1.風(fēng)熱感冒顆粒HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法,其特征包括下述步驟:
(1)參照物溶液的制備:精密稱取牛蒡苷對照品適量,加30~70%甲醇制成每1ml含牛蒡苷60~80μg的溶液,即得。
(2)供試品溶液的制備:取風(fēng)熱感冒顆粒,研細(xì),取約1~3g,精密稱定,精密加入30~70%甲醇25~75ml,稱定重量,超聲處理15~45分鐘,待溶液冷卻至室溫,用30~70%甲醇補足減失的重量,搖勻,用0.22~0.45μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。
(3)色譜條件:采用ZORBAX SB-C18色譜柱(柱長為250mm,內(nèi)徑為4.6mm,粒徑為5μm);流動相為以乙腈-0.1%磷酸溶液為5~45:95~55的混合溶液;流速為0.5~1.5ml/min;DAD檢測器,檢測波長為205~285nm;柱溫25~45℃,理論板數(shù)均不低于10000。
(4)測定:分別精密吸取參照物溶液和供試品溶液各5~20μl,注入液相色譜儀,照高效液相色譜法測定,得到風(fēng)熱感冒顆粒的HPLC特征圖譜。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的風(fēng)熱感冒顆粒HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法,其特征是包括下述步驟:
步驟(1)取參照物溶液濃度為每1ml50%甲醇溶液含牛蒡苷對照品50μg。
步驟(2)取風(fēng)熱感冒顆粒,研細(xì),取約2g,精密稱定,精密加入50%甲醇50ml,稱定重量,超聲處理30分鐘,放冷,用50%甲醇補足減失的重量,搖勻,用0.22~0.45μm微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,即得。
步驟(3)采用ZORBAX SB-C18色譜柱(柱長為250mm,內(nèi)徑為4.6mm,粒徑為5μm),流動相為以乙腈為流動相A,以0.1%磷酸溶液為流動相B,進行梯度洗脫。梯度洗脫的時間及流動相比例為:0~10min,A相:5%、B相:95%;10~20min,A相:5~10%、B相:95~90%;20~50min,A相:10~20%、B相:90~80%;50~65min,A相:20~30%、B相:80~70%;65~75min,A相:30~45%、B相:70~55%;75~77min,A相:45~5%、B相:55~95%。
步驟(4)采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件生成由17個共有峰構(gòu)成的風(fēng)熱感冒顆粒HPLC對照特征圖譜,所述共有峰中峰3為腺苷峰,峰5為綠原酸峰,峰13為橙皮苷峰,峰15為連翹苷峰,峰16為牛蒡苷峰;
步驟(5)上述步驟(1)-(4)同法操作,得到的樣品特征圖譜,采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟件與對照特征圖譜進行分析,相似度大于0.90為合格產(chǎn)品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的風(fēng)熱感冒顆粒HPLC特征圖譜的構(gòu)建方法,其特征是對照特征圖譜中,以牛蒡苷峰為參照峰S峰,計算各特征峰與S峰的相對保留時間,所述相對保留時間在第一規(guī)定值的±5%之內(nèi),所述第一規(guī)定值分別為:0.15-峰1、0.23-峰2、0.27-峰3、0.29-峰4、0.40-峰5、0.43-峰6、0.57-峰7、0.69-峰8、0.73-峰9、0.74-峰10、0.81-峰11、0.84-峰12、0.89-峰13、0.91-峰14、98-峰15、1.00-峰S、1.06-峰17。