本發(fā)明涉及一種生物學(xué)領(lǐng)域，尤其是涉及一種用于循環(huán)中干細(xì)胞在體實(shí)時(shí)無(wú)損檢測(cè)及歸巢動(dòng)力學(xué)研究方法與裝置。

背景技術(shù)：

自多莉羊誕生以來(lái)，干細(xì)胞與再生生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域不斷取得了重大技術(shù)突破，各類(lèi)創(chuàng)新性研究成果連續(xù)多年被國(guó)際頂級(jí)學(xué)術(shù)期刊《科學(xué)》評(píng)選為了十大科學(xué)進(jìn)展之一。干細(xì)胞基礎(chǔ)研究的突破更是引起了人們對(duì)干細(xì)胞技術(shù)實(shí)際應(yīng)用的高度重視，尤其是山中伸彌與約翰·格登因在體細(xì)胞反向誘導(dǎo)成干細(xì)胞和細(xì)胞核重新編程所取得的重大成果而獲得2012年度的諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)，則進(jìn)一步提升了干細(xì)胞技術(shù)及產(chǎn)業(yè)化對(duì)經(jīng)濟(jì)與社會(huì)發(fā)展的巨大影響力。干細(xì)胞技術(shù)不僅改造也傳統(tǒng)醫(yī)藥醫(yī)療產(chǎn)業(yè)，而且從研發(fā)到產(chǎn)業(yè)化形成了新的突破型高技術(shù)產(chǎn)業(yè)，干細(xì)胞產(chǎn)業(yè)成為了當(dāng)前全球最具發(fā)展?jié)摿Φ膽?zhàn)略性新興產(chǎn)業(yè)。

1983年，Gallatin等在《自然》雜志上首次報(bào)道血源性淋巴細(xì)胞能選擇性地進(jìn)入二級(jí)淋巴器官，這個(gè)過(guò)程他們用淋巴細(xì)胞“歸巢”進(jìn)行定義。后來(lái)“歸巢”被逐漸用于形容細(xì)胞(特別是白細(xì)胞)趨向性遷移并定植到特定靶向組織的過(guò)程。近年來(lái)，隨著干細(xì)胞療法的興起，這個(gè)概念被引申至多種干細(xì)胞。許多研究表明，干細(xì)胞向損傷或缺血等組織的歸巢行為和所涉及的一系列分子與白細(xì)胞向炎性組織的歸巢機(jī)制十分相似。盡管白細(xì)胞向炎性組織的歸巢機(jī)制已經(jīng)比較清楚，干細(xì)胞向損傷或缺血組織的歸巢的具體機(jī)制至今仍尚不完全明確，缺乏評(píng)判歸巢效率及治療效率之間相關(guān)性的標(biāo)準(zhǔn)方法，包含輸注細(xì)胞數(shù)量、輸注部位、歸巢時(shí)的間隔時(shí)間、評(píng)估歸巢的方法、歸巢效率等。

由于某些干細(xì)胞具有能歸巢至特殊部位的特性，使其有可能成為特殊的藥物載體，靶向定位于特殊組織并發(fā)揮治療效用。而要擔(dān)載有細(xì)胞毒性的治療藥物，就必須得確定藥物的擔(dān)載量和藥效釋放時(shí)間，因此，確定干細(xì)胞輸注后的循環(huán)時(shí)間，干細(xì)胞在歸巢途中發(fā)生凋亡情況，研究干細(xì)胞循環(huán)時(shí)間及歸巢時(shí)間以確定出載藥篩選時(shí)長(zhǎng)。

在檢測(cè)干細(xì)胞歸巢及趨向性研究方法上，目前主要的評(píng)估手段為放射性核素成像、熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)結(jié)合小動(dòng)物活體成像、近紅外熒光成像、核磁共振成像、組織切片結(jié)合免疫組化及熒光原位雜交技術(shù)。這些檢測(cè)技術(shù)都有各自的優(yōu)劣點(diǎn)，如成像技術(shù)雖然能直觀反映出細(xì)胞在活體組織內(nèi)的分布情況，但不能反映在血循環(huán)中的細(xì)胞變化過(guò)程，而傳統(tǒng)的流式細(xì)胞儀技術(shù)，雖然能監(jiān)測(cè)血液中細(xì)胞的樣本，但屬于侵襲的檢測(cè)，并且受限于血樣體積和檢測(cè)靈敏度，無(wú)法實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間的監(jiān)測(cè)干細(xì)胞在循環(huán)中的動(dòng)力學(xué)變化過(guò)程。

為了克服現(xiàn)有檢測(cè)手段的不足，實(shí)現(xiàn)對(duì)循環(huán)中的干細(xì)胞進(jìn)行在體、實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，對(duì)干細(xì)胞在循環(huán)中的動(dòng)力學(xué)變化進(jìn)行定量分析，本發(fā)明設(shè)計(jì)了一種用于循環(huán)中干細(xì)胞在體實(shí)時(shí)無(wú)損檢測(cè)及歸巢動(dòng)力學(xué)研究方法與裝置，該裝置利用動(dòng)物血管或人體的血管中自然流動(dòng)的血流，作為傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀的液流系統(tǒng)，激光聚焦于血管上構(gòu)成檢測(cè)平面，當(dāng)帶有熒光標(biāo)記或自發(fā)熒光的干細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)窗口時(shí)，收到激光的激發(fā)后的熒光信號(hào)就會(huì)被共焦的熒光信號(hào)檢測(cè)器所采集到，再通過(guò)信號(hào)放大收集到計(jì)算機(jī)中，進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄和處理。該技術(shù)具有非侵入性、高靈敏度、能在不影響受檢個(gè)體生理狀態(tài)的情況下進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)程動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)循環(huán)中受檢物質(zhì)的變化情況。這是一種非侵入式的檢測(cè)技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀需要頻繁采樣和樣本處理過(guò)程，對(duì)活體樣本檢測(cè)而言較少干擾樣本的生理狀態(tài)，可以高靈敏度的長(zhǎng)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種在體、實(shí)時(shí)、動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，對(duì)干細(xì)胞在循環(huán)中的動(dòng)力學(xué)變化進(jìn)行定量分析的用于循環(huán)中干細(xì)胞在體實(shí)時(shí)無(wú)損檢測(cè)及歸巢動(dòng)力學(xué)研究方法與裝置。

本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：一種用于循環(huán)中干細(xì)胞在體實(shí)時(shí)無(wú)損檢測(cè)及歸巢動(dòng)力學(xué)研究裝置，其特征在于，包括：激發(fā)光系統(tǒng)、激光聚焦系統(tǒng)、檢測(cè)平面、檢測(cè)窗口、照明系統(tǒng)、成像系統(tǒng)、熒光信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)、信號(hào)放大系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)；所述的激發(fā)光系統(tǒng)通過(guò)激光聚焦系統(tǒng)聚焦于血管上構(gòu)成檢測(cè)平面，所述的檢測(cè)平面上設(shè)有檢測(cè)窗口，檢測(cè)窗口上方設(shè)有照明系統(tǒng)，所述的照明系統(tǒng)照射到待測(cè)部位時(shí)，待測(cè)部分在成像系統(tǒng)中成像；所述的熒光信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)采集檢測(cè)窗口處的信號(hào)，并通過(guò)信號(hào)放大系統(tǒng)輸送到數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄和處理。

所述的激發(fā)光系統(tǒng)包含多種激光波長(zhǎng)，該激光波長(zhǎng)在紫外波段和/或可見(jiàn)光波段，不同的激光波段對(duì)應(yīng)不同的熒光染料，激光波長(zhǎng)的選擇根據(jù)不同情況選用不同的染料。

所述的激光聚焦系統(tǒng)是透鏡或者其它聚焦器件；用于將激發(fā)光系統(tǒng)發(fā)出的激光聚焦于檢測(cè)平面上。

所述的檢測(cè)窗口用來(lái)固定動(dòng)物或人體的待測(cè)血管，動(dòng)物或人體的待測(cè)血管根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要而定。檢測(cè)窗口包括玻璃板等；檢測(cè)窗口是用來(lái)放置動(dòng)物或者人體的待測(cè)血管，激發(fā)光從檢測(cè)窗口射出，通過(guò)檢測(cè)窗口對(duì)待測(cè)血管內(nèi)的干細(xì)胞進(jìn)行照射，玻璃板是檢測(cè)血管和激光出射口之間的一個(gè)隔板，避免血管和激光出射口直接接觸。

所述的照明系統(tǒng)與檢測(cè)平面垂直，照明系統(tǒng)照射到待測(cè)動(dòng)物或人體的待測(cè)部位時(shí)，待測(cè)部分會(huì)在成像系統(tǒng)中成像。光學(xué)照明系統(tǒng)包括由波長(zhǎng)為520-550nm，中心波長(zhǎng)為530nm的光電二極管等。

所述的成像系統(tǒng)為成像設(shè)備，包括CCD；用來(lái)固定待測(cè)動(dòng)物或人體的血管以及實(shí)時(shí)觀測(cè)血管內(nèi)熒光標(biāo)記的干細(xì)胞。

所述的熒光信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)、信號(hào)放大系統(tǒng)、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)為常規(guī)市售產(chǎn)品。

一種采用所述的用于循環(huán)中干細(xì)胞在體實(shí)時(shí)無(wú)損檢測(cè)及歸巢動(dòng)力學(xué)研究裝置進(jìn)行研究的方法，其特征在于，包括以下步驟：利用動(dòng)物血管或人體血管中自然流動(dòng)的血流，作為傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀的液流系統(tǒng)，激發(fā)光系統(tǒng)通過(guò)激光聚焦系統(tǒng)聚焦于血管上構(gòu)成檢測(cè)平面，當(dāng)帶有熒光標(biāo)記或自發(fā)熒光的干細(xì)胞通過(guò)檢測(cè)窗口時(shí)，受到激光的激發(fā)后的熒光信號(hào)就會(huì)被共焦的熒光信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)所采集到，再通過(guò)信號(hào)放大系統(tǒng)收集到數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄和處理，照明系統(tǒng)與檢測(cè)平面垂直，照明系統(tǒng)照射到待測(cè)動(dòng)物或人體的待測(cè)部位時(shí)，待測(cè)部分會(huì)在成像系統(tǒng)中成像，成像系統(tǒng)用來(lái)固定待測(cè)動(dòng)物或人體的血管以及實(shí)時(shí)觀測(cè)血管內(nèi)熒光標(biāo)記的干細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)時(shí)間的監(jiān)測(cè)干細(xì)胞在動(dòng)物或人體循環(huán)中的動(dòng)力學(xué)變化過(guò)程，監(jiān)測(cè)干細(xì)胞在循環(huán)系統(tǒng)中的歸巢動(dòng)力學(xué)。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：

1、該方法這是一種非侵入式的檢測(cè)技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀需要頻繁采樣和樣本處理過(guò)程，對(duì)活體樣本檢測(cè)而言較少干擾樣本的生理狀態(tài)，可以高靈敏度的長(zhǎng)時(shí)動(dòng)態(tài)檢測(cè)。

2、該方法可以對(duì)循環(huán)中的干細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)循環(huán)中干細(xì)胞數(shù)量變化，評(píng)估轉(zhuǎn)移進(jìn)程，評(píng)價(jià)治療效果。

3、該方法能有效確定干細(xì)胞輸注后的循環(huán)時(shí)間，干細(xì)胞在歸巢途中發(fā)生凋亡情況，方便研究干細(xì)胞循環(huán)時(shí)間及歸巢時(shí)間。

4、該方法用途廣泛：可廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)、生物化學(xué)等臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明裝置示意圖；

圖2為在體流式細(xì)胞儀(M1，M2，M3：為反射鏡；顯微鏡鏡頭為0.6A，40倍物鏡；DM1、DM 2為雙色分光鏡；AL1、AL 2、AL 3、AL 4為消色差透鏡；CL為柱透鏡；MS為機(jī)械狹縫；F1、F2為濾光片，PMT為光電倍增管，用來(lái)將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成電信號(hào))；

圖3為活體流式細(xì)胞儀檢測(cè)尾靜脈注射DiD標(biāo)記的MSC在皮下瘤小鼠中的循環(huán)時(shí)間為10天，絕大部分MSC從循環(huán)中消失時(shí)仍有極少量的DiD陽(yáng)性信號(hào)存在于循環(huán)中；

圖4為典型的反彈峰出現(xiàn)在40小時(shí)；

圖5A為在體流式細(xì)胞儀檢測(cè)尾靜脈注射DiD標(biāo)記的MSC在原位瘤小鼠模型中的循環(huán)時(shí)間為8天，絕大部分MSC從循環(huán)中消失時(shí)仍有極少量的DiD陽(yáng)性信號(hào)存在于循環(huán)中；

圖5B為在第40小時(shí)左右出現(xiàn)反彈峰；

圖6為在體流式細(xì)胞儀檢測(cè)尾靜脈注射DiD標(biāo)記的MSC在肺轉(zhuǎn)移癌小鼠模型中的循環(huán)時(shí)間為7天，無(wú)明顯的反彈峰。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

實(shí)施例

如圖1所示，一種用于循環(huán)中干細(xì)胞在體實(shí)時(shí)無(wú)損檢測(cè)及歸巢動(dòng)力學(xué)研究裝置，包括：激發(fā)光系統(tǒng)A、激光聚焦系統(tǒng)B、檢測(cè)平面C、檢測(cè)窗口D、照明系統(tǒng)E、成像系統(tǒng)F、熒光信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)G、信號(hào)放大系統(tǒng)H、數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)L；所述的激發(fā)光系統(tǒng)A通過(guò)激光聚焦系統(tǒng)B聚焦于血管上構(gòu)成檢測(cè)平面C，所述的檢測(cè)平面C上設(shè)有檢測(cè)窗口D，檢測(cè)窗口D上方設(shè)有照明系統(tǒng)E，所述的照明系統(tǒng)E照射到待測(cè)部位時(shí)，待測(cè)部分在成像系統(tǒng)F中成像；所述的熒光信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)G采集檢測(cè)窗口D處的信號(hào)，并通過(guò)信號(hào)放大系統(tǒng)H輸送到數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)L，進(jìn)行數(shù)據(jù)記錄和處理。

按照以上措施制作了一臺(tái)樣機(jī)在體流式細(xì)胞儀該樣機(jī)的，原理如圖2所示：其中：

1、激發(fā)光系統(tǒng)A：用633nm光纖激光器發(fā)出紅色激光束對(duì)三氟甲磺酸鹽染料(DiD)染色的細(xì)胞進(jìn)行激發(fā)，激光經(jīng)過(guò)中性密度濾光片NDF控制發(fā)射功率后，經(jīng)雙色分光鏡DM1反射柱透鏡CL，經(jīng)柱透鏡壓縮后至機(jī)械狹縫MS限制光束大小，截取位于高斯分布中心的激光，形成較為均勻的光束。再經(jīng)消色差透鏡AL1進(jìn)行消色差后經(jīng)反射鏡M2反射后進(jìn)入物鏡(0.6A，40倍)聚焦系統(tǒng)，在樣品聚焦平面(成檢測(cè)平面C)上生成一個(gè)5×72μm的長(zhǎng)方形檢測(cè)窗口D，檢測(cè)窗口D內(nèi)聚焦深度為50μm/。

2、成像系統(tǒng)F：光學(xué)照明系統(tǒng)E由波長(zhǎng)為520-550nm，中心波長(zhǎng)為530nm光電二極管LED提供，該波段的光容易被血液吸收，形成對(duì)比度強(qiáng)成像較為清晰的圖像，同時(shí)與638nm的激發(fā)波段及664nm波長(zhǎng)的發(fā)射光均無(wú)重疊，相互影響較小。照明光束照射至樣本平面后，投射過(guò)的部分被物鏡(0.6A，40倍)采集，形成平行光被雙色分光鏡DM3反射經(jīng)濾光片F(xiàn)1慮光后通過(guò)消色差透鏡AL2進(jìn)行消色差處理后至CCD前方的消色差透鏡AL2最終聚焦到CCD感光元件上。通過(guò)移動(dòng)三維載物臺(tái)，使樣本在顯示區(qū)域成清晰的像。激發(fā)光路發(fā)出的線性光斑覆蓋相應(yīng)成像平面，使其光斑長(zhǎng)軸覆蓋完血管直徑，并垂直于血流方向，當(dāng)血液流過(guò)光斑聚焦平面時(shí)能全被光斑平面覆蓋并激發(fā)，當(dāng)血流中熒光標(biāo)記過(guò)的細(xì)胞流經(jīng)光斑平面時(shí)被有效激發(fā)，并發(fā)射出相應(yīng)波長(zhǎng)的熒光，通過(guò)熒光信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)G搜集信號(hào)；

3、熒光信號(hào)檢測(cè)系統(tǒng)G：當(dāng)熒光標(biāo)記的樣本被特定波長(zhǎng)的激光激發(fā)后，發(fā)出相應(yīng)波長(zhǎng)的熒光，通過(guò)同一物鏡采集，穿過(guò)雙色分光鏡DM2，經(jīng)過(guò)雙色分光鏡DM2反射到檢測(cè)光路，透過(guò)帶通濾光片F(xiàn)2、消色差透鏡AL4及MS后被光電倍增管接收；

4、信號(hào)采集及處理：當(dāng)熒光信號(hào)被PMT檢測(cè)后經(jīng)微電流放大器(信號(hào)放大系統(tǒng)H)放大，再由5千赫茲信號(hào)模擬/數(shù)字信號(hào)轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號(hào)，傳入計(jì)算機(jī)，應(yīng)用Measure Foundry軟件進(jìn)行觀察記錄(即數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)L)。

當(dāng)用另外一種波長(zhǎng)的激光(488)激發(fā)時(shí)，原理類(lèi)似，此時(shí)會(huì)用到反射鏡M1、M3以及濾光片F(xiàn)3、消色差透AL3。

經(jīng)過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證證明：該方法是一種非侵入式的檢測(cè)技術(shù)，該裝置不僅可以用于動(dòng)物在體的各類(lèi)干細(xì)胞實(shí)時(shí)檢測(cè)、歸巢動(dòng)力學(xué)研究，能有效確定干細(xì)胞輸注后的循環(huán)時(shí)間，干細(xì)胞在歸巢途中發(fā)生凋亡情況，方便研究干細(xì)胞循環(huán)時(shí)間及歸巢時(shí)間。同時(shí)可以對(duì)人體循環(huán)中的干細(xì)胞進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)循環(huán)中干細(xì)胞數(shù)量變化，有效確定干細(xì)胞輸注后的循環(huán)時(shí)間，干細(xì)胞在歸巢途中發(fā)生凋亡情況，評(píng)估轉(zhuǎn)移進(jìn)程，評(píng)價(jià)治療效果。

下面列舉一個(gè)熒光染料標(biāo)記間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)在腫瘤模型體內(nèi)歸巢特性研究的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行簡(jiǎn)單說(shuō)明：

間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)在腫瘤模型體內(nèi)歸巢特性研究采用Balb/c小鼠為MSC細(xì)胞來(lái)源，用先天免疫缺陷的Balb/c nude裸鼠構(gòu)建腫瘤模型。

1、DiD-MSC細(xì)胞在皮下瘤小鼠模型中歸巢時(shí)間

皮下瘤構(gòu)建成功以后，將DiD標(biāo)記后的MSC細(xì)胞通過(guò)尾靜脈緩慢注射入小鼠體內(nèi)，立即放置入到樣機(jī)的樣本平臺(tái)開(kāi)始檢測(cè)。連續(xù)監(jiān)測(cè)一個(gè)小時(shí)的數(shù)據(jù)，以每十分鐘為一次小的節(jié)點(diǎn)，最后將所有數(shù)據(jù)匯總后，統(tǒng)計(jì)平均每分鐘檢測(cè)到的DiD信號(hào)數(shù)目，代表著循環(huán)中MSC的細(xì)胞數(shù)量變化趨勢(shì)，取了6只模型小鼠為每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的平行樣本。結(jié)果如圖3所示，DiD標(biāo)記的MSC在皮下瘤小鼠中在循環(huán)中數(shù)量變化呈一定波動(dòng)變化趨勢(shì)，在剛注入循環(huán)的2小時(shí)內(nèi)細(xì)胞數(shù)量平穩(wěn)維持在4個(gè)/分鐘，在4-8小時(shí)后循環(huán)中細(xì)胞數(shù)量出現(xiàn)上升到12小時(shí)出現(xiàn)下降，在第14小時(shí)和40小時(shí)及60小時(shí)出現(xiàn)了比較明顯的回升，而10天以后信號(hào)逐漸從循環(huán)中消失(圖3)。圖4為典型的在40小時(shí)和66小時(shí)出現(xiàn)的反彈峰情況，在第十天以后仍然有極少量的紅色DiD信號(hào)存在于外周血循環(huán)中。

2.DiD-MSC細(xì)胞在原位瘤小鼠模型中歸巢時(shí)間

原位腫瘤模型在接種四周以后通過(guò)尾靜脈注射DiD標(biāo)記的MSC細(xì)胞，經(jīng)過(guò)樣機(jī)連續(xù)檢測(cè)在不同時(shí)間段循環(huán)中的DiD信號(hào)如圖5所示：每分鐘MSC細(xì)胞數(shù)在循環(huán)中呈逐漸減少趨勢(shì)(圖5A)，在第四十小時(shí)出現(xiàn)了細(xì)胞數(shù)目的反彈，而每分鐘DiD信號(hào)數(shù)目在第八天后趨近于零。圖5B為典型的DiD信號(hào)在30-48小時(shí)出現(xiàn)反彈峰的情況。

3.DiD-MSC細(xì)胞在肺轉(zhuǎn)移癌小鼠模型中歸巢時(shí)間

肺轉(zhuǎn)移癌在接種四周后，用樣機(jī)連續(xù)監(jiān)測(cè)通過(guò)尾靜脈注射DiD標(biāo)記的MSC細(xì)胞，測(cè)得MSC在循環(huán)中清除曲線及循環(huán)時(shí)間如圖6所示，每分鐘MSC細(xì)胞數(shù)在循環(huán)中呈逐漸減少趨勢(shì)(圖6)，在循環(huán)中第四小時(shí)出現(xiàn)了數(shù)量增多，兩小時(shí)后循環(huán)中DiD信號(hào)數(shù)量陡降，并在第七天從循環(huán)中清除。

實(shí)施例2

所述的激發(fā)光系統(tǒng)A包含多種激光波長(zhǎng)，該激光波長(zhǎng)在紫外波段和/或可見(jiàn)光波段，不同的激光波段對(duì)應(yīng)不同的熒光染料，激光波長(zhǎng)的選擇根據(jù)不同情況選用不同的染料。在本實(shí)施例中選用紫外光波長(zhǎng)，染料對(duì)應(yīng)選用丹磺酰氯等。