本發(fā)明涉及視網(wǎng)膜表面膜的電鏡標(biāo)本制備方法。

背景技術(shù)：

病變視網(wǎng)膜表面的一層膜在眼底病診斷中有重要意義,其不僅組織薄, 而且非常軟, 手術(shù)取下來的表面膜組織易卷縮在一起, 須飄浮在液體表面才能展開。視網(wǎng)膜表面膜如用常規(guī)電鏡標(biāo)本制樣方法顯示不出其細胞層次，不能很好地觀察表面膜組織中各種細胞形態(tài)及它們相互之間的關(guān)系。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出一種視網(wǎng)膜表面膜的電鏡標(biāo)本制備方法。

一種視網(wǎng)膜表面膜的電鏡標(biāo)本制備方法，其特征在于包括以下制備步驟：

（1）取人或者動物脫落網(wǎng)膜，泡入用2%多聚甲醛、0.5%戊二醛、0.2mol/L二甲砷酸鈉緩沖液配制的混合液中，將pH值調(diào)節(jié)至7.4，固定4h，然后用0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液漂洗數(shù)次；

（2）然后將1滴濃度為22%的白蛋白滴在清潔載玻片上,用解剖針或牙簽輕輕地把視網(wǎng)膜表面膜撈入白蛋白中,讓它自然鋪展,再取3%戊二醛2-3滴，滴于白蛋白上, 微波高火力固定5s ,室溫放置2 min, 使白蛋白和戊二醛固定凝成塊狀，在微波固定時, 在標(biāo)本周圍加適量冷水, 使溫度低于35攝氏度；

（3）用雙面刀片從底部刮下, 修掉沒有組織的部分, 再用0.1-0.5mol/L二甲砷酸鈉緩沖液漂洗后經(jīng)1%鋨酸后固定1-5h；

（4）逐級酒精脫水, 用多角孔的平板把標(biāo)本塊豎立包埋, 切厚片定位,超薄切片,利用鈾-鉛染色后既得。

優(yōu)選地，所述微波設(shè)備的功率為800W,245 MHz。

優(yōu)選地，所述步驟（3）中二甲砷酸鈉緩沖液為0.1mol/L，鋨酸后固定2h。

本發(fā)明所述方法制備的視網(wǎng)膜表面膜的電鏡標(biāo)本，表面膜標(biāo)本展平，方法簡單、方便易于操作，穩(wěn)定可靠。

具體實施方式

實施例1。

一種視網(wǎng)膜表面膜的電鏡標(biāo)本制備方法，其特征在于包括以下制備步驟：

（1）取人或者動物脫落網(wǎng)膜，泡入用2%多聚甲醛、0.5%戊二醛、0.2mol/L二甲砷酸鈉緩沖液配制的混合液中，將pH值調(diào)節(jié)至7.4，固定4h，然后用0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液漂洗數(shù)次；

（2）然后將1滴濃度為22%的白蛋白滴在清潔載玻片上,用解剖針或牙簽輕輕地把視網(wǎng)膜表面膜撈入白蛋白中,讓它自然鋪展,再取3%戊二醛2-3滴，滴于白蛋白上, 微波高火力固定5s ,室溫放置2 min, 使白蛋白和戊二醛固定凝成塊狀，在微波固定時, 在標(biāo)本周圍加適量冷水, 使溫度低于35攝氏度；

（3）用雙面刀片從底部刮下, 修掉沒有組織的部分, 再用0.1-0.5mol/L二甲砷酸鈉緩沖液漂洗后經(jīng)1%鋨酸后固定1-5h；

（4）逐級酒精脫水, 用多角孔的平板把標(biāo)本塊豎立包埋, 切厚片定位,超薄切片,利用鈾-鉛染色后既得。

實施例2。

一種視網(wǎng)膜表面膜的電鏡標(biāo)本制備方法，其特征在于包括以下制備步驟：

（1）取人或者動物脫落網(wǎng)膜，泡入用2%多聚甲醛、0.5%戊二醛、0.2mol/L二甲砷酸鈉緩沖液配制的混合液中，將pH值調(diào)節(jié)至7.4，固定4h，然后用0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液漂洗數(shù)次；

（2）然后將1滴濃度為22%的白蛋白滴在清潔載玻片上,用解剖針或牙簽輕輕地把視網(wǎng)膜表面膜撈入白蛋白中,讓它自然鋪展,再取3%戊二醛2-3滴，滴于白蛋白上, 微波高火力固定5s ,室溫放置2 min, 使白蛋白和戊二醛固定凝成塊狀，在微波固定時, 在標(biāo)本周圍加適量冷水, 使溫度低于35攝氏度；

（3）用雙面刀片從底部刮下, 修掉沒有組織的部分, 再用0.1-0.5mol/L二甲砷酸鈉緩沖液漂洗后經(jīng)1%鋨酸后固定1-5h；

（4）逐級酒精脫水, 用多角孔的平板把標(biāo)本塊豎立包埋, 切厚片定位,超薄切片,利用鈾-鉛染色后既得。

（5）所述微波設(shè)備的功率為800W,245 MHz。

實施例3。

一種視網(wǎng)膜表面膜的電鏡標(biāo)本制備方法，其特征在于包括以下制備步驟：

（1）取人或者動物脫落網(wǎng)膜，泡入用2%多聚甲醛、0.5%戊二醛、0.2mol/L二甲砷酸鈉緩沖液配制的混合液中，將pH值調(diào)節(jié)至7.4，固定4h，然后用0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液漂洗數(shù)次；

（2）然后將1滴濃度為22%的白蛋白滴在清潔載玻片上,用解剖針或牙簽輕輕地把視網(wǎng)膜表面膜撈入白蛋白中,讓它自然鋪展,再取3%戊二醛2-3滴，滴于白蛋白上, 微波高火力固定5s ,室溫放置2 min, 使白蛋白和戊二醛固定凝成塊狀，在微波固定時, 在標(biāo)本周圍加適量冷水, 使溫度低于35攝氏度；

（3）用雙面刀片從底部刮下, 修掉沒有組織的部分, 再用0.1-0.5mol/L二甲砷酸鈉緩沖液漂洗后經(jīng)1%鋨酸后固定1-5h；

（4）逐級酒精脫水, 用多角孔的平板把標(biāo)本塊豎立包埋, 切厚片定位,超薄切片,利用鈾-鉛染色后既得。

（5）所述步驟（3）中二甲砷酸鈉緩沖液為0.1mol/L，鋨酸后固定2h。