗(yàn)地段平均每天有700000±300輛汽車通過(guò)；動(dòng)力：氣泵維持恒定流速1.2m3/分。通過(guò)本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試裝置提取PM2.5，進(jìn)行體外測(cè)試實(shí)驗(yàn)，如下MTT法檢測(cè)小球藻生長(zhǎng)因子(CPEs)對(duì)人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的影響取對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)的人成纖維細(xì)胞100μL(濃度為2*105個(gè)/mL)加入到96孔細(xì)胞板中，待細(xì)胞貼壁后，吸出培養(yǎng)基，加入終濃度為0.01％、0.05％和0.1％的小球藻生長(zhǎng)因子(CPEs)溶液，置于溫箱培養(yǎng)24h，每孔加入5mg/mL的MTT溶液20μL，37℃孵育4h。孵育完成后，用移液槍小心的吸出每孔培養(yǎng)基，加入150μLDMSO溶液，待甲瓚結(jié)晶溶解后，放入酶標(biāo)儀震蕩混勻5min，以630nm波長(zhǎng)為參考，在全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀上檢測(cè)492nm波長(zhǎng)處的OD值，并計(jì)算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率＝加藥組/對(duì)照組*100％；對(duì)照0.01％CPEs0.05％CPEs0.1％CPEs細(xì)胞存活率100％104％110％121％CPEs對(duì)巨噬細(xì)胞Ana-1吞噬活性的影響。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，吹打制成2*105個(gè)/mL單細(xì)胞懸液，每孔100μL，接種于96孔細(xì)胞板，細(xì)胞貼壁后棄培養(yǎng)上清液，設(shè)對(duì)照組、加藥組，每組6個(gè)復(fù)孔，加藥組加入終濃度為0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％CPEs溶液，分別培養(yǎng)24，48，72h后，每孔加新鮮配制的0.1％NR和PM2.5懸濁液20μL，輕輕混勻后繼續(xù)培養(yǎng)3h。之后小心吸棄含有NR的培養(yǎng)液，用生理PBS輕柔洗去未被吞噬的NR。每孔加150μL細(xì)胞裂解液(無(wú)水乙醇：乙酸＝1：1(v/v))，靜置2h，使細(xì)胞溶解，震蕩混勻后測(cè)定540nm處OD值[90]。細(xì)胞對(duì)NR的吞噬率如下：吞噬率＝加藥組/對(duì)照組*100％；對(duì)照0.005％CPEs0.01％CPEs0.02％CPEs0.03％CPEs0.04％CPEs巨噬細(xì)胞吞噬率100％150.3％192.4％216.4％193.3％188.2％當(dāng)使用本發(fā)明提供的抗污染測(cè)試裝置時(shí)，如圖2所示，地點(diǎn)：在上海市中心(徐家匯)收集大氣PM2.5；時(shí)間：2016年1月14日-16日(每天提取8小時(shí))共計(jì)24小時(shí)；大氣條件：實(shí)驗(yàn)地段平均每天有700000±300輛汽車通過(guò)；動(dòng)力：氣泵維持恒定流速1.2m3/分實(shí)驗(yàn)步驟：1、準(zhǔn)備三臺(tái)裝置，將3塊3D皮膚做免疫標(biāo)記；A、直接培養(yǎng)人3D皮膚5天；B、提取PM2.51小時(shí)后培養(yǎng)人3D皮膚5天；C、在3D皮膚上均勻涂抹0.5％的小球藻深層凈化因子(CPEs)后再提取PM2.51小時(shí)，培養(yǎng)3D皮膚5天；2、5天后使用Leica’sQ500成像分析軟件測(cè)量A/B/C三種情況下人3D皮膚厚度；3、檢測(cè)標(biāo)記物絲聚蛋白的表達(dá)量。以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3