本發(fā)明屬于免疫分析和生物傳感技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大的免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

腫瘤標(biāo)志物的靈敏檢測(cè)，在臨床上對(duì)于腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)，腫瘤高危人群的篩選、良性和惡性腫瘤的鑒別診斷、腫瘤發(fā)展程度的判斷，腫瘤的治療效果的觀察和評(píng)價(jià)及腫瘤復(fù)發(fā)和預(yù)后的預(yù)測(cè)產(chǎn)生極大的影響，引起人們的廣泛關(guān)注。

電化學(xué)免疫傳感器已經(jīng)廣泛用于腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，夾心型電化學(xué)免疫傳感器結(jié)合了高特異性的免疫分析技術(shù)和高靈敏的電化學(xué)分析技術(shù)，具有靈敏度高、制備簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、成本低等優(yōu)點(diǎn)，在臨床檢驗(yàn)、環(huán)境監(jiān)測(cè)、食品安全控制、生物監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域都有重要的應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明中使用的石墨烯是褶皺的二維平面薄膜，具有大的比表面積，良好的電子傳遞能力和催化性能，能有效吸附固載抗體。TaC納米片高溫還原在石墨烯表面，有效地避免了石墨烯片層的堆疊，TaC具有鉑族金屬的電子結(jié)構(gòu)以及在費(fèi)米能級(jí)上的相似性，具有和貴金屬類似的催化活性。此外，相對(duì)于過(guò)渡金屬氧化物（TMO）和過(guò)渡金屬硫化物（TMS），TaC在酸堿環(huán)境中具有更高的穩(wěn)定性。十面體的銀納米粒子（Ag DeNps）相對(duì)于銀納米微球，擁有更多的催化活性位點(diǎn)，但銀納米粒子的穩(wěn)定性相對(duì)較差，均勻包覆的金納米粒子可以有效的提高銀納米粒子的穩(wěn)定性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法及應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)了對(duì)腫瘤標(biāo)志物的超靈敏檢測(cè)。

本發(fā)明的目的之一是提供一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法。

本發(fā)明的目的之二是將所制備的基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器應(yīng)用于腫瘤標(biāo)志物的高靈敏、特異性檢測(cè)。

本發(fā)明的技術(shù)方案，包括以下步驟。

1. 一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法，步驟如下：

（1）將直徑為3 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；

（2）將上述電極置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.8% ~ 1.0%的HAuCl₄溶液中，在-0.2V下掃描30s,在電極表面形成電沉積金基底，用超純水沖洗，晾干；

（3）繼續(xù)將6 μL、10 ~ 15 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體滴加到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中干燥；

（4）繼續(xù)將3 μL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的牛血清白蛋白溶液滴加到電極表面，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

（5）滴加6 μL、0.0005 ~ 40 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中干燥；

（6）將6 μL、3 ~ 5mg/mL的負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4℃冰箱中晾干，制得一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器。

2. 如權(quán)利要求1所述的一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法，所述金包覆十面體銀納米粒子的制備，步驟如下：

（1）十面體銀納米粒子溶液的制備

取13 ~ 15 mL的超純水加入到20 mL的燒杯中，依次緩慢加入0.05 mol/L 、0.5 mL檸檬酸鈉，0.05 mol/L、22.5 μL聚對(duì)苯乙烯磺酸鈉，0.05 mol/L、50μL精氨酸，0.05 mol/L、0.4mL硝酸銀，新配制的0.1mol/L 、0.1 ~ 0.3 mL硼氫化鈉，溶液由淡黃色變?yōu)榱咙S色；600rpm條件下持續(xù)攪拌45 min，加入0.2 ~ 0.4 mL、30% H₂O₂，繼續(xù)攪拌30 min，生成的溶液置于藍(lán)色的LED燈光下13 ~ 15 h，制得十面體銀納米粒子的溶液，置于4℃冰箱中保存，備用；

（2）金包覆十面體銀納米粒子的制備

將新配置的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%、1.0 ~ 2.0 mL氯金酸水溶液緩慢加入到3.0 mL的十面體銀納米粒子的溶液中，震蕩至溶液由黃色變?yōu)榫萍t色，制得金包覆十面體銀納米粒子的溶液；

3. 如權(quán)利要求1所述的一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法，所述負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備，步驟如下：

（1）負(fù)載TaC的石墨烯的制備

①石墨烯的制備

在冰水浴和攪拌條件下，將2.0 ~ 3.0g天然石墨粉緩緩地加入到45 ~ 60 mL濃硫酸中，持續(xù)攪拌15 ~ 25 min；邊攪拌邊依次加入10.0 ~ 15.0g KMnO₄ 和 5.0 ~ 7.5 g NaNO₃，保持溶液溫度低于20℃，攪拌10 ~ 15 min，再升溫至40℃，持續(xù)攪拌30 ~ 40 min，加入50 ~ 75mL的超純水，將溶液置于油浴鍋中，95℃下加熱30 ~ 40 min；將200mL的超純水和10 ~ 15 mL、30% 的H₂O₂加入到上述溶液中，反應(yīng)至溶液由黑褐色變?yōu)辄S色，分別用1 mol/ L HCl和超純水洗滌三次；65℃真空干燥12h備用；

②負(fù)載TaC的石墨烯的制備

將上述制備的0.1 ~ 0.2 g石墨烯分散在200 mL的超純水中，超聲2 h，加入0.05 ~ 0.1gK₂TaF₇繼續(xù)超聲30 ~ 50 min，將混合液置于油浴鍋中， 90℃下攪拌，蒸發(fā)掉大部分的水，直至變?yōu)槟z狀；將凝膠狀液體置于表面皿中，在0℃下冷凍干燥12~ 16 h，得到疏松多孔海綿狀固體產(chǎn)物，將所得固體在氬氣保護(hù)、1200℃下煅燒2h，得到負(fù)載TaC的石墨烯；

（2）負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的制備

取5~ 7mg 負(fù)載TaC的石墨烯加入到3.0 mL 金包覆十面體銀納米粒子的溶液中，超聲30min，形成負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯溶液，離心；分別用無(wú)水乙醇及超純水洗滌三次、30℃真空干燥24h，得到負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末；

（3）負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備

將6 ~ 10 mg的負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末溶于1 mL的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，震蕩溶解，再加入100 μL、80 ~ 120 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)抗體溶液和900 μL、50 mmol/L的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液，4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩，孵化12 h，制得負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

4.如權(quán)利要求1所述的制備方法制備的一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器，用于腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)，檢測(cè)步驟如下：

（1）使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測(cè)試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.0 ~ 8.0磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測(cè)試；

（2）用時(shí)間-電流法對(duì)分析物進(jìn)行檢測(cè)，輸入電壓為-0.4 V，取樣間隔 0.1 s，運(yùn)行時(shí)間400 s；

（3）當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μL、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化。

上述所述腫瘤標(biāo)志物選自下列之一：CA199、CA125。

本發(fā)明所用原材料均可在化學(xué)試劑公司或生物制藥公司購(gòu)買(mǎi)。

本發(fā)明的有益成果

（1）本發(fā)明使用了負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯納米復(fù)合材料，石墨烯有大的比表面積，可增加抗體的結(jié)合位點(diǎn)，石墨烯氧化得石墨烯，是親水性物質(zhì)，在水中有優(yōu)越的分散性，且羧基能與抗體上的氨基有效結(jié)合，TaC納米薄片在石墨烯片層上高溫還原能有效避免石墨烯片層的堆疊，TaC具有鉑族金屬的電子結(jié)構(gòu)以及在費(fèi)米能級(jí)上的相似性，具有和貴金屬類似的催化活性，能夠有效地提高對(duì)H₂O₂的催化性能。此外，相對(duì)于過(guò)渡金屬氧化物和過(guò)渡金屬硫化物，TaC在酸堿環(huán)境中具有更高的穩(wěn)定性。十面體的銀納米粒子相對(duì)于銀納米微球，擁有更多的催化活性位點(diǎn)，均勻包覆的金納米粒子可以有效的提高銀納米粒子的穩(wěn)定性。

（2）采用負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯作為捕獲抗體標(biāo)記物，石墨烯有極高的強(qiáng)度和良好的導(dǎo)電性，具有較高的穩(wěn)定性，TaC納米薄片還原在石墨烯表面，由于TaC較高的催化活性，提高了對(duì)過(guò)氧化氫的催化作用。金包覆十面體銀納米粒子通過(guò)物理吸附作用負(fù)載在石墨烯表面，實(shí)現(xiàn)了電化學(xué)信號(hào)的多重放大，從而有效提高了構(gòu)建的傳感器的靈敏度，降低了檢測(cè)限；

（3）一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器對(duì)腫瘤標(biāo)志物CA199的檢測(cè)，其線性范圍0.5 pg ~ 40 ng/mL，檢測(cè)限最低0.16 pg/mL，對(duì)腫瘤標(biāo)志物CA125的檢測(cè)，其線性范圍0.5 pg ~ 35 ng/mL，檢測(cè)限最低0.16 pg/mL表明一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器可以達(dá)到準(zhǔn)確測(cè)定的目的。

具體實(shí)施方式

現(xiàn)將本發(fā)明通過(guò)具體實(shí)施方式進(jìn)一步說(shuō)明，但不限于此

實(shí)施例1一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法，步驟如下：

（1）將直徑為3 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；

（2）將上述電極置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.8%的HAuCl₄溶液中，在-0.2V下掃描30s,在電極表面形成電沉積金基底，用超純水沖洗，晾干；

（3）繼續(xù)將6 μL、10 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體滴加到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中干燥；

（4）繼續(xù)將3 μL、1.0 mg/mL的牛血清白蛋白溶液滴加到電極表面，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

（5）滴加6 μL、0.0005 ~ 40 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中干燥；

（6）將6 μL、3 mg/mL的負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4℃冰箱中晾干，制得一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器。

實(shí)施例2一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法，步驟如下：

（1）將直徑為3 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；

（2）將上述電極置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.9%的HAuCl₄溶液中，在-0.2V下掃描30s,在電極表面形成電沉積金基底，用超純水沖洗，晾干；

（3）繼續(xù)將6 μL、12 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體滴加到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中干燥；

（4）繼續(xù)將3 μL、2.0 mg/mL的牛血清白蛋白溶液滴加到電極表面，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

（5）滴加6 μL、0.0005 ~ 40 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中干燥；

（6）將6 μL、4 mg/mL的負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4℃冰箱中晾干，制得一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器。

實(shí)施例3一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法，步驟如下：

（1）將直徑為3 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉打磨，超純水清洗干凈；

（2）將上述電極置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.0%的HAuCl₄溶液中，在-0.2V下掃描30s,在電極表面形成電沉積金基底，用超純水沖洗，晾干；

（3）繼續(xù)將6 μL、15 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體滴加到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中干燥；

（4）繼續(xù)將3 μL、3.0 mg/mL的牛血清白蛋白溶液滴加到電極表面，超純水沖洗電極表面，4 ℃冰箱中晾干；

（5）滴加6 μL、0.0005 ~ 40 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液，超純水沖洗電極表面，4℃冰箱中干燥；

（6）將6 μL、5 mg/mL的負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液，滴涂于電極表面上，置于4℃冰箱中晾干，制得一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器。

實(shí)施例4所述金包覆十面體銀納米粒子的制備，步驟如下：

（1）十面體銀納米粒子溶液的制備

取13 mL的超純水加入到20 mL的燒杯中，依次緩慢加入0.05 mol/L 、0.5 mL檸檬酸鈉，0.05 mol/L、22.5 μL聚對(duì)苯乙烯磺酸鈉，0.05 mol/L、50μL精氨酸，0.05 mol/L、0.4mL硝酸銀，新配制的0.1mol/L 、0.1 mL硼氫化鈉，溶液由淡黃色變?yōu)榱咙S色；600rpm條件下持續(xù)攪拌45 min，加入0.2 mL、30% H₂O₂，繼續(xù)攪拌30 min，生成的溶液置于藍(lán)色的LED燈光下13 h，制得十面體銀納米粒子的溶液，置于4℃冰箱中保存，備用；

（2）金包覆十面體銀納米粒子的制備

將新配置的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%、1.0 mL氯金酸水溶液緩慢加入到3.0 mL的十面體銀納米粒子的溶液中，震蕩至溶液由黃色變?yōu)榫萍t色，制得金包覆十面體銀納米粒子的溶液。

實(shí)施例5所述金包覆十面體銀納米粒子的制備，步驟如下：

（1）十面體銀納米粒子溶液的制備

取14 mL的超純水加入到20 mL的燒杯中，依次緩慢加入0.05 mol/L 、0.5 mL檸檬酸鈉，0.05 mol/L、22.5 μL聚對(duì)苯乙烯磺酸鈉，0.05 mol/L、50μL精氨酸，0.05 mol/L、0.4mL硝酸銀，新配制的0.1mol/L 、0.2 mL硼氫化鈉，溶液由淡黃色變?yōu)榱咙S色；600rpm條件下持續(xù)攪拌45 min，加入0.3 mL、30% H₂O₂，繼續(xù)攪拌30 min，生成的溶液置于藍(lán)色的LED燈光下14 h，制得十面體銀納米粒子的溶液，置于4℃冰箱中保存，備用；

（2）金包覆十面體銀納米粒子的制備

將新配置的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%、1.5 mL氯金酸水溶液緩慢加入到3.0 mL的十面體銀納米粒子的溶液中，震蕩至溶液由黃色變?yōu)榫萍t色，制得金包覆十面體銀納米粒子的溶液。

實(shí)施例6所述金包覆十面體銀納米粒子的制備，步驟如下：

（1）十面體銀納米粒子溶液的制備

取15 mL的超純水加入到20 mL的燒杯中，依次緩慢加入0.05 mol/L 、0.5 mL檸檬酸鈉，0.05 mol/L、22.5 μL聚對(duì)苯乙烯磺酸鈉，0.05 mol/L、50μL精氨酸，0.05 mol/L、0.4mL硝酸銀，新配制的0.1mol/L 、0.3 mL硼氫化鈉，溶液由淡黃色變?yōu)榱咙S色；600rpm條件下持續(xù)攪拌45 min，加入0.4 mL、30% H₂O₂，繼續(xù)攪拌30 min，生成的溶液置于藍(lán)色的LED燈光下15 h，制得十面體銀納米粒子的溶液，置于4℃冰箱中保存，備用；

（2）金包覆十面體銀納米粒子的制備

將新配置的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%、2.0 mL氯金酸水溶液緩慢加入到3.0 mL的十面體銀納米粒子的溶液中，震蕩至溶液由黃色變?yōu)榫萍t色，制得金包覆十面體銀納米粒子的溶液。

實(shí)施例7所述負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備，步驟如下：

（1）負(fù)載TaC的石墨烯的制備

①石墨烯的制備

在冰水浴和攪拌條件下，將2.0 g天然石墨粉緩緩地加入到45 mL濃硫酸中，持續(xù)攪拌15 min；邊攪拌邊依次加入10.0 g KMnO₄ 和 5.0 g NaNO₃，保持溶液溫度低于20℃，攪拌10 min，再升溫至40℃，持續(xù)攪拌30 min，加入50 mL的超純水，將溶液置于油浴鍋中，95℃下加熱30 min；將200mL的超純水和10 mL、30% 的H₂O₂加入到上述溶液中，反應(yīng)至溶液由黑褐色變?yōu)辄S色，分別用1 mol/ L HCl和超純水洗滌三次；65℃真空干燥12 h備用；

②負(fù)載TaC的石墨烯的制備

將上述制備的0.1 g石墨烯分散在200 mL的超純水中，超聲2 h，加入0.05g K₂TaF₇繼續(xù)超聲30 min，將混合液置于油浴鍋中， 90℃下攪拌，蒸發(fā)掉大部分的水，直至變?yōu)槟z狀；將凝膠狀液體置于表面皿中，在0℃下冷凍干燥12 h，得到疏松多孔海綿狀固體產(chǎn)物，將所得固體在氬氣保護(hù)、1200℃下煅燒2 h，得到負(fù)載TaC的石墨烯；

（2）負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的制備

取5 mg 負(fù)載TaC的石墨烯加入到3.0 mL 金包覆十面體銀納米粒子的溶液中，超聲30 min，形成負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯溶液，離心；分別用無(wú)水乙醇及超純水洗滌三次、30℃真空干燥24 h，得到負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末；

（3）負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備

將6 mg的負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末溶于1 mL的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，震蕩溶解，再加入100 μL、80 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)抗體溶液和900 μL、50 mmol/L的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液，4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩，孵化12 h，制得負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

實(shí)施例8所述負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備，步驟如下：

（1）負(fù)載TaC的石墨烯的制備

①石墨烯的制備

在冰水浴和攪拌條件下，將2.5 g天然石墨粉緩緩地加入到55 mL濃硫酸中，持續(xù)攪拌20 min；邊攪拌邊依次加入12.5 g KMnO₄ 和 6.0 g NaNO₃，保持溶液溫度低于20℃，攪拌13 min，再升溫至40℃，持續(xù)攪拌35 min，加入65 mL的超純水，將溶液置于油浴鍋中，95℃下加熱35 min；將200mL的超純水和12.5 mL、30% 的H₂O₂加入到上述溶液中，反應(yīng)至溶液由黑褐色變?yōu)辄S色，分別用1 mol/ L HCl和超純水洗滌三次；65℃真空干燥12h備用；

②負(fù)載TaC的石墨烯的制備

將上述制備的0.15 g石墨烯分散在200 mL的超純水中，超聲2 h，加入0.075 g K₂TaF₇繼續(xù)超聲40 min，將混合液置于油浴鍋中， 90℃下攪拌，蒸發(fā)掉大部分的水，直至變?yōu)槟z狀；將凝膠狀液體置于表面皿中，在0℃下冷凍干燥14 h，得到疏松多孔海綿狀固體產(chǎn)物，將所得固體在氬氣保護(hù)、1200℃下煅燒2 h，得到負(fù)載TaC的石墨烯；

（2）負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的制備

取6 mg 負(fù)載TaC的石墨烯加入到3.0 mL 金包覆十面體銀納米粒子的溶液中，超聲30 min，形成負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯溶液，離心；分別用無(wú)水乙醇及超純水洗滌三次、30℃真空干燥24 h，得到負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末；

（3）負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備

將8 mg的負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末溶于1 mL的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，震蕩溶解，再加入100 μL、100 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)抗體溶液和900 μL、50 mmol/L的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液，4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩，孵化12 h，制得負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

實(shí)施例9所述負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備，步驟如下：

（1）負(fù)載TaC的石墨烯的制備

①石墨烯的制備

在冰水浴和攪拌條件下，將3.0 g天然石墨粉緩緩地加入到60 mL濃硫酸中，持續(xù)攪拌25 min；邊攪拌邊依次加入15.0g KMnO₄ 和 7.5 g NaNO₃，保持溶液溫度低于20℃，攪拌15 min，再升溫至40℃，持續(xù)攪拌40 min，加入75mL的超純水，將溶液置于油浴鍋中，95℃下加熱40 min；將200mL的超純水和15 mL、30% 的H₂O₂加入到上述溶液中，反應(yīng)至溶液由黑褐色變?yōu)辄S色，分別用1 mol/ L HCl和超純水洗滌三次；65℃真空干燥12 h備用；

②負(fù)載TaC的石墨烯的制備

將上述制備的0.2 g石墨烯分散在200 mL的超純水中，超聲2 h，加入0.1 g K₂TaF₇繼續(xù)超聲50 min，將混合液置于油浴鍋中， 90℃下攪拌，蒸發(fā)掉大部分的水，直至變?yōu)槟z狀；將凝膠狀液體置于表面皿中，在0℃下冷凍干燥16 h，得到疏松多孔海綿狀固體產(chǎn)物，將所得固體在氬氣保護(hù)、1200℃下煅燒2 h，得到負(fù)載TaC的石墨烯；

（2）負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的制備

取7 mg 負(fù)載TaC的石墨烯加入到3.0 mL 金包覆十面體銀納米粒子的溶液中，超聲30min，形成負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯溶液，離心；分別用無(wú)水乙醇及超純水洗滌三次、30℃真空干燥24h，得到負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末；

（3）負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液的制備

將10 mg的負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末溶于1 mL的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液中，震蕩溶解，再加入100 μL、120 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)抗體溶液和900 μL、50 mmol/L的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液，4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩，孵化12 h，制得負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測(cè)抗體孵化物溶液，4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

實(shí)施例10 腫瘤標(biāo)志物CA199的檢測(cè)

1）使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測(cè)試，飽和甘汞電極為參比電極，鉑絲電極為輔助電極，所制備的傳感器為工作電極，在10 mL、50 mmol/L的pH 5.0 ~ 8.0磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測(cè)試；

（2）用時(shí)間-電流法對(duì)分析物進(jìn)行檢測(cè)，輸入電壓為-0.4 V，取樣間隔 0.1 s，運(yùn)行時(shí)間400 s；

（3）當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后，每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μL、5 mol/L的雙氧水溶液，記錄電流變化；

（4）根據(jù)所得電流與CA199濃度之間的線性關(guān)系，繪制工作曲線，測(cè)得線性范圍為0.5pg ~ 40 ng/mL，檢測(cè)限最低0.16 pg/mL。

實(shí)施例11腫瘤標(biāo)志物CA125的檢測(cè)

按照實(shí)施例10的方法對(duì)樣品中CA125進(jìn)行檢測(cè)，其線性范圍為0.5 pg ~ 35 ng/mL，檢測(cè)限為0.16 pg/mL。