本發(fā)明屬于微量檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種指紋遺留多種毒品識別和指紋成像的方法。

背景技術(shù)：

近年來，藥物濫用問題在我國越來越嚴重。目前對疑似吸毒人員進行毒品檢測一般采取尿檢或血檢，實踐中往往遇到被檢查人不配合取樣或者更換檢測樣品等問題。因此，利用方便快速且可靠的測試方法篩查吸毒和攜毒人員對于打擊毒品犯罪十分關(guān)鍵。

指紋作為重要的生物識別手段，具有唯一性、終身不變性和方便性。吸毒者在吸食時或相關(guān)人員接觸毒品后，毒品會沾到指紋上；另一方面，通過汗液代謝，少量毒品會通過吸毒者手指上的汗液分泌孔殘留在指紋上。利用指紋遺留物質(zhì)進行毒品識別可以使毒品信息與個人身份(指紋)相結(jié)合，具有取樣簡便、快速可靠、識別準確等優(yōu)勢。

納米顆粒增強免疫法在納米顆粒表面修飾毒品抗體，利用抗原抗體特異反應(yīng)標記指紋中的毒品，通過熒光信號實現(xiàn)指紋成像，在吸毒和攜毒人員的快速篩查領(lǐng)域有良好的應(yīng)用前景。然而，現(xiàn)有的納米載體增強免疫法在指紋遺留物質(zhì)毒品識別時存在一枚指印一次只能檢測一種毒品的局限性。而在實際應(yīng)用中，一般情況下對于待測指紋中的毒品種類是未知的，且在犯罪現(xiàn)場獲取的指紋數(shù)量往往有限，所以需要對一枚指紋同時進行多種毒品識別。另外，現(xiàn)有的檢測方法通常需要使用第二抗體等進行熒光標記或增強，操作過程復(fù)雜，實驗周期較長，而且實驗過程中需多次沖洗指印，容易造成指印物質(zhì)損失。因此，若能采用簡便快速的方法對一枚指印同時篩查多種毒品，同時進行指紋成像，將具有很大的實際價值。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種指紋遺留多種毒品識別和指紋成像的方法，通過所述方法，檢測過程只需一步反應(yīng)即可同時實現(xiàn)指紋成像和指紋遺留多種毒品識別，且利用一枚指紋可以同時檢測多種毒品。

本發(fā)明的一種指紋遺留多種毒品識別和指紋成像的方法，步驟如下：

1)將彩色熒光微球溶于磷酸鹽緩沖液中，再將其加入體積比4:1～5:3的EDC(65～80mM)/NHS(15～30mM)混合液中活化1～5小時。離心后去除上清液，離心沉淀用磷酸鹽緩沖液溶解，得到活化微球溶液。在活化微球溶液中加入0.1～2mg/ml毒品抗體，孵育1～4小時，離心后去除上清液，離心沉淀即為毒品抗體修飾的彩色熒光微球。

2)將2～5種所述毒品抗體修飾的彩色熒光微球混合溶解在含有0.2～5g/L牛血清蛋白、0.5～5g/L非離子型表面活性劑和0.1～2g/L助懸劑的磷酸鹽緩沖液中，得到檢測液；

3)將檢測液滴加到指印遺留部位，在37℃濕潤環(huán)境下反應(yīng)5～30分鐘。除去檢測液后，用磷酸鹽緩沖液緩慢沖洗指印。用熒光微球激發(fā)波長的光照射指印部位，記錄熒光微球發(fā)射波長下的圖像，即可獲得熒光指紋圖像，并通過熒光顏色確定指印中的毒品種類。

該技術(shù)方案中，所述彩色熒光微球可以是紅色熒光微球、黃色熒光微球、綠色熒光微球、藍色熒光微球、或紫色熒光微球。

所述的毒品可以是嗎啡、苯丙胺、甲基苯丙胺、氯胺酮、或四氫大麻酚，毒品抗體即指上述各種毒品相應(yīng)的抗體。

所述的非離子型表面活性劑可以是Tween20、Tween40、Span40、Span80、TritonX-100中的一種或幾種。

所述的助懸劑可以是乙二醇、丙三醇、聚乙二醇中的一種或幾種。

本發(fā)明的有益效果在于：

本發(fā)明中的熒光微球具有毒品識別與指紋成像雙重功能，利用熒光微球的熒光信號直接形成指紋圖像，同時通過圖像中的熒光顏色可直接判斷指紋中的毒品種類。本發(fā)明方法操作過程簡單，檢測時間短，檢測過程只需一步反應(yīng)即可同時實現(xiàn)指紋成像和指紋遺留多種毒品的識別，可應(yīng)用于吸毒和攜毒人員的快速篩查領(lǐng)域。

附圖說明

圖1是實施例1中的含有嗎啡指紋的熒光顯微照片。

圖2是實施例1中的含有氯胺酮指紋的熒光顯微照片。

圖3是實施例1中的不含嗎啡和氯胺酮指紋的熒光顯微照片。

具體實施方式

本發(fā)明的方法是在彩色熒光微球表面修飾特定的毒品抗體，使微球本身具有的熒光顏色特征與所修飾的毒品抗體種類相關(guān)聯(lián)；再混合多種所述毒品抗體修飾的彩色熒光微球，得到檢測液；再用所述檢測液與指印物質(zhì)進行反應(yīng)，指印中的毒品選擇性地與相應(yīng)的抗體發(fā)生特異性結(jié)合，除去未反應(yīng)的熒光微球和抗體，利用結(jié)合到指印上的微球熒光信號實現(xiàn)潛指紋成像，同時，通過彩色熒光微球的顏色確定指印中的毒品抗原種類，實現(xiàn)一枚指印一次識別多種毒品。該方法利用微球的熒光信號直接成像，不需要使用第二抗體等進行熒光標記或增強，操作過程簡單，檢測過程只需一步反應(yīng)即可同時實現(xiàn)指紋成像和指紋遺留多種毒品識別。

下面結(jié)合具體實例進行詳細說明。

實施例1

1)將綠色和紅色熒光微球分別溶于磷酸鹽緩沖液中，再將其分別加入體積比4:1的EDC(75mM)/NHS(25mM)混合液中活化4小時。離心后去除上清液，離心沉淀用磷酸鹽緩沖液溶解，得到活化綠色熒光微球溶液和活化紅色熒光微球溶液。在活化綠色微球溶液中加入0.5mg/mL嗎啡抗體，在活化紅色微球溶液中加入0.5mg/mL氯胺酮抗體，分別孵育2小時，離心后去除上清液，離心沉淀即為嗎啡抗體修飾的綠色熒光微球和氯胺酮抗體修飾的紅色熒光微球。

2)將嗎啡抗體修飾的綠色熒光微球和氯胺酮抗體修飾的紅色熒光微球混合溶解在含有1g/L牛血清蛋白、2g/L Tween20和1.5g/L乙二醇的磷酸鹽緩沖液中，得到檢測液；

3)分別將100μl檢測液滴加到1～3號三枚未知指紋上，在37℃濕潤環(huán)境下反應(yīng)30分鐘。除去檢測液后，用磷酸鹽緩沖液緩慢沖洗指印3次。對三枚未知指紋指紋分別用480nm波長的光照射，觀察記錄520nm波長下的圖像。用590nm波長的光照射指紋，觀察記錄620nm波長下的圖像。1號指紋紋線發(fā)綠色熒光，如圖1所示，即可判斷此枚指紋中含有嗎啡。2號指紋紋線發(fā)紅色熒光，如圖2所示，即可判斷此枚指紋中含有氯胺酮。3號指紋紋線在兩種光照射下均不發(fā)熒光，如圖3所示，即可判斷此枚指紋中不含嗎啡和氯胺酮。

實施例2

1)將藍色、綠色和黃色熒光微球分別溶于磷酸鹽緩沖液中，再將其分別加入體積比3:1的EDC(70mM)/NHS(20mM)混合液中活化3小時。離心后去除上清液，離心沉淀用磷酸鹽緩沖液溶解，得到活化藍色、綠色和黃色熒光微球溶液。在活化藍色微球溶液中加入1mg/mL苯丙胺抗體，在活化綠色微球溶液中加入1mg/mL甲基苯丙胺抗體，在活化黃色微球溶液中加入1mg/mL四氫大麻酚抗體，分別孵育3小時，離心后去除上清液，離心沉淀即為苯丙胺抗體修飾的藍色熒光微球、甲基苯丙胺抗體修飾的綠色熒光微球和四氫大麻酚抗體修飾的黃色熒光微球。

2)將苯丙胺抗體修飾的藍色熒光微球、甲基苯丙胺抗體修飾的綠色熒光微球和四氫大麻酚抗體修飾的黃色熒光微球混合溶解在含有2g/L牛血清蛋白、1g/L Span40和2g/L丙三醇的磷酸鹽緩沖液中，得到檢測液；

3)將100μl檢測液滴加到未知指紋上，在37℃濕潤環(huán)境下反應(yīng)20分鐘。除去檢測液后，用磷酸鹽緩沖液緩慢沖洗指印3次。對未知指紋指紋分別用400nm波長的光照射，觀察記錄420nm波長下的圖像。用480nm波長的光照射指紋，觀察記錄520nm波長下的圖像。用550nm波長的光照射指紋，觀察記錄570nm波長下的圖像。指紋紋線發(fā)藍色熒光，即可判斷此枚指紋中含有苯丙胺。指紋紋線發(fā)綠色熒光，即可判斷此枚指紋中含有甲基苯丙胺。指紋紋線發(fā)黃色熒光，即可判斷此枚指紋中含有四氫大麻酚。指紋紋線在三種光照射下均不發(fā)光，即可判斷此枚指紋中不含苯丙胺、甲基苯丙胺和四氫大麻酚。

實施例3

1)將紅色、黃色、綠色、藍色、紫色熒光微球分別溶于磷酸鹽緩沖液中，再將其分別加入體積比5:2的EDC(75mM)/NHS(30mM)混合液中活化2小時。離心后去除上清液，離心沉淀用磷酸鹽緩沖液溶解，得到活化綠色熒光微球溶液和活化紅色熒光微球溶液。在活化紅色、黃色、綠色、藍色、紫色熒光微球溶液中分別加入2mg/mL嗎啡抗體、苯丙胺抗體、甲基苯丙胺抗體、氯胺酮抗體和四氫大麻酚抗體(一種溶液中只加入一種抗體)，分別孵育4小時，離心后去除上清液，離心沉淀即為嗎啡抗體修飾的紅色熒光微球、苯丙胺抗體修飾的黃色熒光微球、甲基苯丙胺抗體修飾的綠色熒光微球、氯胺酮抗體修飾的藍色熒光微球和四氫大麻酚抗體修飾的紫色熒光微球。

2)將上述熒光微球混合溶解在含有2.5g/L牛血清蛋白、2.5g/L TritonX-100和1.5g/L聚乙二醇的磷酸鹽緩沖液中，得到檢測液；

3)將100μl檢測液滴加到未知指紋上，在37℃濕潤環(huán)境下反應(yīng)20分鐘。除去檢測液后，用磷酸鹽緩沖液緩慢沖洗指印3次。對未知指紋指紋分別用590nm波長的光照射指紋，觀察記錄620nm波長下的圖像。用550nm波長的光照射指紋，觀察記錄570nm波長下的圖像。用480nm波長的光照射指紋，觀察記錄520nm波長下的圖像。用400nm波長的光照射，觀察記錄420nm波長下的圖像。用380nm波長的光照射指紋，觀察記錄400nm波長下的圖像。指紋紋線發(fā)紅色熒光，即可判斷此枚指紋中含有嗎啡。指紋紋線發(fā)黃色熒光，即可判斷此枚指紋中含有苯丙胺。指紋紋線發(fā)綠色熒光，即可判斷此枚指紋中含有甲基苯丙胺。指紋紋線發(fā)藍色熒光，即可判斷此枚指紋中含有氯胺酮。指紋紋線發(fā)紫色熒光，即可判斷此枚指紋中含有四氫大麻酚。指紋紋線在五種光照射下均不發(fā)光，即可判斷此枚指紋中不含嗎啡、苯丙胺、甲基苯丙胺、氯胺酮和四氫大麻酚。