抗癌劑作用增強(qiáng)劑及其應(yīng)用、以及癌患者預(yù)后推定用生物標(biāo)記物及其應(yīng)用
【專利說明】抗癌劑作用増強(qiáng)劑及其應(yīng)用、以及癌患者預(yù)后推定用生物 標(biāo)記物及其應(yīng)用
[0001] 本申請為專利申請200980133438. 4 (申請日：2009年8月27日，發(fā)明創(chuàng)造名稱： 抗癌劑作用增強(qiáng)劑及其應(yīng)用、以及癌患者預(yù)后推定用生物標(biāo)記物及其應(yīng)用）的分案申請。
技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及增強(qiáng)抗癌劑的作用的藥劑及其用途、以及癌患者預(yù)后推定用生物標(biāo)記 物及其用途等。
【背景技術(shù)】
[0003] 組蛋白去乙?；福℉DACs)通過抑制細(xì)胞的增殖、分化、生存而抑制癌的發(fā)生（非 專利文獻(xiàn)1、2)。從過去的研宄已知HDACs的抑制劑（HDACi)在與其他的抗癌劑并用時發(fā)揮 顯著的協(xié)同效果（非專利文獻(xiàn)2、3)。然而，還未完全理解HDACi發(fā)揮協(xié)同效果時的分子機(jī) 理。
[0004] 經(jīng)過系統(tǒng)的活體外（in vitro)研宄慢慢發(fā)現(xiàn)HDACi對腫瘤細(xì)胞特異性誘導(dǎo)細(xì) 胞增殖的停止、分化、細(xì)胞凋亡以及腫瘤血管新生的抑制等（非專利文獻(xiàn)2、3、4)?；?這種活體外研宄，幾種HDACi在接受臨床實(shí)驗(yàn)，其中之一的伏立諾他（suberoylanilide hydroxamic acid，SAHA)已通過美國食品和藥物管理局（FDA)的許可被應(yīng)用于皮膚T細(xì)胞 性淋巴瘤的治療（非專利文獻(xiàn)4、5)。另外，還報道有HDACi除了單獨(dú)的作用之外還通過與 多種作用的抗癌劑并用而發(fā)揮協(xié)同效果（非專利文獻(xiàn)2、4)。而且，已知包括順鉑、5-FU、依 托泊苷（etoposide)、阿霉素（Doxorubicin)等的化學(xué)療法劑中，細(xì)胞毒性作用的機(jī)理之一 是誘導(dǎo)活性氧（R0S)的產(chǎn)生（非專利文獻(xiàn)6~9)。還報道有抗氧化酶或其關(guān)聯(lián)基因的表達(dá) 的改變將調(diào)節(jié)對癌細(xì)胞化學(xué)療法劑的抵抗性（非專利文獻(xiàn)10~13)，而這將支持上述的利 用化學(xué)療法劑的R0S產(chǎn)生的誘導(dǎo)對細(xì)胞毒活性重要這一見解。
[0005] 非專利文獻(xiàn)
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[0020] 非專利文獻(xiàn) 15:Glozak MA，Seto E. (2007) ? Histone deacetylases and cancer. Oncogene 26:5420-5432
[0021] 非專利文獻(xiàn) 16: Takahashi M，Inaguma Y，Hiai H，Hirose F. (1988). Developmentally regulated expression of a human〃finger〃-containing gene encoded by the 5'half of the ret transforming gene. Mol Cell Biol. 4:1853-6
[0022] 非專利文獻(xiàn) 17: Tezel，G. et al. M. (1999) ? Different nuclear/cytoplasmic distributions of RET finger protein in different cell types.Pathol. Int.49:881-886
[0023]非專利文獻(xiàn) 18 : Takahashi，M. and Cooper，G. M. : ret transforming gene encodes a fusion protein homologous to tyrosine kinases. Mol. Cell. Biol. 7, 1378-1385(1987)
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[0025]非專利文獻(xiàn) 20:Shimono, Y.，Murakami，H.，Kawai，K.，Wade，P. A.，Shimokata，K. and Takahashi，M. :Mi_2 associates with BRG1 and RET finger protein at the distinct regions with transcriptional activating and repressing abilities. J. Biol. Chem. 278:51638-51645(2003)
[0026]非專利文獻(xiàn) 21: Shimono, K.，Shimono, Y.，Shimokata，K.，Ishiguro, N.，and Takahashi，M. :Microspherule protein 1, Mi-2 0 , and RET finger protein associate in the nucleolus and up-regulate ribosomal gene transcription. J. Biol. Chem. 280:39436-39447(2005)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0027] 在癌治療中并用多個抗癌劑的情況較多?？拱﹦┑牟⒂檬且蕴岣咧委熜Ч麨槟康?進(jìn)行的，但有時帶來嚴(yán)重的副作用。其原因在于現(xiàn)在使用的抗癌劑的大部分以增殖迅速的 細(xì)胞作為靶，對癌細(xì)胞以外的正常的細(xì)胞也起到細(xì)胞損傷作用。
[0028] 本發(fā)明在如上的背景下，以提供增強(qiáng)抗癌劑的作用的手段，或提供對把握癌患者 的預(yù)后有用的生物標(biāo)記物及其用途，從而達(dá)成提高癌的治療效果為課題。
[0029] 到目前為止已知HDACi將改變控制細(xì)胞內(nèi)氧化狀態(tài)的硫氧還蛋白 (Thioredoxin)、TBP-2的表達(dá)。鑒于該事實(shí)，本發(fā)明人建立如下假說：HDACi通過控制細(xì) 胞內(nèi)的抗氧化機(jī)理而使癌細(xì)胞變?yōu)榭拱﹦┟舾行?。為了證實(shí)該假說，著眼于具有（1)在 人的腫瘤中呈高表達(dá)，（2)控制細(xì)胞的增殖、分化、生存這樣特征（Halkidou K，Gaughan L, Cook S, Leung HY, Neal DE, Robson CN. (2004). Upregulation and nuclear recruitment of HDACI in hormone refractory prostate cancer. Prostate 59:177-189 (非專利 文獻(xiàn) 14) ；Glozak MA, Seto E. (2007). Histone deacetylases and cancer. Oncogene 26:5420-5432(非專利文獻(xiàn)15))的HDACI，和具有（1)在癌細(xì)胞株中有高表達(dá)，（2)活 體內(nèi)的表達(dá)有局限性這樣的特征（了81^1^8111]\1，11^81111^￥，]^3；[11，11；[1'086?.(1988). Developmentally regulated expression of a human〃:finger〃-containing gene encoded by the 5'half of the ret transforming gene. Mol Cell Biol. 4:1853-6 (非專利文獻(xiàn) 16) ；Tezel, G. et al. M. (1999). Different nuclear/cytoplasmic distributions of RET finger protein in different cell types. Pathol. Int. 49:881-886 (非專利文獻(xiàn) 17)) 之上還具有（3)其敲除（knockout)鼠不顯示嚴(yán)重的表型這樣的特征（未發(fā)表數(shù)據(jù)）的 (RET finger protein)，進(jìn)行了深入的研宄。其結(jié)果發(fā)現(xiàn) HDAC1 對 Thioredoxin Binding Protein-2 (TBP-2)的表達(dá)進(jìn)行負(fù)控制，從而增進(jìn)對癌細(xì)胞氧化應(yīng)激的抵抗性。另外，還發(fā) 現(xiàn)HDAC1通過由RFP以及轉(zhuǎn)錄因子NF-Y構(gòu)成的蛋白復(fù)合體而被配置于TBP-2基因的啟動 子上。另外，還發(fā)現(xiàn)使用RNAi的RFP的表達(dá)抑制將招致該蛋白復(fù)合體的降解，結(jié)果顯著增 大癌細(xì)胞的順鉑（抗癌劑，也是氧化應(yīng)激的誘導(dǎo)劑）敏感性。這些事實(shí)表明RFP是癌細(xì)胞 獲得抗癌劑耐性的重要的控制因子，還表明抑制RFP的表達(dá)或作用，則介由抗癌劑的作用 的增強(qiáng)，可提高癌治療結(jié)果。
[0030] 另一方面，還發(fā)現(xiàn)RFP的高表達(dá)，與人的大腸癌的TBP-2的表達(dá)下降、大腸癌患者 的預(yù)后不良相關(guān)。這表示使用抗癌劑時抑制RFP的表達(dá)或作用這一治療對策的有效性，還 表明檢查癌細(xì)胞的RFP的表達(dá)水平則能判定對抗癌劑的耐性，而該判定結(jié)果將成為對確定 治療方針（有效的治療法的選擇等）、改善預(yù)后、提高患者生存質(zhì)量（QOL)等有貢獻(xiàn)的有益 信息。進(jìn)一步研宄的結(jié)果還發(fā)現(xiàn)RFP的表達(dá)與子宮體癌的預(yù)后不良相關(guān)。引人注意的是得 到了如下的見解：在發(fā)現(xiàn)RFP的高表達(dá)時，采用通過更積極的手術(shù)方式的舉措將改善預(yù)后。 如上所述，表明RFP作為癌患者的預(yù)后推定用生物標(biāo)記物（指標(biāo)）有用。尤其是表明在子 宮體癌中，RFP的表達(dá)將成為決定手術(shù)方式時的有益的指標(biāo)。
[0031] 本發(fā)明主要是以上述的見解以及成果為基礎(chǔ)，內(nèi)容如下。
[0032] [1] 一種作用增強(qiáng)劑，是具有氧化應(yīng)激誘導(dǎo)效力的抗癌劑的作用增強(qiáng)劑，其中，以 抑制RFP (RET finger protein)基因的表達(dá)或RFP的作用的化合物為有效成分。
[0033] [2]如[1]所述的作用增強(qiáng)劑，其中，所述化合物是選自以下的（a)~⑷中的化 合物：
[0034] (a)以RFP基因作為靶的siRNA ;
[0035] (b)在細(xì)胞內(nèi)生成以RFP基因作為靶的siRNA的核酸構(gòu)建物；
[0036] (c)以RFP基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為靶的反義核酸；
[0037] (d)以RFP基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物作為靶的核酶。
[0038] [3]如[1]或[2]所述的作用增強(qiáng)劑，其中，與具有氧化應(yīng)激誘導(dǎo)效力的抗癌劑并 用。
[0039] [4] 一種增強(qiáng)具有氧化應(yīng)激誘導(dǎo)效力的抗癌劑的作用的方法，包括：在靶癌細(xì)胞 內(nèi)，抑制RFP基因的表達(dá)或RFP的作用的步驟。
[0040] [5] -種癌治療法，包括：將[1]或[2]所述的作用增強(qiáng)劑給藥的步驟和將具有氧 化應(yīng)激誘導(dǎo)效力的抗癌劑給藥的步驟。
[0041] [6] -種抗癌劑耐性檢測法，包括：檢查從活體分離的癌細(xì)胞內(nèi)的RFP表達(dá)量的步 驟，和
[0042] 基于所述步驟的結(jié)果，判定對具有氧化應(yīng)激誘導(dǎo)效力的抗癌劑的所述癌細(xì)胞的耐 性的步驟。
[0043] [7] -種癌患者的預(yù)后推定用生物標(biāo)記物，包含RFP。
[0044] [8]如[7]所述的預(yù)后推定用生物標(biāo)記物，其中，癌為大腸癌或子宮體癌。
[0045] [9] 一種癌患者的預(yù)后推定法，其中，以從癌患者分離的癌細(xì)胞內(nèi)的RFP表達(dá)量為 指標(biāo)。
[0046] [10]如[9]所述的預(yù)后推定法，其中，癌細(xì)胞內(nèi)的RFP表達(dá)量多是表示預(yù)后不良。
[0047