1.一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法,其特征在于,步驟如下:
(1)將直徑為3 mm的玻碳電極用Al2O3拋光粉打磨,超純水清洗干凈;
(2)將上述電極置于質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.8% ~ 1.0%的HAuCl4溶液中,在-0.2V下掃描30s,在電極表面形成電沉積金基底,用超純水沖洗,晾干;
(3)繼續(xù)將6 μL、10 ~ 15 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物捕獲抗體滴加到電極表面,超純水沖洗,4℃冰箱中干燥;
(4)繼續(xù)將3 μL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的牛血清白蛋白溶液滴加到電極表面,超純水沖洗電極表面,4 ℃冰箱中晾干;
(5)滴加6 μL、0.0005 ~ 40 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標(biāo)志物抗原溶液,超純水沖洗電極表面,4℃冰箱中干燥;
(6)將6 μL、3 ~ 5mg/mL的負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測抗體孵化物溶液,滴涂于電極表面上,置于4℃冰箱中晾干,制得一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器。
2.如權(quán)利要求1所述的一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法,所述金包覆十面體銀納米粒子的制備,步驟如下:
(1)十面體銀納米粒子溶液的制備
取13 ~ 15 mL的超純水加入到20 mL的燒杯中,依次緩慢加入0.05 mol/L 、0.5 mL檸檬酸鈉,0.05 mol/L、22.5 μL聚對苯乙烯磺酸鈉,0.05 mol/L、50μL精氨酸,0.05 mol/L、0.4mL硝酸銀,新配制的0.1mol/L 、0.1 ~ 0.3 mL硼氫化鈉,溶液由淡黃色變?yōu)榱咙S色;600rpm條件下持續(xù)攪拌45 min,加入0.2 ~ 0.4 mL、30% H2O2,繼續(xù)攪拌30 min,生成的溶液置于藍(lán)色的LED燈光下13 ~ 15 h,制得十面體銀納米粒子的溶液,置于4℃冰箱中保存,備用;
(2)金包覆十面體銀納米粒子的制備
將新配置的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%、1.0 ~ 2.0 mL氯金酸水溶液緩慢加入到3.0 mL的十面體銀納米粒子的溶液中,震蕩至溶液由黃色變?yōu)榫萍t色,制得金包覆十面體銀納米粒子的溶液。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器的制備方法,所述負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測抗體孵化物溶液的制備,步驟如下:
(1)負(fù)載TaC的石墨烯的制備
①石墨烯的制備
在冰水浴和攪拌條件下,將2.0 ~ 3.0g天然石墨粉緩緩地加入到45 ~ 60 mL濃硫酸中,持續(xù)攪拌15 ~ 25 min;邊攪拌邊依次加入10.0 ~ 15.0 g KMnO4和 5.0 ~ 7.5 g NaNO3,保持溶液溫度低于20℃,攪拌10 ~ 15 min,再升溫至40℃,持續(xù)攪拌30 ~ 40 min,加入50 ~ 75 mL的超純水,將溶液置于油浴鍋中,95℃下加熱30 ~ 40 min;將200mL的超純水和10 ~ 15 mL、30% 的H2O2加入到上述溶液中,反應(yīng)至溶液由黑褐色變?yōu)辄S色,分別用1 mol/ L HCl和超純水洗滌三次;65℃真空干燥12 h備用;
②負(fù)載TaC的石墨烯的制備
將上述制備的0.1 ~ 0.2 g石墨烯分散在200 mL的超純水中,超聲2 h,加入0.05 ~ 0.1 g K2TaF7繼續(xù)超聲30 ~ 50 min,將混合液置于油浴鍋中, 90℃下攪拌,蒸發(fā)掉大部分的水,直至變?yōu)槟z狀;將凝膠狀液體置于表面皿中,在0℃下冷凍干燥12~ 16 h,得到疏松多孔海綿狀固體產(chǎn)物,將所得固體在氬氣保護(hù)、1200℃下煅燒2h,得到負(fù)載TaC的石墨烯;
(2)負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的制備
取5~ 7 mg 負(fù)載TaC的石墨烯加入到3.0 mL 金包覆十面體銀納米粒子的溶液中,超聲30 min,形成負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯溶液,離心;分別用無水乙醇及超純水洗滌三次、30℃真空干燥24 h,得到負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末;
(3)負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測抗體孵化物溶液的制備
將6 ~ 10 mg的負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯固體粉末溶于1 mL的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液中,震蕩溶解,再加入100 μL、80 ~ 120 μg/mL的腫瘤標(biāo)志物檢測抗體溶液和900 μL、50 mmol/L的pH 7.4的磷酸鹽緩沖溶液,4℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中振蕩,孵化12 h,制得負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的檢測抗體孵化物溶液,4℃下保存?zhèn)溆谩?/p>
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法制備的一種基于負(fù)載TaC和金包覆十面體銀納米粒子的石墨烯的免疫傳感器,用于腫瘤標(biāo)志物的檢測,檢測步驟如下:
(1)使用電化學(xué)工作站以三電極體系進(jìn)行測試,飽和甘汞電極為參比電極,鉑絲電極為輔助電極,所制備的傳感器為工作電極,在10 mL、50 mmol/L的pH 5.0 ~ 8.0磷酸鹽緩沖溶液中進(jìn)行測試;
(2)用時間-電流法對分析物進(jìn)行檢測,輸入電壓為-0.4 V,取樣間隔 0.1 s,運(yùn)行時間400 s;
(3)當(dāng)背景電流趨于穩(wěn)定后,每隔50 s向10 mL、50 mmol/L的pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液中注入10 μL、5 mol/L的雙氧水溶液,記錄電流變化。
5.如權(quán)利要求1、2、3所述的腫瘤標(biāo)志物,其特征在于,所述腫瘤標(biāo)志物選自下列之一: CA199、CA125。