[]本發(fā)明屬于分析化學(xué)，具體地說是一種快速測定寵物食品和寵物補(bǔ)劑中二甲基砜含量的方法。

背景技術(shù)：

0、[背景技術(shù)]

1、二甲基砜(dimethyl?sulfone)，簡稱為msm，是一種天然存在于自然界中的含硫有機(jī)化合物，是自然界硫循環(huán)的一部分，作為一種內(nèi)源性細(xì)胞代謝物和硫供體，廣泛存在于動物和人體中，具有抗炎、抗氧化、抗癌、預(yù)防疾病、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等作用。

2、近年來，寵物行業(yè)在國內(nèi)外發(fā)展迅速，貓狗作為伴侶動物被越來越多人喜愛，很多人甚至將寵物視為家庭成員，對它們關(guān)心愛護(hù)。但寵物都逃不開壽命有限的困擾，寵物在8～10歲時身體機(jī)能就會開始衰退，抵抗力下降，骨骼關(guān)節(jié)出現(xiàn)問題。因為寵物不能通過語言與人類交流，寵物的健康問題不易被主人發(fā)現(xiàn)。各種疾病也會給寵物的生活帶來很大的不適與痛苦，因此越來越多的寵物主人開始關(guān)注和購買功能性寵物食品和寵物補(bǔ)劑，希望給寵物帶來更好的生活質(zhì)量。在2018年農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第21號公告中，二甲基砜被列入《國家飼料添加劑品種目錄》成為一種貓狗專用添加劑，允許作為寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑添加到寵物食品中。目前研究發(fā)現(xiàn)二甲基砜可以滋養(yǎng)寵物皮膚和毛發(fā)，保護(hù)關(guān)節(jié)，提升免疫力，其作為新型飼料添加劑在寵物行業(yè)中將會有廣泛的應(yīng)用前景。

3、然而.有市場就會有利益紛爭，有不法商家在寵物食品和寵物補(bǔ)劑中虛假添加二甲基砜，給寵物食品行業(yè)帶來嚴(yán)重的負(fù)面影響。目前市面上還沒有確定可行的寵物食品或?qū)櫸镅a(bǔ)劑中二甲基砜含量檢測方法，這使得寵物食品中二甲基砜含量檢測工作難以開展，市場監(jiān)管也難以進(jìn)行。二甲基砜相對分子質(zhì)量較小，具有揮發(fā)性，在分析過程中容易受到樣品中雜質(zhì)的干擾。而寵物食品成分較復(fù)雜，其中干擾物多，分析難度本較大，常規(guī)檢測方法顯然不適用于寵物食品和寵物補(bǔ)劑中的msm。

4、因此，建立一個準(zhǔn)確、穩(wěn)定、快速且抗干擾能力強(qiáng)的寵物食品和寵物補(bǔ)劑中二甲基砜含量的檢測方法迫在眉睫。

技術(shù)實現(xiàn)思路

0、[
技術(shù)實現(xiàn)要素：
]

1、本發(fā)明的目的就是要解決上述的不足而提供一種快速測定寵物食品和寵物補(bǔ)劑中二甲基砜含量的方法，經(jīng)提取、快速凈化后用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測，同位素內(nèi)標(biāo)法定量，快速測定寵物食品和寵物補(bǔ)劑中二甲基砜含量，該測定方法準(zhǔn)確、快速、高效，可快速有效的減少或消除樣品基質(zhì)干擾，以及可有效校正基質(zhì)效應(yīng)，消除實驗誤差，提高檢測的準(zhǔn)確度和精密度。

2、為實現(xiàn)上述目的設(shè)計一種快速測定寵物食品和寵物補(bǔ)劑中二甲基砜含量的方法，包括以下步驟：

3、1)樣品預(yù)處理：將寵物食品或?qū)櫸镅a(bǔ)劑樣品粉碎后混合均勻，裝入潔凈干燥的密封瓶中，密封備用；

4、2)樣品的提?。悍Q取適量樣品，使用乙腈提取得到樣品提取液，樣品與乙腈按照固液比為1g:5ml的比例；

5、3)樣品的凈化：將步驟2)所得樣品提取液經(jīng)quechers凈化得上機(jī)分析溶液；

6、4)采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定步驟3)所得上機(jī)分析溶液；

7、5)采用同位素內(nèi)標(biāo)法定量溶液中二甲基砜的濃度，計算得到樣品中二甲基砜的含量。

8、進(jìn)一步地，步驟1)中，將樣品用粉碎機(jī)粉碎至均勻，粉碎后的顆粒大小不大于2mm，避光密封保存。

9、進(jìn)一步地，步驟1)中，若樣品經(jīng)粉碎后顆粒大小仍不均勻，則將經(jīng)粉碎后的樣品過2mm篩后再混合均勻。

10、進(jìn)一步地，步驟2)中，稱樣前再次混勻樣品，準(zhǔn)確稱取1.0g樣品，置于50ml具蓋離心管中，加入100μl的500mg/l二甲基砜-d6同位素內(nèi)標(biāo)溶液，混勻，加入5ml乙腈，使用渦旋振蕩器以1500rpm的轉(zhuǎn)速振蕩5min，然后使用超聲波提取器在35℃下超聲提取5min，將含有樣品的離心管使用高速離心機(jī)以6000r/min離心10min后取上清液得到樣品提取液。

11、進(jìn)一步地，步驟3)中，將步驟2)中得到的樣品提取液置于15ml具蓋離心管中，加入quechers快速凈化樣品前處理所用混合鹽，邊搖晃離心管邊加入混合鹽以防止結(jié)塊，使用渦旋振蕩器以1500rpm的轉(zhuǎn)速振蕩5min，然后將含有樣品提取液的離心管使用高速離心機(jī)以6000r/min離心10min，取上清液經(jīng)0.22μm的聚四氟乙烯濾膜過濾后得上機(jī)分析溶液。

12、進(jìn)一步地，步驟3)中，所述混合鹽包括n-丙基乙二胺、石墨化炭黑、c18和硫酸鎂，n-丙基乙二胺、石墨化炭黑、c18、硫酸鎂的質(zhì)量比為400mg：400mg：400mg：1200mg。

13、進(jìn)一步地，步驟4)中，所述氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀的測定條件為：

14、1)氣相色譜柱：db-ffap；30m×250μm×0.25μm；

15、2)進(jìn)樣口溫度：250℃；

16、3)進(jìn)樣方式：不分流模式；

17、4)流速：1ml/min；

18、5)進(jìn)樣體積：1μl；

19、6)爐溫升溫程序見下表：

20、 升溫速率(℃/min) 爐溫(℃) 保持時間(min) <![cdata[¹⁰⁰]]> <![cdata[²]]> 15 240 5 postrun 245 5

21、7)離子源電離方式：電子轟擊源；

22、8)電離能量：70ev；

23、9)離子源溫度：230℃；

24、10)傳輸線溫度：230℃；

25、11)四級桿溫度：150℃；

26、12)采集模式：sim/scan；

27、13)目標(biāo)物和同位素內(nèi)標(biāo)的特征離子見下表：

28、 名稱 定量離子m/z 定性離子m/z 二甲基砜 79 94、63 d6-二甲基砜 82 100、66

29、。

30、進(jìn)一步地，步驟5)中，根據(jù)步驟4)采集的數(shù)據(jù)，測得二甲基砜和同位素二甲基砜內(nèi)標(biāo)物的相應(yīng)峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液中二甲基砜與內(nèi)標(biāo)的濃度比為橫坐標(biāo)，以二甲基砜峰面積與內(nèi)標(biāo)的峰面積比為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，將試樣溶液中二甲基砜峰面積和內(nèi)標(biāo)物的峰面積之比帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣品溶液中二甲基砜的濃度。

31、進(jìn)一步地，步驟5)中，根據(jù)樣品溶液中二甲基砜的濃度，通過以下公式計算得到樣品中二甲基砜的含量：

32、

33、公式中：

34、c為試樣中二甲基砜的含量，單位為mg/kg；

35、a為由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的樣品溶液中二甲基砜的濃度，單位為mg/l；

36、v為樣品的最終定容體積，單位為ml；

37、m為試樣的取樣量，單位為g；

38、df為稀釋倍數(shù)。

39、本發(fā)明同現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)：

40、(1)本發(fā)明提供了一種樣品中的二甲基砜通過乙腈提取，使用quechers快速樣品前處理凈化后，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行測定，同位素內(nèi)標(biāo)法定量的檢測方法，適用于貓糧、狗糧、寵物零食等多種類型的寵物食品和寵物營養(yǎng)補(bǔ)充劑；

41、(2)本發(fā)明檢測方法快速、準(zhǔn)確、抗干擾能力強(qiáng)，quechers方法可以快速有效的減少或消除樣品基質(zhì)干擾；

42、(3)本發(fā)明同位素內(nèi)標(biāo)法定量可以有效校正基質(zhì)效應(yīng)，消除實驗誤差，提高檢測的準(zhǔn)確度和精密度；

43、(4)本發(fā)明所述方法最低定量濃度較低為5mg/kg，能滿足市場上多種檢測需求，值得推廣應(yīng)用。