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技術(shù)領(lǐng)域：
】本發(fā)明涉及一種血細(xì)胞分析儀用溶血?jiǎng)┘捌渲苽浞椒ā?br>背景技術(shù)：
：由于臨床上的需要，五分類儀器的需求越發(fā)明顯，大多地方醫(yī)療機(jī)構(gòu)都已經(jīng)趨向使用五分類儀器，發(fā)達(dá)地區(qū)的鄉(xiāng)鎮(zhèn)醫(yī)療機(jī)構(gòu)都已經(jīng)投入使用。近幾年國內(nèi)市場(chǎng)血細(xì)胞分析儀廠家逐漸增多，如邁瑞、迪瑞、帝邁、深藍(lán)、藍(lán)韻、優(yōu)利特、特康…等等廠家紛紛推出五分類儀器，激光組件設(shè)計(jì)大多相似，不同于目前主流的多角度激光和熒光染色技術(shù)，大多都是仿照國外較早設(shè)計(jì)的結(jié)構(gòu)，采用高低角度激光，有成本低，結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，調(diào)試容易等特點(diǎn)，五分類儀器及配套試劑的組成及制備方法更是多種多樣，由于儀器設(shè)計(jì)原理基本一致，故反應(yīng)體系也非常接近，個(gè)別廠家稀釋比例不同，或者采樣量不同，稀釋比例卻一致，個(gè)中就出現(xiàn)試劑濃度會(huì)有點(diǎn)差異，需要微調(diào)表面活性劑濃度。本發(fā)明提出的配方分兩步處理細(xì)胞，首先a液使白細(xì)胞膨脹球形化和打孔，破壞紅細(xì)胞以免造成計(jì)數(shù)干擾，b液作為反應(yīng)終止劑，加入后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞收縮，加強(qiáng)對(duì)紅細(xì)胞的破壞，此時(shí)樣品就會(huì)被送到激光流動(dòng)池進(jìn)行檢測(cè)。該方法試劑無需加入染色劑，更加簡(jiǎn)單，可以適用于上述大部分國產(chǎn)激光法五分類儀器上，個(gè)別組份濃度適當(dāng)調(diào)整就可以完全滿足多種品牌儀器的需要。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有不同廠家試劑配方不同，提供了一種活性穩(wěn)定，配料簡(jiǎn)單的血細(xì)胞分析儀用溶血?jiǎng)?，其適用于大部分國產(chǎn)激光法五分類儀器，并符合國家及行業(yè)要求、又能準(zhǔn)確地通過血細(xì)胞分析儀測(cè)試血液中各細(xì)胞參數(shù)。本發(fā)明的另一目的是提供了細(xì)胞分析儀用溶血?jiǎng)┑钠渲苽浞椒?。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：一種血細(xì)胞分析儀用溶血?jiǎng)?，包括a、b液，它們的原料均包括抗凝劑、緩沖液、表面活性劑、防腐劑、滲透壓補(bǔ)償劑和工藝用水；所述a液的ph值為4.0～7.0；所述b液的ph值為7.0～10.0。在對(duì)上述血細(xì)胞分析儀用溶血?jiǎng)┑母倪M(jìn)方案中，所述抗凝劑為edta二鈉或edta二鉀；所述a液的緩沖液為檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液或酸氫二鈉－檸檬酸緩沖液；所述b液的緩沖液為碳酸鈉－甲酸緩沖液或甘氨酸－氫氧化鈉緩沖液；所述表面活性劑是十二烷基三甲基氯化銨、乙二醇苯醚中的一種或兩種；所述防腐劑為異噻唑啉酮；所述滲透壓補(bǔ)償劑為氯化鈉或硫酸鈉。在對(duì)上述血細(xì)胞分析儀用溶血?jiǎng)┑母倪M(jìn)方案中，在每制備1000g的a液中，所需的原料組成有：edta二鈉0.1～1％，檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液或磷酸氫二鈉－檸檬酸緩沖液0.03～5％，十二烷基三甲基氯化銨0.01～10％，乙二醇苯醚0.1～1％，異噻唑啉酮0.05～0.1％，氯化鈉0.1～1％，其余加入工藝用水；在每制備1000g的b液中，所需的原料組成有：碳酸鈉－甲酸緩沖液或甘氨酸－氫氧化鈉緩沖液0.03～5％，十二烷基三甲基氯化銨0.01～10％，乙二醇苯醚0.1～1％，異噻唑啉酮0.05～0.1％，氯化鈉1～2％，其余加入工藝用水。一種血細(xì)胞分析儀用溶血?jiǎng)┑闹苽浞椒?，制備所述a、b液的步驟均包括：(1)配液：將抗凝劑、緩沖液、表面活性劑、防腐劑、滲透壓補(bǔ)償劑倒入裝有相當(dāng)于處方量一半的水的配料桶中，用攪拌器或棒攪拌使物料溶解，溶解后加足處方量的水混合；(2)過濾：物料完全溶解后，用過濾器，開啟泵過濾即得。在對(duì)上述血細(xì)胞分析儀用溶血?jiǎng)┑闹苽浞椒ǖ母倪M(jìn)方案中，所述過濾器的濾芯孔徑為0.1μm微孔濾膜。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：鑒于目前大部分國產(chǎn)激光法五分類儀器的設(shè)計(jì)原理基本一致，本發(fā)明提出配方參考相同的細(xì)胞處理原理，設(shè)計(jì)出使白細(xì)胞膨脹成球形化和打孔、破壞紅細(xì)胞以免造成計(jì)數(shù)干擾的a液，和使反應(yīng)終止、加入后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞收縮、加強(qiáng)對(duì)紅細(xì)胞的破壞的b液，經(jīng)過a、b液處理后的樣品被送到激光流動(dòng)池?zé)o需加入染色劑便可進(jìn)行檢測(cè)，并且生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，方便操作，只需過濾除菌，無毒，濃度低，對(duì)環(huán)境影響小，用新鮮人血或質(zhì)控品在通過血細(xì)胞分析儀測(cè)試或人工計(jì)數(shù)測(cè)試時(shí)，發(fā)現(xiàn)其重復(fù)性和準(zhǔn)確性有較好的效果。下面結(jié)合附圖與具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述：【附圖說明】圖1是實(shí)施例一制備出來的溶血?jiǎng)┰跍y(cè)試時(shí)的白細(xì)胞散點(diǎn)圖；圖2是實(shí)施例二制備出來的溶血?jiǎng)┰跍y(cè)試時(shí)的白細(xì)胞散點(diǎn)圖；圖3是實(shí)施例三制備出來的溶血?jiǎng)┰跍y(cè)試時(shí)的白細(xì)胞散點(diǎn)圖；圖4是實(shí)施例四制備出來的溶血?jiǎng)┰跍y(cè)試時(shí)的白細(xì)胞散點(diǎn)圖；圖5是實(shí)施例五制備出來的溶血?jiǎng)┰跍y(cè)試時(shí)的白細(xì)胞散點(diǎn)圖；圖6是實(shí)施例六制備出來的溶血?jiǎng)┰跍y(cè)試時(shí)的白細(xì)胞散點(diǎn)圖?！揪唧w實(shí)施方式】一種血細(xì)胞分析儀用溶血?jiǎng)?，包括a、b液，它們的原料均包括抗凝劑、緩沖液、表面活性劑、防腐劑、滲透壓補(bǔ)償劑和工藝用水(其是經(jīng)過離子交換處理的水)；所述a液的ph值為4.0～7.0；所述b液的ph值為7.0～10.0，其中：抗凝劑為阻止血液凝固的物質(zhì)，通常用edta二鈉、edta二鉀；緩沖液只要可以使試劑的ph值保持在所希望的范圍內(nèi)即可，ph值為4.0～7.0則選檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液(即由檸檬酸、檸檬酸鈉組成緩沖液對(duì))、磷酸氫二鈉－檸檬酸緩沖液(即由磷酸氫二鈉、檸檬酸組成緩沖液對(duì))為宜，ph值為7.0～10.0則選碳酸鈉－甲酸緩沖液(即由碳酸鈉、甲酸組成緩沖液對(duì))、甘氨酸－氫氧化鈉緩沖液(即由甘氨酸、氫氧化鈉組成緩沖液對(duì))為宜；表面活性劑為增加細(xì)胞膜的通透性，甚至溶解細(xì)胞膜，可選十二烷基三甲基氯化銨、乙二醇苯醚的一種或兩種；防腐劑為使試劑穩(wěn)定不變質(zhì)，通常用異噻唑啉酮；滲透壓補(bǔ)償劑是為了保持的細(xì)胞的基本形狀方便檢測(cè)，通常用無機(jī)鹽類，如氯化鈉、硫酸鈉。本發(fā)明血細(xì)胞分析儀用溶血?jiǎng)┲苽浞椒?，包括如下步驟：1.配液：將抗凝劑、緩沖液、表面活性劑、防腐劑、滲透壓補(bǔ)償劑倒入已加適量工藝用水(約為處方量一半，)的配料桶中，用攪拌器或棒攪拌使物料溶解，溶解后加足處方量的水混合；2.過濾：物料完全溶解(肉眼看不見微粒)后，用0.1μm微孔膜筒式過濾器，開啟泵過濾即得。比如，當(dāng)分別制配1000g的a液和b液時(shí)：所述的a液的原料組成有：edta二鈉0.1～1％，檸檬酸－檸檬酸鈉緩沖液或磷酸氫二鈉－檸檬酸緩沖液0.03～5％，氯化鈉0.1～1％，十二烷基三甲基氯化銨0.01～10％，乙二醇苯醚0.01～5％，異噻唑啉酮0.05～0.1％，加入工藝用水使最后成1000g溶液。所述的b液的原料組成有：氯化鈉1～2％，碳酸鈉－甲酸緩沖液或甘氨酸－氫氧化鈉緩沖液0.03～5％，十二烷基三甲基氯化銨0.01～10％，乙二醇苯醚0.01～5％，異噻唑啉酮0.05～0.1％，加入工藝用水使最后成1000g溶液。本發(fā)明性能測(cè)定：1.外觀應(yīng)為澄清液體，不得有沉淀、顆粒和絮狀物。2.在溫度25℃條件下，用酸度計(jì)測(cè)試3次，計(jì)算測(cè)試結(jié)果的平均值，平均值應(yīng)在±0.5。3.吸收峰波長按溶血?jiǎng)┻m配的血液分析儀所規(guī)定的混合比例，加入適配稀釋劑、抗凝血及被檢溶血?jiǎng)靹蛑瞥蓸颖?；使用波長范圍至少在450nm～800nm，掃描精度優(yōu)于土0.5nm的分光光度計(jì)測(cè)試樣本，在450nm～750nm波長范圍內(nèi)掃描，所得吸收曲線的最大吸收峰波長λmax，特征吸收峰波長λmax應(yīng)在540±10nm范圍內(nèi)。4.空白計(jì)數(shù)使用適配的血液分析儀，做本底檢查或先將分析儀內(nèi)部原有試劑排空，引入待測(cè)試劑，然后將待測(cè)試劑作為樣本在分析儀上連續(xù)進(jìn)行3次測(cè)試，取3次測(cè)試結(jié)果中的最大值作為空白計(jì)數(shù)，就符合下表要求測(cè)試項(xiàng)目要求備注白細(xì)胞計(jì)數(shù)(wbc)≤0.5×109/l-5.準(zhǔn)確性按照血液分析儀的操作說明書，以參考物質(zhì)或至少20份定值血作為樣本，在分析儀上用待測(cè)試劑連續(xù)測(cè)試3次，計(jì)算測(cè)試結(jié)果的平均值，并計(jì)算平均值與標(biāo)稱值的相對(duì)偏差，結(jié)果應(yīng)符合下表的要求。注：定值血是指經(jīng)校準(zhǔn)良好的儀器測(cè)量的新鮮血樣，有相關(guān)參考物質(zhì)時(shí)優(yōu)先選擇。測(cè)試項(xiàng)目要求白細(xì)胞計(jì)數(shù)(wbc)相對(duì)偏差在士7.5％范圍內(nèi)6.白細(xì)胞散點(diǎn)圖按照血液分析儀的操作說明書，溶血?jiǎng)┳饔糜谡Ｈ诵迈r血后，所得的白細(xì)胞散點(diǎn)圖應(yīng)符合下列要求：a)具備兩個(gè)或兩個(gè)以上白細(xì)胞分類散點(diǎn)群；b)符合適用血液分析儀相應(yīng)的白細(xì)胞分類散點(diǎn)群性狀及散點(diǎn)圖標(biāo)志。7.批間差7.1ph的批間差△ph應(yīng)不大于1.0；7.2吸收峰波長的批間差△λmax不大于10nm。8.穩(wěn)定性溶血?jiǎng)┑挠行跒?2個(gè)月，取到效期后的試劑進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果應(yīng)符合上述性能測(cè)試1～7的要求。下面根據(jù)實(shí)施例詳細(xì)描述本發(fā)明，本發(fā)明的目的和效果將變得更加明顯。實(shí)施例1：1)、配液：a液：按重量或體積分別取1g的乙二胺四乙酸二鈉、0.25g的檸檬酸、0.25g的檸檬酸鈉、3g的乙二醇苯醚、0.25g的十二烷基三甲基氯化銨、3g的氯化鈉、0.5g的異噻唑啉酮、加入工藝用水使最后成1000g溶液；b液：按重量或體積分別取14g的氯化鈉、1g的碳酸鈉、0.28ml的甲酸、3g的乙二醇苯醚、0.25g的十二烷基三甲基氯化銨、0.5g的異噻唑啉酮、加入工藝用水使最后成1000g溶液。2)、過濾：物料完全溶解(肉眼看不見微粒)后，用0.1μm微孔膜筒式過濾器，開啟泵過濾即得。實(shí)施例1制備的溶血?jiǎng)┳饔糜谡Ｈ诵迈r血后，所得的白細(xì)胞散點(diǎn)圖如圖1所示，各類細(xì)胞分群明顯，neut的細(xì)胞圖形稍向右上傾斜，雖不夠平整，但都能落入定標(biāo)框內(nèi)，因而符合要求。實(shí)施例2：制備步驟同實(shí)施例1實(shí)施例2制備的溶血?jiǎng)┳饔糜谡Ｈ诵迈r血后，所得的白細(xì)胞散點(diǎn)圖如圖2所示，各類細(xì)胞分群明顯，neut的細(xì)胞圖形稍向右上傾斜(即稍偏定標(biāo)框的右側(cè))，但還算平整，這些細(xì)胞都能落入定標(biāo)框內(nèi)，因而符合要求。實(shí)施例3：制備步驟同實(shí)施例1實(shí)施例3制備的溶血?jiǎng)┳饔糜谡Ｈ诵迈r血后，所得的白細(xì)胞散點(diǎn)圖如圖3所示，各類細(xì)胞分群明顯，neut的細(xì)胞圖形平整，雖稍偏定標(biāo)框的左下側(cè)，但都能落入定標(biāo)框內(nèi)，因而符合要求。實(shí)施例4：制備步驟同實(shí)施例1實(shí)施例4制備的溶血?jiǎng)┳饔糜谡Ｈ诵迈r血后，所得的白細(xì)胞散點(diǎn)圖如圖4所示，各類細(xì)胞分群明顯，neut的細(xì)胞圖形稍向右上傾斜(即稍偏定標(biāo)框的右側(cè))，但還算平整，都能落入定標(biāo)框內(nèi)，因而符合要求。實(shí)施例5：制備步驟同實(shí)施例1實(shí)施例5制備的溶血?jiǎng)┳饔糜谡Ｈ诵迈r血后，所得的白細(xì)胞散點(diǎn)圖如圖5所示，各類細(xì)胞分群明顯，雖neut的細(xì)胞圖形稍向右上傾斜(稍偏定標(biāo)框的上側(cè))，不夠平整，但都能落入定標(biāo)框內(nèi)，因而符合要求。實(shí)施例6：制備步驟同實(shí)施例1實(shí)施例6制備的溶血?jiǎng)┳饔糜谡Ｈ诵迈r血后，所得的白細(xì)胞散點(diǎn)圖如圖6所示，各類細(xì)胞分群明顯，都能落入定標(biāo)框內(nèi)。溶血?jiǎng)┑闹饕阅軈?shù)按照血液分析儀的操作說明書，以新鮮血作為樣本，在分析儀上用待測(cè)試劑與原廠試劑對(duì)照，計(jì)算相對(duì)偏差，從血細(xì)胞的wbc(白細(xì)胞分類計(jì)數(shù))的相對(duì)偏差，從而看出實(shí)施效果：測(cè)試的各項(xiàng)參數(shù)neut％lymph％mono％eo％baso％實(shí)施例140.643.88.17.10.4原廠試劑41.243.87.97.20.4相對(duì)偏差0.730.571.250.700實(shí)施例273.714.58.23.10.5原廠試劑73.214.98.23.20.5相對(duì)偏差0.341.3601.590實(shí)施例372.022.03.32.30.3原廠試劑73.121.13.22.30.3相對(duì)偏差0.762.091.5400實(shí)施例468.022.54.94.30.3原廠試劑67.622.95.04.20.3相對(duì)偏差0.290.881.011.180實(shí)施例587.96.93.61.50.1原廠試劑87.57.13.71.60.1相對(duì)偏差0.231.431.373.230實(shí)施例670.422.44.42.50.3原廠試劑71.221.34.62.60.3相對(duì)偏差0.562.522.221.960綜上所述可得：1.本發(fā)明簡(jiǎn)化了工藝流程，工藝簡(jiǎn)單，相對(duì)同類產(chǎn)品均有一個(gè)組份加入染料，而染料用量較少，稱取誤差大則會(huì)導(dǎo)致濃度控制不一而影響分析效果，本發(fā)明則無需加入染色劑，只需過濾除菌，無毒，濃度低，對(duì)環(huán)境影響小，該項(xiàng)目一旦用于生產(chǎn)，同樣可以大大降低同類產(chǎn)品的生產(chǎn)成本，更好地緩解國內(nèi)市場(chǎng)供求緊張的局面。2.鑒于目前大部分國產(chǎn)激光法五分類儀器的設(shè)計(jì)原理基本一致，本發(fā)明提出的配方參考相同的細(xì)胞處理原理，設(shè)計(jì)出使白細(xì)胞膨脹成球形化和打孔、破壞紅細(xì)胞以免造成計(jì)數(shù)干擾的a液，和使反應(yīng)終止、加入后會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞收縮、加強(qiáng)對(duì)紅細(xì)胞的破壞的b液，經(jīng)過a、b液處理后的樣品被送到激光流動(dòng)池?zé)o需加入染色劑便可進(jìn)行檢測(cè)，可以適用于上述大部分國產(chǎn)激光法五分類儀器上，個(gè)別組份濃度適當(dāng)調(diào)整就可以完全滿足多種品牌儀器的需要。當(dāng)前第1頁12