專利名稱：檢測(cè)用酵母試劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)紅細(xì)胞免疫功能實(shí)驗(yàn)用的酵母試劑的制備方法。
近代免疫學(xué)理論認(rèn)為，不僅白細(xì)胞有免疫功能，紅細(xì)胞也有重要的免疫功能。目前對(duì)紅細(xì)胞免疫的表現(xiàn)、機(jī)理、調(diào)節(jié)因子、檢測(cè)方法進(jìn)行研究，都是采用酵母菌和紅細(xì)胞進(jìn)行花環(huán)試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)紅細(xì)胞的免疫功能，實(shí)驗(yàn)采用的酵母菌的制備目前都為實(shí)驗(yàn)室階段，不僅不能滿足大面積推廣的需要，同時(shí)試驗(yàn)結(jié)果也不夠穩(wěn)定，重復(fù)可比性差，到目前還沒(méi)見(jiàn)到有關(guān)制備方法的公開(kāi)報(bào)導(dǎo)。
本發(fā)明的目的是提供一種供檢測(cè)紅細(xì)胞免疫功能試驗(yàn)用的酵母菌試劑的大規(guī)模制備方法，同時(shí)使用本發(fā)明方法制備的酵母菌試劑在試驗(yàn)使用時(shí)具有結(jié)果穩(wěn)定、準(zhǔn)確率高，可比性強(qiáng)等特點(diǎn)。
本發(fā)明的實(shí)施手段是從空氣、人體分泌物、植物和食品中分離出酵母株，經(jīng)過(guò)優(yōu)選、培養(yǎng)、收集洗滌，加助劑補(bǔ)體致敏和真空冷凍干燥五個(gè)步驟得到酵母菌的凍干致敏、凍干未致敏及懸液試劑。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是制備方法系統(tǒng)完整，便于大規(guī)模制備推廣，本試劑制備工藝科學(xué)合理，所得的酵母菌試劑特異形態(tài)少，細(xì)胞均一，分散均勻，保存使用期長(zhǎng)，可達(dá)1～2年，使用時(shí)性能穩(wěn)定，敏感性高，著色及分散度好，試驗(yàn)結(jié)果易于觀察。
實(shí)施例本酵母菌制劑的制備方法共分五個(gè)步驟進(jìn)行。
一、酵母株的優(yōu)選把從空氣、人體分泌物、植物和食品中分離的酵母菌接種于改良(少糖)沙氏培養(yǎng)基上，在28℃培養(yǎng)72小時(shí)，改良(少糖)沙氏培養(yǎng)基為1000毫升蒸餾水中加入蛋白胨10克，葡萄糖30克，然后選出菌體較大，形態(tài)為圓形或橢圓形，細(xì)胞規(guī)整、特異形態(tài)少的YS酵母株為優(yōu)選酵母株。
二、酵母株的培養(yǎng)將優(yōu)選出的YS酵母株接種在改良沙氏培養(yǎng)基中，在28℃培養(yǎng)66小時(shí)，以不出現(xiàn)芽胞為限。
三、酵母菌的收集和洗滌將培養(yǎng)好的酵母菌隔水煮沸10分鐘，進(jìn)行滅活，然后離心去掉上清液，將收集到的酵母菌經(jīng)多次水洗配成1×108/ml，隔水煮沸30分鐘，并加入防腐劑NaN3，即為懸液酵母試劑(補(bǔ)體未致敏)。
四、懸液酵母試劑加助劑和進(jìn)行補(bǔ)體致敏將懸液酵母試劑加入賦形劑和保護(hù)劑脫脂牛乳;或?qū)乙航湍冈噭┘尤氲攘康?∶10稀釋豚鼠血清在37℃維持15分鐘，水洗3次，加入賦形劑和保護(hù)劑脫脂牛乳。
五、真空冷凍干燥經(jīng)四制備的補(bǔ)體未致敏或致敏的酵母菌制劑懸浮液進(jìn)行冷凍干燥和真空封裝，其操作條件是在0.03托真空條件下，經(jīng)-40℃冷凍處理1小時(shí)，然后在30℃干燥14小時(shí)，使成品水份小于1%，進(jìn)行真空封裝，制成凍干補(bǔ)體未致敏和凍干補(bǔ)體致敏酵母試劑。
權(quán)利要求
1.一種供檢測(cè)用酵母試劑的制備方法，其特征在于它是經(jīng)過(guò)酵母株優(yōu)選、培養(yǎng)、收集洗滌、加助劑補(bǔ)體致敏和真空冷凍干燥五個(gè)步驟進(jìn)行一、酵母株的優(yōu)選把從空氣、人體分泌物、植物和食品中分離的酵母菌接種于改良沙氏培養(yǎng)基上，在28℃培養(yǎng)72小時(shí)，改良沙氏培養(yǎng)基為1000毫升蒸餾水中加入蛋白胨10克、葡萄糖30克，然后選出菌體較大，形態(tài)為圓形或橢圓形、細(xì)胞規(guī)整、特異形態(tài)少的Ys酵母株，為優(yōu)選酵母株，二、酵母株的培養(yǎng)將優(yōu)選出的Ys酵母株接種在改良沙氏培養(yǎng)基中，在28℃培養(yǎng)66小時(shí)，以不出現(xiàn)芽胞為限，三、酵母菌的收集和洗滌將培養(yǎng)好的酵母菌隔水煮沸10分鐘，進(jìn)行滅活，然后離心去掉上清液，將收集到的酵母菌經(jīng)多次水洗配成1×108/ml，隔水煮沸30分鐘，并加入防腐劑NaN3，即為懸液酵母未致敏試劑，四、懸液酵母試劑加助劑和進(jìn)行補(bǔ)體致敏將懸液酵母試劑加入賦形劑和保護(hù)劑；或?qū)乙航湍冈噭┘尤氲攘康?∶10稀釋豚鼠血清在37℃維持15分鐘，水洗3次，加入賦形劑和保護(hù)劑。五、真空冷凍干燥經(jīng)四制備的補(bǔ)體未致敏或致敏的酵母菌制劑懸浮液進(jìn)行冷凍干燥和真空封裝，其操作條件是在0.03托真空條件下，經(jīng)-40℃冷凍處理1小時(shí)，然后在30℃干燥14小時(shí)，使成品水份小于1%，進(jìn)行真空封裝，制成凍干補(bǔ)體未致敏和凍干補(bǔ)體致敏酵母試劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種供檢測(cè)紅細(xì)胞免疫功能實(shí)驗(yàn)用的酵母試劑的制備方法，它是從空氣、人體分泌物、植物和食品中分離出酵母株，經(jīng)過(guò)優(yōu)選、培養(yǎng)、收集洗滌、加助劑補(bǔ)體致敏和真空冷凍干燥五個(gè)步驟得到酵母菌的凍干致敏試劑。本試劑制備工藝科學(xué)合理，便于大規(guī)模推廣制備，所得的酵母菌試劑特異形態(tài)少，細(xì)胞均一，分散均勻，保存使用期長(zhǎng)，可達(dá)一年左右。使用時(shí)性能穩(wěn)定、敏感性高、著色及分散度好，試驗(yàn)結(jié)果易于觀察。
文檔編號(hào)G01N33/53GK1082195SQ9310675
公開(kāi)日1994年2月16日 申請(qǐng)日期1993年5月31日 優(yōu)先權(quán)日1993年5月31日
發(fā)明者劉景田 申請(qǐng)人:劉景田